CN101155929B - 生产5′-核糖核苷酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明描述了包含至少55％w/w(基于无氯化钠干重)的5’-核糖核苷酸的组合物，以及用于生产该组合物的方法，所述方法包括如下步骤：(i)处理微生物细胞，以释放出包含RNA的细胞内容物；(ii)将存在于释放出的细胞内容物中的RNA与其它可溶性细胞物质分离；(iii)将经过分离的RNA转化为5’-核糖核苷酸。
Description
本发明涉及包含5’-核糖核苷酸的组合物和用于生产该组合物的方法。本发明还涉及包含5’-核糖核苷酸的组合物在食品或饲料中的应用。
自溶酵母提取物是对细胞进行破碎和对聚合酵母物质进行消化(裂解)之后从酵母中获得的可溶物质的浓缩物。细胞破碎之后培养基中释放出来的活性酵母酶是造成裂解的原因。通常上述类型的酵母提取物不包含5’-核糖核苷酸，因为在自溶过程期间，天然RNA已被分解或修饰，使其无法或几乎无法降解成5’-核糖核苷酸。富含氨基酸的上述类型的酵母提取物作为基本味道提供者被用于食品工业。酵母提取物中存在的氨基酸为食品增加了类似肉汤、肉汤味。
另一方面，水解酵母提取物是在下述处理之后从酵母中获得的可溶性物质的浓缩物，所述处理是：对细胞进行破碎、消化(裂解)以及在裂解期间向酵母悬浮物中加入蛋白酶和/或肽酶以及特别地，核酸酶。天然酵母酶在裂解之前被失活。该过程期间，形成了鸟嘌呤的5’-核糖核苷酸(5’-鸟嘌呤单磷酸酯；5’-GMP)、尿嘧啶的5’-核糖核苷酸(5’-尿嘧啶单磷酸酯；5’-UMP)、胸腺嘧啶的5’-核糖核苷酸(5’-胸腺嘧啶单磷酸酯；5’-CMP)和腺嘌呤的5’-核糖核苷酸(5’-腺嘌呤单磷酸酯；5’-AMP)。向混合物中加入腺苷酸脱氨酶后，5’-AMP被转化为5’-肌甙单磷酸酯(5’-IMP)。通过此种方法获得的水解酵母提取物因此富含5’-核糖核苷酸，尤其是富含5’-GMP和5’-IMP。通常酵母提取物还富含谷氨酸单钠(MSG)。5’-IMP、5’-GMP和MSG因其增强香味的特性而为人们所知。它们在某些种类的食品中能增加香喷喷的美妙味道。该现象被描述为“口感”或鲜味(umami)。富含5’-核糖核苷酸以及可选地，富含MSG的酵母提取物通常被加入到汤、酱、腌汁或香料调料中。
目前，富含5’-核糖核苷酸的酵母提取物是用具有高RNA含量的酵母菌株和/或通过对细胞内容物的部分提取来生产的。此类型的增味水解酵母提取物的缺点在于：由于氨基酸、短肽和其它酵母成分的存在，它们不适合需要纯净味道的应用。
JP 51106791描述了一种纯化RNA的方法，其中对酵母提取物进行超滤，接着是若干额外的纯化步骤。对于获得有商业吸引力的RNA来说所必需的一系列纯化步骤使得该过程复杂而又昂贵。在该篇文献中没有暗示将经纯化的RNA用于含有5’-核糖核苷酸的组合物的生产，所述5’-核糖核苷酸可被用作食品中的增味剂。
本发明的一个目的是提供含有高含量5’-核糖核苷酸的组合物，其在味道方面是纯净的，并可被用于若干食品或饲料上的应用。本发明的另一个目的是提供具有上述特征的含有5’-核糖核苷酸的组合物的简单而有效的生产方法。
发明内容
本发明提供了包含至少55％w/w(基于无NaCl的干重)5’-核糖核苷酸的组合物。优选地，该组合物包含至少65％w/w的5’-核糖核苷酸，更优选地，至少75％w/w的5’-核糖核苷酸。优选地，该组合物还包含谷氨酸盐。典型地，本发明的组合物包含至多98％w/w的5’-核糖核苷酸。
