CN101111608A - 降低疾病传染性的组合物和方法 - Google Patents

降低疾病传染性的组合物和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101111608A
CN101111608A CNA2005800476619A CN200580047661A CN101111608A CN 101111608 A CN101111608 A CN 101111608A CN A2005800476619 A CNA2005800476619 A CN A2005800476619A CN 200580047661 A CN200580047661 A CN 200580047661A CN 101111608 A CN101111608 A CN 101111608A
Authority
CN
China
Prior art keywords
composition
virus
green tea
extract
ginger
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2005800476619A
Other languages
English (en)
Inventor
理查德·A·罗森布卢姆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Quigley Corp
Original Assignee
Quigley Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Quigley Corp filed Critical Quigley Corp
Publication of CN101111608A publication Critical patent/CN101111608A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/906—Zingiberaceae (Ginger family)
    • A61K36/9066—Curcuma, e.g. common turmeric, East Indian arrowroot or mango ginger
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/31—Brassicaceae or Cruciferae (Mustard family), e.g. broccoli, cabbage or kohlrabi
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/82—Theaceae (Tea family), e.g. camellia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/906—Zingiberaceae (Ginger family)
    • A61K36/9068—Zingiber, e.g. garden ginger
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/006—Oral mucosa, e.g. mucoadhesive forms, sublingual droplets; Buccal patches or films; Buccal sprays
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明公开了抗微生物组合物用于预防和抗感染的方法。该方法包括给药哺乳动物或鸟类一定量组合物的步骤，该组合物含有从姜获得的第一种成分；从绿茶获得的第二种成分；可选的从姜黄获得的第三种成分；以及可接受的载体。给药后，组合物能够有效降低感染疾病的发病率或预防疾病的传染。还公开了用于本发明方法中的鼻和喉喷雾剂组合物。

Description

降低疾病传染性的组合物和方法
本申请是2003年2月6日提交的目前待决的美国专利申请10/359，889的部分接续申请案；这依次是2002年8月6日提交的国际专利申请PCT/US02/24794的部分接续申请案，指定美国并以英文公开；这依次是2002年4月15日提交的美国专利申请10/122,991的部分接续申请案，现在是美国专利6,596,313；这依次是2001年8月6日提交的美国专利申请09/923,090的部分接续申请案，现在是美国专利6,592,896。
发明背景
1.发明领域
本发明涉及组合物的预防用途，用于降低微生物造成的疾病感染的发生。更具体的是本发明涉及治疗、减轻或预防微生物感染的一种或多种症状或副作用的方法，以及减轻微生物感染的感染性或传染性的方法。
2.相关技术的描述
病毒发病机制是病毒在宿主中产生疾病的方法。病毒的发病机制主要是对特定器官中离散的细胞群的病毒损伤的机制，所述损伤在特定宿主中产生疾病的信号和症状。
病毒必须进入宿主细胞以起始感染。进入途径取决于病毒，包括皮肤、眼、呼吸、GI和泌尿生殖道以及循环系统。一些病毒在侵入位点附近造成组织损伤，尤其是感染上呼吸道的病毒，例如流行性感冒、副流行性感冒、鼻病毒和冠状病毒。一旦病毒颗粒入侵细胞，病毒编码的蛋白指导细胞复制病毒基因组并产生病毒特异性蛋白。这些蛋白与病毒基因组包装形成完整的病毒体并被释放。在囊膜病毒情况下，病毒体获得脂膜并将病毒特异糖蛋白插入这个脂膜。囊膜病毒家族包括疱疹病毒科，逆转录病毒科，正粘病毒科，副粘病毒科，黄病毒科，披膜病毒科和冠状病毒科。鼻病毒是不被包膜的小核糖核酸病毒科的成员。
病毒演化出许多进入宿主细胞并起始感染的机制。为与细胞膜融合，病毒具有有膜融合活性的膜糖蛋白。在结合到细胞表面受体后，许多囊膜化的病毒诱导受体介导的胞吞作用，导致细胞形成内体小泡。一旦进入内体小泡，病毒颗粒进行脱壳过程。这确保了对病毒基因组合适的pH，以避免病毒基因组被细胞核酸酶降解。
流感病毒属于病毒的正粘病毒科家族，它们是包含具有8个片段的负链RNA基因组的的囊膜病毒。病毒RNA编码10种病毒特异性蛋白。感染循环的起始需要病毒包膜与宿主细胞表面受体的结合，然后是受体介导的细胞内吞以及病毒与内体膜的融合。融合过程使病毒基因组可释放入细胞质中，再移入细胞核，在核内病毒基因组起始病毒转录和复制。负责流感受体结合和膜融合的蛋白是血凝素蛋白(HA或H抗原)。对大部分株来说，HA蛋白是病毒体表面最多的糖蛋白。HA蛋白还是中和抗体的靶标。存在三种流感病毒的血清型：A，B和C。血清型A和B造成大部分临床疾病。流感A发生最频繁，它的致病力更强，是造成大部分传染性和大流行疾病的原因。根据表面抗原HA和神经氨酸酶(N抗原)，流感A可进一步划分为亚型，H和N抗原是主要的抗原决定簇。株还可以根据首次分离的地理位置、序列号和分离年份进行分类。神经氨酸酶是一种促进感染宿主细胞释放新病毒颗粒的酶。第三种蛋白，M蛋白(基质蛋白)，是一种膜通道蛋白，在A株中称为M2，在B株中称为NB。这些病毒膜糖蛋白是免疫系统作用的靶标。
流感病毒颗粒结合于上和下呼吸道的上皮细胞，在该处它们侵入细胞，释放其基因组，控制宿主细胞复制机制以复制病毒蛋白和核酸。成熟的病毒颗粒通过宿主细胞的裂解释放。由此导致的呼吸道上皮的破坏增加了对二次感染的易感性。流感主要通过呼吸分泌物传染，这些分泌物通过咳嗽和喷嚏传播。当污染了病毒的手直接接触鼻道或眼时，流感还可通过直接接触传播。潜伏期从1到4天，感染者通常在症状出现前的1或2天具有传染性，并在发病后5天仍具有传染性。儿童和免疫受损者释放病毒的时间更长。
在复制期间流感易在一种或两种主要表面抗原上发生小的变化(亦即点突变)。这些变化部分是由于病毒转录组件缺乏校正和改错机制。所述的抗原性漂移(drift)是造成季节性流行的原因，因为它使病毒能够感染先前已接触病毒的只具有部分免疫力的人。流感A病毒特别易于发生抗原性漂移。H和N抗原上的主要变化导致抗原性漂移。抗原性漂移导致新的病毒亚型，因为只有少数人群具有免疫力，它可以造成重大传染性和大流行。
流感对人类造成严重威胁，因为它引起急性呼吸感染的当地传染性和全球大流行。在美国，流感病毒每年造成20,000到40,000个死亡病例和接近300,000住院病例(Sandha and Mossad，Influenza in the OlderAdult.Indications for the Use of Vaccine and Antiviral Therapy，Geriatrics56：43-51，2001，Oxford et al，In：Antigenic Variation，Ed.Craig & Scherf，Academic Press，London pp.53-83，2003)。在1918年的大流行中，普遍认为超过4千万人死亡。尽管儿童和年轻的成年人经历更多感染病例，严重的疾病更常见于年老或患有慢性疾病如哮喘，糖尿病，肾衰和心脏病的免疫受损的个体中。每年流行病趋势是在北半球为11到3月，在南半球为4到9月。
禽流感是流感病毒的A型株造成的。禽流感在全世界都有发生。被感染的鸟类显示广泛的症状，从轻微疾病到高度传染性的致死疾病。高度传染性的致死疾病是流感病毒的特别强毒力的病株造成的。感染这种株伴随着严重症状的突然发生，例如无力，产蛋量下降，软壳蛋，头、眼脸等的肿胀，鼻分泌物，咳嗽或腹泻，最终导致死亡(WHO，2004)。最近，证实15种亚型能够感染鸟类，但只有H7、H5和H9亚型与爆发有关。最近亚洲和不列颠哥伦比亚省的爆发分别是H5N1和H7N3株造成的。如上所述，流感病毒是公共卫生的焦点，因为这些病毒缺乏核酸复制的校正机制以及改正这些错误的修复系统。因此，流感病毒在转录期间容易产生高突变率。此外，流感病毒能够与不同种类的其他亚型调换或交换遗传物质，从而使亚型突破种间障碍，种间障碍通常阻止来自一个种的种特异病毒交叉感染另一个无关的种。种间障碍通常阻止禽流感株传染人类，但偶然的新株可能含有来自禽类和人类流感病株的遗传物质。当人类与家禽家猪非常接近时，会发生这种遗传物质的交换。家猪可能作为人类和禽类株的库。这样的话家猪作为新株出现的天然孵化器，这种新株能够传染人类以及禽类。
在美国现在有4种抗病毒药物用于流感的治疗：金刚烷胺，rimatadine，扎那米韦(扎那米韦(RelenzaTM))和奥塞米韦(TamifluTM)。金刚烷胺和rimatadine只对流感A有效。金刚烷胺，rimatadine和奥塞米韦已被批准用于预防。预防被标明只用于流感爆发期间具有高风险的未免疫人群。因为较差的耐受性和抗药性的发生，抗病毒试剂的用途是有限的。金刚烷胺是最近用于抵抗流感传染的主要抗病毒化合物，但它的活性只限于流感A病毒。抗神经氨酸酶抑制剂如扎那米韦和奥塞米韦是一类新的被批准用于流感A和B感染的抗病毒试剂(Carr et al.，Influenza Virus Carrying Neuraminidase with Reduced Sensitivity toOseltamiver Carboxylatehas Altered Properties In Vitro and isCompromised for Infectivity and Replicative Ability In Vivo，AntiviralRes.54：79-88，2002)。因此，开发新的和有效的抗流感A和B的抗病毒药物具有重要的临床意义(Bamford，Neuraminidase Inhibitors asPotential Anti-Influenza Drugs，J.of Enzyme Inhibition，Review 10：1-16，1995)。
流感疫苗一般在流感季节开始前使用，它们通常给予人群中被认为存在高风险的那部分人。疫苗以好几种形式存在，目的在于预防或至少缓解疾病症状。在接触病毒前使用疫苗以产生抵抗株的中和抗体，该株最有可能造成大范围传染或大流行。但是，疫苗接种费用较大，而且疫苗储备很快就会耗尽。而且，疫苗不可以包含致病病毒成分。换句话说，疫苗制备取决于估计哪种株将作为主要株出现。因此在任意一年，对抗不同流感株只有有限的预防。此外，采用注射施用疫苗的典型方法对许多人来说是不愉快的。在另一方面，预防治疗用于阻止传染或减轻接触病毒后的疾病的严重性。
奥塞米韦TM以及扎那米韦或RelenzaTM(Glaxo Wellcome，第二代抗病毒剂)是神经氨酸酶抑制剂，它们阻止成熟病毒颗粒的释放，从而预防邻近细胞的感染。神经氨酸酶抑制剂减轻流感感染的症状，缩短病程。预防必须在症状开始的48小时窗口期内进行才能有效，而且存在出现抗性株的风险。
严重急性呼吸器官综合症(SARS)是21世纪第一种主要的新传染病。第一个病例于2002年11月出现在中国广东，但在2003年3月才被认定是一种新的疾病。国际间的航空旅行加速了疾病的传播，在22个国家都报告了病例。但是，通过现代通讯技术和全球合作努力，该病在确认后4个月内就被控制。该病造成高发病率和高死亡率，症状包括高烧，头痛，肌痛和干咳。在60岁以上人群中死亡率超过60％(Peiris JSet al.，2003)。通过各种实验室技术手段，包括组织培养物中的病毒扩增和电子显微镜研究，SARS被鉴定是一种新的病毒造成的。几天后测定出的完整基因组序列证实了上述结论被，表明它是造成所述疾病的一种新的冠状病毒。因此，开发用于抗这种类型传染病的抗微生物药物是非常重要的。
其他致病的微生物包括革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌，例如链球菌(Streptococcus)，葡萄球菌(Staphylococcus)，大肠杆菌(E.coli)，假单胞菌(Pseudomonas)和嗜血杆菌(Haemophilus)以及真菌感染包括酵母，白念珠菌(C.albicans)。当这些微生物的活动性感染主要用抗生素治疗时，一些病人不能耐受抗生素。仍有其他病人希望用可以减轻或去除细菌或真菌感染的症状如咽喉痛的治疗模式来增强抗生素治疗。仍有其他病人希望通过在接触细菌或真菌生物前、期间或刚刚接触后的预防治疗，阻止或减轻这些细菌或真菌生物感染的严重性。
最近的研究兴趣集中于不同草本植物，它们含有有效抗氧化化合物，能够显著预防慢性疾病，并具有抗微生物或抗肿瘤活性。抗氧化物质例如类黄酮可在许多草本植物中发现，例如蒲公英，姜，绿茶和迷迭香。最近报道在马-达二氏犬肾(MDCK)细胞中绿茶提取物(GTE)抑制流感A和B病毒的生长，在另一项研究中，绿茶的一种组分，表没食子儿茶精-3-没食子酸(EGCG)，阻止外周血淋巴细胞中HIV-1(111B)和Bal HIV株的复制。已经证明这些物质在治疗不同疾病的领域是有效的；但在建立抗氧化物质用于预防方法方面还没有任何进展。
因此，在本领域需要提供一种预防方法，以减少微生物造成的感染疾病的发病率。
发明概述
相应的，本发明的一些实施例的目的是提供一种减轻微生物造成的感染疾病的发病率的方法。
在第一方面，本发明涉及抗微生物组合物用于预防用途的方法，以减少感染疾病的发病率。该方法包括给已经或者将要接触微生物造成的疾病的哺乳动物或鸟类施用一定量抗微生物组合物的步骤，该组合物具可有从姜获得的第一种成分；可从绿茶获得的第二种成分；以及可接受的载体。当给药时，抗微生物组合物的量可有效减少感染疾病的发生。
在本发明的第二方面，公开了一种预防性抗微生物组合物，它含有从姜获得的第一种成分；从绿茶获得的第二种成分；以及可接受的载体。当作为鼻喷雾剂或喉喷雾剂给药到已经或者将要接触微生物造成的疾病的哺乳动物或鸟类时，抗微生物组合物可有效减少感染疾病的发病率。
作为本发明特征的这些和不同的其他优点以及新颖性特征在权利要求中特别指出，称为本文的一部分。但是，为更好理解本发明、其优点及通过使用其而实现的目的，还需参考伴随描述的事实，其中描述了本发明的优选实施方案。
优选实施方案的详细详述
在第一方面，本发明涉及组合物。本发明的组合物包括可从姜，绿茶和姜黄获得的成分。
此处使用的术语“香料”包括水果香料和植物香料。
