CN101113418A - 一种富集光合细菌的培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种富集光合细菌的培养基。采用的技术方案是：一种富集光合细菌的培养基，其特征在于含有基础培养基、酵母膏和羟基丁二酸；在基础培养基中，每1000ml基础培养基加入0.1g～3.0g的酵母膏和0.5g～2.0g的羟基丁二酸。用本发明的培养基培养光合细菌，培养速度快，成本低。弥补了光合细菌生长期过短以及繁殖过程pH升高过快等方面的不足之处，延长了生长期5～7天，使最大生长量OD660提高到1.6～3.0。
Description
技术领域：
本发明涉及一种富集细菌的培养基，特别涉及一种富集光合细菌的培养基。
背景技术：
光合细菌是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。研究应用的实践表明，光合细菌能利用多种硫化物和有机物作为其光合作用的供氢体和有机碳源，在高浓度的有机废水处理与资源化、水产养殖的水质调控与促进健康生长、在农业中作为高效活性菌肥等方面，发挥着十分有益的和令人瞩目的作用。
光合细菌是一类不产氧的特殊生理类群的原核微生物的总称，是最早出现的具有原始光合成体系的原核微生物，在自然界的碳素、氮素、硫素转化循环中起重要作用。光合细菌营养丰富，细胞干物质中蛋白质含量高达60％以上，光合细菌还含有多种维生素，尤其是B族维生素极为丰富，VB12、叶酸、泛酸、生物素的含量远高于酵母。此外，光合细菌还含有大量的类胡萝卜素、辅酶Q等生理活性物质。因此，光合细菌具有很高的营养价值，在水产和畜禽养殖上有着很高的应用价值。
光合细菌的推广和应用，关键在于需要合适的培养基质，但目前经典的用于富集光合细菌的常规培养基，主要配方为：氯化铵1g，碳酸氢钠1g，磷酸氢二钾0.2g，乙酸钠1～5g，七水硫酸镁0.2g，氯化钠0.5～2g，生长因子10ml，微量元素溶液10ml，蒸馏水980ml，(见《微生物学实验教程》)，其平均富集的时间为2～8周，周期长，且存在培养基成分种类多，成本较高的缺点。
发明内容：
为了解决上述问题，本发明提供一种富集光合细菌的培养基，用本发明的培养基培养光合细菌，培养速度快，成本低。
本发明采用的技术方案是：一种富集光合细菌的培养基，其特征在于含有基础培养基、酵母膏和羟基丁二酸(苹果酸)；在基础培养基中，每1000ml基础培养基加入0.1g～3.0g的酵母膏和0.5g～2.0g的羟基丁二酸。
优选的，在基础培养基中，每1000ml基础培养基加入1.0g的酵母膏和1.5g的羟基丁二酸。
基础培养基是光合细菌的常用培养基。也就是现有技术中经常用的，并已公开的光合细菌培养基。
调节本发明培养基pH为7～9，121℃灭菌30min。将光合细菌接种于培养基中，振荡混匀，置于光照培养箱中光照培养，光照条件为1500～2000lux，温度为30±1℃。
酵母膏对光合细菌的生长量的影响随着酵母膏的浓度的增加而增加，经过7天的光照培养后，当酵母膏的用量小于3g/L时(每1000ml基础培养基加入3.0g)，其菌体繁殖速度很快，菌液OD660达1.9，当酵母膏的用量大于3g/L时，其OD660值无明显变化，菌液OD660为2.0～2.1。因此，酵母膏的用量以0.1g/L～3.0g/L的酵母膏为宜。
羟基丁二酸对光合细菌的生长量的影响，随着羟基丁二酸的浓度的增加而增加，经过7天的光照培养后，当羟基丁二酸的用量小于2.0g/L(每1000ml基础培养基加入2.0g)时，其菌体繁殖速度很快，菌液OD660达1.7，当羟基丁二酸的用量大于2.0g/L时，其OD660值无明显变化，菌液OD660为1.8～1.9。因此，羟基丁二酸的用量以0.5g/L～2.0g/L为宜。
本发明的有益效果是：
1、富集培养速度快。由于在基础培养基中加入了酵母膏、羟基丁二酸等营养成分，为光合细菌创造了一个更好的厌氧环境，使光合细菌生长速度快，培养5天后，菌液颜色逐渐变深，由浅红转变为粉红最后变为深红，培养其OD660为1.7～2.0。
2、光合细菌生长期延长，最大生长量提高。随着培养时间的增加，菌液OD660逐渐增加，培养4天时，其OD660为1.2～1.5，比使用基础培养基培养光合细菌时的OD660有所提高，培养8～12天时，菌液生长量达最高峰，其OD660为2.0～3.0。光合细菌的生长期延长了3～7天，对其繁殖更有促进作用。
3、使用本发明的培养基培养光合细菌，pH值上升较常规基础培养基缓慢。光合细菌生长过程中，随着光合细菌的生长pH值不断升高，当基础培养基中pH值上升到9时，细菌生长受抑制。而本发明的培养基相对于基础培养基pH值上升缓慢，当pH值上升到9时，光合细菌的OD660值开始下降。主要是由于培养基的pH值影响了培养基中营养物质的离子化程度，从而影响微生物对营养物质的吸收，而且还会影响代谢反应中各种酶的活性。