本发明还提供了一种非常简单、划算因此在商业上很具吸引力的方法。有益地，本发明的方法与从酵母提取物中对RNA的分离以及将经过分离的RNA向5’-核糖核苷酸的转化结合在一起。以这种方式，可能以相对简单并因此在商业上很具吸引力的方法生产出高纯度的5’-核糖核苷酸来。
本发明的方法可被用于生产本发明组合物。
特别地，本发明提供了用于生产含有5’-核糖核苷酸的组合物的方法，所述方法包括：
(i)处理微生物细胞，以释放出包含RNA的细胞内容物；
(ii)将存在于释放出的细胞内容物中的RNA与其它可溶性细胞物质分离；
(iii)将经过分离的RNA转化为5’-核糖核苷酸。
在此用术语“5’-核糖核苷酸”来指5’-GMP、5’-CMP、5’UMP、5’-AMP和/或5’-IMP的混合物，其中混合物中的5’-IMP是通过将5’-AMP部分或完全转化成5’-IMP来获得的。
术语“5’-核糖核苷酸”在本文中指游离的5’-核糖核苷酸或其盐。
5’-核糖核苷酸在本发明组合物中的重量百分比基于该组合物无NaCl的干重，并且作为5’-核糖核苷酸的二钠盐七水合物(2Na.7Aq)来被计算。无NaCl并不意味着本发明的组合物就不能含有NaCl，而是在计算％w/w时将NaCl从所述组合物中排除出去。后一种计算可以通过本领域技术人员已知的方法来进行。组合物中谷氨酸盐的量被计算为谷氨酸的百分比(％w/w)，即，组合物的每重量无NaCl干重中游离谷氨酸的重量。
优选地，本发明的组合物包含谷氨酸盐，其中，谷氨酸盐与5’-核糖核苷酸的比例小于0.1，优选地，小于0.05，或者更优选地，小于0.01；以及，其中该比例大于0.001。通常，所述组合物包含0.01％至10％，优选0.05％至5％或更优选地，0.1％至2％w/w的谷氨酸盐，这些含量基于所述组合物的无NaCl干重。
优选地，本发明的组合物包含的5’-GMP的量比5’-IMP和5’-AMP的总和更多。商业上可获得的所有酵母提取物含有的5’-GMP的量都比5’-IMP和5’-AMP的总和要少。优选从酵母获得的本发明的5’-核糖核苷酸组合物含有比5’-IMP和5’-AMP的总和还多的5’-GMP。在此类组合物中相对于5’-IMP和5’-AMP的总和而言，更高的5’-GMP含量是有好处的，因为这使得该组合物较之目前商业上可获得的酵母提取物具有更强的增味能力。这是因为5’-GMP在增加香味的方面比5’-IMP更为有用，而5’-AMP对增加香味没有作用(T.Nagodawithana，“Savoury Flavours”，(1995)editedby Esteekay associates，Inc，Wisconsin，USA，page 302)。
任何类型的微生物都可被用作本发明方法中RNA的来源。细菌和真菌微生物是优选的，例如适于食品和饲料应用的那些。优选的微生物是那些具有食品级状态并因此可以安全用于人类食品消耗的。优选的是具有高RNA含量的微生物。
适合在本发明方法中使用的微生物的例子包括酵母和丝状真菌，例如Trichoderma或Aspergillus。属于Saccharomyces、Kluyveromyces或Candida属的酵母菌株是优选使用的。属于Saccharomyces，例如属于Saccharomyces cerevisiae株的酵母菌株是优选的。
合适的细菌微生物的例子是乳酸细菌，例如，乳酸菌(Lactobacillus)。
本发明的方法可以以讨论中的微生物的发酵培养液开始。可使用本领域内已知的发酵方法。在一些情况下，该发酵培养液在用于本发明的方法之前可被浓缩，例如通过离心或过滤。例如，膏状酵母(已被浓缩成15-27wt％干物质含量的面包酵母)可被使用。