此处使用的术语“甜味剂”包括糖，例如葡萄糖、蔗糖和果糖。糖还包括高果糖淀粉糖浆固体、转化糖、包括山梨糖醇的糖醇及其混合物。人工甜味剂也包括在术语“甜味剂”的范围内。
此处使用的术语“可接受的”是指适于人/或动物使用的无过度不良副作用(诸如毒性、刺激和过敏反应)，与合理的风险/受益比相匹配的组分。
此外，此处使用的术语“安全和有效量”是指以此处所述的方式使用的一种组分的量，足以产生治疗学要求的反应而无过度的不良副作用(诸如毒性、刺激和过敏反应)，与合理的风险/受益比相匹配。
此处使用的术语“抑制”微生物，是指减少或者预防微生物的进一步生长，或者预防微生物结合正常细胞，和/或从正在治疗的人或者动物去除一些或所有的感染性颗粒。在实施例中讨论了确定微生物抑制的合适方法。
此处使用的术语“传染性”是指微生物从一个宿主转移到另一个宿主。
用于本发明的全部活性化合物，如果可得到，可以从其他来源获得。因此短语“可以从...获得”或者短语“可能是从...获得”是指包含从姜黄、姜或绿茶获得的化合物或者组合物，并因此包含相同的化合物和/或组合物的合成形式以及从其他来源获得的相同的化合物和/或组合物。
在第一个实施方案中，本发明的组合物包括安全和有效量的从姜获得的第一种成分和从绿茶获得的第二种成分，以提供此处所述的一种或多种有益效果。
本发明的组合物的第一种成分可以从姜(Zingiber officinale，通常也称为姜根)获得。源于南亚的姜是可以生出达1英尺长和几乎1英寸宽的草样叶子的2-4英尺的多年生植物。正如它在杂货店被称作姜根一样，它实际上由刮掉了树皮样外层的该植物的地下茎组成。
可用于本发明的姜的活性化合物包括但不限于1，8-桉树脑、10-脱氢姜二酮、10-姜醇、6-姜二酮、6-姜醇、6-姜烯酚、8-β-17-环氧-λ-反式-12-烯-15，16-二醇、8-姜醇、8-姜烯酚、9-氧代-橙花叔醇、乙醛、乙酸、丙氨酸、α-亚麻酸、α-亚麻酸、α-水芹烯、α-蒎烯、α-萜品烯、α-萜品醇、α-姜烯、芳-姜黄烯、精氨酸、抗坏血酸、天门冬酰胺、β-红没药醇、β-胡萝卜素、β-榄香烯、β-桉叶油醇、β-芷香酮、β-香叶烯、β-水芹烯、β-蒎烯、β-芹子烯、β-倍半水芹烯、β-谷甾醇、β-崖柏酮、乙酸冰片酯、硼、咖啡酸、钙、樟脑烯、樟脑、癸酸、辛酸、辣椒素、石竹烯、佳味酚、绿原酸、铬、柠檬醛、香茅醛、香茅醛、钴、铜、异丙基苯、姜黄素、半胱氨酸、飞燕草色素、δ-杜松烯、榄香醇、乙酸乙酯、肉豆蔻酸乙酯、金合欢醛、金合欢烯、阿魏酸、糠醛、γ-氨基丁酸、γ-松油烯、香叶醛、香叶醇、乙酸香叶酯、姜酮、谷氨酸、甘氨酸、六氢姜黄素、组氨酸、异姜酮-B、异亮氨酸、莰非醇、卵磷脂、柠檬烯、亚油酸、镁、锰、甲硫氨酸、单不饱和脂肪酸、月桂烯、杨梅酮、肉豆蔻酸、橙花醛、橙花醇、橙花叔醇、烟酸、镍、油酸、草酸、p-香豆酸、p-伞花烃、p-羟基苯甲酸、棕榈酸、泛酸、非洲豆蔻醇、广藿香醇、苯丙氨酸、五氢黄酮、核黄素、硒、莽草酸、萜品烯-4-醇、硫胺素、色氨酸、香草酸、香草醛、锌和姜油酮。而且，还可以使用两种或多种这些活性化合物的混合物。
可以采用多种形式将从姜获得的本发明组合物的第一种成分掺入本发明的组合物中，所述形式包括提取物，诸如姜粉提取物、姜液提取物、姜粉包括姜根粉和一种或多种姜的活性化合物、部分或者整个姜植株、其酊剂及其混合物。优选的，本发明组合物的第一种成分选自姜提取物和姜根粉。
每克本发明的组合物优选的包含约1mg至约150mg姜根粉。最优选的，每克组合物包含约6mg至约110mg姜根粉。这些范围在摄取制剂中利用购自Stryka Botanics的姜根粉，以及在喷雾剂中利用购自Kalsec，Inc.of Kalamazoo，Michigan的姜提取物K(AquaresinGinger)作为基线。
在这里给出的各种成分的量是参照组分中的一种形式，即姜根粉。如果某种成分以另一种形式存在，那么要使用的量将提供与此处给定量的那种成分的量相同量的一种或多种活性化合物的量。例如，如果使用姜的酊剂，所用酊剂的量将提供与上面指定的姜根粉所提供的量相等的一种或多种活性化合物的量。这适用于所有组分，此处已经给定该组分某一特定形式的量。
本发明组合物的第二种成分可以获自绿茶。从绿茶中获得的第二种成分可能具有抗氧化效果。绿茶是灌木茶(Camellia sinensis)的干的叶和叶芽。绿茶主要产自中国和日本。干茶叶主要由已知为多酚的植物化合物(约36％)组成，主要是黄酮醇(包括儿茶酚)、类黄酮和黄酮二醇。这种叶子还含有植物生物碱(约4％)，包括咖啡因、可可碱和茶碱。
绿茶的药理活性主要归功于其活性化合物。用于本发明的绿茶的活性化合物包括但不限于黄酮醇、儿茶酚、类黄酮、黄酮二醇、植物生物碱、咖啡因、可可碱、茶碱、酚酸、蛋白、碳水化合物和矿物质。
从绿茶获得的第二种成分可以以绿茶粉、绿茶提取物，诸如绿茶粉提取物、绿茶液体提取物以及绿茶的一种或多种活性化合物、部分或者整株绿茶植物体、绿茶叶片、其酊剂或其混合物的形式包括在组合物内。优选的，本发明组合物的第二种成分选自绿茶叶片、绿茶粉和绿茶提取物。更优选的，本发明组合物的第二种成分是绿茶提取物。
每克本发明的组合物优选的包含约1mg至约20mg绿茶提取物。最优选的，每克组合物包含约4mg至约15mg绿茶提取物。这些范围利用购自Stryka Botanics的绿茶作为摄取制剂的基线，以及购自中国长沙Phytoway公司的绿茶提取物作为喷雾剂的基线。
可以获自姜、绿茶和姜黄的本发明组合物的成分可以以姜黄粉、姜粉和绿茶粉的形式使用，每种成分可以分别从姜黄根茎、姜根和绿茶叶片磨碎。对合成路线已知的姜、绿茶和姜黄的特定活性化合物，可以合成该活性化合物。如果需要，植物提取物可按下述方式制备。可选的，也可从诸如Kelsec，Inc.of Kalamazoo，MI的商业来源购买姜黄粉、姜粉和绿茶粉和/或一种或多种此处所含的活性化合物。
可用于本发明组合物的植物提取物，例如姜黄提取物、姜提取物、绿茶提取物和辣根(horseradish)提取物可以利用通常的提取程序制备。可选的，提取物可以从诸如Kelsec，Inc.of Kalamazoo，MI的商业来源购买。
从上述任意植物将具有药学或生物学活性的植物提取物制备成方便给药的剂型的步骤是本领域公知的。
本发明的组合物可用于治疗病毒感染，因为正如本申请的实施例所证明，本发明的组合物具有显著的抗微生物特性。本发明的组合物也可用作治疗组合物，通过给药患有一种或多种下列症状或疾病的病人，来治疗一种或多种病毒感染症状，包括咽喉痛、充血、咽炎、粘膜炎和/或粘膜发炎。
本发明的组合物也可用于减少感染疾病的发病率。在本发明组合物的这个申请中，安全和有效量的本发明的组合物给药已经或将要接触微生物造成的疾病的哺乳动物或鸟类，相对已经或将要接触微生物造成的疾病但没有给药本发明的组合物的哺乳动物或鸟类，可以减少感染所述疾病的发生。
优选的，本发明的组合物可制成任何可接受的剂型，包括但不限于胶囊、片剂、锭剂、圆锭剂(troches)、硬糖果、粉剂、喷雾剂、凝胶剂、酏剂、糖浆以及悬浮液或者溶液。本发明的组合物也可以以营养增补剂的形式给药，在这种情况下本发明的组合物可以是营养增补剂或者可以构成包含其他成分的营养增补剂的一部分。
本发明的组合物也可与可接受的载体进行配制。可接受的载体包括但不限于：(a)碳水化合物，包括甜味剂，更优选的是果糖、蔗糖、糖、葡萄糖、淀粉、乳糖、麦芽糖、麦芽糖糊精、淀粉糖浆固体、蜂蜜固体、市售片剂营养增补剂包括EmdexTM，Mor-RexTM，Royal-TTM，Di-PacTM，Sugar-TabTM，Sweet-RexTM，和New-TabTM；(b)糖醇，包括甘露糖醇、山梨糖醇与木糖醇；和(c)各种相对不可溶的赋形剂，包括磷酸二钙、硫酸钙、碳酸钙、微晶纤维素及其他片剂成分。
本发明的锭剂、片剂和圆锭剂可以在形状、大小与制造工艺方面有所不同。至于用于口服使用的片剂，可接受的载体可以另外包括乳糖和玉米淀粉。包括例如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠与滑石的润滑剂也可以加入到片剂中。片剂也可以包含诸如柠檬酸钠、碳酸钙与磷酸钙的赋形剂。也可以使用分解剂诸如淀粉、藻酸与复合硅酸盐。片剂还可以包括粘合剂诸如聚乙烯吡咯烷酮、明胶、PEG-8000与阿拉伯树胶。
至于用于口服使用的锭剂，常用的可接受载体可以另外的包括诸如PEG-8000的粘合剂。优选的锭剂重量为约0.1至约15克，以在口服时提供合适的溶解率。更优选的，锭剂重量为约1至约6克。
锭剂的制备是本领域公知的，本领域技术人员很容易利用本发明组合物制备锭剂。组合物优选的贮存于气密性容器和阴凉避光处。
片剂和圆锭剂可利用本领域公知的步骤制备，在可选成分上可以有小的改变。这种改变在本领域普通技术人员熟知的技术范围内。
可选的，本发明组合物可以与诸如水或者其他液体的溶剂或者分散剂以及任选在药用载体中配制成诸如糖浆、漱口药或者喷雾剂的液态形式，用于在持续时间段内将组合物反复施用于口腔以及口咽粘膜。优选的，治疗时间为约5至约60分钟，并且更优选的为约20至约30分钟，以延长组合物与口及咽喉组织的接触时间。可选的，这种制剂可以是适于在使用前用水或者其他物质稀释的浓缩形式。
组合物也可以配制成可咀嚼的形式，诸如软糖果、橡皮糖、充填液体的糖以及口香糖胶基或者为诸如牙膏与漱口药的牙用产品的形式。在使用中，可咀嚼的组合物优选在口腔中保持优选约5至60分钟的持续时间，更优选的约20至30分钟。牙用产品可以采用这种产品的常规方式使用。
本发明的组合物可以配制成含有或不含稀释剂的胶囊形式。对于胶囊而言，有效的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当使用悬浮液时，乳化剂和/或悬浮剂可以用于所述悬浮液中。此外，包括上述一种或多种锭剂成分的固体组合物也可用于软和硬明胶胶囊内。
本发明的组合物也可以配制成鼻气雾剂或者吸入剂组合物。这种组合物可以利用公知的技术制备。对于这些类型的制剂，合适的载体可以包括以下成分：带有一种或多种防腐剂的盐、提高生物利用率的吸收促进剂、碳氟化合物和/或传统的增溶剂或者分散剂。
可选择的包括在本发明组合物中的其他材料包括白藜芦醇(三羟基1，2-二苯乙烯)、肌醇、其它的B族-复合维生素以及另外的抗炎物质。此外，本发明组合物还可以包括一些成分，诸如甜味剂、香料、着色剂、染料、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、融化剂、赋形剂、缓和剂，和一些溶剂或稀释剂，诸如水、乙醇、丙二醇、甘油，以及它们的不同组合。
在任选的实施例中，本发明组合物包括以安全和有效量存在的可从姜黄获得的一种或多种成分，以提供一种或多种此处所述的有益效果。姜黄(Curcuma longa)或者北印度的Haldi被广泛用作药物以及印度烹调用的普通成分。姜黄的根茎作为一种细粉用于药物和食物。
姜黄根茎的黄色色素由三种称为类姜黄素的化合物组成。这三种类姜黄素的化合物是姜黄素(二阿魏酰基甲烷)、脱甲氧姜黄素(羟基肉桂酰基阿魏酰基甲烷)和双-脱甲氧姜黄素(二羟基二肉桂酰基甲烷)(参见Drug Analysis，Chromatography and Microscopy，p.169，AnnArbor Science Inc.，1973)。姜黄精油主要由以下化合物组成：右旋樟脑(约1％)、环异戊二烯月桂烯(约85％)和对-甲苯基甲基原醇(约5％)(参见E.Gunther，The Essential Oil，pp.123-4，Van Nostrand Co.，1955)。
从姜黄中获得的本发明组合物的成分优选包括类姜黄素，诸如姜黄素(二阿魏酰基甲烷)、脱甲氧姜黄素(羟基肉桂酰基阿魏酰基甲烷)和双-脱甲氧姜黄素(二羟基二肉桂酰基甲烷)，和两种或多种这些类姜黄素的混合物。
从姜黄分离类姜黄素的方法是已知的(参见Janaki and Bose，AnImproved Method for the Isolation of Curcumin From Turmeric，J.IndianChem.Soc.44：985，1967)。可选的，用于本发明的类姜黄素可以通过合成方法制备。
可以从姜黄中获得的成分可以许多不同形式掺入到本发明的组合物中。那些不同的形式优选的包括姜黄的提取物，诸如姜黄粉提取物、姜黄液体提出物、一种或多种类姜黄素化合物以及姜黄粉、部分或者整株姜黄植物体、其酊剂及其混合物。更优选的，从姜黄获得的可选成分是姜黄提取物。
当使用可从姜黄获得的成分时，每克本发明的组合物优选包含约1mg至约20mg姜黄粉提取物。最优选的，每克组合物包含约6mg至约1 5mg姜黄粉提取物。这些范围基于使用95％的姜黄提取物，例如Pharmline，Inc.的摄取制剂形式以及姜黄根提取物(姜黄油树脂)例如Kalsec，Inc.，Kalamazoo，Michigan的喷雾剂形式。
此外，本发明组合物还可以包括以安全和有效量存在的可从辣根的根获得的一种或多种成分，以提供一种或多种此处所述的有益效果。
可从辣根的根获得的可选成分包括辣根(Cochlearia Armoracia)的提取物。辣根包括挥发油，与芥末中发现的相似。这些包括glucosinolates(芥末油葡糖苷类)、水田芥甙(gluconasturtiin)和芥子甙(sinigrin)，在胃中分解时得到烯丙基异硫氰酸酯。
本发明组合物可选的包括乙醇、丙二醇和丙三醇及其不同组合，作为添加的活性成分可占到总重的10％。最优选的，添加直到总重10％的乙醇作为活性成分。更优选的，添加2.5-7％的乙醇。
用于本发明组合物的可选的甜味剂包括但不限于糖精、阿斯巴甜、甜蜜素、安赛蜜、新橙皮苷二氢查耳酮、其他超级甜味剂及其混合物，所述甜味剂可以足够低的量加入到载体，以免与组合物的主要成分发生化学上的相互作用。
用于本发明组合物的可选的香料包括但不限于薄荷、薄荷醇、桉叶油素、冬青、甘草、丁香、肉桂、留兰香(spearmint)、樱桃、柠檬、橙、酸橙、薄荷醇及其各种组合。
优选的，那些来源于姜、绿茶和可选的来自姜黄的上述主要成分构成组合物总重的约0.5％至约90％。更优选的，主要成分构成组合物总重的约10％至约70％。最优选的，主要成分构成组合物总重的约20％至约40％。
所述组合物的非载体成分可以依据用于所述组合物载体的量在本发明的组合物中相应的增减，而对所述组合物的所需应用效果无显著影响，所述非载体成分包括上述可以从姜黄、姜和绿茶获得的成分。
减少或预防传染涉及预防或减少微生物从一个患者(已被感染)传播到另一个患者(未被感染)。一些患者被认为是感染携带者。携带者是一些能够传播微生物但不遭受急性感染的个体。这些携带者可以说是长期(或慢性)被微生物感染。除了长期被感染的传播者，其他传染性个体可能是那些被活动性感染，尤其是急性感染早期或晚期的那些个体。本发明的一个方面涉及将本发明的组合物给药已被微生物感染的哺乳动物或鸟类，以阻止疾病传播到其他哺乳动物或鸟类和/或减轻已感染哺乳动物或鸟类中的疾病症状。
预防治疗是针对即将接触微生物或者刚刚接触微生物的患者。这种预防治疗单用是有效的，也可以有效增强疫苗效果。预防治疗也可用于抵抗还没有疫苗的微生物。在预防治疗的情况下，本发明的组合物给药即将接触微生物或者刚刚接触微生物的患者，目的在于减少该患者被微生物活动性感染的发病率。
在另一方面，本发明涉及通过给感染病毒的患者给药本发明组合物以减轻、治疗或者预防病毒感染的至少一种症状或者副作用的方法，所述组合物包括可从姜和绿茶中获得的成分。
在该方法中，患者可以是人、体外细胞系统或者动物。优选的，患者为哺乳动物，更优选为人。在该方法中，可通过给药本发明组合物可以被抑制的病毒包括，连同其他病毒，鼻病毒、流感病毒、西尼罗河病毒、单纯疱疹病毒、HIV-1、HIV-2、腺病毒、冠状病毒、流感病毒、风疹病毒、黄热病病毒和呼吸道合胞病毒(RSV)。在一个优选实施例中，通过给药本发明组合物可以被抑制的病毒至少包括人鼻病毒16、疱疹病毒I(HSV-I)、流感A/Moscow/10/99、禽流感A(H5N1)和B/Guangdong/120/00。
