以下实施例描述了一些本发明化合物的制备,并表明了它们的活性。
微波照射用CEM Discover聚焦微波反应器进行。用无加热的GeneVac Series I或具有30℃VacRamp的Genevac Series II或Buchi旋转式蒸发仪除去溶剂。用获自Silicycle的粒度为40-63μm(230-400目)的硅胶通过快速层析柱纯化化合物。用制备型HPLC纯化化合物是在Gilson系统上进行的,采用反相ThermoHypersil-KeystoneHyperprep HS C18柱(12μm,100×21.2mm),9.5分钟20-100%B梯度(A=水/0.1%TFA,B=乙腈/0.1%TFA),流速=30ml/min,加样溶剂2∶1 DMSO∶乙腈(1.6ml),在215nm UV检测。
在氘化溶剂中用Bruker 400MHz AV光谱仪记录1H NMR谱。化学位移(δ)用用百万分之一份(ppm)表示。用Kieselgel 60 F254(Merck)板进行薄层层析(TLC)分析并用紫外光显色。
分析型HPLCMS在Agilent HP1100、Waters 600或Waters 1525 LC系统上进行,采用反相Hypersil BDS C18柱(5μm,2.1×50mm),2.10分钟0-95%B梯度(A=水/0.1%TFA,B=乙腈/0.1%TFA),流速=1.0ml/min。用Gilson G1315A二极管阵列检测器、G1214A单波长UV检测器、Waters 2487双波长UV检测器、Waters 2488双波长UV检测器或Waters 2996二极管阵列UV检测器记录215nm的UV光谱。用具有Z-喷射界面的Micromass LCT或者具有Z-喷射或MUX界面的Micromass LCT以每秒扫描2次或每1.2秒扫描1次的采样速率获得m/z 150-850之间的质谱。数据用OpenLynx和OpenLynx Browser软件进行积分和记录。
采用以下缩写:
MeOH=甲醇
EtOH=乙醇
EtOAc=乙酸乙酯
Boc=叔丁氧基羰基
DCM=二氯甲烷
DMF=二甲基甲酰胺
DMSO=二甲亚砜
TFA=三氟乙酸
THF=四氢呋喃
Na2CO3=碳酸钠
HCl=盐酸
DIPEA=二异丙基乙胺
NaH=氢化钠
NaOH=氢氧化钠
NaHCO3=碳酸氢钠
Pd/C=碳载钯
TME=叔丁基甲基醚
N2=氮气
PyBop=(苯并三唑-1-基-氧)-三-吡咯烷-磷六氟磷酸盐
Na2SO4=硫酸钠
Et3N=三乙胺
NH3=氨
TMSCl=三甲基氯硅烷
NH4Cl=氯化铵
LiAlH4=氢化铝锂
PyBrOP=溴代-三-吡咯烷磷六氟磷酸盐
MgSO4=硫酸镁
nBuLi=正丁基锂
CO2=二氧化碳
EDCl=N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐
Et2O=二乙醚
LiOH=氢氧化锂
HOBt=1-羟基苯并三唑
ELS=蒸发光散射
TLC=薄层层析
ml=毫升
g=克
mg=毫克
mol=摩尔
mmol=毫摩尔
LCMS=高效液相色谱/质谱
NMR=核磁共振
r.t.=室温
aq.=水溶液
饱和=饱和
h=小时
min=分钟
中间体
中间体A:2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-羧酸乙酯
中间体A是按照方案1中描述的方法制备的。
2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯
将4-氯-2-甲硫基-5-嘧啶羧酸乙酯(12.5g,53.88mmol)和Zn粉(14.1g,215.52mmol)混合并加入苯(60ml)和3M NH4Cl(140ml)。将此悬浮液剧烈搅拌并于80℃加热30小时。将反应混合物通过硅藻土过滤并用EtOAc(200ml)洗涤。将滤液真空浓缩至约50ml,然后在H2O(400ml)和EtOAc(400ml)之间分配。水层再用EtOAc(250ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并真空浓缩成深色油状物。该油状物通过柱层析纯化,用纯的庚烷、之后是1∶1∶1庚烷/CH2Cl2/Et2O、最后用2∶2∶0.5庚烷/CH2Cl2/Et2O洗脱。得到无色油状的标题化合物(13g,61%)。m/z 199[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.30(3H,t),2.60(3H,s),4.35(2H,q),9.0(2H,s)。
2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-羧酸乙酯-中间体A
0℃氮气下,用30分钟时间边搅拌边在2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(13g,47.59mmol)的无水THF(250ml)溶液中缓慢加入mCPBA(47.59g,275.76mmol)的THF(150ml)溶液。使反应混合物升至室温并搅拌2小时。然后将反应混合物真空浓缩成约100ml并将产物/苯甲酸混合物预吸附到硅胶上。通过层析纯化,一开始用纯己烷,然后用1∶5∶3 CH2Cl2/庚烷/Et2O,之后用1∶1∶1 CH2Cl2/庚烷/Et2O洗脱。获得白色固体状的标题化合物(10g,66%)。m/z 231[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.40(3H,t),3.50(3H,s),4.40(2H,q),9.50(2H,s)。
中间体B:6-氨基氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯
中间体B是按照方案2所述的方法制备的。
3-苄基-6-硝基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-2,4-二酮
在N-苄基马来酰亚胺(5.0g,26.7mmol)的MeCN(334ml)溶液中加入溴代硝基甲烷(1.87ml,26.7mmol)。加入K2CO3(3.69g,26.7mmol)并将反应混合物在室温下剧烈搅拌。4小时后再加入一份溴代硝基甲烷(0.2ml)。间隔4小时后再加入溴代硝基甲烷(0.2ml)(×4)。48小时后,TLC(50%DCM/庚烷)指示反应完成。将反应混合物蒸发至干。棕色残余物通过柱层析纯化(100%DCM),得到白色固体状的标题化合物(3.0g,42%)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:3.35(2H,s),4.50(1H,s),4.55(2H,s),7.2-7.4(5H,m)。
3-苄基-6-硝基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷
在3-苄基-6-硝基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(3.0g,12.2mmol)的溶液无水THF(30ml)中加入NaBH4(1.15g,30.48mmol)。反应物在氮气下室温搅拌15分钟。逐滴加入BF3·THF复合物(3.15ml,13.4mmol)并将反应物在40℃加热4小时。再加入NaBH4(0.15g),随后加入BF3·THF复合物(0.32ml)。在45℃连续加热30分钟。边搅拌边逐滴加入THF/H2O混合物(1/1,60ml)。所得混合物在50℃加热1小时,然后室温静置16小时。除去THF以主要留下水。用EtOAc萃取,干燥(MgSO4)并蒸发至干以得到黄色油状的标题化合物(2.47g,93%)。m/z 219[M+H]+,1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:2.50(4H,s),3.15(2H,d),3.65(1H,s),4.55(1H,s),7.2-7.4(5H,m)。
6-硝基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷盐酸盐
0℃下在3-苄基-6-硝基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷(2.47g,11.3mmol)的1,2-二氯乙烷(5ml)溶液中加入氯甲酸氯乙酯(1.83ml,16.9mmol)。将反应混合物在55℃加热4小时。再加入氯甲酸氯乙酯(0.5ml)并继续加热2小时。将反应混合物蒸发至干。加入MeOH(15ml)并将反应混合物在65℃加热3小时。加入浓HCl(1ml)并将反应物室温搅拌2小时。已经有灰色沉淀形成,该沉淀物通过过滤分离并用Et2O洗涤。得到灰色粉末状的标题化合物(464mg,25%)。1H NMR(300 MHz,d6-DMSO)δ:2.90(2H,s),3.3-3.6(4H,m),4.75(1H,s),9.50(2H,br s)。
6-硝基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯
将6-硝基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷盐酸盐(464mg,2.82mmol)悬浮于无水DCM(10ml)并冷却至0℃。加入Boc2O(677mg,3.10mmol),然后加入DMAP(1个晶体)和Et3N(0.43ml,3.10mmol)。将反应混合物室温搅拌5小时。减压除去溶剂以得到白色固体。通过急骤层析纯化(25%EtOAc的庚烷溶液)得到白色固体状的标题化合物(592mg,92%)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:1.45(9H,s),2.65(2H,s),3.50(2H,d),3.75(2H,q),4.10(1H,t)。
6-氨基氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯-中间体B
存EtOH(5ml)中存在10%Pd/C(20mg)时将6-硝基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(592mg,2.59mmol)在氢气(气球压力(balloon pressure))下还原18小时。通过硅藻土过滤除去催化剂。用EtOH洗涤硅藻土并将滤液浓缩以得到淡黄色油状的标题化合物(487mg,95%)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.40(9H,s),1.7-1.9(2H,m),3.2-3.4(4H,m)。
中间体C:3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基甲基氨基里酸叔丁酯
中间体C是按照方案3描述的方法制备的。
5-苄基-4,6-二氧代-1,3a,4,5,6,6a-六氢吡咯并[3,4c]吡唑-3-羧酸乙酯
将N-苄基马来酰亚胺(50g,267.1mmol)溶于Et2O(600ml),用重氮乙酸乙酯(31ml,293.8mmol)处理并在氮气下室温搅拌36小时。有白色沉淀形成,将其通过过滤分离,用冰冷的Et2O洗涤并干燥以得到白色固体状的标题化合物(72g,89%)。m/z 302[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.20(3H,t),4.15(2H,q),4.55(2H,s),4.60(1H,d),5.00(1H,d),7.15-7.35(5H,m),9.60(1H,s)。
3-苄基-2,4-二氧代-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯
将5-苄基-4,6-二氧代-1,3a,4,5,6,6a-六氢吡咯并[3,4c]吡唑-3-羧酸乙酯(72g,239.2mmol)加热至160℃直到其融化成黄色油状物。将此油状物再加热至200℃并开始鼓泡。将此油状物在200℃加热30分钟直到鼓泡消失。将此时琥珀色的油状物冷却至室温并与冰冷的Et2O一起研磨。将所得沉淀过滤并用更多冰冷的Et2O洗涤以得到固体乳膏状的标题化合物(37.2g,57%)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.20(3H,t),2.80(1H,t),3.00(2H,d),4.15(2H,q),4.35(2H,s),7.20-7.40(5H,m)。
(3-苄基-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基)甲醇
将3-苄基-2,4-二氧代-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯(37.2g,136.3mmol)溶于无水THF(400ml)。在0℃时将该溶液逐滴加入LiAlH4(20.7g,545.3mmol)的无水THF(200ml)悬浮液。将所得棕色悬浮液在氮气下于60℃加热36小时。然后将混合物冷却至0℃并用饱和NH4Cl小心淬灭。有灰色固体形成,加入更多THF并适度搅拌。在混合物中加入固体Na2SO4并室温搅拌30分钟。混合物然后通过硅藻土过滤以得到淡黄色溶液。将此溶液真空浓缩以得到橙色油状的标题化合物(14.1g,51%)。m/z204[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.25(2H,d),2.85(2H,d),3.20(2H,t),3.55(2H,s),4.35(1H,t),7.20-7.40(5H,m)。
3-苄基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-甲醛(carbaldehyde)
氮气下在搅拌烧瓶中的DCM(100ml)中加入草酰氯(0.88ml,17.73mmol)并将溶液的内部温度冷却至-65℃。然后逐滴加入DMSO(1.26ml,17.73mmol),保持内部温度在所有时刻都为-65℃或更低。然后在反应混合物中缓慢加入(3-苄基-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基)甲醇(2.00g,9.85mmol)的DCM(50ml)溶液,再次确保内部温度不超过-65℃。加入完成后在反应物中缓慢加入三乙胺(5.90ml,42.35mmol),再次确保内部温度不超过-65℃。加入完成后使反应物缓慢升至室温并在真空下除去溶剂。残余物通过柱层析纯化(25%EtOAc,在庚烷中)以得到淡黄色油状的标题化合物(1.49g,76%)。LCMS纯度90%,m/z 202[M+H]+,1H NMR(300 MHz,d6-DMSO)δ:2.11(2H,m),2.44(1H,m),2.50(2H,d,J=9.3Hz),3.07(2H,d,J=9.3Hz),3.64(2H,s),7.21-7.35(5H,m),9.31(1H,d,J=4.8Hz)。
3-苄基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-甲醛肟
室温氮气下,边搅拌边在3-苄基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-甲醛(1.60g,7.96mmol)的EtOH(100ml)溶液中加入盐酸羟胺(1.69g,22.84mmol)和乙酸钠(2.45g,29.85mmol)。将反应物搅拌16小时。然后在真空下除去溶剂并将残余物在DCM(100ml)和K2CO3水溶液(100ml)之间分配。分离有机层,水层用DCM(100ml)洗涤。将合并的有机层干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂以得到黄色油状的标题化合物(1.57g,91%-肟同分异构体的1∶1混合物)。LCMS纯度85%,m/z 217[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.65(4H,m),1.86(1H,m),2.29(4H,d,J=9Hz),2.50(1H,m),2.91(4H,dd,J=2.4,9Hz),3.57(4H,s),6.05(1H,d,J=9Hz),6.96(1H,d,J=8.1Hz),7.21-7.34(10H,m),10.28(1H,s),10.59(1H,s)。
(3-苄基-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基)甲胺
氮气下,将3-苄基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-甲醛肟(1.57g,7.27mmol)的THF(75ml)溶液冷却至0℃并加入LiAlH4(965mg,25.44mmol)。将反应物在60℃加热16小时,然后冷却至0℃。用H2O(3ml)和饱和酒石酸钾钠水溶液(1ml)的混合物淬灭,并将所得悬浮液搅拌30分钟。加入MgSO4并将混合物通过硅藻土过滤。然后将滤液真空浓缩以得到淡黄色油状的标题化合物(1.35g,93%)。LCMS纯度80%,m/z 203[M+H]+,1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:1.21(4H,m),1.41(1H,m),2.36(2H,d,J=8.7Hz),2.52(2H,d,J=7.2Hz),2.97(2H,d,J=8.7Hz),3.54(2H,s),7.20-7.36(5H)。
(3-苄基-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基)甲基氨基甲酸叔丁酯
室温下将(3-苄基-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基)甲胺(1.35g,6.68mmol)在二烷/H2O(9∶1,100ml)中搅拌。加入三乙胺(1.4ml,10.02mmol),然后加入Boc2O(1.46g,6.7mmol)并将反应物搅拌30分钟。然后加入H2O(100ml)并用Et2O(2×150ml)萃取该溶液。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂以得到黄色油状产物(2.01g,100%)。LCMS纯度95%,m/z 303[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.27(2H,m),1.43(10H,s),2.35(2H,dm,J=8.7Hz),2.96(2H,d,J=8.7Hz),3.59(2H,s),4.66(1H,br s),7.21-7.33(5H,m)。
3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基甲基氨基甲酸叔丁酯-中间体C
室温下,边搅拌边在(3-苄基-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基)甲基氨基甲酸叔丁酯(2.35g,7.78mmol)和EtOH(90ml)的溶液中加入10%Pd/C(2.35g)和甲酸铵(2.35g),并将反应物搅拌2小时。然后将悬浮液通过硅藻土过滤并将滤液真空浓缩。加入DCM(100ml)以得到胶状白色固体并过滤混合物。将滤液真空浓缩以得到黄色油状的标题化合物(1.2g,73%)。LCMS纯度95%,m/z 213[M+H]+,1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:0.89(1H,m),1.26(2H,m),1.47(9H,s),2.96(2H,d,J=11.4Hz),3.07(4H,m),4.62(2H,br s)。
中间体D:O-(1-异丁氧基乙基)羟胺
中间体D是按照WO 01/60785描述的方法制备的(见方案4)。
1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:0.85(6H,d),1.15(3H,d),1.75(1H,m),3.18(1H,dd),3.42(1H,dd),4.53(1H,q),5.82(2H,s)。
实施例
实施例1:N-羟基2-{6-[(2-萘基磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5- 羧酰胺(carboxamide)三氟乙酸酯
实施例1是按照方案5描述的方法制备的。
6-[(2-萘基磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯
0℃氮气下,将2-萘磺酰氯(20.07g,97.39mmol)一次性加入中间体B(17.53g,88.54mmol)和Et3N(24.7ml,177.07mmol)的无水DCM(270ml)溶液,得到淡棕色溶液,使该溶液升至室温过夜。反应混合物用DCM(200rml)和饱和NaHCO3(200ml)稀释。将有机相分离,用H2O(2×200ml)洗涤,干燥(Na28O4),过滤并真空浓缩以得到淡黄色油状。与TME和庚烷一起研磨以得到固体,该固体通过过滤分离并用庚烷洗涤以得到白色固体状的标题化合物(27.99g,82%)。LCMS纯度100%,m/z 389[M+H]+,1HNMR(300 MHz,CDCl3)δ:1.35(9H,s),1.82(2H,m),1.96(1H,m),3.29-3.34(2H,m),3.41-3.56(2H,m),5.12(1H,br s),7.62-7.68(2H,m),7.85(1H,m),7.93(1H,d),7.99-8.02(2H,m),8.47(1H,m)。
6-[(2-萘基磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己烷三氟乙酸酯
将20%TFA的DCM溶液(300ml)中的6-[(2-萘基磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(27.50g,68.43mmol)溶液室温搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩,然后加入DCM(100ml)并在真空下除去三次以除去过量TFA而得到标题化合物,其为三氟乙酸酯的盐(粗产率=34.0g)。该产物无需进一步纯化便可用于下面的步骤。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ:1.86(2H,s),2.20(1H,m),3.22(4H,m),7.70-7.75(2H,m),7.83(1H,dd),8.08(1H,d),8.18-8.23(3H,m),8.33(1H,br s),8.48(1H,s),9.20(1H,br s)。
2-{6-[(2-萘基磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酸乙酯
室温氮气下,边搅拌边在6-[(2-萘基磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己烷三氟乙酸酯(27.50g,68.43mmol)的MeCN(300ml)悬浮液中加入K2CO3(28.33g,205.29mmol)。用5分钟逐滴加入中间体A(15.74g,68.43mmol)的MeCN(50ml)溶液以形成沉淀,将该沉淀室温搅拌过夜。反应混合物用EtOAc(250ml)稀释得到悬浮液,该悬浮液用水(2×250ml)洗涤。通过过滤分离有机相中的沉淀,用TME洗涤并空气干燥以得到白色固体状的标题化合物(25.40g,85%)。LCMS纯度96%,m/z 439[M+H]+,1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ:1.26(3H,t),1.82(2H,s),1.90(1H,m),3.50-3.53(2H,m),3.67-3.70(2H,m),4.23(2H,q),7.67-7.71(2H,m),7.84(1H,m),8.04(1H,d),8.15-8.22(3H,m),8.50(1H,m),8.70(2H,s)。
2-{6-[(2-萘基磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酸
室温下,将1M NaOH水溶液(500ml)加入THF(500ml)和MeOH(100ml)中的2-{6-[(2-萘基磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酸乙酯(25.40g,58.00mmol)溶液。将反应混合物搅拌18小时。在真空下除去有机溶剂并用1M aq.HCl将所得水溶液酸化至pH约5。形成的大量白色沉淀通过过滤分离,用水洗涤并与甲苯共沸以干燥,得到白色固体状产物(22.19g,93%)。LCMS纯度100%,m/z 411[M+H]+,1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ:1.97(2H,s),2.05(1H,s),3.64-3.67(2H,m),3.82-3.89(2H,m),7.84-7.88(2H,m),8.01(1H,m),8.21(1H,d),8.31-8.36(3H,m),8.66(1H,s),8.83(2H,s)。
N-(1-异丁氧基乙氧基) 2-[6-(萘-2-磺酰基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-
羧酰胺
室温氮气下,将EDCI(7.27g,37.9mmol)加入无水DCM(100ml)和无水THF(500ml)中的2-{6-[(2-萘基磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酸(22.19g,54.12mmol)悬浮液。加入Et3N(22.6ml,162.14mmol),然后加入HOBt(8.78g,64.97mmol)和中间体D(8.9ml,64.89mmol)。室温搅拌6天后LCMS显示78%转化成所需产物。将反应混合物与EDCI(10.25g,53.47mmol)、HOBt(7.22g,53.43mmol)和Et3N(19.4ml,139.00mmol)反应。再室温搅拌3天后LCMS显示有96%转化。将反应混合物蒸发至干并悬浮于EtOAc(100ml)和水(100ml)。通过过滤收集白色固体,用EtOAc(50ml)、水(50ml)和MeOH(50ml)洗涤,并真空干燥以得到白色固体状的粗制产物(30g,LCMS纯度92%)。将该产物在EtOH(1500ml)中于60℃搅拌1小时,得到白色悬浮液,将其冷却至室温,过滤并空气干燥以得到白色固体状的标题化合物(24.0g,87%)。LCMS纯度97%,m/z 511[M+H]+,1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ:1.60-1.75(6H,m),1.80(2H,s),1.90(1H,s),4.50(3H,m),4.65(2H,d),4.00(1H,m),4.95(1H,t),7.60(2H,m),7.80-8.30(4H,d),8.50(1H,s),8.65(2H,s)。
N-羟基2-{6-[(2-萘基磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺三氟 乙酸酯-实施例1
室温氮气下,边剧烈搅拌边用5分钟将4M HCl的二烷(350ml)溶液分批加入N-(1-异丁氧基乙氧基)2-[6-(萘-2-磺酰基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酰胺(10.0g,19.65mmol)。2小时后加入DCM(20ml),然后再加入另一份4M HCl的二烷(20ml)溶液并继续搅拌2.5小时。将反应混合物真空蒸发至约200ml体积,分批加入DCM(200ml)以使其沉淀。所得白色沉淀通过过滤分离并用DCM(5ml)洗涤,得到白色粉末状的标题化合物(6.25g,75%)。LCMS纯度98%,m/z 426[M+H]+,1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ:1.75(2H,s),1.80(1H,s),3.20(1H,s),3.45(2H,d),3.65(2H,d),7.45(2H,m),7.65(1H,d),7.95-8.15(4H,m),8.40(1H,s),8.50(2H,s),11.0(1H,br s)。C21H26ClN5O6S的计算值:C,49.27;H,5.12;Cl,6.92;N,13.68。实测值:C,49.70;H,5.09;Cl,7.10;N,13.55。
实施例2-4按照与实施例1类似的方法制备:
实施例2:N-羟基2-{6-[(噻吩-2-基磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶 -5-羧酰胺
LCMS纯度100%,m/z=282[M+H]+,280[M-H]-,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.82(2H,s),1.93(1H,m),3.48-3.75(4H,溶剂峰之下),7.22(1H,t),7.65(1H,dd),7.96(1H,dd),8.23(1H,d),8.65(2H,s),10.55(1H,br s)。
实施例3:N-羟基2-(6-{[(3,5-双三氟甲基苯基)磺酰基]氨基}-3-氮杂二环[3.1.0]己 -3-基)嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>95%,m/z 512[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.84(2H,s),2.07(1H,br s),3.45-3.55(2H,m),3.70(2H,d,J=11.7Hz),8.38(2H,s),8.47-8.52(1H,m),8.54-8.57(1H,m),8.62(2H,s),9.00(1H,br s),11.05(1H,br s)。
实施例4:N-羟基2-(6-{[(4-三氟甲氧基苯基)磺酰基]氨基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3- 基)嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 460[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.81(2H,m),1.91(1H,s),3.51(2H,d,J=11.6Hz),3.68(2H,d,J=11.8Hz),7.64(2H,d,J=8.2Hz),7.97(2H,d,J=8.8Hz),8.24(1H,br s),8.62(2H,s),9.01(1H,br s),11.07(1H,br s)。
实施例5:N-羟基2-{6-[(萘-2-羰基)氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰 胺
实施例5是按照方案6描述的方法制备的。
6-(2-萘酰氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯
在冷却的(冰浴)中间体B(170mg,0.86mmol)的吡啶(1ml)溶液中加入2-萘酰氯(180mg,0.94mmol)。将混合物搅拌1小时,然后加入水(8ml)。所得沉淀通过过滤收集,并真空干燥以得到标题化合物(314mg,100%)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:1.47(9H,s),1.85(2H,s),2.71(1H,d),3.40-3.50(2H,m),3.82(2H,d),6.37(1H,br s),7.54-7.60(2H,m),7.81(1H,dd),7.88-7.95(3H,m),8.26(1H,s)。
N-羟基2-{6-[(萘-2-羰基)氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}-嘧啶-5-羧酰胺-实施例5
标题化合物按照实施例1所描述的相同方法从6-(2-萘酰氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯制备。LCMS纯度>98%,m/z 390[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.04(2H,br s),2.64-2.70(1H,m),3.60-3.70(2H,m),3.95(2H,d,J=11.6Hz),7.55-7.66(2H,m),7.88-8.05(4H,m),8.43(1H,br s),8.69(2H,s),8.74(1H,d,J=3.9Hz),9.01(1H,br s),11.05(1H,br s)。
实施例6-19按照与实施例5类似的方法制备:
实施例6:N-羟基2-(6-{2-[4-(1,1-二氧代异噻唑烷-2-基)苯基]乙酰基氨基}-3-氮杂 二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 473[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.81(2H,br s),2.32-2.42(3H,m),3.33(2H,s),3.48(2H,t,J=7.9Hz),3.57(2H,m),3.73(2H,t,J=6.8Hz),3.84(2H,m),7.14(2H,d,J=5.5Hz),7.24(2H,d,J=5.5 Hz),8.28(1H,d,J=2.5Hz),8.64(2H,s),11.05(1H,br s)。
实施例7:N-羟基2-[6-(5-苯基戊酰氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酰 胺
LCMS纯度>98%,m/z 396[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.52,(4H,m),1.76(2H,br s),2.07(2H,m),2.34(1H,m),2.58(2H,m),3.57(2H,m),3.84(2H,m),7.14-7.29(5H,m),8.00(1H,d,J=2.5Hz),8.67(2H,s),11.05(1H,br s)。
实施例8:N-羟基2-[6-(6-苯基己酰)氨基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-嘧啶-5-羧酰 胺
LCMS纯度>90%,m/z 140[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.24(2H,m),1.52(4H,m),1.75(2H,br s),2.02(2H,t,J=8.6Hz),2.33(1H,m),2.55(2H,t,J=9.1Hz),3.56(2H,m),3.83(2H,m),7.13-7.29(5H,m),7.97(1H,d),8.65(2H,s),11.03(1H,br s)。
实施例9:N-羟基2-(6-{[(1-苯基环丙基)羰基]氨基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧 啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>99%,m/z 380[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:0.96(2H,dd,J=5.8,7.2Hz),1.32(2H,dd,J=5.8,7.2Hz),1.79(2H,br s),2.31(1H,m),3.52(2H,dm),3.79(2H,d),7.06(1H,d,J=11.0Hz),7.23-7.40(5H,m),8.64(2H,s),8.99(1H,br s),11.04(1H,s)。
实施例10:N-羟基2-{6-[(2-苯基丙酰)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧 酰胺
LCMS纯度>99%,m/z 368[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.31(3H,d,J=9.2Hz),1.76(2H,m),2.35(1H,m),3.54(3H,m),3.82(2H,dd,J=1.9,9.5Hz),7.18-7.35(5H,m),8.18(1H,d),8.64(2H,s),8.99(1H,br s),11.05(1H,s)。
实施例11:N-羟基2-{6-[(噻吩-3-基乙酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶 -5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 360[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.80(2H,br s),2.28(1H,m),3.33(2H,s),3.56(2H,dm,J=11.7Hz),3.83(2H,d),7.01(1H,dd,J=3.9,1.2Hz),7.22(1H,d,J=2.1Hz),7.45(1H,dd,J=2.1,1,2Hz),8.23(1H,d,J=3.9Hz),8.65(2H,s),8.99(1H,br s),11.05(1H,br s)。
实施例12:N-羟基2-{6-[(环己基羰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧 酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 346.2[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.05-1.40(4H,m),1.55-1.80(8H,m),1.95-2.10(1H,m),2.30-2.38(1H,m),3.50-3.60(2H,m),3.82(2H,d,J=11.7Hz),7.88(1H,d,J=4Hz),8.65(2H,s),8.99(1H,br s),11.07(1H,br s)。
实施例13:N-羟基2-[6-(苯甲酰氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 339.4[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.98(2H,br s),2.55-2.63(1H,m),3.62(2H,d,J=11.7Hz),3.92(2H,d,J=11.7Hz),7.41-7.58(3H,m),7.83(2H,m),8.60(1H,d,J=3.9Hz),8.67(2H,s),8.95-9.05(1H,br s),11.08(1H,s)。
实施例14:N-羟基2-{6-[2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙酰基氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0] 己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 407[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.80(2H,br s),2.35-2.40(1H,m),2.45(2H,s),3.52-3.60(2H,m),3.74(3H,s),3.83(2H,d,J=11.7Hz),7.02(1H,m),7.10-7.18(2H,m),7.37(1H,d,J=8.2Hz),7.53(1H,d,J=7.9Hz),8.19(1H,d,J=3.7Hz),8.64(2H,s),8.98(1H,br s),11.01(1H,br s)。
实施例15:N-羟基2-[6-(4-苯氧基丁酰氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧 酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 398[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.76-1.81(2H,m),1.86-1.98(2H,m),2.22(2H,t,J=7.5Hz),2.34-2.38(1H,m),3,52-3.61(2H,m),3.83(1H,d,J=11.7Hz),3.94(2H,t,J=6.3Hz),6.88-6.95(3H,m),7.28(2H,dd,J=8.3,8.3Hz),8.07(1H,d,J=3.8Hz),8.65(2H,s),8.99(1H,br s),11.06(1H,br s)。
实施例16:N-羟基2-{6-[(1-苯并呋喃-5-基羰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基} 嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>99%,m/z 380[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.99(2H,br s),2.62(1H,m),3.62(2H,dm,J=11.7Hz),3.92(2H,d,J=11.7Hz),7.06(1H,m),7.66(1H,d,J=8.5Hz),7.81(1H,dd,J=8.5,1.8Hz),8.08(1H,d,J=1.8Hz),8.17(1H,d,J=1.8Hz),8.61(1H,d,J=3.9Hz),8.68(2H,s),9.00(1H,br s),11.07(1H,br s)。
