CN101269135B - 葛根、山楂和红花黄酮类成分的提取纯化工艺 - Google Patents

葛根、山楂和红花黄酮类成分的提取纯化工艺 Download PDF

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Abstract

复方脑得生方中葛根、山楂和红花黄酮类成分的提取纯化工艺。按质量比取葛根261份,山楂157份和红花91份,加浓度60-80%的乙醇回流提取三次,三次乙醇加入量分别为药材质量10、8、6倍量,提取时间分别为2、1、1小时,合并3次提取液,回收乙醇,浓缩到无乙醇味,得到的提取浓缩液,加水至含生药0.1克/毫升,过滤,滤液过D-101大孔树脂柱吸附、用水洗和乙醇洗脱,吸附液流速为1-3倍柱体积/小时,吸附液量为4-5倍柱体积;水洗速率为3倍柱体积/小时,水洗体积为4-6倍柱体积;洗脱用乙醇浓度为30-60%,流速为1-3倍柱体积/小时,用量为2-6倍柱体积;收集乙醇洗脱液,浓缩至密度1.05-1.10克/毫升,干燥,即得总黄酮质量含量78.1%提取物产品。

Description

葛根、山楂和红花黄酮类成分的提取纯化工艺
技术领域
本发明涉及一种中药复方的提取方法,具体涉及复方脑得生方中葛根、山楂和红花的提取方法及其提取物。
背景技术
复方脑得生收载于《中国药典》2005版一部,由三七、川芎、红花、葛根、山楂组成。治疗脑动脉硬化、缺血性脑中风及脑出血后遗症等病症有显著疗效。
现代药理研究表明,葛根总黄酮具有扩张脑血管,解除脑血管痉挛,改善脑循环,增加脑血流量的作用。山楂的主要有效成分为黄酮类化合物,具有降血压、增加冠脉流量、强心、降血脂等作用。红花总黄酮具有扩张冠状动脉、改善心肌缺血、降低血压、抗脑缺血、保护神经细胞及抑制血小板活化、缓解血栓形成、减轻血液循环障碍等作用。因此,开发研究复方脑得生方中葛根、山楂和红花三味药总黄酮提取物具有重要的意义。
目前脑得生制剂多为片剂、蜜丸剂、颗粒剂、胶囊剂。以上各制剂中葛根、山楂、红花全部或部分以生药粉入药,以致服用剂量较大,质量可控性,不符合中药现代药化的要求。
本研究采用正交实验设计法对葛根、山楂和红花三味药的总黄酮提取纯化作了全面系统的研究。内容具有较强的实用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种复方脑得生方中葛根、山楂和红花的总黄酮有效部位的提取、纯化和提取物的干燥方法。
本发明的又一目的在于提供采用上述方法获得的葛根、山楂和红花总黄酮提取物。
本发明所述复方脑得生方中葛根、山楂和红花三味中药质量比例为:
葛根261份  山楂(去核)157份  红花91份。
本发明的一种葛根、山楂和红花的提取纯化方法包括:葛根、山楂和红花乙醇提取液浓缩后,过大孔树脂柱,水洗,再用乙醇洗脱,浓缩乙醇洗脱液,喷雾干燥。
具体提取纯化步骤如下:
1)、取复方脑得生方中葛根、山楂和红花饮片,加浓度60-80%的乙醇回流提取三次,第一次加药材质量10倍量的乙醇提取2小时,第二次加8倍量的乙醇提取1小时,第三次加6倍量的乙醇提取1小时,合并3次提取液,减压回收乙醇,浓缩到无乙醇味,得提取浓缩液;
2)、将步骤1)得到的提取浓缩液加水至每毫升含生药0.1克,过滤,得滤液;
3)、将步骤2)得到的滤液过D-101大孔树脂柱进行吸附、用水洗和乙醇洗脱,吸附、水洗和乙醇洗脱工艺条件为:吸附液流速为1-3倍柱体积/小时,吸附液量为4-5倍柱体积;水洗速率为3倍柱体积/小时,水洗体积为4-6倍柱体积;洗脱用乙醇的浓度为30-60%,流速为1-3倍柱体积/小时,用量为2-6倍柱体积;
4)、收集乙醇洗脱液,浓缩至密度为1.05-1.10克/毫升,喷雾干燥,得到葛根、山楂和红花的提取物产品,提取物中总黄酮质量含量为78.1%。收集干燥的提取物产品,封口,放冷,称重,置干燥处保存。
上述提取纯化优选条件:
所述步骤1)中加浓度70%的乙醇回流提取三次。
所述步骤3)中吸附流速为1倍柱体积/小时,吸附量为3.5倍柱体积;水洗速率为3倍柱体积/小时,水洗体积为5倍柱体积;洗脱用乙醇的浓度为40%,流速为3倍柱体积/小时,用量为5倍柱体积。
所述步骤4)中喷雾干燥条件为:喷雾干燥器进风口温度为170℃,出风口温度为85℃,雾化盘转速为20000转/分钟。
本发明中所述乙醇浓度%是指100体积乙醇水溶液中含乙醇体积分数。
发明与现有技术相比,具有如下优点:
1、有效成分转移率高且提取物总黄酮纯度高。对脑得生中葛根、山楂和红花三味药乙醇回流提取再过大孔树脂,除去了大量水溶性杂质,纯化得到的总黄酮有效部位,总黄酮转移率达到84.2%、质量含量高达78.1%。
2、采用喷雾干燥可以明显缩短活性成分的受热时间,减少成分损失。
3、喷雾干燥粉末较稳定均一,方便下一步制剂。
3、本工艺采用D-101大孔树脂进行分离纯化。该树脂价格较低,而且安全性较高,是目前国内药品行业使用最多的一种大孔树脂。
附图说明
图1葛根、山楂和红花提取总黄酮工艺流程图
图2葛根、山楂和红花提取液样品溶液上D101大孔树脂柱吸附总黄酮的泄漏曲线
图3水洗量与水洗液中黄酮含量关系曲线(水洗量考察)
图4水洗量与水洗液中干膏重关系曲线(水洗量考察)
图540%乙醇为洗脱剂洗脱树脂柱中总黄酮的洗脱曲线
图1所示工艺流程为:取三味中药饮片(葛根261份、山楂157份、红花91份)14公斤,用70%乙醇回流提取3次,第一次用乙醇140升,回流提取2小时,第二次用乙醇为112升,第三次用乙醇为84升,分别回流提取1小时,3次得到的山楂提取液合并,回收乙醇,浓缩到无乙醇味,释至140升,过滤备用;滤液以1倍柱体积/小时速率通过大孔树脂(药材∶D-101大孔树脂=1∶3),吸附完全后先用以3倍柱体积/小时速率冲5倍柱体积蒸馏水,再用5倍柱体积的40%乙醇以相同流速洗脱,收集洗脱液,洗脱液浓缩至适量体积,喷雾干燥,得葛根、山楂和红花的提取物密封保存
