CN101274038A - 白英消疹止痒凝胶制剂质量控制中的含量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种白英消疹止痒凝胶制剂质量控制中的含量检测方法，具体来说是白英消疹止痒凝胶制剂中有效成分芦丁以及薄荷脑的含量测定方法。白英消疹止痒凝胶是由白英和薄荷脑组成处方的一种中药复方新药，以卡波姆、明胶为凝胶基质，加入保湿剂甘油、三乙醇胺制备而成的半透明水溶性凝胶，该药物主要用于治疗慢性湿疹、皮炎及皮肤瘙痒等症。本发明方法公开的含量测定方法准确，且稳定性好，成分分离完全，该方法使白英消疹止痒凝胶制剂质量的更稳定、可控。

Description

白英消疹止痒凝胶制剂质量控制中的含量检测方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种白英消疹止痒凝胶制剂质量控制中的含量检测方法，具体来说，是白英消疹止痒凝胶制剂中有效成分芦丁以及薄荷脑的含量测定方法。

技术背景

白英消疹止痒凝胶，主要用于治疗慢性湿疹、皮炎，是由白英和薄荷脑组成处方的一种中药复方新药。皮炎湿疹是皮肤科的常见病、多发病，常反复发作，难以治愈，是一种变态反应性皮肤病，发病率约占皮肤病的1/4。白英(Solanum Lyratum Thanb)为茄科植物白英的全草，主要含有甾体生物碱和黄酮类成分如芦丁等有效成分，此药用于治疗皮肤病，具有清热解毒、祛风利湿功效。薄荷挥发性油中主要成分为左旋薄荷醇(Menthol)，薄荷为天然的药物促渗剂，同时据药理文献报道其具有抗炎、抗菌等功效，还有利于协同其它药物更好的渗透皮肤，从而达到治疗的效果。

白英消疹止痒凝胶是一种局部外用的水溶性凝胶剂，此凝胶剂的基质是由甘油、吐温、卡波普等组成，本类基质一般容易涂展和洗除，无油腻感，涂用润滑舒适，能吸收组织的渗出液，而且不阻碍皮肤的正常功能，同时具有杀菌、收敛的作用。作为天然药物制剂，药理试验结果证明其无毒副作用，长期使用对皮肤无不良反应，不含激素类成分，特别适合婴幼儿、儿童、及妇女湿疹患者用药。

目前，尚未有白英中有效成分含量测定的报道，本发明是按照新药注册管理办法，首次制定并公开了白英消疹止痒凝胶的有效成分芦丁及其薄荷脑含量测定方法。准确检测白英消疹止痒凝胶制剂中有效成分的含量是在生产中有效控制产品质量的方法，本发明的含量测定方法是采用分光光度法检测药物中芦丁的含量和采用气相色谱法测定薄荷脑的含量。

发明内容

本发明的目的是提供一种白英消疹止痒凝胶制剂质量控制中的含量检测方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

白英消疹止痒凝胶制剂质量控制中的含量检测方法中含有如下含量测定中一种或几种；

1、白英消疹止痒凝胶制剂中芦丁含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取在110～130℃减压干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置于100ml容量瓶中，加60％～90％乙醇55～85ml，超声波振荡使溶解，加60％～80％乙醇至刻度，摇匀，为芦丁对照品溶液，每1ml中含无水芦丁0.25mg；

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml，分别置25ml量瓶中，加60％～80％乙醇至6ml，加3％～10％亚硝酸钠溶液0.5～1.5ml，混匀，放置3～10分钟，加0.5％～3.0％氯化铝溶液1.0～5.0ml，摇匀，放置3～10分钟，加2.0％～6.0％氢氧化钠试液5～20ml，再加水至刻度，摇匀，放置10～20分钟；以相应的溶液为空白，按照分光光度法，在510nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

测定法：取白英消疹止痒凝胶制剂，精密称定3.0～8.0g，置于50ml烧杯中，加入60％～90％乙醇5～25ml溶液，60℃水浴加热20～40分钟，使其溶解，然后在冰浴中冷却20～60分钟min，待基质凝固后，过滤，滤液置于25ml容量瓶中，加60％～90％乙醇至刻度，摇匀，放置3～5小时，即得供试品溶液；精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，加60％～80％乙醇至6ml，加3％～10％亚硝酸钠溶液0.5～1.5ml，混匀，放置3～10分钟，加0.5％～3.0％氯化铝溶液1.0～5.0ml，摇匀，放置3～10分钟，加2.0％～6.0％氢氧化钠试液5～20ml，再加水至刻度，摇匀，放置10～20分钟；按照分光光度法，在510nm波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。