4、成本低。在常规培养基中，由于加入了生长因子和微量元素溶液，使用成本太高，而本发明用酵母膏和羟基丁二酸替代了生长因子和微量元素溶液，使成本降低。
5、用本发明培养基培养的光合细菌，用于净化和改善养殖水体。按光合细菌的30kg/hm2用量一次性洒入鱼塘，试验池水质比对照组有明显改善，其中溶解氧增加68％，COD下降21％，氨氮下降58.7％，硝酸氮下降29.4％，硫化物下降77.4％。
附图说明：
图1是本发明与常规培养基，在培养基富集培养过程中，光密度OD660的变化图；
图2是本发明与常规培养基，在培养基富集培养过程中，pH变化图。
在图1和图2中，a代表本发明的培养基，b代表常规培养基
具体实施方式：
实施例1
(一)富集光合细菌培养基的配制
基础培养基：氯化铵1.0g，碳酸氢钠1.0g，磷酸氢二钾0.2g，乙酸钠3.0g，七水硫酸镁0.2g，氯化钠1.0g，用蒸馏水配成1000ml。
在上述基础培养基中，加入0.1g酵母膏和0.5g羟基丁二酸。
(二)光合细菌的培养
将上述培养基的pH调至7，121℃灭菌30min。将光合细菌(市购)按照接种浓度为4％接种于培养基中，振荡混匀，置于光照培养箱中光照培养，光照条件为1500lux，温度30℃。
富集培养结果：光照培养5天后，菌液OD660为1.3，光照培养8天后，达到最大生长量，菌液OD660为1.9，使光合细菌的对数生长期延长3天。
实施例2
(一)富集光合细菌培养基的配制
基础培养基：氯化铵1.0g，碳酸氢钠1.0g，磷酸氢二钾0.2g，乙酸钠3.0g，七水硫酸镁0.2g，氯化钠1.0g，用蒸馏水配成1000ml。
在上述基础培养基中，加入3.0g酵母膏和2.0g羟基丁二酸。
(二)光合细菌的培养
将上述培养基的pH调至7，121℃灭菌30min。将光合细菌(市购)按照接种浓度为4％接种于培养基中，振荡混匀，置于光照培养箱中光照培养，光照条件为1500lux，温度30℃。
富集培养结果：光照培养5天后，菌液OD660为1.4，光照培养10天后，达到最大生长量，菌液OD660为2.2，使光合细菌的对数生长期延长5天。
实施例3
(一)富集光合细菌培养基的配制
基础培养基：氯化铵1.0g，碳酸氢钠1.0g，磷酸氢二钾0.2g，乙酸钠3.0g，七水硫酸镁0.2g，氯化钠1.0g，用蒸馏水配成1000ml。
在上述基础培养基中，加入1.0g酵母膏和1.5g羟基丁二酸。
(二)光合细菌的培养
将上述培养基的pH调至7，121℃灭菌30min。将光合细菌(市购)按照接种浓度为4％接种于培养基中，振荡混匀，置于光照培养箱中光照培养，光照条件为1500lux，温度30℃。
富集培养结果：光照培养5天后，菌液OD660为1.8，光照培养12天后，达到最大生长量，菌液OD660为2.5，使光合细菌的对数生长期延长7天，最大生长量提高。
用此培养基培养的光合细菌应用于养殖水的净化处理，养殖水COD、氨氮的去除率分别达到了61％、70.48％。
对比例
分别取实施例3本发明的培养基和背景技术中介绍的常规培养基，分别调节培养基的pH为7，121℃灭菌30min。将光合细菌(市购)按照接种浓度为4％接种于培养基中，振荡混匀，置于光照培养箱中光照培养，光照条件为1500lux，温度30℃。光照培养12天，测定培养基富集培养过程中光密度OD660变化(见图1)及pH变化(见图2)。
从图1可知，使用常规培养基培养光合细菌，3天后菌液开始转红，第5天时菌液OD660为1.5，5天后其OD660逐渐降低；使用本发明培养基培养光合细菌，随着培养时间的增加，菌液OD660逐渐增加，培养12天，其OD660为2.4，本发明的培养基使光合细菌的对数生长期延长7天，并且对其繁殖更有促进作用。
由图2可知，随着光合细菌的生长pH值不断升高，当常规培养基中pH值上升到9时，细菌生长受抑制。使用本发明的培养基培养光合细菌相对于常规培养基pH值上升缓慢，使光合细菌的对数生长期延长。
Claims (2)
1.一种富集光合细菌的培养基，其特征在于含有基础培养基、酵母膏和羟基丁二酸；在基础培养基中，每1000ml基础培养基加入0.1g～3.0g的酵母膏和0.5g～2.0g的羟基丁二酸。
2.根据权利要求1所述的一种富集光合细菌的培养基，其特征在于在基础培养基中，每1000ml基础培养基加入1.0g的酵母膏和1.5g的羟基丁二酸。
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