通常从具有高RNA含量的菌株(即，典型地，具有6-15％的RNA含量)中来获得发酵培养液。以这种方式，在水解过程中会产生高含量的5’-核糖核苷酸。虽然具有高RNA含量的酵母或其它微生物菌株是优选的，但是，具有低RNA含量的酵母或其它微生物菌株也是可以使用的。有利地，使用本发明的方法，可将上述酵母或其它微生素菌株转化为具有高5’-核糖核苷酸含量的组合物或酵母提取物。此外，使用本发明的方法，可以获得其中5’-核糖核苷酸含量比基于初始酵母或微生物的RNA含量预测出来的含量和/或在目前可获得的酵母提取物中发现的含量要高的组合物。
在对微生物细胞进行处理以释放出细胞内容物之前，优选对所述微生物细胞进行处理以使所述细胞中存在的天然的酶失活。通常，在自溶微生物提取物中RNA会被降解或修饰，对该RNA的分离因此也就缺少吸引力了。
例如用热激(heat shock)对发酵培养液中天然的酶进行失活是可行的，所述热激例如5至10分钟，适合在80℃-97℃的温度下进行。该处理应当至少使降解所述微生物RNA的酶(例如，磷酸酶、Rnase、Fdase)失活。因此，优选地，在该处理之后所述微生物RNA将不会被降解或修饰。RNA降解可能发生于稍后的阶段，例如，通过加入合适的酶。
在本发明的方法中，对微生物细胞进行处理以释放出包含RNA的细胞内容物。通过该处理，细胞壁被破碎和/或破坏，导致细胞内容物的释放。
为了从细胞中释放出细胞内容物，可以采用本领域技术人员已知的方法对细胞进行化学处理、机械处理或酶处理。
机械处理包括均质(homogenisation)技术。为此目的，适用高压均质机是可行的。其它的均质技术可以包括用颗粒例如沙和/或玻璃珠来混合，或者研磨装置(例如玻珠研磨机)。
化学处理包括使用盐、碱和/或一种或多种表面活性剂或去垢剂。化学处理是较不优选的，因为它们可能导致RNA的部分降解，尤其是用到碱的时候，以及导致随后2’-核糖核苷酸和3’-核糖核苷酸的形成。
优选地，用酶进行该溶解或细胞壁裂解步骤，因为就此可以获得对该过程的更好的控制。此外，酶的使用使得该方法特别适合于大规模的应用。若干种酶制剂都可以使用，包括纤维素酶、葡聚糖酶、半纤维素酶、几丁质酶、蛋白酶或果胶酶。例如，可以使用蛋白酶，例如内切蛋白酶。用于酶的反应条件取决于所使用的酶。通常，所述的微生物细胞被酶处理1至24小时，在4至10的pH和40℃至70℃的温度下进行。
化学处理或酶处理之后，优选地，所用的化学物质或酶应在使得RNA不会被实质上改变和/或降解的条件下被中和或失活。
对酶的失活可通过pH处理或者优选地，通过热处理来进行。
随后，将释放出的细胞内容物中存在的RNA与其它可溶性微生物细胞物质分离。
按照本领域技术人员已知的方法，可以将可溶的RNA与其它可溶性物质分离，例如RNA的选择性沉淀或者色谱方法。优选地，通过超滤(UF)来进行RNA与其它可溶性微生物细胞物质的分离。超滤很经济又很方便，特别适合大规模应用以及制造食品级产品。就实验室规模而言，对RNA的分离可以若干种途径来进行，其中每种都能获得非常纯净的少量RNA样品。这些方法通常劳动强度大且很昂贵。本发明提供了特别适用于大规模分离RNA或5’-核糖核苷酸的方法，该方法还允许以有商业吸引力的规模来生产RNA或5’-核糖核苷酸。本发明的方法产生了良好纯度且高产量的5’-核糖核苷酸。大规模意味着本发明方法中的初始材料可以是10m3或更大的发酵罐中生产的微生物的发酵培养液。