2、白英消疹止痒凝胶制剂中薄荷脑含量测定方法：

用气相色谱法测定，色谱条件为：

PEG-20M弹性石英毛细管柱(Supelco-Wax)，30m×0.25mm；FID检测器；进样口温度200～250℃；检测器温度230～270℃；分流进样，进样量1μl，分流比10∶1；柱温为100～160℃；理论板数按环己烷峰计算应不低于8000；载气为氮气，流速为2.5～8.0ml/min；内标物为环己酮；

供试品溶液的制备：取白英消疹止痒凝胶制剂0.5～2.0g，精密称定，置烧杯中，加无水乙醇20～100ml，置60℃水浴中，加热搅拌1～3min使溶解，抽滤，滤液置于50ml容量瓶中，精密加入内标溶液1～3ml，加无水乙醇至刻度，用0.22μm滤膜过滤，即得。

对照品的制备：精密称取内标物环己酮0.5～2.000g，加无水乙醇定容至50～200ml，备用。精密称取薄荷脑对照品25mg，加入一定量无水乙醇，加入1ml内标溶液，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm滤膜过滤，即得；

精密度试验：

精密称取薄荷脑对照品25mg，分别置10ml容量瓶中，加1ml内标溶液，以无水乙醇稀释至刻度，摇匀，依法连续测定6次，峰面积的RSD的数据结果表明，本发明的含量测定方法精密度良好。

稳定性试验：取供试品溶液，以上述色谱条件分别于0、4、8、12、24、48小时依法测定薄荷脑含量，结果表明，溶液在48小时内性质稳定。

重现性试验：

取同批号的本凝胶制剂，按供试品溶液的制备方法，平行制备6份，依上述色谱条件分别进样1ul，记录峰面积值，结果发现重现性较好。

加样回收率试验：

精密称取本凝胶制剂1.0g，共6份，置烧杯中，分别加入薄荷脑对照品溶液1ml，以供试品溶液的制备方法制备，分别进样测定，结果表明，回收率符合要求。

测定结果：将三批样品分别按供试品溶液的制备制成溶液，依上述色谱条件分别进样1μL进行测定，计算结果。

实验结果表明，本发明的白英消疹止痒凝胶中薄荷脑含量测定方法，有效成分分离良好，稳定性高，重现性好，可以有效的测定薄荷脑含量。本发明使本产品质量标准得以进一步完善、提高，切实做到白英消疹止痒凝胶制剂质量的稳定、可控。

具体实施方式

下面以本发明的实施例为基础详细说明本发明，但本发明不局限于此。

实施例1：白英消疹止痒凝胶制剂中芦丁的含量测定

(1)、材料、试剂和仪器：

材料：白英消疹止痒凝胶(东莞劲芳生物医药孵化器有限公司提供，批号：20050209)

试剂：硼砂(化学纯)，芦丁(标准级)，氧化钙(化学纯)，盐酸(化学纯)。

仪器：721型分光光度计，真空泵，JJ500电子天平(常熟双杰测试仪器厂)等。

(2)、对照品溶液的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置于100ml容量瓶中，加75％乙醇60ml，超声波振荡使溶解，加75％乙醇至刻度，摇匀，为芦丁对照品溶液，每1ml中含无水芦丁0.25mg。

(3)、测定波长的确定：分别取供试品溶液和对照品溶液，按标准曲线制备的方法显色，于350～600波长之间扫描，结果表明，两者均在510波长处有最大吸收，故选择510为测定波长，由于供试品本身有色，在510波长处有吸收，故在测定供试液时，以同一浓度未加显色剂的供试液为空白对照，可消除背景吸收的影响。

(4)、标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml，分别置25ml量瓶中，加75％乙醇至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1.0ml，混匀，放置6分钟，加1.0％氯化铝溶液3.0ml，摇匀，放置6分钟，加4.0％氢氧化钠试10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；以相应的溶液为空白，按照分光光度法，在510nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程y＝0.404x-0.029，r＝0.99961，表明芦丁对照品在10.28-61.68ug/ml范围内线性关系良好。

(5)、测定法：取白英消疹止痒凝胶制剂，精密称定5.0g，置于50ml烧杯中，加入75％乙醇20ml溶液，60℃水浴加热20～40分钟，使其溶解，然后在冰浴中冷却20～60分钟min，待基质凝固后，过滤，滤液置于25ml容量瓶中，加60％～90％乙醇至刻度，摇匀，放置3～5小时，即得供试品溶液；精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，加60％～80％乙醇至6ml，加3％～10％亚硝酸钠溶液0.5～1.5ml，混匀，放置3～10分钟，加0.5％～3.0％氯化铝溶液1.0～5.0ml，摇匀，放置3～10分钟，加2.0％～6.0％氢氧化钠试液5～20ml，再加水至刻度，摇匀，放置10～20分钟；按照分光光度法，在510nm波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，得到结果。计算得到每1.0g白英消疹止痒凝胶制剂中芦丁的含量为0.025mg。