可选的，患者也可以是鸟类(禽)成员，包括常见的商品化家禽：火鸡、鸭、鹅和鸡，不常见一点的是鸵鸟以及其他通常作为家庭宠物的鸟类，例如金丝雀和鹦鹉。可通过直接将组合物喷入鸟的鼻道给药该组合物或者通过喷雾让鸟穿行来给药。因此，该组合物可预防性的施用，以杀病毒或抑制病毒的方式起作用。可选的，组合物可用于减轻病毒的传染性。
可通过本发明这种方法治疗、减轻或者至少部分预防的由病毒引起的症状可以包括一种或多种头痛、关节痛、发烧、咳嗽、打喷嚏、肌肉疼痛、流鼻涕、口干、眩晕及其他与病毒感染有关的症状。在鸟类中，这些症状包括无力，产蛋量下降，软壳蛋，脑、眼脸等的肿胀，鼻分泌物，咳嗽或痢疾。
在该方法中，通过给药本发明组合物可被抑制的微生物包括革兰氏阳性细菌，例如链球菌(Streptococcus)、葡萄球菌(Staphylococcus)，革兰氏阴性细菌，例如大肠杆菌(E.coli)、假单胞菌(Pseudomonas)、嗜血杆菌(Haemophilus)，和真菌例如组织胞浆菌(Histoplasma)和芽生菌(Blastomycosis)以及酵母例如白念珠菌(C.albicans)和隐球菌(Crytococcus)。
所述组合物的有效量会依据下列因素而改变，诸如接受治疗的病人、给药的特定方式、所用特定活性成分的活性、年龄、体重、一般的健康情况、病人的性别与饮食、给药时间、排泄率、所用成分的特定组合、组合物主要成分的总量以及疾病或者症状的严重性。考虑这些因素属于本领域普通技术人员的技能。
根据需要，组合物可以每天施用约1至约15次，如果需要，更优选的为每天约2至12次，或者根据需要最优选的为每天约6至10次。本发明的组合物可以采用上述任意可接受的剂型给药，包括但不限于：片剂、胶囊、锭剂、圆锭剂、硬糖、粉剂、口腔喷雾剂、鼻喷雾剂、凝胶剂、酏剂、糖浆、可咀嚼的组合物、牙用产品、悬浮液和溶液。
组合物的每一剂量包含安全和有效量的本发明组合物。适于每一治疗给药的有效量包含总共约0.1克至约1克可以从姜与绿茶获得的成分。更优选的，适于每一治疗给药的有效量包含总共约0.2克至约0.5克可以从姜与绿茶获得的成分。依照本发明的方法所施用的这种组合物的各种成分的量与上述本发明组合物中的量相同。
优选的，在所述组合物的各口服给药期间，该组合物在口中保持至少约5至约60分钟，使该组合物的主要成分在其完全溶解之前与口腔组织或者咽喉接触。更优选的，该组合物在口中保持至少约15至约30分钟。
当组合物以喷雾剂形式给药时，可以减少各活性成分的量，因为例如与锭剂或胶囊相比，喷雾剂组合物可以更直接的将活性成分递送到需要它们的位置。
下列优选范围定义根据本发明的方法适于以喷雾剂形式给药的本发明的组合物。
根据本发明的方法以喷雾剂给药的每克组合物优选包含大约1mg至大约10mg的aquaresin姜。最优选，每克组合物包含大约3mg至大约7mg的aquaresin姜。
根据本发明的方法以喷雾剂给药的每克组合物优选包含大约1mg至大约20mg的绿茶叶片提取物。最优选的，每克组合物包含大约4mg至大约15mg的绿茶叶片提取物。
根据本发明的方法以喷雾剂给药的每克任选实施方案的组合物优选包含大约1mg至大约12mg的可溶性姜黄油树脂。最优选的，每克组合物包含大约4mg至大约9mg的可溶性姜黄油树脂。
本发明将通过如下实施例进行进一步说明，所述实施例不应看作以任何方式对本发明进行限制。本发明的范围将通过所附权利要求进行限定。
实施例1本发明的组合物
利用上述方法配置锭剂形式的本发明的组合物。所述锭剂的成分列举如下：
    糖     1g
    滑榆树皮     118mg
    姜黄提取物(5％姜黄素)     18mg
    姜根     140mg
    辣根的根     70mg
    绿茶叶片提取物(30％儿茶酚和多酚)     14mg
实施例2咽喉痛的治疗
患有咽喉痛的7个病人，通过将锭剂保持在其口腔内大约15-30分钟直到所述锭剂完全溶解，每人每两个小时摄取根据实施例1配制的一片锭剂。在任意给定天，没有病人服用超过10个锭剂的剂量。
接受治疗的病人报告在摄入2到20片锭剂后他们的咽喉痛症状完全消除。同时发现每一锭剂可以使咽喉痛减轻达6小时。
实施例3组合物杀病毒活性的体外试验
在这个实施例中应用的杀病毒活性的体外试验方案以人鼻病毒16(此后称为“HRV-16”)作为靶病毒，以及由Jacobs等人在Characteristicsof Human diploid MRC-5，Nature(London)，227：168-170(1970)中描述的与人组织相关的MRC-5细胞系作为HRV-16病毒的宿主细胞。试验物质与病毒温育后，通过显微镜观察肉眼评价由病毒复制诱导的细胞致病作用(CPE)，在用于鼻病毒生长的MRC-5细胞系上测定残余的病毒感染活性的滴度。更具体的说，通过观察MRC-5培养物中气球样/圆细胞而进行CPE评分。
为确定这种杀病毒的活性，最初以1/20的稀释度应用实施例1的组合物(此后称为“物质1”)，然后用生理盐水通过系列稀释法进一步稀释。这种稀释的组合物与HRV-16一同温育预定的时间段，然后用细胞感染培养基将反应调节至中性pH值而终止反应。然后将得到的溶液以1/10的稀释度在测试平板上进行细胞感染来测定对MRC-5细胞上的滴度。每一平板包括仅仅包含感染HRV-16的MRC-5细胞的病毒对照，以及仅仅含有未感染的MRC-5细胞的细胞对照。
所述平板在感染之后再温育4天。残余病毒的感染活性利用上述讨论的测定法进行测量。根据表1-4显示的结果，平板上所有的对照都发挥作用。
从所述分析可以得出结论，物质1在1/20的稀释度1分钟的温育时间可有效产生HRV-16病毒log值1.50的降低(-log10 TCID50)。物质1的1/40稀释1分钟温育同样导致log值减少1.00(-log10 TCID50)。2分钟和5分钟的温育期后实现HRV-16滴度的log值减少1/2。因此这些结果倾向显示物质1和HRV-16的1分钟接触时间将导致最有效的病毒滴度降低。
表1显示了物质1的不同稀释度，在终止时间点，MRC-5细胞上的传染性鼻病毒16的残余病毒滴度和log值的降低。
表1
稀释度 等渗溶液中物质1的pH值 终止溶液的pH值 病毒对照(TCID50)     1分钟温育
残余病毒滴度(TCID50)   Log减少量(TCID50)
    1/20     5.03     7.73     3.80     2.30     1.50
    1/40     5.13     7.77     3.80     3.30     0.50
    1/80     4.98     7.83     3.80     3.80     0.00
    1/160     4.98     7.73     3.80     3.80     0.00
表2-4显示，在物质1不同稀释度在三个不同的终止时间点，MRC-5细胞上传染性HRV-16的残余病毒滴度以及log减少值的第二个实验的结果。
表2
物质1的稀释度 HRV-16对照滴度(TCID50)     1分钟温育
  残余HRV-16滴度(TCID50)   HRV-16的Log减少量(TCID50)
    1/20     3.30     1.80     1.50
    1/40     3.30     2.30     1.00
    1/80     3.30     2.80     0.50
    1/160     3.30     2.80     0.50
    1/320     3.30     2.80     0.50
表3
物质1的稀释度 HRV-16对照滴度(TCID50)     2分钟温育
  残余HRV-16滴度(TCID50)   HRV-16的Log减少量(TCID50)
    1/20     3.30     2.80     0.50
    1/40     3.30     2.80     0.50
    1/80     3.30     2.80     0.50
    1/160     3.30     2.80     0.50
    1/320     3.30     2.80     0.50
表4
物质1的稀释度 HRV-16对照滴度(TCID50)     5分钟温育
 残余HRV-16滴度(TCID50)   HRV-16的Log减少量(TCID50)
    1/20     3.30     2.80     0.50
    1/40     3.30     2.80     0.50
    1/80     3.30     3.30     0.00
    1/160     3.30     2.80     0.50
    1/320     3.30     2.80     0.50
在表1-4中，TCID50＝-log10 TCID50。
利用Vero细胞作为宿主细胞，使用包括Herpes 1病毒(HSV-1)的其他病毒，利用MDCK细胞作为宿主细胞，使用流感A/Moscow/10/99和B/Guangdong/120/00进行物质1的类似的杀病毒检测。这些杀病毒检测的结果概述在下列表5-13中。
表5-7显示物质1在不同的稀释度，三个不同的终止时间点，Vero细胞上传染性HSV-1残余病毒滴度以及的log减少值。
表5
物质1的稀释度     HSV-1对照滴度(-log10TCID50)     1分钟温育
  残余HSV-1滴度(-log10 TCID50)   HSV-1的Log减少量(-log10 TCID50)
    1/40     3.80     0.00     3.80
    1/80     3.80     0.00     3.80
    1/160     3.80     2.80     1.00
    1/320     3.80     2.80     1.00
    1/640     3.80     2.80     1.00
表6
物质1的稀释度     HSV-1对照滴度(-log10TCID50)     2分钟温育
  残余HSV-1滴度(-log10 TCID50)  HSV-1的Log减少量(-log10 TCID50)
    1/40     3.80     0.00     3.80
    1/80     3.80     0.00     3.80
    1/160     3.80     1.80     2.00
    1/320     3.80     2.80     1.00
    1/640     3.80     2.80     1.00
表7
物质1的稀释度 HSV-1对照滴度(-log10 TCID50)     5分钟温育
  残余HSV-1滴度(-log10 TCID50) HSV-1的Log减少量(-log10 TCID50)
    1/40     3.80     0.00     3.80
    1/80     3.80     0.00     3.80
    1/160     3.80     1.80     1.00
    1/320     3.80     2.80     1.00
    1/640     3.80     2.80     1.00
表8-10显示物质1在不同的稀释度，三个不同的终止时间点，流感A/Moscow/10/99的残余病毒滴度以及log减少值。
表8
物质1的稀释度 A/Moscow病毒滴度(-log10 TCID50)     1分钟温育
残余A/Moscow滴度(-log10 TCID50) A/Moscow的Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     2.80     0.00     2.80
  1/20     2.80     0.00     2.80
  1/40     2.80     1.80     1.00
  1/80     2.80     1.80     1.00
  1/160     2.80     1.80     1.00
  1/320     2.80     1.80     1.00
  1/640     2.80     1.80     1.00
  柠檬酸盐缓冲液     2.80     1.80     1.00
表9
物质1的稀释度 A/Moscow病毒滴度(-log10 TCID50)     2分钟温育
残余A/Moscow滴度(-log10 TCID50) A/Moscow的Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     2.80     0.00     2.80
  1/20     2.80     0.00     2.80
  1/40     2.80     1.80     1.00
  1/80     2.80     1.80     1.00
  1/160     2.80     1.80     1.00
  1/320     2.80     1.80     1.00
  1/640     2.80     1.80     1.00
  柠檬酸盐缓冲液     2.80     1.80     1.00
表10
物质1的稀释度 A/Moscow病毒滴度(-log10 TCID50)     5分钟温育
残余A/Moscow滴度(-log10 TCID50) A/Moscow的Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     2.80     0.00     2.80
  1/20     2.80     0.00     2.80
  1/40     2.80     1.80     1.00
  1/80     2.80     1.80     1.00
  1/160     2.80     1.80     1.00
  1/320     2.80     1.80     1.00
  1/640     2.80     1.80     1.00
  柠檬酸盐缓冲液     2.80     0.00     2.80
表11-13显示物质1在不同的稀释度，三个不同的终止时间点，流感B/Guangdong/120/00的残余病毒滴度以及log减少值。
表11
物质1的稀释度 B/Guangdong病毒滴度(-log10 TCID50)     1分钟温育
残余B/Guangdong滴度(-log10 TCID50) B/Guangdong的Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     1.80     0.00     1.80
  1/20     1.80     0.00     1.80
  1/40     1.80     1.80     0.00
  1/80     1.80     1.80     0.00
  1/160     2.30     1.80     0.50
  1/320     2.30     1.80     0.50
  1/640     1.80     2.30     -0.50
  柠檬酸盐缓冲液     1.80     0.00     1.80
表12
物质1的稀释度 B/Guangdong病毒滴度(-log10 TCID50)     2分钟温育
残余B/Guangdong滴度(-log10 TCID50) B/Guangdong的Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     1.80     0.00     1.80
  1/20     1.80     0.00     1.80
  1/40     1.80     1.80     0.00
  1/80     1.80     1.80     0.00
  1/160     2.30     1.80     0.50