实施例17:N-羟基2-{6-[(1-苯并噻吩-5-基羰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基} 嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度97%,m/z 395[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.01(2H,br s),2.64(1H,m),3.63(2H,dm,J=11.7Hz),3.93(2H,d,J=11.7Hz),7.55(1H,d,J=5.4Hz),7.81(1H,dd,J=8.6,1.5Hz),7.86(1H,d,J=5.4Hz),8.08(1H,d,J=8.6Hz),8.37(1H,d,J=1.2Hz),8.68(3H,m),8.99(1H,br s),11.05(1H,br s)。
实施例18:N-羟基2-{6-[(噻吩-2-基羰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-}嘧啶-5- 羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 346[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.97(2H,m),2.64(1H,m),3.57-3.66(2H,m),3.90(2H,d,J=11.6Hz),7.12-7.18(1H,m),7.72-7.78(2H,m),8.63-8.65(1H,m),8.67(2H,m),11.07(1H,br s)。
实施例19:N-羟基2-[6-(2-联苯基-4-基-乙酰基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基] 嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度97%,m/z 430[M+H]+,428[M-H]-,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.82(2H,br s),2.39(1H,br s),3.42(2H,s),3.57(2H,d,J=9.6Hz),3.84(2H,d,J=11.6Hz),7.34(3H,m),7.46(2H,m),7.62(4H,m),8.34(1H,d,J=4.1Hz),8.65(2H,s),9.00(1H,br s),11.07(1H,br s)。
实施例20:N-羟基2-{6-[(2-萘基甲基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧 酰胺
实施例20是按照方案7描述的方法制备的。
6-(萘-2-甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯
室温氮气下,将中间体B(200mg,1.01mml)在MeOH(10ml)中搅拌并加入2-萘甲醛(148mg,0.96mmol)。将所得溶液搅拌3小时。之后加入NaBH4(61mg,1.62mmol),有气泡产生,并将溶液搅拌10分钟。然后加入1M NaOH(20ml),形成不透明的白色溶液,将该溶液搅拌20分钟。然后加入H2O(50ml)并用Et2O(2×100ml)萃取该溶液。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂以得到无色油状标题化合物(320mg,100%)。LCMS纯度98%,m/z 339[M+H]+。
N-羟基2-{6-[(2-萘基甲基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺-实施例20
标题化合物按照实施例1所描述的相同方法从6-(萘-2-甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯制备。LCMS纯度>99%,m/z 375[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.22(2H,br s),2.57(1H,m),3.56(2H,dm,J=11.7Hz),3.80(2H,d,J=11.7Hz),4.41(2H,s),7.57(2H,m),7.67(1H,dd,J=8.4,1.8Hz),7.97(3H,m),8.07(1H,s),8.66(2H,s),9.01(1H,br s),9.61(1H,br s),11.10(1H,br s)。
实施例21-44按照与实施例20类似的方法制备:
实施例21:N-羟基2-{6-[(4-甲氧基苄基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5- 羧酰胺
LCMS纯度100%,m/z 382[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:1.45(2H,m),1.73(4H,m),2.25(2H,br s),2.59(1H,m),2.66(2H,t,J=8.9Hz),3.14(2H,t,J=10.1Hz),3.68(2H,dm,J=10.8Hz),4.06(2H,d,J=10.8Hz),7.10-7.30(5H,m),8.69(2H,s)。
实施例22:N-羟基2-[6-(4-苯氧基苄基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧 酰胺
LCMS纯度>97%,m/z 418[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.15(2H,br s),2.58(1H,m),3.58(2H,m),3.83(2H,d,J=11.7Hz),4.26(2H,br s),7.02(2H,d,J=7.8Hz),7.05(2H,d,J=7.2Hz),7.18(1H,t,J=5.4Hz),7.42(2H,td,J=7.5,2.1Hz),7.51(2H,d,J=8.4Hz),8.48(2H,s),9.23(1H,br s),11.05(1H,br s)。
实施例23:N-羟基2-[6-(4-丁基苄基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酰 胺
LCMS纯度97%,m/z 382[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:0.95(3H,t,J=7.2Hz),1.37(2H,m),1.61(2H,m),2.19(2H,br s),2,58(1H,m),2.70(2H,t,J=7.5Hz),3.65(2H,dm,J=12Hz),4.01(2H,d,J=12Hz),4.33(2H,s),7.31(2H,d,J=8.1Hz),7.42(2H,d,J=8.1Hz),8.69(2H,s)。
实施例24:N-羟基2-{6-[(2-苯基丙基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧 酰胺
LCMS纯度97%,m/z 354[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:1.36(3H,d,J=6.9Hz),2.23(2H,m),2.50(1H,br s),3.14(1H,m),3.41(2H,m),3.63(2H,m),3.98(2H,dd,J=11.7,6.6Hz),7.26-7.41(5H,m),8.67(2H,s)。
实施例25:N-羟基2-{6-[(环己基甲基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧 酰胺
LCMS纯度98%,m/z 382[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:0.97-1.25(4H,m),1.60-1.85(7H,m),2.19(2H,br s),2.49(1H,br s),2.98(2H,d,J=6.9Hz),3.69(2H,dm,J=12Hz),4.08(2H,d,J=12Hz),8.69(2H,s)。
实施例26:N-羟基一2-{6-[(4-甲氧基苄基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5- 羧酰胺
LCMS纯度98%,m/z 356[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.13(2H,br s),2.57(1H,br s),3.56(2H,dm,J=11.7Hz),3.82(2H,d,J=11.7Hz),4.20(2H,br s),7.00(2H,d,J=8.7Hz),7.42(2H,d,J=8.7Hz),8.67(2H,s),9.04(1H,s),9.14(1H,br s),11.10(1H,br s)。
实施例27:N-羟基2-{6-[(联苯基-4-基甲基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}嘧 啶-5-羧酰胺
LCMS纯度98%,m/z 402[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.19(2H,br s),2.63(1H,br s),3.59(2H,dm,J=11.7Hz),3.84(2H,d,J=11.7Hz),4.33(2H,br s),7.10-7.30(2H,m),7.35-7.75(8H,m),8.67(2H,s),9.34(1H,br s),11.05(1H,br s)。
实施例28:N-羟基2-{6-[(3,5-二氟苄基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5- 羧酰胺
LCMS纯度98%,m/z 362[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.15(2H,br s),2.61(1H,m),3.58(2H,dm,J=11.7Hz),3.82(2H,d,J=11.7Hz),4.30(2H,br s),7.28(2H,m),7.37(1H,m),8.67(2H,m),9.37(1H,br s),10.19(1H,br s),11.10(1H,br s)。
实施例29:N-羟基2-[6-(3-苯基丁基氨基)-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酰 胺
LCMS纯度99%,m/z 368[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.22(3H,d,J=6.9Hz),1.87(2H,q,J=7.8Hz),2.17(2H,br s),2.64(1H,br s),2.78(2H,m),2.98(1H,m),3.57(2H,dm,J=11.7Hz),3.86(2H,d,J=11.7Hz),7.19-7.35(5H,m),8.66(2H,s),8.82(1H,br s),9.01(1H,m),11.08(1H,s)。
实施例30:N-羟基2-{6-[(4-氯苄基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰 胺
LCMS纯度>98%,m/z 362[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.13(2H,br s),2.57(1H,br s),3.57(2H,dm,J=11.7Hz),3.71(2H,d,J=11.7Hz),4.27(2H,s),7.54(4H,m),8.67(2H,s),9.04(1H,br s),9.26(1H,br s),11.07(1H,br s)。
实施例31:N-羟基2-{6-[(4-氰基苄基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧 酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 351[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.26(2H,br s),2.65(1H,br s),3.67(2H,dm,J=11.7Hz),4.03(2H,d,J=11.7Hz),4.47(2H,br s),7.71(2H,d,J=7.8Hz),7.87(2H,d,J=7.8Hz),8.67(2H,s)。
实施例32:N-羟基2-{6-[(1-苯并噻吩-3-基甲基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基} 嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 382[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.15(2H,br s),2.64(1H,br s),3.54(2H,dm,J=11.7Hz),3.81(2H,d,J=11.7Hz),4.57(2H,s),7.45(2H,m),7.97(1H,s),8.07(2H,dd,J=7.8,0.9Hz),8.67(2H,s),9.04(1H,br s),9.32(1H,br s),11.10(1H,br s)。
实施例33:N-羟基2-[6-(苄基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 326[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.13(2H,br s),2.57(1H,br s),3.56(2H,dm,J=11.7Hz),3.82(2H,d,J=11.7Hz),4.26(2H,s),7.42-7.51(5H,m),8.67(2H,s),9.02(1H,br s),9.20(1H,br s),11.09(1H,br s)。
实施例34:N-羟基2-{6-[(4-三氟甲氧基苄基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧 啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 410[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.15(2H,br s),2.60(1H,br s),3.57(2H,dm,J=11.7Hz),3.83(2H,d,J=11.7Hz),4.31(2H,s),7.25(2H,d,J=8.7Hz),7.64(2H,d,J=8.7Hz),8.67(2H,s),9.02(1H,br s),9.28(1H,br s),11.07(1H,br s)。
实施例35:N-羟基2-{6-[(3,5-双三氟甲基苄基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基} 嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>97%,m/z 462[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.27(2H,br s),2.67(1H,br s),3.68(2H,dm,J=12Hz),4.06(2H,d,J=12Hz),4.56(2H,s),8.13(1H,m),8.20(2H,m),8.69(2H,s)。
实施例36:N-羟基2-{6-[(4-溴代苄基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧 酰胺
LCMS纯度>99%,m/z 406[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.18(2H,br s),3.56(2H,dm,J=11.7Hz),3.81(2H,dm,J=11.7Hz),4.23(2H,s),7.49(2H,d,J=8.4Hz),7.67(2H,d,J=8.4Hz),8.67(2H,s),9.01(1H,br s),9.49(1H,br s),11.10(1H,br s)。
实施例37:N-羟基2-{6-[(联苯基-3-基甲基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}嘧 啶-5-羧酰胺
LCMS纯度98%,m/z 402[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.26(2H,br s),2.57(1H,br s),3.57(2H,d,J=11.7Hz),3.83(2H,d,J=11.7Hz),4.32(2H,br s),7.40(1H,m),7.47-7.54(4H,m),7.73(2H,m),7.93(1H,s),8.67(2H,s),9.75(2H,br s),11.10(1H,br s)。
实施例38:N-羟基2-{6-[(2-苯基乙基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧 酰胺
LCMS纯度99%,m/z 340[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.05(2H,br s),2.61(1H,br s),3.03(2H,m),3.37(2H,m),3.67(2H,dm,J=11.7Hz),4.03(2H,d,J=11.7Hz),7.27-7.38(5H,m),8.68(2H,s)。
实施例39:N-羟基2-[6-(3,3-二苯基丙基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5- 羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 430[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.11(2H,br s),2.42(3H,m),2.99(2H,m),3.64(2H,dm,J=11.7Hz),3.97(2H,d,J=11.7Hz),4.06(1H,t,J=8.1Hz),7.20(2H,m),7.31(8H,m),8.67(2H,s)。
实施例40:N-羟基2-{6-[(2,2,2-三氟-1-苯基乙基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基} 嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 394[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:1.72(3H,m),3.48(2H,m),3.61(2H,m),4.23(1H,m),7.23-7.37(5H,m),8.50(2H,s)。
实施例41:N-羟基2-{6-[(4-氟苄基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰 胺
LCMS纯度>98%,m/z 344[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.27(2H,m),2.57(1H,m),3.58(2H,dm,J=11.7Hz),3.84(2H,d,J=11.7Hz),4.30(2H,m),7.35(2H,m),7.68(2H,m),8.73(2H,s),9.83(2H,m),11.20(1H,m)。
实施例42:N-羟基2-(6-{[4-(三氟甲基)苄基]氨基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶 -5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 394[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.27(2H,m),2.55(1H,m),3.57(2H,dm,J=11.7Hz),3.80(2H,d,J=11.7Hz),4.59(2H,m),7.56(2H,d,J=8.1Hz),7.68(2H,d,J=8.1Hz),8.68(2H,s),10.01(2H,m),11.10(1H,m)。