实施例2：白英消疹止痒凝胶制剂中薄荷脑的含量测定

(1)、仪器与试剂：

HP6890型气相色谱仪(美国惠普公司)，G×300A氮，环己酮、无水乙醇(分析纯)；白英消疹止痒凝胶(自制，批号20050209、20050218、20050221)。

(2)、用气相色谱法测定，色谱条件为：

PEG-20M弹性石英毛细管柱(Supelco-Wax)，30m×0.25mm；FID检测器；进样口温度230℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10∶1；柱温为130℃；理论板数按环己烷峰计算应不低于8000；载气为氮气，流速为3.3ml/min；内标物为环己酮；

(3)、供试品溶液的制备：取白英消疹止痒凝胶制剂1.0g，精密称定，置烧杯中，加无水乙醇40ml，置60℃水浴中，加热搅拌2min使溶解，抽滤，滤液置于50ml容量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加无水乙醇至刻度，用0.22μm滤膜过滤，即得。

(4)、对照品的制备：精密称取内标物环己酮1.000g，加无水乙醇定容至100ml，备用。精密称取薄荷脑对照品25mg，加入一定量无水乙醇，加入1ml内标溶液，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm滤膜过滤，即得；

(5)、精密度试验：

精密称取薄荷脑对照品25mg，分别置10ml容量瓶中，加1ml内标溶液，以无水乙醇稀释至刻度，摇匀，依法连续测定6次，峰面积的RSD为2.19％，结果表明本法仪器精密度良好。

(6)、稳定性试验：

取供试品溶液，以上述色谱条件分别于0、4、8、12、24、48小时依法测定薄荷脑含量，结果表明，溶液在48小时内性质稳定，薄荷脑峰面积RSD为1.80％。

(7)、重现性试验：

取同批号(20050209)本品，按供试品溶液的制备，平行制备6份，依上述色谱条件分别进样1ul，记录峰面积值，计算结果薄荷脑峰面RSD为1.80％。

(8)、加样回收率试验：

精密称取已知含量的供试品批号20050209(含薄荷脑3.0mg/g)1.0g，9份，分别加入高、中、低(6.033mg，4.022mg，2.011mg)不同量的薄荷脑对照品，按照样品测定法进行测定，计算回收率，结果高、中、低3种浓度的平均回收率分别为101.3、99.5、101.1(n＝3)；平均回收率为100.6，RSD为1.21％，详细数据见下表1。

表1  白英消疹止痒凝胶薄荷脑含量测定加样回收率试验结果

(8)、样品测定：

将三批样品分别按供试品溶液的制备制成溶液，依上述色谱条件分别进样测定，按内标法以峰面积计算含量，f＝1.289，薄荷脑在样品溶液中平均含量为0.37mg/mL，即样品中薄荷脑含量为3.0mg/g。三批样品的测定结果如下表2。

表2 白英消疹止痒凝胶中的薄荷脑含量测定结果(n＝3)

(9)、本方法中的计算校正因子公式及含量测定公式为：

校正因子

式中As为内标物的峰面积；Ar为对照品的峰面积；

Cs为内标物溶液的浓度；Cr为对照品溶液的浓度。

含量 $\mathrm{Cx}=f\×\frac{\mathrm{Ax}}{\mathrm{As}/\mathrm{Cs}}$

式中Ax为供试品的峰面积；Cx为供试品的浓度；

As为内标物的峰面积；Cs为内标物的浓度；

f为校正因子。

Claims (4)

1. 一种白英消疹止痒凝胶制剂质量控制中的含量检测方法，其特征在于，该方法中含有如下芦丁的含量测定方法：

对照品溶液的制备：精密称取在110～130℃减压干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置于100ml容量瓶中，加60％～90％乙醇55～85ml，超声波振荡使溶解，加60％～80％乙醇至刻度，摇匀，为芦丁对照品溶液，每1ml中含无水芦丁0.25mg；

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml，分别置25ml量瓶中，加60％～80％乙醇至6ml，加3％～10％亚硝酸钠溶液0.5～1.5ml，混匀，放置3～10分钟，加0.5％～3.0％氯化铝溶液1.0～5.0ml，摇匀，放置3～10分钟，加2.0％～6.0％氢氧化钠试液5～20ml，再加水至刻度，摇匀，放置10～20分钟；以相应的溶液为空白，按照分光光度法，在510nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