在用UF来分离RNA与其它可溶性细胞物质的情况下，可以使用具有10-50kD分子量分离点(cut-off)的过滤器，优选是20-50kD。通常，较大的过滤器尺寸允许较高的过滤器流量，但也可能导致较大的损失和/或较为不纯净的产品。从超滤步骤产生的渗余物中回收RNA部分(fraction)。本领域的技术人很清楚：最终组合物中5’-核糖核苷酸的量会受到方法中所用的超滤器类型的影响，并会受到超滤步骤中洗涤效率的影响。
经过分离的RNA可被转化为5’-核糖核苷酸，优选是使用酶来进行的。
5’-磷酸二酯酶(5’-Fdase)可被用于进行RNA到5’-核糖核苷酸的转化。5’-磷酸二酯酶可从微生物来源或植物来源(例如，麦芽根的提取物)获得。商业上可获得的微生物的5’-Fdase的一个例子是Amano(日本)生产的RP-1酶。脱氨酶，例如腺嘌呤脱氨酶可被用于将5’-AMP转化为5’-IMP。商业上可获得的脱氨酶的一个例子是Amano(日本)生产的脱氨酶500。
用5’-Fdase和脱氨酶进行的从RNA到5’-核糖核苷酸的转化可用两步法或一步法来进行。
在分离RNA之前，在本发明的一种优选实施方式中，将来自微生物细胞(例如细胞壁)的固体物质与释放出的细胞内容物里存在的可溶性物质(包括RNA、蛋白质、碳水化合物、矿物质、油脂和维生素)分离。这可以通过任何适于开展固/液分离的方法来达成。例如可以使用离心或过滤。当在RNA与其它可溶性微生物细胞物质的分离之前未除去来自微生物细胞的固体时，所述固体物质可在完成RNA到5’-核糖核苷酸的转化之后通过任何固/液分离方法来除去。
应当理解，在本发明上下文中，类似于“将存在于释放出的细胞内容物中的RNA与其它可溶性细胞物质分离”的措辞或类似于“将经过分离的RNA转化为5’-核糖核苷酸”的措辞并不一定意味着所有RNA都应被分离或转化。本领域的技术人员很清楚：被分离出的RNA的数量将取决于所用的分离方法的类型；被转化的RNA的量将取决于若干种因素，例如取决于所用的酶的类型。
在RNA向5’-核糖核苷酸转化之后，以及可选地，在除去来自微生物细胞的固体物质之后获得的含有5’-核糖核苷酸的部分，优选地从比5’-核糖核苷酸分子量更高的化合物中来提纯，优选通过超滤。纯化的程度将取决于所用的超滤膜的分子量分离点。
含有5’-核糖核苷酸的部分，(可选地，在通过超滤进行的纯化之后，)通常作为可被进一步浓缩和/或干燥的溶液通过本领域技术人员已知的方法来获得。
可用本发明方法获得的包含5’-核糖核苷酸的组合物，具有高的5’-核糖核苷酸含量，在味道上是纯净的。本说明书中出现的“味道上纯净”指：当以合适的量将本发明的组合物加到食品或饲料中时，在所述食品和/或饲料中，极少有或不存在任何是从中获得所述组合物的微生物所典型具有的特殊的味道和/或气味，或者任何来自所述组合物的肉汤或类似肉汤的味道和/或气味。优选地，在本发明组合物中极少有或不存在微生物所典型具有的任何特殊的味道和/或气息和/或气味。
例如，使用Saccharomyces作为初始材料的情况下，组合物没有酵母味道；使用Candida作为初始材料的情况下，组合物没有甜味。以合适的量应用于食物制品时，该组合物将不提供肉汤或类似肉汤的味道。
根据本发明的一种实施方式，所述5’-核糖核苷酸组合物可按照任何想要的比例加入到传统的酵母提取物中。作为结果，可以获得具有任何想要的5’-核糖核苷酸含量的酵母提取物。
本发明的组合物来自天然的来源，特别是优选为食物级的微生物。
根据本发明的含有5’-核糖核苷酸的组合物可被用于任何食品或饲料产品中，尤其是为了改善和/或增加其味道和/或香气和/或口感。可加入所述组合物的典型的食品类型包括日常食品、烘焙食品、蔬菜、水果、肉、糖果、脂肪、油、饮料(例如，碳酸饮料或来自日常食品的饮料，例如牛奶，来自蔬菜、水果的饮料、酒精饮料等)或任何从上述食品加工得到的食品。