实施例43:N-羟基2-{6-[(喹啉-2-基甲基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5- 羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 377[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.28(2H,br s),2.67(1H,br s),3.59(2H,dm,J=11.7Hz),3.98(2H,d,J=11.7Hz),4.64(2H,s),7.43(1H,d,J=8.4Hz),7.54(1H,t,J=7.2Hz),7.70(1H,t,J=7.2Hz),7.87(1H,d,J=8.4Hz),8.01(1H,d,J=8.4Hz),8.30(1H,d,J=8.4Hz),8.57(2H,s)。
实施例44:N-羟基2-(6-{[(6-氟喹啉-2-基)甲基]氨基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基) 嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 395[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.30(2H,s),2.75(1H,s),3.60(2H,dm,J=11.7Hz),3.88(2H,d,J=11.7Hz),4.69(2H,br s),7.66(1H,d,J=8.4Hz),7.75(1H,td,J=8.7,3.0Hz),7.88(1H,dd,J=9.3,2.7Hz),8.48(1H,d,J=8.4Hz),8.67(2H,s),9.01(1H,br s),9.61(1H,br s),11.09(1H,br s)。
制备N-封端的(-capped)磺胺
N-封端的磺胺按照方案8描述的方法制备。
实施例45:N-羟基2-{6-[甲基(萘-2-磺酰基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}嘧 啶-5-羧酰胺
实施例45按照方案8的方法A制备。
N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基) 2-{6-[(萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}
嘧啶-5-羧酰胺
标题化合物按照实施例1的描述制备。
N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基) 2-{6-[甲基(萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-
基}嘧啶-5-羧酰胺
用庚烷洗涤NaH(147mg,3.75mmol)并将其悬浮于THF(10ml)。然后加入N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)2-[6-(萘-2-磺酰基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酰胺(1.113g,2.2mmol),之后加入硫酸二甲酯(O.22ml,2.3mmol)。将混合物搅拌48小时,然后倒入DCM(150ml)。加入2.4M氯化铵(50ml)。水层再用DCM(150ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并真空浓缩以得到橙色油状物。该物质无需进一步纯化便可用于下面的步骤。
N-羟基2-{6-[甲基(萘-2-磺酰基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺-实施例45
在N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)2-{6-[甲基(萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺中加入TFA/DCM/MeOH(5ml,1∶1∶1混合物)。将溶液室温搅拌2小时。然后将混合物减压浓缩,并通过反向HPLC纯化以得到标题化合物(34mg,两个步骤的产率为3%)。LCMS纯度>98%,m/z 440[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.55(1H,m),2.25(2H,m),2.77(3H,s),3.58(2H,m),3.78(2H,d,J=11.8Hz),7.66-7.84(2H,m),7.82(1H,dd,J=1.8,8.6Hz),8.06(1H,m),8.18(1H,d,J=8.7Hz),8.22-8.28(1H,m),8.49-8.52(1H,m),8.61(2H,s),9.01(1H,br s),11.05(1H,br s)。
实施例46:N-羟基2-{6-[(萘-2-磺酰基)-(2-吡咯烷-1-基-乙基)氨基]-3-氮杂二环 [3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
实施例46按照方案8的方法B制备。
N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)2-{6-[(萘-2-磺酰基)-(2-吡咯烷-1-基乙基)氨基]-3-氮
杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
用庚烷(10ml)洗涤NaH(0.223g,5.5mmol),然后悬浮于DMF(5ml)。加入N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)2-{6-[(萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺(0.991g,1.95mmol)并将混合物搅拌5分钟。在NaH(0.172g,4.3mmol)的DMF溶液中加入1-(2-氯乙基)-吡咯烷盐酸盐(0.724g,4.2mmol)。将反应物温和搅拌2分钟,然后加入到N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)2-{6-[(萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺溶液中。将混合物室温搅拌5天,然后倒入DCM(150ml)并用2.4M氯化铵溶液(50ml)淬灭。分离有机层,水相再用DCM(150ml)萃取。将合并的有机萃取物干燥,真空浓缩以得到标题化合物(0.234g,19%)。该物质无需进一步纯化便可用于下面的步骤。
N-羟基2-{6-[(萘-2-磺酰基)-(2-吡咯烷-1-基-乙基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基} 嘧啶-5-羧酰胺-实施例46
在N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)2-{6-[(萘-2-磺酰基)-(2-吡咯烷-1-基乙基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺(0.234g,0.38mmol)中加入TFA∶DCM∶MeOH(6ml,1∶1∶1混合物)。将混合物室温搅拌3小时然后真空浓缩。产物通过反向HPLC纯化以得到标题化合物(60mg,30%)。LCMS纯度>98%,m/z 523.25[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.55-1.68(4H,m),1.78(1H,m),2.25-2.34(2H,m),2.35-2.45(4H,m),2.55-2.65(2H,m),3.25-3.42(5H,m),3.54-3.63(2H,m),3.73-3.85(2H,m),7.65-7.77(2H,m),7.86(1H,d,J=8.5Hz),8.06(1H,d,J=7.3Hz),8.17(1H,d,J=7.3Hz),8.24(1H,d,J=7.3Hz),8.55(1H,s),8.61(2H,s),9.00(1H,brs),11.05(1H,br s)。
实施例47:N-羟基2-{6-[[2-(2-甲基咪唑并1-1-基)乙基](萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮 杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
实施例47按照方案8的方法C制备。
2-[6-(萘-2-磺酰基氨基)-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基]-嘧啶-5-羧酸乙酯
标题化合物按照实施例1的描述制备。
2-{6-[[2-(2-甲基咪唑并1-1-基)乙基](萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}
嘧啶-5-羧酸乙酯
在2-[6-(萘-2-磺酰基氨基)-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基]-嘧啶-5-羧酸乙酯(0.182g,0.47mmol)的DCM(10ml)溶液中加入三苯膦(0.26g,1mmol)和1-(2-羟乙基)-2-甲基咪唑(0.084mg,0.75mmol)。然后加入偶氮二羧酸二异丙酯(0.167ml,0.85mmol)并将混合物搅拌过夜。将混合物直接加到硅胶柱上并纯化,用2%MeOH/DCM洗脱,得到标题化合物(0.242g,90%)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:1.36(3H,t),1.60-1.80(3H,m),2.57(3H,s),3.43(2H,t),3.48-3.62(2H,m),3.70(2H,d),4.35(2H,t),4.33(2H,q),6.90(1H,d),6.98(1H,d),7.60-7.80(2H,m)7.82(1H,dd),7.95(1H,dd),8.02(2H,d),8.43(1H,s),8.72(2H,s)。
N-羟基2-{6-[[2-(2-甲基咪唑并1-1-基)乙基](萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0] 己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺-实施例47
在密封试管内的2-{6-[[2-(2-甲基咪唑并1-1-基)乙基](萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酸乙酯(0.211g,0.38mmol)的EtOH(6ml)溶液中加入盐酸羟胺(0.460g,6.6mmol)和乙醇钠(0.358g,5.3mmol)。混合物在50℃加热18小时,然后加入水(20ml),产物用DCM(3×100ml)和EtOAc(2×100ml)萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)并浓缩,产物通过重结晶(MeOH)纯化以得到白色固体状的标题化合物(40mg,20%)。LCMS纯度>98%,m/z 534[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.71(1H,m),1.82(2H,m),2.34(3H,s),3.43-3.55(4H,m),3.71(2H,d,J=11.9Hz),4.14(2H,t,J=6.5Hz),6.76(1H,d,J=1.2Hz),7.08(1H,d,J=1.2Hz),7.66-7.76(2H,m),7.88(1H,dd,J=1.8,10.5Hz),8.06(1H,dd,J=2.0,7.1Hz),8.18(1H,d,J=8.7Hz),8.25(1H,dd,J=2.0,8.9Hz),8.57-8.62(3H,m),8.98(1H,br s),11.02(1H,br s)。
实施例48:N-羟基2-(6-{(萘-2-磺酰基)-[2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基]氨基}-3-氮杂 -二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酰胺
实施例48按照方案8的方法D制备。
2-(6-{(萘-2-磺酰基)-[2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基]氨基}-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基)
嘧啶-5-羧酸乙酯
标题化合物按照方法C的描述制备。
2-(6-{(萘-2-磺酰基)-[2-(2-氧代-吡咯烷-1-基)乙基]氨基}-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-
基)-嘧啶-5-羧酸
在2-(6-{(萘-2-磺酰基)-[2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基]氨基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酸乙酯(0.749g,1.4mmol)的EtOH(8ml)溶液中加入乙醇钠(1.08g,15.8mmol)和盐酸羟胺(1.30g,18.7mmol)。将混合物在40℃搅拌18小时,然后加入水(20ml)。产物用DCM(2×100ml)萃取,将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)并真空浓缩。实际证明未形成预期的异羟肟酸酯(hydroxamate)产物。相反,反应形成了酸。通过反向HPLC纯化得到标题化合物(232mg,32%)。该物质无需进一步表征便可直接用于下面的步骤。
N-(1-异丁氧基乙氧基)2-(6-{(萘-2-磺酰基)-[2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基]-氨基}-3-
氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酰胺
在2-(6-{(萘-2-磺酰基)-[2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基]氨基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酸(0.170g,0.3mmol)的DMF(2.5ml)溶液中加入HOBt(83mg,0.54mmol)和EDCI(133mg,0.7mmol)。然后加入中间体D(0.4ml,3mmol)和DIPEA(0.4ml,2.5mmol)并将混合物搅拌过夜。然后蒸发DMF并将粗制混合物直接加到硅胶柱上。产物用2%MeOH/DCM到4%MeOH/DCM洗脱以得到乳白色固体状的标题化合物(83mg,43%)。该物质无需进一步表征便可直接用于下面的步骤。
N-羟基2-(6-{(萘-2-磺酰基)-[2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基]氨基}-3-氮杂-二环[3.1.0] 己-3-基)嘧啶-5-羧酰胺-实施例48
在N-(1-异丁氧基乙氧基)2-(6-{(萘-2-磺酰基)-[2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基]氨基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酰胺中加入TFA∶DCM∶MeOH(3.5ml,1∶2∶2混合物)。将溶液搅拌过夜,然后真空浓缩。产物通过反向HPLC纯化以得到白色固体状的标题化合物(18mg,11%)。LCMS纯度>98%,m/z 537[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)1.83-1.95(3H,m),2.17(2H,t,J=8.2Hz),2.22-2.26(2H,m),3.36-3.45(6H,m),3.52-3.59(2H,m),3.79(2H,t,J=11.8Hz),7.66-7.76(2H,m),7.83(1H,dd,J=1.8,8.7Hz),8.04-8.09(1H,m),8.18(1H,d,J=8.8Hz),8.22-8.27(1H,m),8.53-8.56(1H,m),8.63(2H,s),8.99(1H,br s),11.03(1H,br s)。
实施例49-55按照上述方法制备:
实施例49(方法B):N-羟基2-{6-[(2-羟乙基)(萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0] 己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 470[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.75(1H,m),2.30(2H,m),3.32(2H,m),3.50-3.65(4H,m),3.78(2H,d,J=11.9Hz),7.64-7.77(2H,m),7.85(1H,dd,J=1.8,8.6Hz),8.05(1H,dd,J=2.1,9.2Hz),8.16(1H,d,J=8.8Hz),8.28(1H,dd,J=1.9,7.1Hz),8.53(1H,m),8.61(2H,s),9.00(1H,br s),11.02(1H,br s)。
实施例50(方法B):N-羟基2-{6-[(3-二甲基氨基丙基)(萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮杂 二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 511[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.55-1.68(2H,m),1.76-1.80(1H,m),2.05(6H,s),2.16(2H,t,J=6.9Hz),2.22-2.29(2H,m),3.22-3.33(2H,m),3.55-3.64(2H,m),3.79(2H,d,J=11.8Hz),7.64-7.75(2H,m),7.83(1H,dd,J=1.8,8.7Hz),8.03-8.08(1H,m),8.16(1H,d,J=8.7Hz),8.22-8.25(1H,m),8.52-8.54(1H,m),8.62(2H,s),9.00(1H,br s),11.02(1H,br s)。
实施例51(方法B):N-羟基2-{6-[(2-吗啉-4-基-乙基)(萘-2-磺酰基)氨基]-3-氮杂二 环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 539[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.80-1.83(1H,m),2.26-2.39(6H,m),2.42-2.50(2H,m),3.33-3.42(2H,m),3.45-3.60(6H,m),3.78(2H,d,J=11.7Hz),7.65-7.75(2H,m),7.87(1H,dd,J=1.8,8.6Hz),8.06(1H,dd,J=1.9,7.0Hz),8.16(1H,d,J=8.7Hz),8.24(1H,dd,J=2.1,6.8Hz),8.53-8.56(1H,m),8.58(2H,s)。
实施例52(方法B):N-羟基2-{6-[(2-二甲基氨基乙基)(萘-2-磺酰基)-氨基]-3-氮杂 二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 496.5[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.75-1.79(1H,m),2.10(6H,s),2.25-2.30(2H,m),2.36-2.42(2H,t,J=6.6Hz),3.35(2H,m),3.52-3.58(2H,m),3.76(2H,d,J=11.6Hz),7.65-7.75(2H,m),7.86(1H,dd,J=1.8,8.7Hz),8.06(1H,dd,J=2.2,6.5Hz),8.18(1H,d,J=8.7Hz),8.24(1H,dd,J=2.1,6.8Hz),8.52-8.57(1H,m),8.56(2H,s)。