  1/320     2.30     1.80     0.50
  1/640     1.80     2.80     -1.00
  柠檬酸盐缓冲液     1.80     0.00     1.80
表13
物质1的稀释度 B/Guangdong病毒滴度(-log10 TCID50)     5分钟温育
残余B/Guangdong滴度(-log10 TCID50) B/Guangdong的Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     1.80     0.00     1.80
  1/20     1.80     0.00     1.80
  1/40     1.80     1.80     0.00
  1/80     1.80     1.80     0.00
  1/160     2.30     1.80     0.50
  1/320     2.30     1.80     0.50
  1/640     1.80     2.80     -1.00
  柠檬酸盐缓冲液     1.80     0.00     1.80
从上述结果可以看出，物质1可有效抑制或者消灭流感病毒和人鼻病毒。因此，物质1能有效治疗流感和普通感冒。
实施例4组合物抑制病毒活性的体外研究
本实施例实行的关于杀病毒活性的体外试验方案利用人鼻病毒16(HRV-16)作为靶病毒，鼻病毒敏感的人组织相关的Hela细胞作为HRV-16的宿主细胞，由Conant等人在(Basis for a Numbering system.I.HeIa cells for Propagation and Serologic Procedure，J.Immunol.，100：107-113，1968)中描述。
物质1以1/20、1/40、1/80、1/160和1/320的稀释度溶于感染培养基。稀释物在37℃(5％CO2)培养在MRC-5细胞的平板上30分钟。温育后平板的孔内带有MRC-5细胞的每个物质1的稀释物以已知的滴度2.30(-log10 TCID50)接触HRV-16。每一平板容纳病毒对照(感染HRV-16病毒的Hela细胞，并且无物质1)，细胞对照(仅Hela细胞)以及不同稀释度的试验化合物对照(仅含试验物质的Hela细胞)。平板上的全部其他标本包含感染HRV-16病毒的Hela细胞以及不同稀释度的物质1。平板在感染后继续培养4天。
在物质1与病毒温育后，通过下列方法检测病毒诱导的细胞致病作用(CPE)，滴定鼻病毒生长的Hela细胞上残余病毒的感染活性。
与物质1温育后残余活Hela细胞用结晶紫溶液染色。洗涤除去多余的结晶紫，利用甲醇与乙酸的混合物溶解被结晶紫染色的细胞。然后在酶联免疫吸附读板仪中测定溶液在540nm处的吸光度。病毒诱导的CPE水平与吸光度成反比。
从结晶紫测定法获得的结果可以通过公式y＝mx+c确定物质1的毒性浓度以及有效浓度，公式中x相当于物质1的稀释度，而y相当于物质1对这种细胞的毒性百分比。由此公式，TC50(物质1对所述细胞显示50％毒性的浓度)是物质1的1/571稀释度。
这个结果与物质1在不同稀释度时细胞存活百分比紧密相关，这也是利用结晶紫溶液进行测量，结果如下表14所示。
表14
    无病毒的物质1的稀释度     ％存活细胞
    1/320     89.7
    1/160     94.6
    1/80     97.6
    1/40     109.3
    1/20     168.2
利用相同的等式，其中x仍然相当于物质1的稀释度，而y相当于病毒存在条件下物质1的效应百分比，EC50(试验物质在病毒存在条件下显示50％效应的浓度)经测定是物质1的1/91的稀释度。这个结果与利用结晶紫方法测定的物质1在不同稀释度时存活细胞的百分比密切相关，结果如下表15所示。
表15
    物质1的稀释度和病毒     ％活细胞
    1/320+HRV-16     79.3
    1/160+HRV-16     62.3
    1/80+HRV-16     39.0
    1/40+HRV-16     15.9
    1/20+HRV-16     -220.0
在表14和15中，％存活细胞＝(仅化合物/仅细胞)×100；％活细胞＝(仅细胞-化合物+病毒)/(仅细胞-仅病毒)×100。
“仅化合物”表示仅包含Hela细胞和预定稀释度物质1的孔的测量结果。
“仅细胞”表示仅包含未感染的Hela细胞的孔的测量结果。
“化合物+病毒”表示包含感染HRV-16病毒的Hela细胞和预定稀释度的物质1的孔的测量结果。
“仅病毒”表示仅包含感染HRV-16病毒的Hela细胞的孔的测量结果。
实施例5本发明的抗微生物锭剂
根据下列配方制备抗微生物锭剂。
1)葡萄糖      865.0mg
2)滑榆树皮    150.0mg
3)硬脂酸      75.0mg
4)姜根       105.0mg(儿童)或者140.0mg(成人)
5)辣根的根                70.0mg
6)天然蜂蜜香料            40.0mg
7)姜黄提取物(5％姜黄素)   15.0mg
8)绿茶叶片提取物(36％C&P) 14.0mg
9)二氧化硅                14.0mg
10)硬脂酸镁               12.0mg
11)三氯半乳蔗糖/splenda   4.0mg
注意：此处C&P指“儿茶酚和石炭酸”
实施例6本发明的抗微生物喷雾剂
根据下列配方制备抗微生物喷雾剂。
1)滑榆树皮提取物                    18.52mg
2)可溶解的姜黄油树脂(约8.5％姜黄素) 8.82mg
3)Aquaresin姜                     7.0mg
4)辣根香料WONF                      0.62mg
5)绿茶叶片PE50％色度                14.0mg
6)天然蜂蜜香料                      40.0mg
7)乙醇(95％)@5％                    68.2mg
8)甘油                              603.42mg
9)蒸馏水                            603.42mg
总重：                              1364.0mg
实施例7抗微生物锭剂的体外试验
检测实施例5的抗微生物锭剂对流感病毒株A/NewCaledonia/20/99(H1/N1)，A/Panama/2007/99(H3N2)和B/Guangdong/120/00感染的MDCK细胞的杀病毒和抑制病毒生长的活性。
为测定杀病毒活性，在1/10、1/20、1/40、1/80、1/160、1/320和1/640稀释度时测定锭剂。锭剂用等渗生理盐水(Normasol)稀释。每一稀释度在锭剂与每种病毒接触1、2和5分钟的终点进行检测。用1.8ml 0％FBS细胞培养基终止反应。
这个实施例的log减小值记录为-log10 TCID50并且利用Karber方程式进行计算。
表16-不同稀释度在1分钟终止时间点后传染性A/NewCaledonia/20/99(H1N1)病毒的残余病毒滴度和log减小值
稀释度 A/New Caledonia病毒滴度(-log10 TCID50)     1分钟温育
    残余流感病毒滴度(-log10 TCID50)     病毒Log减少量(-log10 TCID50)
    1/10     2.80     0.00     2.80
    1/20     2.80     2.30     0.50
    1/40     2.80     1.80     1.00
    1/80     2.80     2.30     0.50
    1/160     2.80     1.80     1.00
    1/320     2.80     1.80     1.00
    1/640     2.80     1.80     1.00
    柠檬酸盐缓冲液 2.80 1.80 1.00
表17-不同稀释度在2分钟终止时间点后传染性A/NewCaledonia/20/99(H1N1)病毒的残余病毒滴度和log减小值
稀释度 A/New Caledonia病毒滴度(-log10 TCID50)     2分钟温育
    残余流感病毒滴度(-log10 TCID50)     病毒Log减少量(-log10 TCID50)
    1/10     2.80     0.00     2.80
    1/20     2.80     1.80     1.00
    1/40     2.80     1.80     1.00
    1/80     2.80     1.80     1.00
    1/160     2.80     1.80     1.00
    1/320     2.80     1.80     1.00
    1/640     2.80     1.80     1.00
    柠檬酸盐缓冲液 2.80 1.80 1.00
表18-不同稀释度在5分钟终止时间点后传染性A/NewCaledonia/20/99(H1N1)病毒的残余病毒滴度和log减小值
稀释度 A/New Caledonia病毒滴度(-log10 TCID50)     5分钟温育
    残余流感病毒滴度(-log10 TCID50)     病毒Log减少量(-log10 TCID50)
    1/10     2.80     0.00     2.80
    1/20     2.80     1.80     1.00
    1/40     2.80     1.80     1.00
    1/80     2.80     1.80     1.00
    1/160     2.80     1.80     1.00
    1/320     2.80     1.80     1.00
    1/640     2.80     1.80     1.00
    柠檬酸盐缓冲液 2.80 1.80 1.00
表19-不同稀释度在1分钟终止时间点后传染性A/Panama/2007/99(H3N2)病毒的残余病毒滴度和log减小值
稀释度 A/Panama病毒滴度(-log10 TCID50)     1分钟温育
    残余流感病毒滴度(-log10 TCID50)     病毒Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     4.80     3.80     1.00
  1/20     4.80     3.80     1.00
  1/40     4.80     4.80     0.00
  1/80     4.80     4.30     0.50
  1/160     4.80     4.80     0.00
  1/320     4.80     4.80     0.00
  1/640     4.80     4.80     0.00
  柠檬酸盐缓冲液     4.80     0.00     4.80
表20-不同稀释度在2分钟终止时间点后传染性A/Panama/2007/99(H3N2)病毒的残余病毒滴度和log减小值
稀释度 A/Panama病毒滴度(-log10 TCID50)     2分钟温育
   残余流感病毒滴度(-log10 TCID50)     病毒Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     4.80     3.80     1.00
  1/20     4.80     4.30     0.50
  1/40     4.80     4.80     0.00
  1/80     4.80     4.30     0.50
  1/160     4.80     4.80     0.00
  1/320     4.80     4.80     0.00
  1/640     4.80     4.80     0.00
  柠檬酸盐缓冲液     4.80     2.30     2.50
表21-不同稀释度在5分钟终止时间点后传染性A/Panama/2007/99(H3N2)病毒的残余病毒滴度和log减小值
稀释度 A/Panama病毒滴度(-log10 TCID50)     5分钟温育
    残余流感病毒滴度(-log10 TCID50)     病毒Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     4.80     3.80     1.00
  1/20     4.80     4.30     0.50
  1/40     4.80     4.80     0.00
  1/80     4.80     4.80     0.00
  1/160     4.80     4.80     0.00
  1/320     4.80     4.80     0.00
  1/640     4.80     4.80     0.00
  柠檬酸盐缓冲液     4.80     2.80     2.00
表22-不同稀释度在1分钟终止时间点后传染性B/Guangdong/120/00病毒的残余病毒滴度和log减小值
稀释度 B/Guangdong病毒滴度(-log10 TCID50)     1分钟温育
  残余流感病毒滴度(-log10 TCID50)   病毒Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     3.30     1.30     2.00
  1/20     3.30     1.80     1.50
  1/40     3.30     2.80     0.50
  1/80     3.30     2.80     0.50
  1/160     3.30     2.80     0.50
  1/320     3.30     2.80     0.50
  1/640     3.30     2.80     0.50
  柠檬酸盐缓冲液     3.30     0.00     3.30
表23-不同稀释度在2分钟终止时间点后传染性B/Guangdong/120/00病毒的残余病毒滴度和log减小值
稀释度 B/Guangdong病毒滴度(-log10 TCID50)     2分钟温育
    残余流感病毒滴度(-log10 TCID50)     病毒Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     3.30     1.80     1.50
  1/20     3.30     1.80     1.50
  1/40     3.30     2.80     0.50
  1/80     3.30     2.80     0.50
  1/160     3.30     2.80     0.50
  1/320     3.30     2.80     0.50
  1/640     3.30     2.80     0.50
  柠檬酸盐缓冲液     3.30     0.00     3.30
表24-不同稀释度在5分钟终止时间点后传染性B/Guangdong/120/00病毒的残余病毒滴度和log减小值
稀释度 B/Guangdong病毒滴度(-log10 TCID50)     5分钟温育
    残余流感病毒滴度(-log10 TCID50)     病毒Log减少量(-log10 TCID50)