本发明的组合物在具有降低的或较低的总脂肪的食品(或饮料)中也有合适的应用。在本发明的上下文中，具有降低的或较低的总脂肪的食品，通常是通过加工、配方或导致其中包含的总脂肪降低的再配方，和/或用脂肪替代品对所述总脂肪的替代，从相应的全脂食品中获得的。所述过程和所述的脂肪替代品是本领域内已知的。
具有降低的或较低的总脂肪的食品的明显缺点是：此类食品缺乏相应全脂食品或饮料制品的丰富香味。通过用本发明的组合物来增强具有降低的或较低的总脂肪的食品的味道和/或香气和/或口感中的脂肪气味可以克服掉该缺点。后者意味着所述包含有本发明组合物的具有降低的或较低的总脂肪的食品具有与相应全脂食品的味道和/或香气和/或口感更为相似的味道和/或香气和/或口感。
本发明的组合物还在包含人工加甜剂的食品中具有合适的应用。与使用人工加甜剂相关的明显缺点是副味或后味(例如苦味)在食品中的存在或发展。单独或组合使用时存在上述问题的最常用的人工加甜剂是：安赛蜜-K、阿力甜(alitame)、阿斯巴甜、环己基氨基磺酸盐(cyclamate)、纽甜(neotame)、新橙皮甘(neohesperidine)、糖精、甜叶菊甙、蔗糖素(sucralose)和甜蛋白(thaumatin)。通过使用本发明的组合物来掩盖食品或饮料中人工加甜剂的副味或后味可以克服该缺点。本发明还包括包含人工加甜剂和本发明组合物的组合物。
本发明的组合物可被用来增加饮料中更为特别的味道和/或香气和/或口感，具体而言，在饮料的味道和/或香气中增加特定蔬菜的气味和/或水果气味和/或酒精气味。例如，它们可被用于在蔬果汁中增加特定的蔬菜味道和/或蔬菜香气，在水果汁中增加特定的水果味道和/或水果香气，在酒精饮料，尤其是那些具有低或降低的酒精含量的酒精饮料(例如葡萄酒和啤酒)中增加特定的酒精味道和/或酒精香气。
在上述应用中加到食品或饮料中的5’-核糖核苷酸组合物的量将取决于食品或饮料的类型以及取决于所述的应用。5’-核糖核苷酸组合物的量可以在例如0.0001％w/w至10％w/w中变化，所述的量是相对于所述食品或饮料而言的。
现在将通过一些实施例来对本发明进行阐释，所述实施例并不是要限制本发明的范围。
实施例1
在连续直通热交换器(continuous flowthrough heat exchanger)中，于95℃对40000kg的膏状酵母(干固体为18.2％)进行10分钟的热处理，以失活所有的酵母酶活性。随后，用Pescalase(来自Bacillus licheniformis的内切蛋白酶，DSM N.V.，荷兰)在pH 8.0和62℃对失活的酵母分批进行6小时的处理。此后，在70℃通过对所述蛋白酶进行1小时的热处理(分批)使其失活，用盐酸将pH降至5.3。通过连续离心从反应混合物中除去固体物质。在50kD的超滤器上对剩下的上清液进行超滤以将高分子量的部分(包括RNA)与低分子量的物质分离，所述低分子量的物质例如无机成分、维生素、碳水化合物(例如海藻糖)、游离氨基酸、肽和小的蛋白质。然后在pH 5.3和65℃对所述高分子量的部分(渗余物UF1)与5’-磷酸二酯酶分批进行15小时的培养，以将RNA水解成5’-核糖核苷酸。接着，通过脱氨酶在pH 5.1和55℃进行的2.5小时的培养，将释放出的5’-AMP转化为5’-IMP。最后，用50kD的过滤器对所述反应混合物再次进行超滤。滤液的干固体主要由5’-核糖核苷酸(滤液UF2)组成。