实施例53(方法B):N-羟基2-{6-[(萘-2-磺酰基)-(2-哌啶-1-基乙基)氨基]-3-氮杂二 环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 537[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.40-1.51(2H,m),1.51-1.60(4H,m),1.92(1H,t,J=1.8Hz),2.30-2.35(2H,m),2.38-2.50(4H,m),2.59(2H,t,J=7.5Hz),3.46(2H,t,J=7Hz),3.59-3.69(2H,m),3.92(2H,d,J=12Hz),7.66-7.77(2H,m),7.87(1H,dd,J=1.7,8.7Hz),8.00(1H,dd,J=2.4,9.1Hz),8.07-8.15(2H,m),8.48-8.52(1H,m),8.63(2H,s)。
实施例54(方法C):N-羟基2-{6-[(萘-2-磺酰基)-(2-吡啶-2-基乙基)-氨基]-3-氮杂 二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 531[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.17-2.23(1H,m),2.55-2.63(2H,m),3.46(2H,t,J=7.1Hz),3.92-4.0(2H,m),4.09(2H,t,J=7.1Hz),4.17(2H,d,J=11.8Hz),7.67-7.80(2H,m),8.08-8.17(2H,m),8.16-8.29(2H,m),8.48(1H,dd,J=1.4,8.8Hz),8.58(1H,d,J=8.7Hz),8.66(1H,dd,J=1.4,7.2Hz),8.92-8.99(2H,m),9.04(2H,s),9.40(1H,br s),11.46(1H,br s)。
实施例55(方法D):N-羟基2-{6-[[2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基]-(4-三氟甲氧基苯 磺酰基)氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 571[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.85-1.97(3H,m),2.18(2H,t,J=8.0Hz),2.22-2.24(2H,m),3.34-3.44(6H,m),3.55-3.62(2H,m),3.81(2H,d,J=11.9Hz),7.64(2H,d,J=8.4Hz),7.98(2H,d,J=8.8Hz),8.64(2H,s),8.99(1H,br s),11.04(1H,br s)。
实施例56:N-羟基2-{6-[(2-二乙基氨基乙基)萘-2-基甲基氨基]-3-氮杂二环[3.1.0] 己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
实施例56是按照方案9描述的方法制备的。
N-(1-异丁氧基乙氧基)2-{6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶
-5-羧酰胺
标题化合物按照实施例20描述的方法制备。
N-(1-异丁氧基乙氧基)2-{6-[(2-二乙基氨基-乙基)萘-2-基甲基氨基]-3-氮杂二环
[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
将N-(1-异丁氧基乙氧基)2-{6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}-嘧啶-5-羧酰胺(52mg,0.11mmol)溶于无水DMF(2ml)并在冰上冷却。在该溶液中加入氢化钠(13mg,0.55mmol-60%分散于矿物油中)并将混合物搅拌15分钟。然后边搅拌边在混合物中加入(2-溴乙基)-N,N-二乙胺(22mg,0.12mmol)。搅拌30分钟后小心加入水以淬灭反应物并搅拌10分钟。含水混合物用EtOAc(3×20ml)萃取,合并的有机萃取物用盐水洗涤,干燥(MgSO4)并蒸发至干以得到白色固体状的标题化合物(18mg,29%)。LCMS纯度100%,m/z 575[M+H]+。
N-羟基2-{6-[(2-二乙基氨基乙基)萘-2-基甲基氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧 啶-5-羧酰胺-实施例56
将N-(1-异丁氧基乙氧基)2-{6-[(2-二乙基氨基乙基)萘-2-基甲基氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺(18mg,0.03mmol)溶于无水DCM(3ml)并用4M HCl的二烷(0.015ml,0.06mmol)溶液处理。立即形成白色沉淀。将沉淀滤出并用DCM洗涤以得到白色固体状的标题化合物(8mg,57%)。LCMS纯度98%,m/z 475[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:1.39(6H,t,J=7.2Hz),2.26(2H,br s),2.77(1H,s),3.37(4H,m),3.55(2H,d,J=10.5Hz),3.81(4H,br s),3.93(2H,br d,J=10.5Hz),4.71(2H,br s),7.61(2H,m),7.76(1H,d,J=8.4Hz),7.95-8.04(3H,m),8.20(1H,s),8.71(2H,s)。
实施例57和58按照与实施例56类似的方法制备:
实施例57:N-羟基2-[6-(二萘-2-基甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5- 羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 516[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:1.75(2H,br s),2.63(1H,br s),3.39(2H,m),3.82(2H,m,J=11.7Hz)4.72(4H,br s),7.60-7.68(6H,m),7.97-8.11(8H,m),8.66(2H,s)。
实施例58:N-羟基2-[6-(萘-2-基甲基吡啶-3-基甲基氨基)-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3- 基]嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度97%,m/z 467[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3CN/D2O)δ:1.70(2H,br s),2.16(1H,br s),3.38(2H,d,J=11.3Hz),3.63(2H,d,J=11.3Hz),4.32(2H,br s),4.34(2H,br s),7.50(3H,m),7.90(5H,m),8.45(1H,d,J=7.6Hz),8.55(2H,s),8.72(1H,br s),8.76(1H,d,J=5.0Hz)。
实施例59:N-羟基2-{6-[(3-二乙基氨基丙酰)萘-2-基甲基氨基]-3-氮杂二环[3.1.0] 己-3-基}-嘧啶-5-羧酰胺
实施例59是按照方案10描述的方法制备的。
N-(1-异丁氧基乙氧基) 2-{6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶
-5-羧酰胺
标题化合物按照实施例20的描述制备。
N-(1-异丁氧基乙氧基) 2-{6-[(3-二乙基氨基丙酰)-2-基甲基-氨基]-3-氮杂-二环
[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
将3-N,N-二乙基氨基丙酸(73mg,0.5mmol)悬浮于草酰氯(1ml,11.2mmol)并加入DMF(1滴)。所得混合物室温搅拌过夜。然后将反应混合物减压蒸发并与DCM共沸。将残余物溶于DCM(1ml)并加入到冰冷的DCM(3ml)和三乙胺(0.3ml,2.15mmol)中的N-(1-异丁氧基乙氧基)2-{6-[(萘-2-基甲基)氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}-嘧啶-5-羧酰胺(100mg,0.21mmol)溶液中。0℃搅拌20分钟后将所得混合物室温搅拌过夜。将反应混合物在DCM(5ml)和水(5ml)之间分配。水层用DCM(2×5ml)萃取两次以上,合并的有机层用盐水(2×5ml)洗涤,干燥(MgSO4)并蒸发至干。获得白色固体状的标题化合物(199mg,定量)。m/z 603[M+H]+。
N-羟基2-{6-[(3-二乙基氨基丙酰)萘-2-基甲基氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧
啶-5-羧酰胺-实施例59
将N-(1-异丁氧基乙氧基)2-{6-[(3-二乙基氨基丙酰)萘-2-基甲基-氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺(199mg,0.33mmol)溶于DCM(3ml)并用4M HCl的二烷(0.5ml,2mmol)溶液处理。将所得沉淀过滤并干燥以得到白色固体状的标题化合物(94mg,57%)。LCMS纯度98%,m/z 475[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:1.39(6H,t,J=7.2Hz),2.26(2H,br s),2.77(1H,s),3.37(4H,m),3.55(2H,d,J=10.5Hz),3.81(4H,br s),3.93(2H,d,J=10.5Hz),4.71(2H,br s),7.61(2H,m),7.76(1H,d,J=8.4Hz),7.95-8.04(3H,m),8.20(1H,s),8.71(2H,s)。
实施例60和61按照与实施例59类似的方法制备:
实施例60:N-羟基2-[6-(乙酰基萘-2-基甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶 -5-羧酰胺
LCMS纯度98%,m/z 418[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.32(2H,br s),2.37(3H,s),2.43(1H,br s),3.64(2H,d,J=11.6Hz),3.84(2H,d,J=11.6Hz),7.39(1H,dd,J=8.5,1.3Hz),7.48(2H,m),7.75(1H,s),7.85(3H,m),8.60(2H,s)。
实施例61:N-羟基2-{6-[萘-2-基甲基-(3-吡啶-3-基-丙酰)氨基]-3-氮杂-二环 [3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度98%,m/z 509[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.32(2H,br s),2.43(1H,br s),3.24(4H,m),3.64(2H,d,J=11.7Hz),3.87(2H,d,J=11.7Hz),4.80(2H,s),7.28(1H,d,J=8.5Hz),7.48(2H,m),7.67(1H,br s),7.82(3H,m),7.98(1H,m),8.60-8.69(4H,m),8.85(1H,br s)。
实施例62:N-羟基2-(6-吗啉-4-基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酰胺
实施例62是按照方案11描述的方法制备的。
6-吗啉-4-基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯
边搅拌边将中间体B(200mg,1.01mmol)的无水THF(5ml)溶液加入无水THF(15ml)和三乙胺(323ml,2.32mmol)中的1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(234mg,1.01mmol)溶液中。将混合物加热回流48小时。将反应混合物冷却至室温,用水(10ml)稀释并用EtOAc(3×5ml)萃取。合并的有机萃取物用盐水(2×5ml)洗涤,然后干燥(MgSO4)并蒸发至干。残余物通过急骤层析纯化,用100%DCM到6%MeOH/DCM洗脱以得到澄清油状的标题化合物(24mg,9%)。m/z 269[M+H]+,1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:1.43(9H,s),1.58(2H,br s),2.58(4H,m),3.33-3.56(5H,m),3.65(4H,m)。
2-(6-吗啉-4-基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酸乙酯
将6-吗啉-4-基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(24mg,0.07mmol)溶于4MHCl的二烷(1ml)溶液并室温搅拌1小时。然后将其减压蒸发至干并与DCM(3×)共沸,之后再悬浮于无水MeCN(2ml)。将悬浮液与碳酸钾(96mg,0.7mmol)一起搅拌并加入无水DMF以帮助溶质溶解。最后加入中间体A(16mg,0.07mmol)并将反应混合物室温搅拌18小时。将反应混合物通过急骤层析纯化,用100%DCM到6%MeOH/DCM洗脱以得到白色固体状的标题化合物(16mg,57%)。LCMS纯度100%,m/z 319[M+H]+。
2-(6-吗啉-4-基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酸
将2-(6-吗啉-4-基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酸乙酯(16mg,0.05mmol)溶于THF(1ml)并加入6M的NaOH水(0.5ml)溶液。将反应物室温搅拌18小时。再加入6M NaOH(0.5ml)并将反应物再搅拌24小时。蒸发反应混合物以仅留下含水部分,该部分用10%aq.HCl酸化至pH约1,然后蒸发至干并无需进一步纯化便可用于下面的步骤。LCMS纯度100%,m/z 291[M+H]+。
N-(1-异丁氧基乙氧基)2-(6-吗啉-4-基-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酰胺
将粗制的2-(6-吗啉-4-基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酸悬浮于无水DMF(3ml),加入EDCI(19mg,0.1mmol)和HOBt(11mg,0.075mmol)。搅拌约5分钟后加入三乙胺(35μl,0.25mmol)和中间体D(58μl,0.5mmol),并将所得混合物室温搅拌18小时。反应混合物用水稀释并用EtOAc(3×10ml)和DCM(2×10ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并在硅胶上浓缩。残余物通过急骤层析纯化,用100%DCM到15%MeOH/DCM洗脱以得到乳白色固体状的标题化合物(10mg,51%)。LCMS纯度100%,m/z 406[M+H]+。
N-羟基2-(6-吗啉-4-基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酰胺-实施例62
将N-(1-异丁氧基乙氧基)2-(6-吗啉-4-基-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酰胺(10mg,0.02mmol)溶于DCM(2ml)并用4M HCl的二烷(0.4ml,0.1mmol)溶液处理。所得混合物室温搅拌30分钟,然后减压蒸发并与MeOH(3×5ml)共沸以得到白色固体状的标题化合物(2.3mg,40%)。LCMS纯度90%,m/z 306[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD30D)δ:2.49(2H,br s),2.85(1H,br s),3.55-3.87(8H,m),4.10(4H,m),8.72(2H,s)。
实施例63-66按照与实施例62类似的方法制备:
实施例63:N-羟基2-(6-哌啶-1-基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)pyrimid ine-5-羧酰 胺
LCMS纯度87%,m/z 304[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.36(1H,m),1.74(5H,m),2.42(2H,br s),2.71(1H,m),2.99(2H,m),3.54(4H,m),3.91(2H,d,J=11.5Hz),8.68(2H,s),10.14(1H,br s),11.11(1H,br s)。
实施例64:N-羟基2-[6-(1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧 啶-5-羧酰胺
LCMS纯度100%,m/z 338[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:3.61(2H,d,J=11.6Hz),3.97(2H,d,J=11.6Hz),4.75(4H,m),7.39(4H,m),8.68(2H,s),11.11(1H,br s),11.82(1H,br s),further 3H under DMSO and water peaks。
实施例65:N-羟基2-[6-(3-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3- 基]嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度100%,m/z 366[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.17(2H,br s),2.51(1H,t,J=2.1Hz),3.62(2H,s),3.71(2H,d,J=10.1Hz),4.10(2H,d,J=10.1Hz),4.60(2H,s),7.17-7.33(4H,m),8.68(2H,s)。
实施例66:N-羟基2-[6-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧 啶-5-羧酰胺
LCMS纯度95%,m/z 352[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.54(2H,br s),2.88(1H,br s),3.25(2H,m),3.75(4H,m),4.12(2H,d,J=11.8Hz),4.62(2H,br s),7.31(4H,m),8.70(2H,s)。
实施例67:N-羟基2-[6-(喹啉-2-基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酰胺
实施例67是按照方案12描述的方法制备的。
6-(喹啉-2-基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯
将中间体B(200mg,1.01mmol)与2-氯喹啉(2-chloroquiniline)(328mg,2.02mmol)混合并将这两种固体于100℃熔化16小时。然后冷却反应物并通过柱层析纯化残余物,用0-3%MeOH的DCM溶液洗脱以得到棕色油状的标题化合物(320mg,97%)。LCMS纯度94%,m/z 326[M+H]+。
(3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基)喹啉-2-基-胺
室温氮气下将6-(喹啉-2-基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(320mg,0.98mmol)在4M HCl的二烷(2ml)溶液中搅拌15分钟。然后在真空下除去溶剂并在高真空下干燥残余物,所得物质无需进一步纯化便可用于下面的步骤。LCMS纯度91%,m/z 226[M+H]+。
2-[6-(喹啉-2-基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酸乙酯
室温氮气下将(3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基)喹啉-2-基-胺(0.98mmol)在MeCN(10ml)和DMF(10ml)中搅拌。然后加入K2CO3(1.35g,9.8mmol)并将混合物搅拌15分钟。然后在反应混合物中加入中间体A(227mg,0.98mmol)并继续搅拌30分钟。反应物然后用H2O(100ml)稀释并用EtOAc(2×100ml)萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂以得到标题淡棕色固体状的化合物,该物质无需进一步纯化便可用于下面的步骤。LCMS纯度82%,m/z 376[M+H]+。