  1/10     3.30     1.80     1.50
  1/20     3.30     1.80     1.50
  1/40     3.30     2.80     0.50
  1/80     3.30     2.80     0.50
  1/160     3.30     2.80     0.50
  1/320     3.30     3.30     0.00
  1/640     3.30     1.80     1.50
  柠檬酸盐缓冲液     3.30     0.00     3.30
在杀病毒分析中，已知滴度的病毒作为病毒对照；该对照与试验化合物QR-345经历相同步骤。所有平板上的流感病毒与病毒对照的滴度均一致的大于2.5(-log10 TCID50)。
实施例8抗微生物喷雾剂的体内试验
雪貂是一种用于流感传染研究的已建成的动物模型(Boyd andBeeson，1975；Chen et al.，Induction and Relief of nasal Congestion inFerrets Infected with Influenza，Int.J.Exp.Pathol.76：55-64，1995；Scheiblauer et al.，Pathogenicity of Influenza A/Seal/Mass/ 1/80 VirusMutants for Mammalian Species，Arch.Virol.140：341-8，1995；Sweet andSmith，Pathogenicity of Influenza Virus，Microbiol.Rev.44：303-30，1980；Toms et al.，The relation of Pyrexia and Nasal Inflammatory Response toVirus Levels in Nasal Washings of Ferrets Infected with Influenza Virusesof differing Virulence，Br.J.Exp.Pathol.，58：444-58，1997；Webster et al.，Protection of Ferrets Against Influenza Challenge with a DNA Vaccine tohaemagglutinin，Vaccine 12：1495-8，1994)。雪貂模型已被用于测定流感疫苗的效率(Fenton et al.，1981；Webster et a.，1994)。利用雪貂动物模型的传染性研究不仅证明流感病毒从供体到受体的传播，而且还证明了突变对病毒毒力的影响(Herlocher et al.，Ferrets as a TransmissionModel for Influenza：Sequence changes on the HAl of type A(H3N2)Virus，J.of Infect.Diseases 184：542-46，2001；Herlocher et al.，Influenzavirus carrying an R292K Mutation in the Neuraminidase Gene is notTransmitted in Ferrets，Antimicrobial Res.54：99-1 11，2002)。
在感染流感病毒株A/Sydney/5/97(H3N2)5分钟前，每组6只共四组幼貂(n+++++a
Figure A20058004766100401
ve ferret)接受鼻内剂量的实验或对照组合物。阴性对照组接受磷酸盐缓冲液(PBS)安慰剂。阳性对照组用TamifluTM(奥司米韦磷酸盐，来自Nutley，NJ 的Roche Laboratories)处理。一个实验组用实施例6的鼻喷雾剂处理，另一个实验组用不包含绿茶提取物的相似的鼻喷雾剂处理。在初次使用后，每天两次用指定给它们的组合物给药雪貂。
PBS处理对照组的雪貂显示感染流感A的雪貂的所有典型症状，包括体重减轻、发烧、炎性细胞数增加，并且在感染后的第一天排泄病毒。TamifluTM处理的对照组雪貂没有经历体重减轻，没有病毒排出，没有经历炎症细胞数上升的减少，而且没有发热。
实施例6的检测制剂和相似的不含绿茶提取物的鼻喷雾剂均提供一种低水平的一过性炎症细胞数的减少，抑制发热疾病的进展，延缓病毒的排泄，这种方式可能表明病毒的抑制。但是，用实施例6的鼻喷雾剂处理的雪貂同样显示体重减少症状的减轻。用实施例6的鼻喷雾剂处理的雪貂比用TamifluTM处理的雪貂更有活性。
实施例9体内传染性和预防试验
检测鼻喷雾剂QR-345的性质。QR-345的配方如下：
QR-345配方
姜黄油树脂        0.0308重量百分比
Aquaresin姜     0.0326重量百分比
辣根油#58         0.00300重量百分比
绿茶PE 030725     0.0220重量百分比
甘油              2.3368重量百分比
去离子水          97.5749重量百分比
该研究检测了当被感染的动物接受治疗时，对被感染动物附近生活的动物鼻内使用喷雾剂预防病毒传染的效果以及对未感染动物的预防作用。
在做了电子标签后，大约6-8个月大、体重700-1200g的五十只雪貂(白子雪貂或者艾鼬，来自Highgate Farms，Lincolnshire，GB)被分成6组，如表25所示。从0天到6天检测健康值，合适的动物在麻醉状态下接受鼻内感染，每鼻孔加入0.25ml流感A/Sydney/5/97[H3N2]尿囊储存液。
表25治疗组分布设计
    组     雪貂数目     治疗
    1     5     安慰剂-传染
    2     5     安慰剂-预防
    3     10     QR435-预防
    4     10     QR435-传染
    5     10     TamifluTM-预防
    6     10     TamifluTM-传染
实验设计中的组3和4显示为上面的组3，组4和5显示为上面的组4，组7和8显示为上面的组5，以及组9和10显示为上面的组6。组都是配对的，并细分为5个组，只是因为动物福利的原因。
表26-供体动物的感染状态
    雪貂ID#     组   鼻症状 全身症状 血清转换 病毒排泄
    037284841     安慰剂-传染     Y     Y     Y     N
    034537339     安慰剂-预防     Y     Y     Y     N
    034543003     QR435预防     Y     N     Y     N
    036534054     QR435预防     Y     Y     Y     N
    034540555     QR435传染     Y     Y     无标本     低
    036788799     QR435传染     Y     N     无标本     低
    036803821     TamifluTM预防     N     Y     Y     低
    XXXC     TamifluTM预防     Y     Y     Y     N
    XXXD     TamifluTM传染     Y     Y     Y     N
    036800314     TamifluTM传染     Y     Y     Y     低
传染性研究
传染性研究的目的是检测试验化合物是否能够阻止供体雪貂传染流感病毒给同栏的未感染受体雪貂。每组中一只雪貂接种病毒，大约接种5分钟后，剩余的未接种动物给药试验或者对照化合物。试验化合物或者对照的体积时每鼻孔0.14ml，每次剂量共0.28ml。接种的动物隔离24小时，然后在第1天重新放入相应的组中。接种的动物每天施用两次试验化合物或者合适的对照。剩余的雪貂在整个实验期间都不接受处理。从第0到6天观察所有雪貂的临床表现、体重减轻和发烧情况。在第6天进行鼻内清洗物收集，测量回收的清洗物体积，在实验记录上记载鼻清洗物的重量。利用MDCK细胞检测回收的鼻清洗物的病毒滴度。
表27-31显示传染性实验的结果。表27显示具有流感鼻症状动物的百分比。
表27-具有流感鼻症状动物的百分比(排除了供体动物)
组     天数
  1   2   3   4   5   6
 安慰剂   0％   0％   0％   100％   75％   50％
 TamifluTM   0％   12.5％   37.5   50％   0％   12.5％
 QR435   0％   0％   0％   0％   25％   37.5％
表28显示生理活性降低的动物的百分比。
表28-生理活性降低的动物的百分比(排除了供体动物)
组     天数
  1   2   3   4   5     6
 安慰剂   0％   0％   0％   100％   0％     0％
 TamifluTM   0％   0％   0％   0％   0％     12.5％
 QR435   0％   12.5％   0％   0％   12.5％     0％
考虑不同的流感疾病标准，并用它们测定显示症状的动物的百分比。当考虑鼻症状的时候(表27)，到第4天，安慰剂组100％(4/4)的动物表现流感症状，与此相反，在第4天TamifluTM治疗组只有50％(4/8)的动物显示症状。QR435治疗组没有动物显示症状。但第6天QR435治疗组中37.5％的动物具有鼻症状。不清楚这是流感感染还是鼻喷雾剂的刺激作用造成的。
当考虑流感的全身症状诸如活动性降低时，到第4天，安慰剂组所有(4/4)的动物表现症状，但是在感染后任意一天活性治疗组只有一只动物(12.5％)显示疾病症状。
表29显示治疗组中实验室验确定的流感和血清转换。每只动物在免疫激发前、第24天和感染后取血，这样就可通过血清学确认流感感染。血清转换定义为抗A/Sydney/5/97(H3N2)的抗HAI抗体升高4倍。在表29中显示在安慰剂治疗组和TamifluTM治疗组中100％的动物发生血清转换。但是，QR435治疗组只有57％(4/7)的被检测动物发生血清转换。因为设备问题一个血清标本没被检测。
表29-化验确定的流感；治疗组的血清转换
  血清转换动物的数量   血清转换动物的百分比
   安慰剂     4/4     100
   QR435     4/7*     57
   TamifluTM     8/8     l00
*一只动物在早期被淘汰，未采集标本
表30显示感染后第6天鼻粘膜的平均病毒排出量。在感染后第6天进行鼻清洗，标本在MDCK细胞上进行流感病毒的滴定。表30显示两个活性治疗组间动物排出病毒数目的显著差异。与TamifluTM治疗组中所有动物都排出病毒相比，QR435治疗组中只有一只动物排出病毒。出乎意料的，安慰剂组中只有一只动物(25％)排出病毒。
表30-实验室确定的流感；感染后第6天来自鼻粘膜的病毒排出
组 第6天排出病毒的动物数目 第6天排出病毒的动物百分比
   安慰剂     1/4     25％
   QR435     1/7*     14
   TamifluTM     8/8     100
*一只动物在早期被淘汰，未采集标本
计算治疗组的平均病毒排出，用ANOVA比较差异。发现结果是统计学显著的(p＝0.02)。利用用于多项检验的Bonferroni校正进行t-检验，发现TamifluTM治疗组比安慰剂治疗组(p＝0.021)和QR435治疗组(p＝0.04)显著的排出更多的病毒。
表31是治疗组的平均最大健康评分值。按照上面预防研究结果中所述计算最大健康值的平均值和标准差。结果是显著的(p＝0.02)。按上述方法比较各组，两个治疗组的最大健康值均显著低于安慰剂组(QR435 p＝0.006和TamifluTM p＝0.003)。
表31.治疗组的平均最大健康评分值
    组     平均     N     标准差
    安慰剂     1.0000     4     0.0000
    QR435     .8750     8     .35355
    TamifluTM     .7500     8     .70711
    总和     1.0500     20     .68633
计算每只动物的包含感染后健康评分值总和的AUC-样测量值；并且计算治疗组的平均值和标准差，用ANVOA比较。
表32显示治疗组间的结果和差异是非常显著的(p＝0.002)。用t-检验和用于多项检验的Bonferroni校正比较各组，两个治疗组的健康评分值总和均显著低于安慰剂组(QR435 p＝0.06和TamifluTM p＝0.03)。
表32.治疗组的平均健康评分值总和
    组     平均     N     标准差
    安慰剂     4.2000     4     .95743
    QR435     .3750     8     .64087
    TamifluTM     .5000     8     .83452
    总和     1.5000     20     1.53125
利用相似的方法计算感染后平均最大体重变化，用ANVOA比较。结果是不显著的(p＝0.90)。两个治疗组的体重减轻均显著低于安慰剂组(QR435 p＝0.055和TamifluTM p＝0.019)。计算比较每只动物的感染后体重改变总和的AUC-样标准，并且用ANVOA比较。治疗组间的差异是不显著的(p＝0.64)。
预防研究
预防研究的目的是检测用试验化合物处理未感染的受体雪貂是否能够阻止来自感染的供体的病毒感染。每组中一只雪貂接种病毒，大约接种5分钟后，剩余的未接种动物给药试验化合物或者对照化合物。接种的动物隔离24小时，然后在第1天重新放入相应的组中。接种的动物不接受试验化合物或相应对照的处理。剩余的雪貂每天施用两次试验化合物或者相应的对照。试验化合物或者对照的体积是每鼻孔0.14ml，每次剂量共0.28ml。从第0到6天观察所有雪貂的临床表现、体重减轻和发烧情况。在第6天进行鼻内清洗物收集，测量回收的清洗物体积，在实验记录上记载鼻清洗物的重量。利用MDCK细胞检测回收的鼻清洗物的病毒滴度。在第24天取血用作对照分析。
每只供体动物都被成功感染。因为研究参数的需要，证明每只供体动物都被成功感染并且每只动物都显示感染的临床现象和血清转换是非常重要的。但是，在鼻清洗物中未检测到病毒排出。在供体动物中几乎不存在或者没有病毒排出并不奇怪，因为在提取清洗物的那天即第6天前，病毒排出通常已经停止。
表33-38显示预防实验的结果。表33显示具有流感鼻症状动物的百分比。表34显示试验期间生理活性降低的动物的百分比。
表33-对照组具有流感鼻症状动物的百分比(供体动物除外)
组     天数
    1     2     3     4   5   6
 安慰剂     0     0     0     0   75％   75％
 TamifluTM     0     0     25％     0   0％   12.5
 QR435     0     0     0     0   25％   25％
表34-生理活性降低的动物的百分比(供体动物除外)
组     天数
    1     2    3     4     5     6
  安慰剂     0     0    100％     100％     0     0
  TamifluTM     0     0    0     0     0     0
  QR435     0     0    0     0     0     0
预防研究结果