根据下述方法通过HPLC对样品进行RNA含量和/或5’-核糖核苷酸含量的分析。样品中的RNA在碱处理阶段被水解。用5’-GMP作为标准，用Whatman Partisil 10-SAX柱，用pH 3.35的磷酸缓冲液作为洗脱液以及UV检测，通过HPLC来对GMP(即从RNA水解得到的2’-GMP和3’-GMP)进行定量。基于无氯化钠干物质的RNA的重量百分比相当于基于无氯化钠干物质的游离GMP的重量百分比的～4倍。
还可对过滤物UF2的5’-GMP、5’-IMP、5’-AMP和谷氨酸含量进行分析。用Whatman Partisil 10-SAX柱，用pH 3.35的磷酸缓冲液作为洗脱液以及UV检测，通过HPLC来测定样品中5’-GMP、5’-IMP和5’-AMP的量(以基于无氯化钠的干物质的其二钠七水合物的重量百分比来表示)。基于5’-GMP、5’-IMP和5’-AMP的标准来计算浓度。利用在食物和其它物质测试试剂盒(Boehringer Mannheim/R-Biopharm，EnzymaticBioAnalysis/Food Analysis，Catalogue No.10139092035，Catalogue year 2004，R-BIOPHARM AG，Darmstad，Germany)中测定L-谷氨酸的L-谷氨酸Colorimetric方法来测定谷氨酸的量。
表1中显示了所述提取方法的数据。
表1：核苷酸提取方法的数据
| 数量(kg) | 干固体(％w/w) | 干固体(kg) | RNA* *(％) | 5’-GMP* **(％) | 5’-IMP***(％) | 谷氨酸**(％) | 5’-AMP***(％) | |
| 膏状酵母 | 40000 | 18.20 | 7280 | 8.2 | ||||
| 上清液* | 54100 | 8.77 | 4750 | 10.3 | 5.5 | |||
| 渗余物UF1 | 8120 | 7.80 | 632 | 72.5 | 0.4 | |||
| 滤液UF2* | 10160 | 3.98 | 404 | 0.0 | 24.5 | 24.1 | 0.5 | 0 |
*包括洗涤液体
**％基于无NaCl的干固体
***基于无NaCl的干固体，以2Na.7aq表示
组合物中5’-核糖核苷酸的量是大约97％w/w，这是基于无氯化钠的干物质的。
实施例2
于95℃对2100g膏状酵母的一部分(干固体为18.2％)进行10分钟的热处理，以失活所有的酵母酶活性。随后，用Pescalase(来自Bacilluslicheniformis的内切蛋白酶，DSM N.V.，荷兰)在pH 8.0和62℃对失活的酵母分批进行6小时的处理。此后，在70℃通过对所述蛋白酶进行1小时的热处理(分批)使其失活，用盐酸将pH降至5.3。在50kD的超滤器上对水解物进行超滤以将高分子量的部分及细胞壁(包括RNA)与低分子量的可溶性物质分离，所述低分子量的物质例如无机成分、维生素、碳水化合物(例如海藻糖)、游离氨基酸、肽和小的蛋白质。然后在pH 5.3和65℃将所述渗余物与5’-磷酸二酯酶进行15小时的培养，以将RNA水解成5’-核糖核苷酸。接着，通过脱氨酶在pH 5.1和55℃进行的2.5小时的培养，将释放出的5’-AMP转化为5’-IMP。最终，通过离心去除所述固体，用去矿质水洗涤颗粒部分，并再次离心。两份上清液(初级上清液和洗涤液)被合并，在50kD超滤器上对整体进行超滤，以将低分子量的物质包括5’-核糖核苷酸与高分子量的物质分离。得到的超滤液被浓缩及喷雾干燥。