测定法：取白英消疹止痒凝胶制剂，精密称定3.0～8.0g，置于50ml烧杯中，加入60％～90％乙醇5～25ml溶液，60℃水浴加热20～40分钟，使其溶解，然后在冰浴中冷却20～60分钟min，待基质凝固后，过滤，滤液置于25ml容量瓶中，加60％～90％乙醇至刻度，摇匀，放置3～5小时，即得供试品溶液；精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，加60％～80％乙醇至6ml，加3％～10％亚硝酸钠溶液0.5～1.5ml，混匀，放置3～10分钟，加0.5％～3.0％氯化铝溶液1.0～5.0ml，摇匀，放置3～10分钟，加2.0％～6.0％氢氧化钠试液5～20ml，再加水至刻度，摇匀，放置10～20分钟；按照分光光度法，在510nm波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。

2. 如权利要求1所述的一种白英消疹止痒凝胶制剂质量控制中的含量检测方法，其特征在于该方法中含有芦丁的含量测定方法，具体为：

对照品溶液的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置于100ml容量瓶中，加75％乙醇60ml，超声波振荡使溶解，加75％乙醇至刻度，摇匀，为芦丁对照品溶液，每1ml中含无水芦丁0.25mg；

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml，分别置25ml量瓶中，加75％乙醇至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1.0ml，混匀，放置6分钟，加1.0％氯化铝溶液3.0ml，摇匀，放置6分钟，加4.0％氢氧化钠试10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；以相应的溶液为空白，按照分光光度法，在510nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；

测定法：取白英消疹止痒凝胶制剂，精密称定5.0g，置于50ml烧杯中，加入75％乙醇20ml溶液，60℃水浴加热20～40分钟，使其溶解，然后在冰浴中冷却20～60分钟min，待基质凝固后，过滤，滤液置于25ml容量瓶中，加60％～90％乙醇至刻度，摇匀，放置3～5小时，即得供试品溶液；精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，加60％～80％乙醇至6ml，加3％～10％亚硝酸钠溶液0.5～1.5ml，混匀，放置3～10分钟，加0.5％～3.0％氯化铝溶液1.0～5.0ml，摇匀，放置3～10分钟，加2.0％～6.0％氢氧化钠试液5～20ml，再加水至刻度，摇匀，放置10～20分钟；按照分光光度法，在510nm波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，得到结果。

3. 一种白英消疹止痒凝胶制剂质量控制中的含量检测方法，其特征在于该方法中还包括如下薄荷脑的含量测定方法：

用气相色谱法测定，色谱条件为：

PEG-20M弹性石英毛细管柱(Supelco-Wax)，30m×0.25mm；FID检测器；进样口温度200～250℃；检测器温度230～270℃；分流进样，进样量1μl，分流比10∶1；柱温为100～160℃；理论板数按环己烷峰计算应不低于8000；载气为氮气，流速为2.5～8.0ml/min；内标物为环己酮；

供试品溶液的制备：取白英消疹止痒凝胶制剂0.5～2.0g，精密称定，置烧杯中，加无水乙醇20～100ml，置60℃水浴中，加热搅拌1～3min使溶解，抽滤，滤液置于50ml容量瓶中，精密加入内标溶液1～3ml，加无水乙醇至刻度，用0.22μm滤膜过滤，即得。

对照品的制备：精密称取内标物环己酮0.5～2.000g，加无水乙醇定容至50～200ml，备用。精密称取薄荷脑对照品25mg，加入一定量无水乙醇，加入1ml内标溶液，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm滤膜过滤，即得；

测定结果：分别进样1μL进行测定，计算结果；检测标准为每1.0g白英消疹止痒凝胶制剂中薄荷脑的含量在2.00mg～4.00mg之间。

4. 如权利要求3所述的一种白英消疹止痒凝胶制剂质量控制中的含量的检测方法，其特征在于该方法还包括薄荷脑的含量测定方法，具体为：

用气相色谱法测定，色谱条件为：

PEG-20M弹性石英毛细管柱(Supelco-Wax)，30m×0.25mm；FID检测器；进样口温度230℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10∶1；柱温为130℃；理论板数按环己烷峰计算应不低于8000；载气为氮气，流速为3.3ml/min；内标物为环己酮；

供试品溶液的制备：取白英消疹止痒凝胶制剂1.0g，精密称定，置烧杯中，加无水乙醇40ml，置60℃水浴中，加热搅拌2min使溶解，抽滤，滤液置于50ml容量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加无水乙醇至刻度，用0.22μm滤膜过滤，即得。

对照品的制备：精密称取内标物环己酮1.000g，加无水乙醇定容至100ml，备用。精密称取薄荷脑对照品25mg，加入一定量无水乙醇，加入1ml内标溶液，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm滤膜过滤，即得；

测定结果：分别进样1μL进行测定，计算结果；检测标准为每1.0g白英消疹止痒凝胶制剂中薄荷脑的含量在2.00mg～4.00mg之间。