在预防研究中，第5天安慰剂组中75％(3/4)具有流感感染的鼻症状，而第3天TamifluTM组中25％具有鼻症状，第5天QR435组中25％具有鼻症状。当考虑显示生理活性降低的动物的百分比时，结果是更引人注目的，因为安慰剂组100％显示生理活性降低，而TamifluTM组或QR435组没有动物显示活性降低的任何迹象。表35显示治疗组的平均最大健康评分值。计算每只动物最大健康评分值的平均值和标准差，然后用ANOVA比较。结果接近于具有显著性(p＝0.087)。
表35.治疗组的平均最大健康值
    组     平均     N     标准差
    安慰剂     1.0000     4     0.0000
    QR435     .3750     8     .51755
    TamifluTM     .3750     8     .51755
    总和     .5000     20     .51299
计算每只动物的包含感染后健康评分值总和的AUC-样标准；并且计算治疗组的平均值和标准差，用ANVOA比较。表35显示治疗组间的结果和差异是非常显著的(p＜0.0005)。用t-检验和用于多项检验的Bonferroni校正比较各组，两个治疗组的健康评分值总和均显著低于安慰剂组。
表36.治疗组的平均健康评分值总和
    组     平均     N     标准差
    安慰剂     3.5000     4     1.00000
    QR435     .3750     8     .51755
    TamifluTM     .5000     8     .75593
    总和     1.5000     20     1.43178
每只动物在被攻击前、和感染后第24天取血，这样就可通过血清学确认流感感染。血清转换是针对接种株的HAl抗体升高4倍。
表37-实验室确定的流感；治疗组的血清转换
  血清转换动物的数量 血清转换动物的百分比
  安慰剂     2/2*     100％
  QR435     0/8     0％
  TamifluTM     8/8     100％
表38显示实验室确定的流感和感染后第6天对照组排出病毒的动物的百分比。感染后第6天进行鼻清洗，标本在MDCK细胞上滴定检测流感病毒。表38显示两个活性治疗组中排出病毒的动物的数目存在本质差异，即与安慰剂治疗组的75％和TamifluTM治疗组的87.5％相比，QR435治疗组没有动物排出病毒。
表38-实验室确定的流感；感染后第6天治疗组的病毒排出
组 第6天排出病毒的动物数目 第6天排出病毒的动物百分比
    安慰剂     3/4     75％
    QR435     0/8     0％
    TamifluTM     7/8     87.5％
计算治疗组的平均病毒排出，用ANOVA比较差异。发现结果是统计学显著的(p＝0.001)。利用用于多项检验的Bonferroni校正进行t-检验，发现QR435治疗组比安慰剂治疗组(p＝0.004)和TamifluTM治疗组(p＝0.002)显著的排出更少的病毒。
计算治疗组每只动物最大最大体重变化的平均值和标准差，用ANVOA比较。结果是显著的(p＝0.018)。利用t-检验和用于多项检验的Bonferroni校正比较各组。两个治疗组的体重减轻均显著低于(或者非常接近)安慰剂治疗组(QR435 p＝0.055和TamifluTM p＝0.019)。
计算每只动物的包含感染后体重改变总和的AUC-样标准；计算治疗组平均值和标准差并且用ANVOA比较。治疗组间的差异是不显著的(p＝0.461)。
利用相似的方法计算感染后平均最大体重变化，用ANVOA比较。结果是显著的(p＝0.018)。两个治疗组的体重减轻均显著低于安慰剂组(QR435 p＝0.055和TamifluTM p＝0.019)。计算每只动物的包含感染后体重改变总和的AUC-样标准，并且用ANVOA比较。治疗组间的差异是不显著的(p＝0.461)。
结论
在传染性和预防实验中，用TamifluTM治疗(奥司米韦磷酸盐，每天给药两次，每次5mg/kg)的阳性治疗组通常可以预防流感症状。另一方面，这些动物通过病毒排出和受体动物的血清转换显示被感染。与此相反，试验化合物QR-345可100％有效地预防感染，部分有效地预防传染。因此，化合物的重要好处在于其预防感染的能力，具体的是抑制病毒颗粒的排出，从而减少病毒的传播。
实施例10-体外比较抗SARS病毒的杀病毒和抑制病毒活性
在体外检测两种组合物QR439和QR439(a)对SARS病毒的杀病毒和抑制病毒活性。QR439按以下配方制备：
(1)Aquaresin姜     0.6849重量百分比
(2)姜黄油树脂        0.6466重量百分比
(3)绿茶PE            0.4619重量百分比
(4)甘油              49.1039重量百分比
(5)去离子水          49.1039重量百分比
QR439(a)按以下配方制备：
(1)Aquaresin姜     0.6840重量百分比
(2)姜黄油树脂        0.6466重量百分比
(3)绿茶PE            0.4619重量百分比
(4)辣根油            0.063192重量百分比
(5)甘油              49.0723重量百分比
(6)去离子水          49.0723重量百分比
检测中，阳性对照化合物是：1％Triton-X 100(在人造唾液[0.1％NaHCO3，18％KH2PO4，0.1％胃粘蛋白，调节pH到6.0-6.5])中用于杀病毒分析，1％DMSO(PBS中)的利巴韦林(200μ/ml)用于抑制病毒分析。
阴性对照化合物是只用于杀病毒分析的人造唾液(0.1％NaHCO3，18％KH2PO4，0.1％胃粘蛋白，调节pH到6.0-6.5)。Urbani SARS病毒使用时的储存滴度是105 TCID50/ml。试验化合物QR439和QR439(a)在Sterets Normasol(Seton Prebbles Ltd)中稀释以产生下列用于杀病毒分析的稀释度：1/10，1/20，1/40，1/80，1/160，1/320，和1/640。
杀病毒分析方法
在96孔板C1008(Vero 76的一种克隆)细胞上滴定残余病毒滴度检测病毒生长。分析结果用于评估CPE(细胞致病作用)，利用Karber方法测定病毒滴度。
实施以下步骤进行杀病毒分析。360μl试验化合物与40μl病毒混合。搅拌混合物，然后温育30秒、1、2、4或8分钟。通过加入3.6ml感染培养基(DMEM，2mM L-谷胺酰胺，HEPES，青霉素-链霉素)，反应在特定时间终止。添加感染培基的稀释效应造成反应终止，因为在这一步病毒和试验化合物被稀释10倍。在96孔板C1008(Vero 76的一种克隆)细胞上以10倍稀释度滴定残余病毒感染性。C1008细胞在37℃孵育7-10天。结果用于进行CPE评分，并计算病毒滴度。在感染后3、4和5天检测细胞的CPE。
细胞毒分析方法
所有三种化合物都在C1008细胞上进行细胞毒分析以决定何种稀释度用于抑制病毒分析。在96孔板的第一孔(复孔形式)加入200μl每种试验化合物和对照化合物，在整块板上2倍系列稀释进行滴定。平板在3 5℃5％CO2条件下温育。温育3天后观察细胞的CPE。
抑制病毒分析的方法
用于抑制病毒分析的稀释度如下：按如下稀释度的QR439和QR439(a)：1/200，1/300，1/400，1/500，1/600。用适当的感染培养基(DMEM，2mM L-谷胺酰胺，HEPES，青霉素-链霉素)稀释每种试验化合物。每孔C1008细胞(复孔)加入100μl各稀释的试验化合物和阳性对照，然后在35℃5％CO2条件下温育30分钟。温育后，每个含试验化合物和阳性对照的孔加入10μl Urbani SARS病毒(储存滴度是105 TCID50/ml)。在观察细胞的CPE前，平板在35℃5％CO2条件下温育3-5天。记录CPE后，在平板上进行结晶紫分析，以测量细胞的OD(光密度)。用OD值测定试验化合物的TC50和EC50。
结果
对试验化合物进行的细胞毒分析的结果显示在下面的表39中。每个未稀释的化合物以复孔形式加入平板第一列的孔中，然后在整个平板中进行2倍系列稀释。范围在1/8和1/16稀释度间的浓度相当于在杀病毒分析中加入平板的试验化合物的浓度。这是因为加入终止培养基时化合物被1/10稀释。
表39.细胞毒分析
    2倍系列稀释
试验化合物   UD   1/2   1/4   1/8     1/16     1/32     1/64    1/128  1/256  1/512
    QR439   +   +   +   +     +     +     +    +  -  -
    QR439(a)   +   +   +   +     +     +     +    +  -  -
    纯细胞   -   -   -   -     -     -     -    -  -  -
+两孔均显示毒性
-两孔均显示无毒
+/1一孔显示毒性，另一孔显示无毒
表39显示在1/8稀释度(相当于杀病毒分析中使用的未稀释化合物的稀释度)两种试验化合物对细胞均有毒性。在杀病毒和抑制病毒分析中，稀释度需要大于1/128以消除毒性。
CPE观察(表40)显示三种受检测化合物中没有一种检测到抑制病毒活性。
表40.CPE观察
QR439 QR439(a) 利巴韦林 只有细胞 病毒对照
试验化合物的稀释度*   A   +     +     T     -     +
  B   +     +     T     -     +
  C   +     +     T     -     +
  D   +     +     T     -     +
  E   +     +     T     -     +
  F   ND     ND     T     -     +
10倍稀释   未稀释     10     103     104     105
未稀释病毒   +     +     +/-     -     -
+两孔中均有病毒感染
-两孔中均无病毒感染
+/-一孔中有病毒感染，另一孔中无病毒感染
T两孔中均有毒性
ND在第6个系列稀释度未完成抑制病毒分析
*QR439和QR439(a)的稀释度为A＝1/200，B＝1/300，C＝1/400，D＝1/500，E＝1/600
对试验化合物QR439和QR439(a)进行的杀病毒分析的结果分别显示在表41和42。这些表显示病毒滴度在试验化合物1/10稀释后下降，这相当于未稀释病毒的1/10稀释度。
表41.与试验化合物QR439接触后病毒滴度的Log减小值
    病毒滴度的Log减少值(-log10TCID50/ml)
  初始稀释度     试验化合物接触时间(分)     病毒对照滴度a
  0.5   1   2   4   8
  未稀释   T   T   T   T   T     2.5
  1/10   ≥1.0   ≥1.0   ≥1.0   ≥1.0   ≥1.0     2.5
  1/20   ≥1.0   ≥1.0   ≥1.0   ≥1.0   ≥1.0     2.5
  1/40   2.5*   2.5*   2.5*   2.5*   2.5*     3.0
  1/80   2.0*   2.0*   2.0*   2.0*   2.0*     2.5
  1/160   2.5*   2.5*   2.0   2.5*   2.5*     3.0
  1/320   0.0   1.5   1.0   1.5   2.5*     3.0
  1/1/640   0.0   0.5   1.5   0.5   1.0     3.0
a-log10TCID50/ml
*无病毒回收。但是利用Karber计算方法(考虑到初始1/10稀释度)得到0.5 TCID50/ml滴度。
表42.与试验化合物QR439(a)接触后病毒滴度的Log减小值
    病毒滴度的Log减少值(-log10TCID50/ml)
    初始稀释度     试验化合物接触时间(分)     病毒对照滴度a
    0.5     1     2     4     8
    未稀释     T     T     T     T     T     2.5
    1/10     ≥1.0     ≥1.0     ≥1.0     ≥1.0     ≥1.0     2.5
    1/20     2.0*     2.0*     2.0*     ≥1.0     ≥1.0     2.5
    1/40     2.0*     2.0*     2.0*     2.0*     2.0*     3.0
    1/80     2.0     2.0     2.5*     2.5*     2.5*     2.5
    1/160     2.5     3.0*     3.0*     3.0*     3.0*     3.0
    1/320     0.0     0.5     0.0     0.5     1.0*     1.5
    1/1/640     0.5     0.5     1.5     0.5     0.0     2.5
a-log10TCID50/ml
*无病毒回收。但是利用Karber计算方法(考虑到初始1/10稀释度)得到0.5 TCID50/ml滴度。
结果显示对QR439来说，除了1/320(30秒)和1/640(30秒、1分钟和4分钟)外，从1/40到1/640稀释度的所有接触时间点，杀病毒活性都存在显著降低。结果显示对QR439(a)来说，除了1/20(4分钟和8分钟)外，从1/20到1/60稀释度的所有接触时间点，杀病毒活性都存在显著降低。
实施例11-抗微生物鼻喷雾剂对H3N2流感感染的效果
40只雪貂用流感A/Sydney/5/97[H3N2]感染，每天用上面实施例9使用的QR43 5或者对照化合物治疗，持续4天。观测疾病迹象以及体重、直肠温度、细胞计数和病毒排出。病毒接种物A/Sydney/5/97是有致病力的，并观察到疾病迹象，接受安慰剂治疗(PBS)的雪貂显示流感A感染的明显症状。阳性对照(TamifluTM)可有效减少体重减轻、发热和临床症状。在QR435给药组未注意到疾病的缓解。
试验物质是包含1.8％上面实施例9所示配方的活性化合物的鼻喷雾剂。阳性对照物质是TamifluTM(奥司米韦磷酸盐)，每天5mg/kg给药两次。磷酸盐缓冲盐水(作为鼻喷雾剂)也被用作对照，鼻内每天给药4次。
攻击病毒A/Sydney/5/97[H3N2]来自Retroscreen病毒保藏中心。雪貂成功被流感感染，PBS治疗组(阴性对照)显示相关疾病的典型迹象。TamifluTM治疗组(阳性对照)显示疾病严重性的减轻，在病毒排出、体重减轻和疾病值方面均有统计学显著(或者几乎显著)的降低。
两个试验化合物治疗组(QR435每天两次和QR435每天四次)都没有显示治疗目的的疾病缓解。但是，如上面实施例9所示，QR435在抗传染和预防用途方面是有效的。
实施例12
为减少鼻喷雾剂的刺激性质，并保留先前证明的抗传染性质，在雪貂模型中检测不同辣根浓度的效果。QR-435全辣根ALS流涎喷雾制剂成分如下：
QR-345制剂
姜黄油树脂        0.0308重量百分比
Aquaresin姜     0.0326重量百分比
辣根油#58         0.00300重量百分比
绿茶PE030725      0.0220重量百分比
甘油              2.3368重量百分比
去离子水          97.5749重量百分比
在50％辣根试验制剂中，辣根油减少到0.0015％重量，甘油和去离子水增加0.000075％重量。相似的，在25％辣根研究中，辣根油减少到0.000075，甘油和去离子水增加0.001125％重量。
表43显示不同雪貂组的分布和栏处理规程。因为后勤原因每组被严格分成两栏。每组由4只受体动物和1只供体动物组成。