对得到的粉末分析其5’-GMP、5’-IMP和5’-AMP的浓度。此外，在终产物中测量谷氨酸和氯化钠的浓度，以及在膏状酵母中测量RNA的浓度。通过用Jenway氯化物测量仪PCLM3(Jenway，Essex，England)在样品中测量氯离子以及计算相应的氯化钠的量，来对氯化钠进行测定。表2中显示了所述提取方法的数据。
表2：核苷酸提取方法的数据(50kD UF过滤器)
| 干固体(％w/w) | 干固体(g) | RNA*(％) | NaCl(％) | 5’-GMP**(％) | 5’-IMP**(％) | 谷氨酸*(％) | 5’-AMP**(％) | |
| 膏状酵母 | 18.2 | 383 | 8.2 | 0 | ||||
| 最终粉末 | 97.4 | 0.0 | 7.3 | 18.2 | 18.2 | 0.9 | 0.0 |
*％基于无NaCl的干固体
**基于无NaCl的干固体，以2Na.7aq表示
组合物中5’-核糖核苷酸的量是73％w/w，这是基于无氯化钠的干物质的。该数量要低于实施例1中终产物中的数量(基于无氯化钠的干物质，大约97％)。这意味着组合物中5’-核糖核苷酸的量可能受方法类型的影响。
实施例3
按照实施例2所述，从2100g膏状酵母(干固体为18.2％)来开展所述的方法。但是，本实施例中使用30kD的超滤器(实施例2中是50kD的超滤器)。
表3中显示了该提取方法的数据。
表3：核苷酸提取方法的数据(30kD UF过滤器)
| 干固体(％w/w) | 干固体(g) | RNA*(％) | NaCl(％) | 5’-GMP* *(％) | 5’-IMP**(％) | 谷氨酸*(％) | 5’-AMP* **(％) | |
| 膏状酵母 | 18.50 | 389 | 8.2 | 0 | ||||
| 最终粉末 | 95.83 | 0.0 | 5.0 | 19.4 | 16.0 | 0.6 | 3.4 |
*％基于无NaCl的干固体
**基于无NaCl的干固体，以2Na.7aq表示
组合物中5’-核糖核苷酸的量是大约78％w/w，这是基于无氯化钠的干物质的。该数量较之通过50kD UF过滤器生产的组合物(实施例2)要高大约5％。这意味着组合物中5’-核糖核苷酸的量可能受UF过滤器类型的影响。
实施例4含有5’-核糖核苷酸的组合物在人工加甜剂型的Coca
或在
普通Fanta
中的用途
对根据本发明的含有5’-核糖核苷酸的组合物添加到人工加甜剂型的Coca
(Cola Cola
-Coca Cola Company-Rotterdam)或加到普通Fanta
(Coca Cola Company-Rotterdam)中的影响进行了研究。
所述组合物含有17.8％w/w的5’-GMP、17.6％w/w的5’-IMP(即大约70％的5’-核糖核苷酸)和0.7％w/w的谷氨酸，上述含量基于无NaCl的干物质。干物质中氯化钠含量＜1％。每升饮料中使用50mg剂量的组合物。
包含所述组合物的饮料的味道和/或香气和/或口感是由一组食品品尝方面的专家来分析的(实验1和2)，并与原来的饮料进行了比较。对Coca Cola而言，还将包含所述组合物的饮料的味道和/或香气和/或口感与普通的Coca
(Coca Cola Company-Rotterdam)进行了比较。
表4(Coca Cola
)和表5(Fanta
)中分别显示了所述结果。
表4
表5
该结果清晰地显示了核糖核苷酸对Cola Cola
或Fanta
的味道和/或香气和/或口感的正面影响。在包含所述组合物的Cola Cola