2-[6-(喹啉-2-基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酸
将2-[6-(喹啉-2-基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酸乙酯(0.98mmol)在THF(10ml)和H2O(10ml)中室温搅拌64小时。然后将反应物酸化至pH约3并在真空下除去溶剂以得到棕色固体。收集该固体并用少量H2O洗涤以得到棕色固体状的标题化合物(103mg,3个步骤的产率为30%)。LCMS纯度90%,m/z 348[M+H]+。
N-(1-异丁氧基乙氧基) 2-[6-(喹啉-2-基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-嘧啶-5-羧
酰胺
室温氮气下将2-[6-(喹啉-2-基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酸(103mg,0.29mmol)在DMF(10ml)中搅拌。加入EDCI(67mg,0.35mmol)和HOBt(47mg,0.35mmol)并将混合物搅拌10分钟。然后加入中间体D(200μl,1.45mmol)和三乙胺(202μl,1.45mmol)并将反应物搅拌16小时。反应物然后用H2O(100ml)稀释并用DCM(2×100ml)萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。残余物通过柱层析纯化,用0-10%MeOH的DCM溶液洗脱以得到白色固体状的标题化合物(48mg,36%)。LCMS纯度85%,m/z 463[M+H]+。
N-羟基2-[6-(喹啉-2-基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酰胺-实施例67
室温氮气下将N-(1-异丁氧基乙氧基)2-[6-(喹啉-2-基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-嘧啶-5-羧酰胺(48mg,0.1mmol)在DCM(2ml)中搅拌。加入4M HCl的二烷(20μl,0.2mmol)溶液,立即有固体沉淀。将反应物搅拌10分钟然后在真空下除去溶剂。在残余物中加入DCM(约10ml),将固体滤出并干燥以得到白色固体状的标题化合物(21mg,58%)。LCMS纯度98%,m/z 363[M+H]+,(300MHz,d6-DMSO)δ:2.19(2H,br s),2.99(1H,m),3.63(2H,dm,J=11.7Hz),4.27(2H,d,J=11.7Hz),7.15(1H,d,J=8.8Hz),7.53(1H,t,J=7.6Hz),7.81(1H,t,J=7.6Hz),7.94(1H,d,J=8.0Hz),8.09(1H,d,J=8.0Hz),8.33(1H,d,J=8.8Hz),8.28(2H,s),10.24(1H,br s),11.12(1H,br s),12.96(1H,br s)。
实施例68按照与实施例67类似的方法制备:
实施例68:N-羟基2-[6-(异喹啉-1-基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酰 胺
LCMS纯度99%,m/z 363[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.35(2H,br s),2.84(1H,m),3.65(2H,dm,J=11.7Hz),4.33(2H,d,J=11.7Hz),7.34(1H,d,J=6.9Hz),7.74-7.82(2H,m),7.95-8.02(2H,m),8.73(2H,s),8.80(1H,d,J=8.4Hz),10.12(1H,br s),11.15(1H,br s),12.81(1H,br s)。
实施例69:N-羟基2-{[3-(2-萘基磺酰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基]氨基}嘧啶-5- 羧酰胺
实施例69是按照方案13描述的方法制备的。
6-{[5-(乙氧基羰基)嘧啶-2-基]氨基}-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯
在中间体B(150mg,0.76mmol)的MeCN(0.7ml)溶液中加入K2CO3。再在其中逐滴加入中间体A(174mg,0.76mmol)的MeCN(0.7ml)溶液,得到白色悬浮液。继续室温搅拌30分钟,之后发现白色悬浮液转变为淡黄色。将反应混合物蒸发,重溶于EtOAc(10ml)并用水(5ml)洗涤。将EtOAc层干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩至干。通过急骤层析纯化(100%DCMto 2%MeOH/DCM)得到乳白色固体状的标题化合物(0.15g,57%)。LCMS纯度89%,m/z 349[M+H]+。
2-(3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基氨基)嘧啶-5-羧酸酯三氟乙酸乙酯
使6-{[5-(乙氧基羰基)嘧啶-2-基]氨基}-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(0.15g)溶液在20%TFA/DCM(10ml)中室温静置1小时。将反应混合物浓缩至干,得到标题产物,其为TFA盐(0.17g)。LCMS纯度76%,m/z 249[M+H]+。该产物无需纯化便可用于下一阶段。
2-{[3-(萘基磺酰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基]氨基}嘧啶-5-羧酸乙酯
在2-(3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(107mg,0.4mmol)的无水DCM(5ml)溶液中加入Et3N(0.18ml,1.2mmol)。在氮气下缓慢加入萘-2-磺酰氯(98mg,0.4mmol)的DCM(5ml)溶液。将混合物室温搅拌1小时,然后用DCM(30ml)稀释并用饱和NaHCO3水溶液(2×20ml)、水(10ml)和盐水(10ml)洗涤。将DCM干燥(Na2SO4),过滤并蒸发至干以得到淡黄色固体。通过急骤柱层析纯化(DCM到2%MeOH/DCM)得到白色固体状的标题化合物(128mg,73%-over two steps)。LCMS纯度100%,m/z439[M+H]+。
2-{[3-(2-萘基磺酰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基]氨基}嘧啶-5-羧酸
在THF(5ml)和MeOH(1ml)中的2-{[3-(萘基磺酰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基]氨基}嘧啶-5-羧酸乙酯(127mg,0.29mmol)溶液中加入1M NaOH(4ml)。将溶液室温搅拌2.5小时。用2M HCl将反应混合物酸化至pH约5/6以得到白色沉淀,该沉淀通过过滤收集,用水洗涤并真空干燥以得到白色固体状的标题化合物(105mg,88%)。LC-MS纯度100%,m/z 411[M+H]+。
N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)2-{[3-(2-萘基磺酰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基]氨基}
嘧啶-5-羧酰胺
在DCM(5ml)和THF(5ml)中的2-{[3-(2-萘基磺酰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基]氨基}嘧啶-5-羧酸(105mg,0.26mmol)溶液中加入EDCI(59mg,0.3mmol)。加入Et3N(0.08ml,0.8mmol),然后加入HOBt(42mg,0.3mmol)和O-(四氢-吡喃-2-基)-羟胺(36mg,0.3mmol)。将悬浮液室温搅拌3天。再加入EDCI(14mg)、Et3N(0.02ml)、HOBt(11mg)和O-(四氢-吡喃-2-基)-羟胺(9mg)并于室温再连续搅拌3天。将反应混合物蒸发至干,重溶于EtOAc(20ml)并用饱和NaHCO3水溶液(10ml)和水(10ml)洗涤。将EtOAc层干燥(Na2SO4),过滤并浓缩至干以得到白色固体状的标题化合物(110mg,83%)。LCMS纯度90%,m/z 511[M+H]+。
N-羟基2-{[3-(2-萘基磺酰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基]氨基}嘧啶-5-羟酰胺-实施例69
室温下,在MeOH(15ml)和DCM(15ml)中的N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)2-{[3-(2-萘基磺酰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基]氨基}嘧啶-5-羧酰胺(110mg,0.21mmol)溶液中加入TFA(1.5ml)并将混合物搅拌8小时,然后在真空下除去溶剂。重溶于DCM(5ml×2)并减压浓缩至干以除去过量TFA。通过制备型HPLC纯化得到白色固体状的标题化合物(25.1mg,21%)。LCMS纯度100%,m/z 426[M+H]+,1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ:1.15(2H,s),2.55(1H,s),3.20(2H,d),3.65(2H,d),7.65(2H,m),7.75(1H,d),7.90(1H,m),8.15-8.30(3H,m),8.50(1H,s),8.65(2H,s)。
实施例70:N-羟基2-{3-[(2-萘基磺酰基)氨基]氮杂环丁烷-1-基}嘧啶-5-羧酰胺
实施例70是按照方案14描述的方法制备的。
2-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]氮杂环丁烷-1-基}嘧啶-5-羧酸乙酯
室温氮气下,将中间体A(267mg,1.16mmol)加入叔丁基氮杂环丁烷-3-基-氨基甲酸(200mg,1.16mmol)和K2CO3(481mg,3.48mmol)的MeCN(10ml)溶液中。将所得白色悬浮液室温搅拌4小时。反应混合物用水(50ml)稀释并用EtOAc(3×50ml)萃取。合并的有机相用水(2×50ml)和盐水(50ml)洗涤,干燥(MgSO4)并真空浓缩以得到白色固体状的标题化合物(323mg,86%)。LCMS纯度100%,m/z 323[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.37(3H,t),1.46(9H,s),4.04(2H,m),4.34(2H,q),4.53(2H,t),4.64(1H,br s),5.02(1H,br s),8.84(2H,s)。
2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-羧酸乙酯盐酸盐
将4M HCl的二烷(15ml)溶液加入2-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]氮杂环丁烷-1-基}嘧啶-5-羧酸乙酯(323mg,1mmol)并将反应物室温搅拌30分钟。将悬浮液真空浓缩以得到白色固体状的标题化合物(323mg,定量)。LCMS纯度78%,m/z 223[M+H]+。
2-{3-[(2-萘基磺酰基)氨基]氮杂环丁烷-1-基}嘧啶-5-羧酸乙酯
室温氮气下,边搅拌边在2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-羧酸乙酯盐酸盐(317mg,1.23mmol)的DCM(15ml)悬浮液中加入Et3N(0.51ml,3.68mmol)。室温下一次性加入萘磺酰氯(306mg,1.35mmol)并将溶液室温搅拌过夜。反应混合物用DCM(50ml)稀释并用饱和NaHCO3(2×50ml)、水(50ml)和盐水(50ml)洗涤,干燥(MgSO4)并真空浓缩以得到固体乳膏状的。通过急骤柱层析纯化(2%MeOH/DCM)得到白色固体状的标题化合物(354mg,70%)。LCMS纯度97%,m/z 413[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.32(3H,t),3.87(2H,m),4.29-4.38(5H,m),5.18(1H,d),7.65-7.70(2H,m),7.83(1H,d),7.93-8.02(3H,m),8.45(1H,s),8.76(2H,s)。
2-{3-[(2-萘基磺酰基)氨基]氮杂环丁烷-1-基}嘧啶-5-羧酸
将1M NaOH(10ml)加入THF(10ml)和MeOH(2ml)中的2-{3-[(2-萘基磺酰基)氨基]氮杂环丁烷-1-基}嘧啶-5-羧酸乙酯(347mg,0.84mmol)溶液中并将反应物室温搅拌过夜。将反应混合物酸化至pH约2(2M HCl),再用饱和NaHCO3调至pH约7,得到白色沉淀。将反应物冷却至0℃并通过过滤分离沉淀,得到白色固体状的标题化合物(303mg,94%)。LCMS纯度97%,m/z 385[M+H]+。
N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基) 2-{3-[(2-萘基磺酰基)氨基]氮杂环丁烷-1-基}嘧啶-5-
羧酰胺
室温氮气下,将EDCI(90mg,0.47mmol)加入DCM(10ml)和THF(10ml)中的2-{3-[(2-萘基磺酰基)氨基]氮杂环丁烷-1-基}嘧啶-5-羧酸(150mg,0.39mmol)溶液中。加入Et3N(0.14ml,1.02mmol)、HOBt(63mg,0.47mmol)和O-(四氢-吡喃-2-基)-羟胺(55mg,0.47mmol)并将反应物室温搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩得到无色油状物,将该油状物溶于DCM(20ml),用水(3×20ml)洗涤,干燥(Na28O4)并真空浓缩以得到白色固体状的标题化合物(162mg,86%)。LCMS纯度93%,m/z 484[M+H]+。
N-羟基2-{3-[(2-萘基磺酰基)氨基]氮杂环丁烷-1-基}嘧啶-5-羧酰胺-实施例70
室温下,将TFA(0.60ml)加入DCM(10ml)和MeOH(10ml)中的N-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)2-{3-[(2-萘基磺酰基)氨基]氮杂环丁烷-1-基}嘧啶-5-羧酰胺(156mg,0.32mmol)溶液中并将溶液室温搅拌24小时。再加入TFA(0.40ml)加入并再连续搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩并与DCM共沸以除去TFA从而得到白色泡沫。在热DCM(15ml)和MeOH(1ml)中研磨得到白色沉淀,将该沉淀冷却至室温并通过过滤分离以得到白色固体状的标题化合物(82mg,50%)。LCMS纯度100%,m/z 400[M+H]+,1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ:3.64(2H,m),4.12(2H,t),4.31(1H,br s),7.71-7.76(2H,m),7.84(1H,d),8.09(1H,d),8.18-8.22(2H,m),8.49(1H,s),8.57(3H,s),9.01(1H,s),11.07(1H,s)。
实施例71:N-羟基2-{6-[(萘-2-基甲基氨基)甲基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶 -5-羧酰胺
实施例71是按照方案15描述的方法制备的。
2-(6-{[(叔丁氧基羰基)氨基]甲基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酸乙酯
室温氮气下,将中间体C(2.27g,10.7mmol)在MeCN/DMF(60ml,1∶1)中与K2CO3(4.44g,32.1mmol)一起搅拌10分钟。然后加入中间体A(2.48g,10.7mmol)并将反应物搅拌30分钟。反应物然后用H2O(100ml)稀释并用EtOAc(2×100ml)萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。残余物通过柱层析纯化,用0-5%MeOH的DCM溶液洗脱以得到白色固体状的标题化合物(3.5g,90%)。LCMS纯度97%,m/z 363[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:0.70(1H,m),1.28(3H,t,J=7.2Hz),1.38(9H,s),1.61(2H,m),2.93(2H,m),3.54(2H,d,J=11.7Hz),3.82(2H,d,J=11.7Hz),4.26(2H,q,J=7.2Hz),6.92(1H,m),8.76(2H,s)。
2-[6-(氨基甲基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酸乙酯
室温氮气下,将2-(6-{[(叔丁氧基羰基)氨基]甲基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酸乙酯(1.7g,4.7mmol)在DCM(20ml)中搅拌。加入4M HCl的二烷(2.35ml,9.4mmol)溶液,立即有固体沉淀出。再将反应物搅拌30分钟,然后在真空下除去溶剂。将残余物溶于DCM(100ml)并用饱和NaHCO3水溶液(100ml)洗涤。然后将有机层干燥(Na2SO4)并在真空下除去溶剂以得到橙色固体状的标题化合物(1.2g,97%)。LCMS纯度97%,m/z 263[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:0.64(1H,m),1.29(3H,t,J=7.2Hz),1.58(2H,m),3.33(4H,m),3.55(2H,d,J=11.7Hz),3.82(2H,d,J=11.7Hz),4.26(2H,q,J=7.2Hz),8.76(2H,s)。
2-(6-{[(萘-2-基甲基)氨基]甲基}-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基)-嘧啶-5-羧酸乙酯
室温氮气下,将2-[6-(氨基甲基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]嘧啶-5-羧酸乙酯(200mg,0.76mmol)与2-萘甲醛(119mg,0.76mmol)一起在MeOH(10ml)中搅拌16小时。然后加入NaBH4(46mg,1.22mmol)并将混合物搅拌10分钟。加入饱和NH4Cl水溶液(20ml)并将混合物搅拌20分钟。反应物然后用H2O(50ml)稀释并用Et2O(2×100ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂以得到黄色油状的标题化合物,该物质无需进一步纯化便可用于下面的步骤。LCMS纯度92%,m/z403[M+H]+。
2-(6-{[(萘-2-基甲基)氨基]甲基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酸
将2-(6-{[(萘-2-基甲基)氨基]甲基}-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基)-嘧啶-5-羧酸乙酯(0.76mmol)在THF(6ml)和1M NaOH(6ml)中室温搅拌16小时。然后用2M HCl将反应物酸化至pH约3,使固体沉淀出来。收集沉淀物并干燥以得到白色固体状的标题化合物(72mg,两个步骤的产率为25%),该物质无需进一步纯化便可用于下面的步骤。LCMS纯度96%,m/z 375[M+H]+。
N-(1-异丁氧基乙氧基)2-(6-{[(萘-2-基甲基)氨基]甲基}-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基)
嘧啶-5-羧酰胺