表43.组分布
    组     雪貂数目     治疗
    1a     5   安慰剂(PBS)QDS
    1b     5   安慰剂(PBS)QDS
    2a     5   QR435 100％辣根QDS
    2b     5   QR435 100％辣根QDS
    3a     5   QR435 50％辣根QDS
    3b     5   QR435 50％辣根QDS
    4a     5   QR43 525％辣根QDS
    4b     5   QR43 525％辣根QDS
    5a     5   TamifluTM 5mg/kg BDS
    5b     5   TamifluTM 5mg/kg BDS
QDS＝鼻内每天4次剂量
BDS＝口服每天2次剂量
利用用于动物鉴别和体温监测的可编程可注射的应答器电子标记动物。从浅表静脉抽取血液标本，通过心脏穿刺取末端血。
供体雪貂按如下方式鼻内感染：从5只的组移出1只动物，动物在麻醉状态下用0.5ml病毒(每鼻孔0.25ml)感染。供体动物不用试验物质治疗。按照表43所列的治疗组分配和表44的研究时间表，受体雪貂接受治疗。收集鼻清洗物，测量回收的鼻清洗物体积并称重以测定鼻清洗物回收的体积。
对抗同源病毒的标本进行HI分析，以检测雪貂血清阴性以及血清转换的程度，如果感染后有的话。记录健康值、体重和体温。利用苔酚蓝计数鼻清洗标本中的所有细胞，以评估从鼻上皮回收的炎症细胞应答。在MDCK细胞上进行鼻清洗物的病毒排出。
表44.研究时间表
天数   0   1   2   3   4   5   6     16
电子标记   X
麻醉   X     X
体温   X   X   X   X   X   X   X
体重   X   X   X   X   X   X   X
健康值   X   X   X   X   X   X   X
供体感染   X
供体分离   X
供体整合   X
鼻清洗   X
用于HAI的血清   X     X
试验物剂量受体   X   X   X   X   X   X   X
表45显示接触流感病毒后供体动物的临床迹象。从表中可看出，每个供体动物都成功感染了流感病毒。
表45.供体临床迹象
栏*   ％体重减轻(顶点到低点) 发热＞1SD，＞2SD或者＞3SD 血清转换
    1a1b     0.802.31     ＞3SD＞3SD     YY
    2a2b     2.880.91     ＞3SD＞3SD     YY
    3a3b     1.901.43     ＞2SD＞2SD     YY
    4a4b     2.761.15     ＞2SD＞3SD     YY
    5a     2.49     ＞1SD     Y
    5b     0.93     ＞2SD     Y
*参见表43治疗规程
用下列参数检测受体雪貂中的流感相关疾病：体重减轻、发热、病毒排出、血清转换、临床鼻和活性迹象、鼻细胞计数。对照组(PBS治疗组1a和1b)显示典型的流感疾病迹象，包括体重减轻、发热、血清转换和出现一些疾病的临床迹象(包括活性和鼻迹象)。TamifluTM治疗组没有显示任何明显的临床迹象，也没有发生血清转换，因此证明TamifluTM治疗可有效缓解流感疾病。组间的体重减轻百分比的比较表明疾病间存在差异。先找出每只雪貂的最高体重，随后鉴定最低体重，计算出减轻的体重。最高和最低体重的区别计算为第0天体重作为基本体重的百分比。当比较治疗组间的体重减轻时，几种治疗显示能显著减轻疾病。表46的结果显示PBS治疗组显著不同于所有其他治疗组。(PBSvs.100％辣根p＝0.008；PBS vs.50％辣根p＝0.022；PBS vs.25％辣根p＝0.005；PBS vs.TamifluTM p＝0.003)。
因此，试验化合物与阳性对照(TamifluTM)一样可有效预防被流感感染动物的体重减轻，该流感通过自然传染途径来自另一只雪貂。
表46A.结果比较
因变量：分散在各栏的体重改变
组号 平均值 标准误差     95％置信区间
    下限     上限
  PBS     -2.860     .405     -3.686     -2.304
  100％辣根     -1.231     .405     -2.057     -.405
  50％辣根     -1.478     .405     -2.304     -.651
  25％辣根     -1.141     .405     -1.967     -.315
  TamifluTM     -.980     .405     -1.806     -.154
表46B.配对比较
因变量：分散在各栏的体重改变
(I)组号 (J)组号 平均差(I-J) 标准误差 Sig.a     95％置信区间
  下限   下限
PBS   100％辣根     -1.629     .572   .008   -2.797     -.460
  50％辣根     -1.382     .572   .022   -2.551     -.214
  25％辣根     -1.719     .572   .005   -2.887     -.550
  TamifluTM     -1.880     .572   .003   -3.048     -.712
100％辣根   PBS     1.629     .572   .008   .460     2.797
  50％辣根     2.46     .572   .670   -.922     1.415
  25％辣根     -9.000E-02     .572   .876   -1.258     1.078
  TamifluTM     -.251     .572   .664   -1.420     .917
 50％辣根   PBS     1.382     .572   .022   .214     2.551
  100％辣根     -.246     .572   .670   -1.415     .922
  25％辣根     -.336     .572   .561   -1.505     .832
  TamifluTM     -.497     .572   .391   -1.666     .671
25％辣根   PBS     1.719     .572   .005   .550     2.887
  100％辣根     -9.000E-02     .572   .876   -1.078     1.258
  50％辣根     -.336     .572   .561   -1.666     1.505
  TamifluTM     -.161     .572   .780   -1.330     1.007
Tamiflu   PBS     -1.880     .572   .003   .712     3.048
  100％辣根     .251     .572   .664   -.917     1.420
  50％辣根     .497     .572   .391   -.671     1.666
  25％辣根     .161     .572   .780   -1.007     1.330
a.用于多重比较的修正：最低显著差异(相当于无修正)
与先前测量相比，体温升高大于3SD(标准差)的个体雪貂被认为是患有严重发热疾病。每组的SD根据第一天每组的平均体温计算。因为第0天麻醉剂的使用可能导致体温的改变，第1天的体温更适合用来产生基线平均值和SD。表47概括了发热情况，所述发热定义为从先前体温测量增加3SD。
表47.结果比较
栏号* 每栏发热雪貂的数量(升高＞3SD) 组号 每组发热雪貂的数量(升高＞3SD)
    1a     2 1 4
    1b     2
    2a     1 2 1
    2b     0
    3a     0 3 1
    3b     1
    4a     3 4 5
    4b     2
    5a     0 5 1
    5b     1
*参见表43的栏治疗规程
表48.轻微发热疾病
栏号* 每栏发热雪貂的数量(升高＞2SD) 组号 每组发热雪貂的数量(升高＞2SD)
    1a     3 1 7
    1b     4
    2a     2 2 4
    2b     2
    3a     1 3 2
    3b     1
    4a     3 4 5
    4b     2
    5a     2 5 4
    5b     2
*参见表43的栏治疗规程
利用发热的X2分析，所述发热定义为先前体温测量增加3SD，测定下列数据：
PBS治疗vs.50％辣根p＝0.106(表49)
PBS vs.10％辣根p＝0.106(表50)
PBS vs.TamifluTM p＝0.106(表51)
表48概括了与先前测量体温相比，体温明显增加超过2SD的雪貂数量，所述体温增加被认为是轻微发热疾病。
表49.PBS和50％辣根治疗之间的发热雪貂的数目的X2分析(体温从基线升高＞3SD)
           组号 总和
    PBS    100％辣根
发热＝＞从基线升高3SD 否     计数     4    7     11
    预期计数     5.5    5.5     11.0
    占组数目％     50.0％    87.5％     68.8％
是     计数     4    1     5
    预期计数     2.5    2.5     5.0
    占组数目％     50.0％    12.5％     31.3％
总和           计数     8    8     16
          预期计数     8.0    8.0     16.0
          占组数目％     100％    100％     100％
x2检验
值 df   Asymp.Sig.(2-sided)   Exact Sig.(2-sided)   Exact Sig.(1-sided)
    皮尔逊x2     2.618b     1     .106
    连续性修正a     1.164     1     .281
    似然比     2.756     1     .097
    Fisher精确检验     .282     .141
    线线关联     2.455     1     .117
    确认实例的数目     16
a.只计算2X2表
b.2细胞(50.0％)预期计数少于5。最大预期计数是2.50。
表50.PBS和100％辣根治疗之间的发热雪貂的数目的X2分析(体温从基线升高＞3SD)
           组号 总和
    PBS     50％辣根
发热＝＞从基线升高3SD 否   计数     4     7     1 1
  预期计数     5.5     5.5     11.0
  占组数目％     50.0％     87.5％     68.8％
是   计数     4     1     5
  预期计数     2.5     2.5     5.0
  占组数目％     50.0％     12.5％     31.3％
总和         计数     8     8     16
        预期计数     8.0     8.0     16.0
        占组数目％     100％     100％     100％
x2检验
值 Df     Asymp.Sig.(2-sided)     Exact Sig.(2-sided)     Exact Sig.(1-sided)
    皮尔逊x2     2.618b     1     .106
    连续性修正a     1.164     1     .281
    似然比     2.756     1     .097
    Fisher精确检验     .282     .141
    线线关联     2.455     1     .117
    确认实例的数目     16
a.只计算2X2表
b.2细胞(50.0％)预期计数少于5。最大预期计数是2.50。
表51.PBS和TamifluTM治疗之间的发热雪貂的数目的X2分析(体温从基线升高＞3SD)
    组号 总和
    PBS    TamifluTM
发热＝＞从基线升高3SD   否     计数     4    7     11
    预期计数     5.5    5.5     11.0
    占组数目％     50.0％    87.5％     68.8％
是     计数     4    1     5
    预期计数     2.5    2.5     5.0
    占组数目％     50.0％    12.5％     31.3％
  总和             计数     8    8     16
            预期计数     8.0    8.0     16.0
            占组数目％     100％    100％     100％
x2检验
值 Df   Asymp.Sig.(2-sided)   Exact Sig.(2-sided)   Exact Sig.(1-sided)
    皮尔逊x2     2.618b     1     .106
    连续性修正a     1.164     1     .281
    似然比     2.756     1     .097
    Fisher精确检验     .282     .141
    线线关联     2.455     1     .117
    确认实例的数目     16
a.只计算2X2表
b.2细胞(50.0％)预期计数少于5。最大预期计数是2.50。
利用发热的X2分析，所述发热定义为先前体温测量增加2SD，测定下列数据：
PBS治疗vs.50％辣根p＝0.012(表52)
PBS vs.10％辣根p＝0.106(表53)
PBS vs.TamifluTM p＝0.106(表54)
表52.PBS和50％辣根治疗之间的发热雪貂的数目的X2分析(体温从基线升高＞2SD)
           组号 总和
    PBS     50％辣根
发热＝＞从基线升高2SD 否     计数     1     6     7
    预期计数     3.5     3.5     7.0
    占组数目％     12.5％     75％     68.8％
是     计数     7     2     9
    预期计数     4.5     4.5     9.0
    占组数目％     87.5％     25％     56.3％
总和           计数     8     8     16
          预期计数     8.0     8.0     16.0
          占组数目％     100％     100％     100％
x2检验
值 Df   Asymp.Sig.(2-sided)   Exact Sig.(2-sided)   Exact Sig.(1-sided)
    皮尔逊x2     6.349b     1     .012
    连续性修正a     4.063     1     .044
    似然比     26.904     1     .009
    Fisher精确检验    .041     .020