中，饮料中由于存在人工加甜剂(阿斯巴甜、环己基氨基磺酸钠和安赛蜜)而产生的后味被掩盖了。在包含所述组合物的Fanta
整体味道，尤其是其中的水果气味得到了增强。
此外，没有酵母气味被引入到所述饮料中，而使用传统的酵母提取物时，这种气味就是正常情况了。这表示，根据本发明的组合物味道纯净，特别适于不期望存在有来自酵母提取物或组合物的酵母味道/气味的饮料应用。
实施例5含有5’-核糖核苷酸的组合物在经过加工的奶酪中的用途
将实施例4中的组合物加入到低脂奶酪酱(Slimkuipje天然15+，包含5％w/w的总脂肪)中，加入剂量为每100g奶酪酱中50mg。包含所述组合物的奶酪酱(实验1)的味道和/或香气通过食品品尝方面的一组专家来分析，并与原本的(低脂)奶酪酱的味道和相应的全脂产品(全脂)(Goudkuipje天然48+，ERU-Woerden-荷兰生产，包含21％w/w的总脂肪)的味道进行比较。
结果显示于表6中。
表6
| 实验 | 组合物(mg/100g) | 对于味道/香气的观察 |
| 全脂产品 | 0 | 幼奶酪味、微弱香气、脂肪感 |
| 低脂产品 | 0 | 奶酪味道较弱、香气少、无奶酪的真正特点、无奶油感、无脂肪感 |
| 实验1 | 50 | 较低脂产品有更强的奶酪香气、更多奶油感、更多脂肪感、较低脂产品更好口感、更接近全脂产品、纯净的奶酪味道、无酵母气味 |
该结果清楚地显示了本发明组合物对经加工低脂奶酪的味道和/或香气和/或口感的影响。具体而言，包含所述组合物的低脂奶酪酱的味道和/或香气和/或口感更像全脂奶酪酱的味道和/或香气和/或口感。此外，没有来自所述组合物的酵母气味被引入食品。
Claims (11)
1.一种生产含有5’-核糖核苷酸的组合物的方法，所述方法包括：
(i)处理微生物细胞，以释放出包含RNA的细胞内容物；
(ii)将所述释放出的细胞内容物中存在的RNA与其它低分子量可溶性细胞物质分离，其中所述的将RNA与其它可溶性细胞物质的分离是通过使用分子量分离点为10-50kD的过滤器进行超滤来进行的；以及
(iii)将经过分离的RNA转化为5’-核糖核苷酸。
2.如权利要求1所述的方法，其中，在处理所述微生物细胞以释放所述的细胞内容物之前对所述微生物细胞的天然的酶进行失活。
3.如权利要求1所述的方法，其中用酶、化学或机械手段对所述的细胞进行处理。
4.如权利要求3所述的方法，其中用酶对所述的细胞进行处理。
5.如权利要求4所述的方法，其中用于处理细胞的酶是蛋白酶。
6.如权利要求1所述的方法，其中，在将所述释放出的细胞内容物中存在的RNA与其它可溶性细胞物质分离之前，除去来自所述微生物细胞的固体物质。
7.如权利要求6所述的方法，其中，通过离心或过滤来除去所述的固体物质。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述的经过分离的RNA是通过酶转化为5’-核糖核苷酸的。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述的经过分离的RNA是通过5’-Fdase或者通过5’-Fdase和脱氨酶转化为5’-核糖核苷酸的。
10.如权利要求1所述的方法，其中，通过去除具有高于5’-核糖核苷酸的分子量的化合物来对所述5’-核糖核苷酸进行进一步地纯化。
11.如权利要求10所述的方法，其中，所述的去除具有高于5’-核糖核苷酸的分子量的化合物是通过超滤来进行的。
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