室温氮气下,将2-(6-{[(萘-2-基甲基)-氨基]-甲基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-密啶-5-羧酸(72mg,0.19mmol)与EDCI(44mg,0.23mmol)和HOBt(31mg,0.23mmol)一起在DMF(10ml)中搅拌10分钟。然后加入中间体D(131μl,0.95mmol),之后加入三乙胺(132μl,0.95mmol)并将反应物搅拌64小时。然后用H2O(50ml)反应物并用DCM(2×100ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。残余物通过柱层析纯化,用0-10%MeOH的DCM溶液洗脱以得到无色油状标题化合物(43mg,46%)。LCMS纯度97%,m/z 490[M+H]+。
N-羟基2-{6-[(萘-2-基甲基氨基)甲基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}-嘧啶-5-羧酰胺-
实施例71
室温氮气下,将N-(1-异丁氧基乙氧基)2-(6-{[(萘-2-基甲基)氨基]甲基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5-羧酰胺(43mg,0.09mmol)在DCM(2ml)中搅拌并加入4M HCl的二烷(45μl,0.18mmol)溶液。立即有固体沉淀出来。将反应物搅拌10分钟然后在真空下除去溶剂以得到白色固体状的标题化合物(16mg,50%)。LCMS纯度98%,m/z 390[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.91(2H,m),2.50(1H,m),2.99(2H,m),3.55(2H,m),3.88(2H,d,J=11.7Hz),4.34(2H,m),7.58(2H,m),7.68(1H,m),7.95(2H,m),8.03(2H,m),8.66(2H,s),9.11(2H,br s),11.07(1H,br s)。
实施例72-75按照与实施例71类似的方法制备:
实施例72:N-羟基2-{6-[(苄基氨基)甲基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基}嘧啶-5-羧酰 胺
LCMS纯度>99%,m/z 340[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:0.79(1H,m),1.65(2H,br s),2.74(2H,d,J=7.2Hz),3.49(2H,dm,J=11.4Hz),3.84(2H,d,J=11.4Hz),3.94(2H,s),7.24-7.35(5H,m),8.54(2H,s),由于MeOD无NH/NHOH峰。
实施例73:N-羟基2-(6-{[(4-氯苄基)氨基]甲基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)嘧啶-5- 羧酰胺
LCMS纯度99%,m/z 374[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:0.98(1H,br s),1.88(2H,br d),3.09(2H,d,J=6.9Hz),3.62(2H,d,J=11.7Hz),3.99(2H,d,J=11.7Hz),4.24(2H,s),7.50(4H,br s),8.66(2H,m),由于MeOD无NH/NHOH峰。
实施例74:N-羟基2-(6-{[(喹啉-2-基甲基)氨基]甲基}-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基) 嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度98%,m/z 391[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:1.09(1H,br s),1.95(2H,br s),3.33(2H,m),3.64(2H,d,J=11.7Hz),4.01(2H,d,J=11.7Hz),4.64(2H,s),7.52(1H,d,J=8.7Hz),7.66(1H,t,J=7.2Hz),7.83(1H,t,J=7.2Hz),7.99(1H,d,J=8.7Hz),8.12(1H,d,J=8.7Hz),8.41(1H,d,J=8.7Hz),8.67(2H,s),由于MeOD无NH/NHOH峰。
实施例75:N-羟基2-(6-{[(6-氟喹啉-2-基甲基)氨基]甲基}-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3- 基)嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度99%,m/z 409[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:1.09(1H,m),1.95(2H,br s),3.25(1H,d,J=7.2Hz),3.64(2H,d,J=11.7Hz),4.01(2H,d,J=11.7Hz),4.64(2H,s),7.56(1H,d,J=8.4Hz),7.65(2H,m),8.17(1H,dd,J=3.6,5.4Hz),8.39(1H,d,J=8.4Hz),8.68(2H,s),由于MeOD无NH/NHOH峰。
实施例76:N-羟基2-[5-(萘-2-磺酰基)六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5- 羧酰胺
实施例76是按照方案16描述的方法制备的。
2-[5-(叔丁氧基羰基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5-羟酸乙酯
在六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-羧酸叔丁酯(0.396g,1.86mmol)的MeCN(10ml)溶液中加入K2CO3(0.377g,2.72mmol),然后加入中间体A(0.48g,2.08mmol)。将混合物搅拌90分钟,然后倒入水(20ml)中。产物通过过滤收集,然后真空干燥以得到乳白色固体状的标题化合物(0.437g,58%)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:1.39(3H,t),1.47(9H,s),3.02(2H,m),3.22-3.41(2H,m),3.55-3.65(4H,m),3.80-3.97(2H,m),4.36(2H,t),8.88(2H,s)。
2-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基嘧啶-5-羧酸乙酯
在2-[5-(叔丁氧基羰基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5-羧酸乙酯(0.345g,0.9mmol)中加入4M HCl的二烷(2ml,8mmol)溶液。将混合物室温搅拌1小时,然后蒸发至干。将残余物溶于甲醇,加载到SCX-2柱上,用甲醇(100ml)洗涤,然后用2M氨的甲醇溶液洗脱以得到标题化合物(0.285g,100%)。LCMS纯度>95%,m/z 263[M+H]+。
途径I-制备磺胺
2-[5-(萘-2-磺酰基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5-羧酸乙酯
在2-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基嘧啶-5-羧酸乙酯(0.271g,1.0mmol)的吡啶(5ml)悬浮液中加入2-萘磺酰氯(0.269g,1.18mmol)。将混合物搅拌3小时,然后加入水(25ml)并通过过滤收集产物。再用水洗涤产物,然后真空干燥以得到标题化合物(0.231g,51%)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:1.39(3H,t,J=6.9Hz),2.92-3.07(2H,m),3.29(2H,dd,J=3.9,10.2Hz),3.45(2H,dd,J=3.9,12.3Hz),3.59(2H,dd,J=7.2,10.2Hz),4.35(2H,q,J=7.2Hz),7.58-7.75(2H,m),7.82(1H,dd,J=1.8,8.7Hz),7.90-8.05(2H,m),8.40(1H,s),8.77(2H,s)。
途径II-制备酰胺
2-[5-(萘-2-羰基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5-羧酸乙酯
在2-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基嘧啶-5-羧酸乙酯(0.156g,0.59mmol)的吡啶(2ml)悬浮液中加入2-萘羰基氯(0.136g,0.71mmol)。将混合物搅拌3小时,然后加入水(10ml)并通过过滤收集产物。再用水洗涤产物,然后真空干燥以得到标题化合物(0.217g,71%)。
途径III-制备胺
2-(5-萘-2-基甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-5-羧酸乙酯
在2-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基嘧啶-5-羧酸乙酯(0.187g,0.71mmol)的DCE(2ml)溶液中加入2-萘甲醛(0.205g,1.31mmol)和三乙氧基硼氢化钠(0.274g,1.25mmol)。将混合物搅拌3小时,然后倒入DCM(100ml)。加入饱和NaHCO3(100ml)并再用DCM(100ml)萃取。将合并的有机萃取物干燥(MgSO4),浓缩,并通过急骤柱层析纯化以得到标题化合物(0.266g,99%)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:1.39(3H,t,J=6.9Hz),2.59(2H,d,J=6.9Hz),2.73-2.90(2H,m),2.94-3.10(2H,m),3.67(2H,d,J=11.7Hz),3.82(2H,s),3.90(2H,dd,J=8.1,12Hz),4.37(2H,q,J=7.2Hz),7.41-7.43(3H,m),7.74(1H,s),7.76-7.89(3H,m),8.88(2H,s)。
以下步骤是对实施例76(磺胺)描述的,但它们同样适用于酰胺和胺。
2-[5-(萘-2-磺酰基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5-羧酸
在2-[5-(萘-2-磺酰基)-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基]-嘧啶-5-羧酸乙酯(0.201g,0.44mmol)的乙醇(2ml)悬浮液中加入6M NaOH溶液(2ml,12mmol)。将反应物在80℃加热2小时,然后冷却至室温。加入2M HCl将pH调至约5。使溶液静置过夜,并通过过滤收集产物以得到标题化合物(0.154g,82%)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.80-2.95(2H,m),3.17(2H,dd,J=3.6,10.2Hz),3.20-3.30(2H,m),3.46(2H,dd J=7.2,10.5Hz),3.61(2H,dd,J=6.9,11.7Hz),7.60-7.78(2H,m),7.82(1H,dd,J=1.8,8.7Hz),8.06(1H,d,J=8.1Hz),8.13(1H,d,J=8.7Hz),8.18(1H,d,J=7.8Hz),8.47(1H,s),8.59(2H,s)。
N-(1-异丁氧基乙氧基)2-[5-(萘-2-磺酰基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶
-5-羧酰胺
在2-[5-(萘-2-磺酰基)-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基]-嘧啶-5-羧酸(0.266g,0.71mmol)的DMF(2ml)溶液中加入EDCI(0.204g,1.06mmol)、HOBt(0.171g,1.1mmol)、中间体D(1ml,7mmol)和DIPEA(2ml,11mmol)。将反应物搅拌24小时,然后直接加到硅胶柱上。用2%MeOH/DCM到5%MeOH/DCM洗脱产物以得到标题化合物(0.255g,66%)。该物质无需表征便可用于下面的步骤。
N-羟基2-[5-(萘-2-磺酰基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5-羧酰胺-实施例76
在N-(1-异丁氧基乙氧基)2-[5-(萘-2-磺酰基)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]-嘧啶-5-羧酰胺(0.255g,0.5mmol)中加入TFA/DCM/MeOH(5ml,1∶2∶2混合物)。将溶液搅拌2小时,然后真空浓缩。残余物通过反向HPLC纯化以得到所需产物(95mg,50%)。LCMS纯度>98%,m/z 440[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.90(2H,brs),3.24(4H,dd,J=3.3,10Hz),3.45(2H,dd,J=6.8,9.8Hz),3.61(2H,dd,J=6.7,11.4Hz),7.62-7.77(2H,m),7.83(1H,dd,J=1.1,8.5Hz),8.06(1H,d,J=7.8 Hz),8.13(1H,d,J=8.8Hz),8.17(1H,d,J=8.2Hz),8.47(1H,s),8.55(2H,s),11.02(1H,s)。
实施例77-85按照与实施例76类似的方法制备:
实施例77:N-羟基2-[5-(萘-2-羰基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5-羧酰 胺
LCMS纯度98%,m/z 404[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.95-3.15(2H,m),3.25-3.63(4H,m),3.65-3.95(4H,m),7.52-7.68(3H,m),7.90-8.05(3H,m),8.13(1H,s),8.68(2H,s),8.99(1H,br s),11.07(1H,br s)。
实施例78:N-羟基2-[5-(4-苯氧基丁酰)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5- 羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 412[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.05-2.15(2H,m),2.46-2.67(2H,m),3.0-3.22(2H,m),3.38-3.58(4H,m),3.70-3.95(4H,m),3.97-4.08(2H,m),6.88-6.93(3H,m),7.22(2H,dd,J=7.8,7.8Hz),8.68(2H,s)。
实施例79:N-羟基2-(5-萘-2-基甲基六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)嘧啶-5-羧 酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 390[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:3.30-3.40(2H,m),3.40-3.90(8H,m),4.57(2H,s),7.61(2H,s),7.90-8.13(3H,m),8.65-8.75(2H,m),9.04(1H,br s),10.09(1H,br s),11.12(1H,br s)。
实施例80:N-羟基2-[5-(5-甲氧基茚满-1-基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧 啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 396[M+H]+,1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.34-2.63(2H,m),2.88-3.05(1H,m),3.0-3.5(9H,m),3.53-3,80(5H,m),4.52-4.60(1H,m),6.87(1H,d,J=7.7Hz),6.95(1H,s),7.48(1H,d,J=8.2Hz),8.67(2H,s)。
实施例81:N-羟基2-[5-(3,5-双三氟甲基苯磺酰基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)- 基]-嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 526[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.93-3.05(2H,m),3.20-3.28(4H,m),3.50(2H,dd,J=6.4,9.8Hz)3.63(2H,dd,J=7.3,11.9Hz),8.34(2H,s),8.52(1H,s),8.63(2H,s),8.99(1H,br s),11.06(1H,brs)。
实施例82:N-羟基2-[5-{[4-(三氟甲氧基)苯基]磺酰基}六氢吡咯并[3,4-c]吡咯 -2(1H)-基]嘧啶-5-羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 474[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.87-3.00(2H,m),3.13(2H,dd,J=3.6,10.1Hz),3.21(2H,dd,J=3.5,11.7Hz),3.33-3.46(2H,dd,J=7.0,10.3Hz),3.65(2H,dd,J=6.9,11.5Hz),7.60(2H,d,J=8.0Hz),7.95(2H,d,J=8.8Hz),8.64(2H,s),8.97(1H,br s),11.05(1H,br s)。
实施例83:N-羟基2-[5-(3,5-二氟苄基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5- 羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 376[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:3.00-3.15(2H,m),3.42-3.51(2H,m),3.53-3.65(2H,m),3.65-3.88(4H,m),4.42(2H,s),7.22-7.33(2H,m),7.39(1H,t,J=9.3Hz),8.70(2H,s),11.21(1H,br s),11.10(1H,br s)。
实施例84:N-羟基2-[5-(4-甲氧基苄基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5- 羧酰胺
LCMS纯度>98%,m/z 370[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.9-3.1(2H,m),3.25-3.45(2H,m),3.52-3.85(6H,m),3.78(3H,s),4.28-4.35(2H,m),6.97-7.05(2H,m),7.39-7.48(2H,m),8.67-8.73(2H,m),9.88(1H,br s),11.10(1H,br s)。
实施例85:N-羟基2-[5-(4-氯苄基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]嘧啶-5-羧酰 胺
LCMS纯度>98%,m/z 374[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:2.98-3.12(2H,m),3.28-3.50(2H,m),3.52-3.71(4H,m),3.72-3.86(2H,m),4.36-4.45(2H,m),7.50-7.58(4H,m),8.66-8.75(2H,m),10.08(1H,br s),11.11(1H,br s)。
实施例86:N-羟基2-[9-(萘-2-磺酰基)-3,9-二氮杂-螺[5.5]十一烷-3-基]嘧啶-5-羧 酰胺