具体实施方式
下面结合实施例对本发明方法进一步说明。
实施例1葛根、山楂和红花总黄酮的提取工艺实验
(1)使用乙醇回流提取法进行实验,采用L9(34)正交实验法考察乙醇回流提取葛根、山楂和红花总黄酮中乙醇浓度、乙醇用量(药材质量的倍数)、提取时间等因素的工艺参数,并采用紫外-可见分光光度法对提取物中总黄酮的含量进行测定,同时用高效液相法测定葛根素和羟基红花黄色素A的含量,并以此为指标进行比较分析。结果见表1,表2,表3,表4,表5。
表1试验因素水平表
表2L9(34)正交实验表
Figure S2008100472149D00032
Figure S2008100472149D00041
表3总黄酮量方差分析
Figure S2008100472149D00042
表4葛根素量方差分析
Figure S2008100472149D00043
表5羟基红花黄色素A量方差分析
正交试验结果表明(见表3,表4,),影响因素最大的为提取时间,乙醇浓度、乙醇用量无明显影响,直观分析出最佳提取工艺为A2B3C3
表6验证试验结果
从羟基红花黄色素A方差分析(表5)看,各因素对羟基红花黄色素A的含量无显著性差异。直观分析出最佳提取工艺为A2B3C3。综上所述,选定最合适的工艺条件为,70%乙醇,提取3次,提取时间(倍数)分别为2小时(10倍),1小时(8倍),1小时(6倍)。(2)验证试验:取葛根,山楂,红花饮片(葛根261份、山楂157份和红花91份),共3份,按照优选提取工艺进行验证试验,验证试验结果如表6:
验证试验结果表明优选的提取工艺稳定可行。
实施例2葛根、山楂和红花总黄酮的大孔树脂纯化工艺实验
用前述优选提取条件提取得到的提取液进行如下实验:
(1)D-101树脂纯化工艺实验
①吸附条件优选实验
采用正交试验方法以上样药液浓度(以样品中所含有的原药材量计)、径高比及上样流速作为考察因数,应用L9(34)正交表安排试验,因素及水平安排见表7。对以上9组试验分别测定总黄酮含量,并进行评价。分析结果见表8,表9。
表7因素水平表
Figure S2008100472149D00052
表8正交试验结果
Figure S2008100472149D00053
Figure S2008100472149D00061
表9方差分析
Figure S2008100472149D00062
直观分析表明,3个因素对葛根,山楂和红花总黄酮在大孔吸附树脂上的吸附效率的影响程度依次为:上样浓度(A)>上样流速(D)>径高比(B),方差分析表明,在葛根,山楂和红花总黄酮的吸附过程中,A因素有显著影响,综合考虑,优选组合为A2B1D3
②上样量考察
取0.1克/毫升样品溶液,加于20克D-101树脂柱上(径高比1∶7),以1倍柱体积/小时的流速通过。每个流分收集10毫升,测定并计算流分中总黄酮的浓度。测定结果见图2。图中可以看出当上样量为70毫升时(约为3.5倍柱体积)开始明显泄漏,150毫升达到吸附饱和。综合考虑确定上样体积为70毫升(即生药∶树脂=1∶3)。
③水洗量考察
取0.1克/毫升样品溶液70毫升,加于20克D101树脂柱上(径高比1∶7),以1倍柱体积/小时的流速通过。再用蒸馏水以2倍柱体积/小时速度洗脱,每个流分收集10毫升,测定并计算流分中总黄酮量(见图3)和干膏重(见图4)。由图可知,在5倍柱体积后的水洗脱液中黄酮损失较大,所以确定水洗体积为5倍柱体积。
④乙醇洗脱浓度考察
另取20g树脂五份上柱,按以上条件进行吸附,5倍柱体积水冲洗后,分别以适量30%、40%、50%、60%、70%乙醇以2倍柱体积/小时的流速洗脱,测定洗脱液中总黄酮含量,计算洗脱率;挥干溶剂,将浸膏衡重,精密称定并计算总黄酮的含量,结果见表10
表10不同浓度洗脱液中总黄酮的量
Figure S2008100472149D00071
综合考虑总黄酮纯度与转移率选用40%乙醇洗脱。
⑤洗脱速率考察
按上述条件进行动态吸附,以80%乙醇为洗脱剂,分别以2,3,4倍柱体积/小时的速度洗脱,测定乙醇洗脱物中总黄酮量并计算洗脱率,结果表明洗脱速率为3倍柱体积/小时时洗脱率最高。
⑥乙醇洗脱量考察
按上述条件进行动态吸附,以40%乙醇为洗脱剂进行洗脱,定量收集流出液并测定其中总黄酮浓度。结果见图5。
结果表明:用100毫升(约5倍柱体积)40%乙醇以2倍柱体积/小时流速可以完全洗脱20g树脂所吸附的黄酮类成分。
实施例3中试放大实验
称取山楂饮片14千克,70%乙醇回流提取3次,第一次用乙醇140升,回流提取2小时,第二次用乙醇112升,回流提取1小时,第三次用乙醇84升,分别回流提取1小时。合并3次提取液,回收乙醇至无醇味,放置过夜,次日用滤布滤除沉淀,稀释至每毫升含生药0.1克的溶液,备用。
将20千克药用级D101型大孔树脂用适量乙醇浸泡,湿法上柱,处理后备用。
提取药液分两次上样加入树脂柱,每次70升,上样流速为1倍柱体积/小时,上样后先用5倍柱体积的蒸馏水冲洗,再用5倍柱体积40%乙醇以3倍柱体积/小时流速洗脱,收集乙醇洗脱液,浓缩至小体积(密度约为1.05克/毫升),喷雾干燥(喷雾干燥器进风口温度为170℃,出风口温度为85℃,雾化盘转速为20000转/分钟)。收集干燥提取物,封口,放冷,称重,置干燥处保存。采用紫外-可见分光光度法测定提取物中总黄酮的含量,计算转移率(转移率=提取物中总黄酮的含量/原药材中总黄酮的含量×100%)和收膏率(收膏率=提取物总质量/原药材总质量×100%)。试验结果见表11。
表11中试实验结果
Figure S2008100472149D00081
三批中试放大研究结果表明:其山楂总黄酮转移率达84.23%,提取物中总黄酮含量79.27%。表明本研究的工艺参数可行,工艺条件稳定,可望过渡到产业化生产。