实施例86是按照方案17描述的方法制备的。
标题化合物采用实施例76所描述的相同方法从3,9-二氮杂-螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯制备。LCMS纯度90%,m/z 482[M+H]+,1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:1.30(4H,m),1.58(4H,m),3.03(4H,m),3.70(4H,m),7.69(1H,dd,J=1.3,6.9Hz),7.74(1H,dd,J=1.9,8.1Hz),7.78(1H,dd,J=2.1,8.7Hz),8.10(2H,d,J=7.8 Hz),8.15(1H,d,J=8.7Hz),8.22(2H,d,J=5.2Hz),8.45(2H,br s),8.60(2H,s)。
实施例87:N-羟基6-(5-萘-2-基甲基-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基)-吡啶-5-羧酰 胺
实施例87是按照方案18描述的方法制备的。
2-[5-(叔丁氧基羰基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]吡啶-5-羧酸乙酯
在六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-羧酸叔丁酯(1.11g,5.23mmol)的二烷溶液中加入6-氯烟酸乙酯(1.28g,6.9mmol)和DIPEA(2ml,11.6mmol)。混合物在75℃加热3天。然后将混合物倒入EtOAc(100ml)并用饱和氯化铵(50ml)、水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机部分干燥(MgSO4)、浓缩并通过急骤柱层析纯化(5%MeOH-DCM)以得到标题化合物(1.429g,75%)。m/z 362.25[M+H]+;1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:8.32(1H,dd,J=0.6,2.1Hz),8.03(1H,dd,J=2.4,9.0Hz),6.32(1H,d,J=8.7Hz),4.34(2H,q,J=6.9Hz),3.24-3.85(8H,m),3.03(2H,m),1.47(9H,s),1.38(3H,t,J=7.2Hz)。
2-六氢吡咯并[3 4-c]吡咯-2(1H)-基吡啶-5-羧酸乙酯盐酸盐
在2-[5-(叔丁氧基羰基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基]吡啶-5-羧酸乙酯(1.429g,3.92mmol)中加入4M HCl的二烷(10ml,40mmol)溶液。将混合物搅拌2小时,然后加入Et2O(50ml)。产物通过过滤收集并再用Et2O(50ml)洗涤以得到标题化合物(1.19g,定量)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:9.95(1H,br s),9.84(1H,br s),8.44(1H,d,J=1.8Hz),8.20(1H,dd,J=2.1,9.3Hz),7.01(1H,d,J=9.3Hz),4.31(2H,q,J=7.2Hz),3.0-4.05(10H,m),1.31(3H,t,J=7.2Hz)。
6-(5-萘-2-基甲基-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基)吡啶-5-乙酸乙酯
在2-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基吡啶-5-羧酸乙酯盐酸盐(0.54g,1.81mmol)的DCE(5ml)悬浮液中加入2-萘甲醛(0.57g,3.64mmol)和三乙氧基硼氢化钠(0.78g,3.68mmol)。将混合物搅拌过夜,然后倒入饱和碳酸氢钠(100ml)。产物用DCM(2×100ml)萃取,并将合并的萃取物干燥(MgSO4)、浓缩并通过急骤柱层析纯化(4%MeOH-DCM)以得到标题化合物(0.255g,35%)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ:8.63(1H,d,J=2.1Hz),7.92(1H,dd,J=2.4,9.0Hz),7.75-7.89(3H,m),7.44-7.49(3H,m),6.53(1H,d,J=8.7Hz),4,25(2H,q,J=7.2Hz),3.65-3.74(4H,m),3.35-3.41(2H,m),2.94(2H,m),2.57-2.64(2H,m),1.29(3H,t,J=7.2Hz)。
6-(5-萘-2-基甲基-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基)吡啶-5-羧酸
在6-(5-萘-2-基甲基-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基)吡啶-5-乙酸乙酯(0.255g,0.63mmol)的EtOH(2ml)悬浮液中加入6M NaOH(2ml,12mmol)。将混合物在80℃加热90分钟然后冷却至室温。然后加入浓HCl直到有沉淀形成,该沉淀通过过滤收集(240mg,定量)。该化合物无需表征便可用于下面的步骤。
N-(1-异丁氧基乙氧基)6-(5-萘-2-基甲基-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基)吡啶-5-羧
酰胺
在6-(5-萘-2-基甲基-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基)吡啶-5-羧酸(0.24g,0.6mmol)的DMF(5ml)溶液中中加入HOBt(0.26g,1.7mmol)、EDCI(0.303g,1.6mmol)、DIPEA(1ml,5.8mmol)和中间体D(1ml,7.4mmol)。将混合物搅拌过夜然后倒入Et2O(250ml)。用水(50ml)、饱和碳酸氢钠(50ml)、水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。然后将萃取物干燥(MgSO4)、浓缩并通过急骤柱层析纯化(4%MeOH-DCM)以得到标题化合物(0.199g,58%)。1H NMR (300MHz,d6-DMSO)δ:11.17(1H,br s),8.50(1H,d,J=2.1Hz),7.81-7.90(4H,m),7.77(1H,s),7.42-7.50(3H,m),6.52(1H,d,J=8.8Hz),4.95(2H,q,J=7.0Hz),3.61-3.74(6H,m),2.88-2.99(2H,m),2.60-2.69(2H,m),1.72-1.84(1H,m),1.31(3H,d,J=5.1Hz),0.86(6H,d,J=6.6Hz)。
N-羟基6-(5-萘-2-基甲基-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基)吡啶-5-羧酰胺-实施例87
在N-(1-异丁氧基乙氧基)6-(5-萘-2-基甲基-六氢-吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基)吡啶-5-羧酰胺(0.199g,0.4mmol)中加入TFA∶DCM∶MeOH(8ml,1∶2∶2)。将该溶液搅拌6小时然后真空浓缩。将残余物悬浮于MeOH并倒入EtOH(250ml)。混合物用1∶1饱和碳酸氢钠/1M NaOH(100ml)和水(50ml)洗涤。将有机部分干燥(Na2SO4)、浓缩并通过反向HPLC纯化以得到标题化合物(9mg,5%)。m/z 389.25[M+H]+;1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.64(2H,d,J=5.3Hz),2.90-3.07(4H,m),3.37-3.58(4H,m),3.89(2H,s),6.46(1H,d,J=8.9Hz),7.33-7.44(3H,m),7.70-7.80(5H,m),8.37(1H,d,J=2.2Hz)。
实施例88:N-羟基4-{6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}-苯甲酰 胺
实施例88是按照方案19描述的方法制备的。
6-(萘-2-甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯
标题化合物按照实施例20的描述制备。
6-(萘-2-甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷
将6-(萘-2-甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(800mg,2.37mmol)在4M HCl的二烷(10ml)溶液中室温搅拌1小时,然后再在40℃搅拌1.5小时。然后在真空下除去溶剂并将残余物干燥,该物质无需进一步纯化便可用于下面的步骤。LCMS纯度90%,m/z 239[M+H]+。
4-{6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}-苯甲酸乙酯
室温氮气下,将6-(萘-2-甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷(2.37mmol)在DMSO(30ml)中搅拌。然后加入K2CO3(3,27g,23.70mmol)和4-氟苯甲酸乙酯并将反应物在100℃搅拌3天。然后使反应物冷却至室温并倒入H2O(100ml)中。用DCM(2×100ml)萃取,将合并的有机层干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂以得到橙色油状的标题产物,该物质无需进一步纯化便可用于下面的步骤。LCMS纯度70%,m/z 387[M+H]+。
4-{6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}-苯甲酸三甲基硅醇盐
(sylanoate)
室温氮气下,将4-{6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}-苯甲酸乙酯(500mg,1.29mmol)与三甲基硅醇钾(332mg,2,58mmol)一起在THF(30ml)中搅拌6小时。加入更多的三甲基硅醇钾(332mg,2,58mmol)并将反应物在50℃搅拌4天。使反应物冷却至室温,有沉淀形成。该沉淀通过过滤分离,干燥且无需进一步纯化便可用于下面的步骤。LCMS纯度60%,m/z 359[M+H]+。
N-(1-异丁氧基乙氧基) 4-{6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}-苯
甲酰胺
室温氮气下,将4-{6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}-苯甲酸三甲基硅醇盐(1.29mmol)在DMF(30ml)中搅拌。加入EDCI(297mg,1.55mmol)、HOBt(209mg,1.55mol)、中间体D(89μl,6.45mmol)和NEt3(899μl,6.45mmol)并将反应物在50℃搅拌24小时。搅拌24小时之后将反应物冷却至室温并用水(100ml)稀释。然后用DCM(2×100ml)萃取,将有机层干燥(MgSO4)并真空浓缩。残余物通过柱层析纯化(10%MeOH的DCM溶液)以得到橙色油状的标题化合物(117mg,19%)。LCMS纯度70%,m/z 474[M+H]+。
N-羟基4-{6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}-苯甲酰胺-实施例88
将N-(1-异丁氧基乙氧基)4-{6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-3-氮杂-二环[3.1.0]己-3-基}-苯甲酰胺(117mg,0.25mmol)在DCM(10ml)中室温搅拌并加入4M HCl的二烷(0.5ml)溶液。将反应物搅拌30分钟,然后在真空下除去溶剂。残余物通过Gilson HPLC纯化以得到粉色固体状的标题化合物(13mg,14%)。LCMS纯度98%,m/z 374[M+H]+。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ:2.25(2H,br s),2.71(1H,s),3.32(2H,m),3.71(2H,d,J=9.3Hz),4.54(2H,s),6.61(2H,d,J=8.1Hz),7.62(5H,m),7.95(4H,m),由于CD3OD无NH/NHOH峰。
测量生物学活性
组蛋白脱乙酰基酶活性
用购自Biomol的HDAC荧光活性试验测量化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶活性的能力。简言之,在存在或不存在抑制剂时将Fluor de LysTM底物(一种ε-氨基被乙酰化的赖氨酸)与具有组蛋白脱乙酰基酶活性的原料(HeLa细胞核提取物)一起孵育。底物的脱乙酰化使底物对Fluor de LysTM显影剂敏感从而产生荧光。因此,将底物与具有HDAC活性的原料一起孵育导致信号增强,而当存在HDAC抑制剂时信号减弱。
数据表达为占不存在抑制剂时测得的对照的百分比,所有样品要减去背景信号,如下所示:
%活性=((Si-B)/(So-B))×100
其中,Si是存在底物、酶和抑制剂时的信号,So是存在底物、酶和载体时的信号,其中的抑制剂是被溶解的,而B是不存在酶时测得的背景信号。
确定IC50值时采用Graphpad Prism软件,将8个数据点的结果拟合到具有可变斜率的S形剂量反应曲线方程(%活性与化合物浓度的对数),然后通过非线性回归分析确定IC50值。
利用HeLa细胞粗制核提取物的组蛋白脱乙酰基酶活性进行筛选。购自4C(Seneffe,Belgium)的制品是从收获自指数生长期的HeLa细胞制备的。按照Dignam JD 1983Nucl.Acid.Res.11,1475-1489制备核提取物,在液氮中急冻并储存于-80℃。最终的缓冲液组成为20mM Hepes、100mM KCl、0.2mM EDTA、0.5mM DTT、0.2mMPMSF和20%(v/v)甘油。
IC50结果被归入3个范围之一,如下:
范围A:IC50<100nM,
范围B:IC50从101nM到1000nM;
范围C:IC50>1000nM。
U937和HUT细胞抑制试验
收获生长在对数期的癌细胞系(U937和HUT)并以1000-2000细胞/孔(最终体积为100μl)接种到96孔组织培养板上。细胞生长24小时后用化合物处理细胞。然后再将平板孵育72-96小时,之后按照供应商(Roche Applied Science)的说明进行WST-1细胞存活试验。
数据表达为不存在抑制剂时测得的对照的抑制百分数,如下所示:
%抑制=100-((Si/So)×100)
其中,Si是存在抑制剂时的信号,So是存在DMSO时的信号。
采用6复孔从8个浓度(最高终浓度10μM,3倍稀释)生成剂量反应曲线。
确定IC50值时采用Graphpad Prism软件,将8个数据点的结果拟合到具有可变斜率的S形剂量反应曲线方程(%活性与化合物浓度的对数),然后通过非线性回归分析确定IC50值。
IC50结果被归入3个范围之一,如下:
范围A:IC50<330nM,
范围B:IC50从331nM到3300nM;
范围C:IC50>3300nM。
HeLa细胞抑制试验
收获生长在对数期的Hela细胞并以1000细胞/孔(最终体积为200ul)接种到96孔组织培养板上。细胞生长24小时后用化合物(最终浓度为20μM)处理细胞。然后再将平板孵育72小时,之后按照Skehan 1990 J Natl Canc Inst 82,1107-1112进行磺基罗丹明B(SRB)细胞存活试验。
数据表达为不存在抑制剂时测得的对照的抑制百分数,如下所示:
%抑制=100-((Si/So)×100)
其中,Si是存在抑制剂时的信号,So是存在DMSO时的信号。
确定IC50值时采用Graphpad Prism软件,将8个数据点的结果拟合到具有可变斜率的S形剂量反应曲线方程(%活性与化合物浓度的对数),然后通过非线性回归分析确定IC50值。
IC50结果被归入3个范围之一,如下:
范围A:IC50<330nM,
范围B:IC50从331nM到3300nM;
范围C:IC50>3300nM。
结果表
实施例编号 |
HDAC活性 |
HeLa活性 |
U937活性 |
HUT活性 |
1 |
A |
A |
A |
A |
2 |
A |
C |
C |
C |
3 |
A |
B |
A |
A |
4 |
A |
B |
A |
A |
5 |
A |
B |
B |
A |
6 |
A |
C |
C |
C |
7 |
A |
B |
B |
B |
8 |
A |
B |
B |
A |
9 |
A |
B |
B |
B |
10 |
A |
B |
B |
B |
11 |
A |
B |
C |
B |
12 |
A |
B |
B |
B |
13 |
A |
B |
B |
B |
14 |
A |
B |
B |
B |
15 |
A |
B |
B |
B |
16 |
A |
B |
B |
A |
17 |
A |
B |
B |
A |
18 |
A |
C |
C |
B |
19 |
A |
A |
A |
A |
20 |
A |
B |
A |
A |
21 |
A |
B |
A |
A |
22 |
A |
A |
A |
A |
23 |
A |
B |
B |
A |
24 |
A |
B |
A |
A |
25 |
A |
A |
A |
A |
26 |
A |
A |
A |
A |
27 |
A |
A |
A |
A |
28 |
A |
A |
A |
A |
29 |
A |
A |
A |
A |
30 |
A |
A |
A |
A |
31 |
A |
B |
A |
A |
32 |
A |
A |
A |
A |
33 |
A |
A |
A |
A |
34 |
A |
B |
A |
A |
35 |
A |
A |
A |
A |
36 |
A |
n/d |
A |
A |
37 |
A |
A |
A |
A |
38 |
A |
B |
B |
A |
39 |
A |
B |
A |
A |
40 |
A |
B |
B |
A |
41 |
A |
B |
A |
A |
42 |
A |
B |
B |
A |
43 |
A |
A |
A |
A |
44 |
A |
A |
A |
A |
45 |
A |
B |
B |
A |
46 |
A |
A |
A |
A |
47 |
A |
B |
B |
B |
48 |
A |
B |
B |
B |
49 |
A |
B |
B |
B |
50 |
A |
n/d |
A |
A |
51 |
A |
A |
A |
A |
52 |
A |
B |
B |
A |
53 |
A |
A |
A |
A |
54 |
A |
B |
B |
B |
55 |
A |
C |
B |
B |
56 |
A |
A |
B |
A |
57 |
C |
C |
C |
C |
58 |
B |
B |
B |
B |
59 |
A |
A |
A |
A |
60 |
A |
A |
A |
A |
61 |
A |
B |
B |
A |
62 |
B |
C |
C |
B |
63 |
B |
C |
C |
B |
64 |
A |
B |
B |
A |
65 |
A |
B |
B |
B |
66 |
A |
B |
B |
B |
67 |
A |
B |
B |
A |
68 |
A |
A |
A |
A |
69 |
A |
C |
C |
B |
70 |
A |
C |
C |
B |
71 |
A |
B |
B |
A |
72 |
A |
B |
B |
A |
73 |
A |
B |
B |
A |
74 |
A |
B |
B |
A |
75 |
B |
B |
B |
B |
76 |
A |
B |
B |
A |
77 |
A |
A |
B |
A |
78 |
A |
C |
B |
B |
79 |
A |
A |
A |
A |
80 |
A |
A |
B |
A |
81 |
A |
C |
B |
B |
82 |
A |
B |
B |
B |
83 |
A |
B |
A |
A |
84 |
A |
B |
B |
A |
85 |
A |
B |
A |
A |
86 |
B |
C |
B |
B |
87 |
A |
B |
B |
B |
88 |
B |
B |
B |
B |