Claims (1)

1.一种复方脑得生方中葛根、山楂和红花的总黄酮有效部位的提取物,其特征是,所述的复方脑得生方中葛根、山楂和红花三味中药质量比例为:葛根261份、去核山楂157份和红花91份,所述的提取物中总黄酮质量含量为78.1%,按下述方法提取得到,提取步骤为:
1)、取复方脑得生方中葛根、山楂和红花饮片,加浓度70%的乙醇回流提取三次,第一次加药材质量10倍量的乙醇提取2小时,第二次加8倍量的乙醇提取1小时,第三次加6倍量的乙醇提取1小时,合并3次提取液,减压回收乙醇,浓缩到无乙醇味,得提取浓缩液;
2)、将步骤1)得到的提取浓缩液加水至每毫升含生药0.1克,过滤,得滤液;
3)、将步骤2)得到的滤液过D-101大孔树脂柱进行吸附、用水洗和乙醇洗脱,吸附、水洗和乙醇洗脱工艺条件为:吸附液流速为1倍柱体积/小时,吸附液量为3.5倍柱体积;水洗速率为3倍柱体积/小时,水洗体积为5倍柱体积;洗脱用乙醇的浓度为40%,流速为3倍柱体积/小时,用量为5倍柱体积;
4)、收集乙醇洗脱液,浓缩至密度为1.05克/毫升,喷雾干燥即得,喷雾干燥条件为:喷雾干燥器进风口温度为170℃,出风口温度为85℃,雾化盘转速为20000转/分钟。
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