    线线关联     5.952     1     .015
    确认实例的数目     16
a.只计算2X2表
b.4细胞(100.0％)预期计数少于5。最大预期计数是3.50。
表53.PBS和100％辣根治疗之间的发热雪貂的数目的X2分析(体温从基线升高＞2SD)
            组号 总和
    PBS    100％辣根
发热＝＞从基线升高2SD 否     计数     1    6     5
    预期计数     2.5    2.5     5.0
    占组数目％     12.5％    50％     31.3％
是     计数     7    4     11
    预期计数     5.5    5.5     11.0
    占组数目％     87.5％    50％     68.8％
总和           计数     8    8     16
          预期计数     8.0    8.0     16.0
          占组数目％     100％    100％     100％
x2检验
值 Df    Asymp.Sig.(2-sided)   Exact Sig.(2-sided)   Exact Sig.(1-sided)
    皮尔逊x2     2.618b     1     .106
    连续性修正a     1.164     1     .281
    似然比     2.756     1     .097
    Fisher精确检验     .282     .141
    线线关联     2.455     1     .117
    确认实例的数目     16
a.只计算2X2表
b.2细胞(50.0％)预期计数少于5。最大预期计数是2.50。
表54.PBS和TamifluTM治疗之间的发热雪貂的数目的X2分析(体温从基线升高＞2SD)
            组号 总和
    PBS    TamifluTM
发热＝＞从基线升高2SD 否     计数     1    4     5
    预期计数     2.5    2.5     5.0
    占组数目％     12.5％    50％     31.3％
是     计数     7    4     11
    预期计数     5.5    5.5     11.0
    占组数目％     87.5％    50％     68.8％
总和           计数     8    8     16
          预期计数     8.0    8.0     16.0
          占组数目％     100％    100％     100％
x2检验
值 Df  Asymp.Sig.(2-sided)   Exact Sig.(2-sided)   Exact Sig.(1-sided)
    皮尔逊x2     2.618b     1     .106
    连续性修正a     1.164     1     .281
    似然比     2.756     1     .097
    Fisher精确检验     .282     .141
    线线关联     2.455     1     .117
    确认实例的数目     16
a.只计算2X2表
b.2细胞(50.0％)预期计数少于5。最大预期计数是2.50。
结论
尽管所有试验化合物治疗的雪貂都发生了血清转换，但具有100％和50％辣根成分的QR-435可以显著或者几乎显著的缓解全身性疾病，这是通过检测体重和体温得到的。但是，任何治疗都不能根除疾病的其他迹象。对照组显示流感疾病的临床迹象。PBS治疗组显示流感感染的典型迹象：体重减轻、发热和血清转换以及疾病的弱临床迹象，活性降低和鼻迹象。TamifluTM治疗组显示无显著的体重减轻、弱临床迹象、病毒排出、减弱的发热严重程度和无血清转换。
在试验治疗组，用发热和体重减轻定义病毒的严重程度。当与PBS组比较时，所有治疗剂量显著缓解体重减轻的严重性。当发热定义为体温增加2SD时，50％辣根治疗组显示发热发生率的显著降低。100％辣根治疗组也可以根除发热，被发现是几乎显著的。当发热定义为体温增加3SD时，100％和50％辣根治疗组的发热发生率接近显著降低，但25％辣根治疗不能根除发热。因此，100％和50％辣根治疗比25％辣根治疗能够更大程度减轻全身迹象。这表明强的剂量依赖性需要50％或更高辣根以根除发热和体重减轻。50％或更高辣根治疗可以降低从供体传染到受体的病毒滴度，从而减轻疾病症状的严重性。而且通过以治疗方式用50％或更高辣根治疗根除疾病也是可能的。
实施例13
记载的第一例人感染禽株的病例是1997年香港18人感染H5N1，导致6人死亡。更近的爆发发生在东南亚，导致大量死亡，如表55所示。
表55.东南亚确诊的人H5N1(禽)流感病例(WHO2004)
    国家     病例总数     死亡人数
    越南     22     15
    泰国     12     8
    总数     34     23
本研究测定了下面表56-67所列制剂治疗从人分离的禽株流感病毒A/Vietnam/I 194/04，H5N1的效果。阴性对照是DMEM-DMSO 1％，而抑制病毒分析中的阳性对照是0.37μM amatadine。杀病毒分析中的阳性对照是1％Tween-20/20％ETOH/PBS(终浓度)。此外，还使用了只有细胞和只有病毒的阳性对照。只有细胞的对照只用维持培养基。对只有病毒的对照，检测步骤是相似的，除了使用细胞维持培养基取代试验化合物。表56-57显示了被检测的制剂。
表56.制剂I
    成分     重量％
    姜黄油树脂，ex.Kalsec     0.6466
    Aquaresin姜，ex.Kalsec     0.6840
    辣根-辣根油，ex.Kalsec     0.06312
    绿茶PE-90％Phytoway绿茶PE 030725.Huizhen S09160304 0.4619
    甘油     49.0723
    水     49.0723
    总重量     100.0002
表56.制剂II
    成分     重量％
    植物油中的姜黄提取物，ex.Kalsec     0.6466
    姜油树脂，ex.Kalsec     0.6840
    辣根-辣根油，ex.Kalsec     0.06312
    绿茶PE-90％Phytoway绿茶PE 030725.Huizhen S09160304 0.4619
    甘油     36.9077
    水     36.9077
    Neobee M-5中链甘油三酯     12.2850
    BASF T-Maz聚山梨酸酯80     12.0441
    总重量     100.0001
通过视觉观察细胞致病作用(CPE)确定杀病毒分析的终点，并且采用Karber方法检测残余病毒滴度。通过与只有病毒的对照比较，检测与试验化合物接触的病毒滴度的降低。抗病毒活性是1-log10TCID50/ml的减少(参见Oxford，J.S.等人，″Sodium deoxycholateexerts a direct destructive effect on HlV and Influenza viruses in-vitro andinhibits retrovirus-induced pathology in an animal model.″Antiv.Chem.Chemother.，5(3)：176-181(1994))。抑制病毒分析的终点也通过视觉CPE值确定。抗病毒活性通过感染的存在与否来表示。
抑制病毒分析
在抑制病毒分析中，制剂I-II被1/10(101)，1/100(102)和1/1000(103)稀释。此外，未稀释的制剂I-II(100)也被检测。在抑制病毒分析中，马-达二氏犬肾(MDCK)细胞种植于96孔板(100μl/孔)，在37℃5％CO2孵育2天。2天后，细胞用100μl/孔PBS洗涤2次，然后加入100μl/孔感染培养基。细胞中加入1/103稀释的原倍病毒储存液，在标准温育条件下(即37℃和5％CO2)吸附1到2小时。然后向被感染的孔中加入50μl/孔每种试验制剂(稀释的和未稀释的)。平板在标准温育条件下温育3天。CPE观察和结晶紫染色确定分析的终点。此外，在2倍系列稀释后进行血凝分析(HA)。
进行结晶紫染色时，当使用未稀释和101稀释的制剂I时，观察到一些抑制病毒活性。有效浓度EC50经计算为1/10188(即在1/101和1/102之间的稀释度)。
在此分析中，所有稀释度的制剂II的所有试验孔中均观察到CPE。进行结晶紫染色时，没有观察到制剂II的抑制病毒活性。
表58显示抑制病毒分析的HA分析数据。
表58.抑制病毒分析活性
    HA效价(HAU)
  稀释度(10X)     制剂I     新制剂II
    0     64     ＜2*
    -1     32     ＜2*
    -2     256     128
    -3     256     256
*此处记录的HAU(HA单位)更像是化合物的毒性而不是抗病毒活性造成的。
Amatadine的HA效价范围从16到32HAU，表明几乎没有抗A/Vietnam/1 194/04株的活性。
杀病毒分析
在杀病毒分析中制剂I和II稀释1/10和1/80。在杀病毒分析中，马-达二氏犬肾(MDCK)细胞种植于96孔板(100μl/孔)，37℃5％CO2孵育2天。2天后，细胞用100μl/孔PBS洗涤2次，然后加入100μl/孔感染培养基。1/1000稀释的原倍病毒储存液(40μl/孔)加入到每种试验化合物(360μl)，室温温育30秒或者5分钟。通过添加感染培养基(3.6ml)终止反应。反应终止是1/10稀释造成的。终止混合物以复孔形式(1110μl)加入96孔板第一排，然后10倍系列稀释后在整个平板进行滴定。平板在标准温育条件下温育3天，对CPE评分。在2倍系列稀释后进行血凝分析(HA)。
表59显示使用制剂的杀病毒分析的HA数据。
表59.制剂I的杀病毒活性
    制剂I(HAU)
    1/10     1/80
稀释度(10X)     时间(分钟)
    0.5     5     0.5     5
    0     ＜2     ＜2     64     ＜2
    -1     ＜2     ＜2     ＜2     ＜2
    -2     ＜2     ＜2     ＜2     ＜2
    -3     ＜2     ＜2     ＜2     ＜2
    -4     ＜2     ＜2     ＜2     ＜2
    细胞对照     ＜2     ＜2     ＜2     ＜2
    病毒对照     64     64     64     32
数据显示制剂I在5分钟温育后具有杀病毒活性，对1/10稀释度只在30秒温育后具有杀病毒活性。
表60显示使用制剂II杀病毒分析的HA数据。
    制剂II(HAU)
    1/10     1/80
稀释度(10X)     时间(分钟)
    0.5     5     0.5     5
    0     256     256     32     256
    -1     ＜2     ＜2     16     32
    -2     ＜2     ＜2     ＜2     ＜2
    -3     ＜2     ＜2     ＜2     ＜2
    -4     ＜2     ＜2     ＜2     ＜2
    细胞对照     ＜2     ＜2
    病毒对照     32     64     64     64
表60显示制剂II具有一些可以检测到的杀病毒活性，但与制剂I观察到的活性比较，数量较低。两个杀病毒分析的阳性对照都是1％Tween-20/20％ETOH/PBS。阳性对照在所有平板始终＜2HAU，因此显示良好的抗A/Vietnam/1 194/04株的抗病毒活性。
结论
当在抑制病毒分析中检测时，制剂I具有可检测到的抗病毒活性。该活性被分为中等的，导致病毒复制大约10倍降低。但是，当与QR制剂温育时，在细胞单层观察到一些非特异变化，因此不能准确定量抗细胞相对抗病毒效果的精确分布。一些新的抗病毒药物已经被设计，通过影响细胞功能发挥病毒抑制活性。QR混合物的不同成分发挥不同的抗细胞和抗病毒效应是可能的。
制剂II检测到了杀病毒活性，但制剂II的效果低于制剂I。未来可能的研究方向是分析完整化合物中每种成分的贡献。
到目前为止，NI(神经酰胺酶(neuramidase)抑制剂)阻滞剂显示能够抑制禽流感株H5N1，而amantadine显示针对禽H5N1株相对无活性。
但是，应该了解，尽管在上面描述中列举了很多本发明的特征和优点，但它们只是说明性的。在不违反本发明的内涵和外延的条件下，可以对上述方法的运用以及上述本发明的组合物有所改变。意在说明上述说明书中的所有内容应该视为说明性的，并不是限制意义的。本发明的范围将根据所附权利要求进行确定。

Claims (30)

1.一种降低微生物传染性的方法，包括给哺乳动物或者鸟类施用安全和有效量的组合物的步骤，所述哺乳动物或者鸟类已经接触微生物造成的疾病或者已经感染微生物造成的疾病，所述组合物包含：
可从姜获得的第一种成分；
可从绿茶获得的第二种成分；
可接受的载体；
给药后，所述量可有效减少接触所述哺乳动物或者鸟类的其他哺乳动物或者鸟类感染所述疾病的发病率。
2.权利要求1的方法，其中所述疾病是由选自病毒、细菌、真菌和酵母的微生物造成的。
3.权利要求2的方法，其中微生物是病毒，选自疱疹病毒、HIV病毒、AIDS病毒、流感病毒、H5N1流感病毒、鼻病毒、SARS病毒和呼吸道合胞病毒。
4.权利要求1的方法，其中组合物以选自片剂、胶囊、锭剂、圆锭、硬糖、可咀嚼组合物和牙用产品的形式给药。
5.权利要求1的方法，其中组合物作为鼻喷雾剂或者咽喉喷雾剂给药。
6.权利要求1的方法，其中第一种成分选自姜粉提取物、姜液体提取物、姜粉、整株姜植物体的至少一部分、姜酊剂、姜中含有的一种或多种化合物及其混合物；以及
第二种成分选自绿茶粉、绿茶粉提取物、绿茶液体提取物、整株绿茶植物体的至少一部分、绿茶酊剂、绿茶中含有的一种或多种化合物及其混合物。
7.权利要求1的方法，其中第一种成分包含姜根粉，第二种成分包含绿茶提取物。
8.权利要求1的方法，其中每克组合物包含大约1mg至大约20mg的绿茶提取物，以及大约1mg至大约150mg的姜根粉。
9.权利要求1的方法，其中组合物还包含可从姜黄获得的第三种成分。
10.权利要求9的方法，其中可从姜黄获得的成分选自姜黄粉提取物、姜黄液体提取物、姜黄提取物、一种或多种类姜黄素化合物、姜黄中含有的一种或多种其他化合物、姜黄粉、整株姜黄植物体的至少一部分、姜黄酊剂及其混合物。
11.权利要求9的方法，其中可从姜黄获得的成分包含姜黄提取物。
12.权利要求9的方法，其中组合物包含大约1mg至大约20mg的姜黄粉提取物。
13.权利要求9的方法，其中组合物还包含可从辣根的根获得的第四种成分。
14.权利要求1的方法，其中组合物还包含选自乙醇、白藜芦醇、丙二醇和甘油的一种或多种成分。
15.权利要求14的方法，其中组合物包含乙醇。
16.一种组合物预防用途的方法，用于减轻疾病的一种或多种严重性、疾病症状的严重性以及疾病症状的发生率，包括给已经或者将要接触疾病的哺乳动物或鸟类施用一定量的组合物的步骤，所述组合物包含：
可从姜获得的第一种成分；
可从绿茶获得的第二种成分；
可接受的载体；
给药后，所述量可有效减少疾病的一种或多种严重性、疾病症状的严重性以及疾病症状的发生率。
17.权利要求16的方法，其中所述疾病是由选自病毒、细菌、真菌和酵母的微生物造成的。
18.权利要求17的方法，其中病毒选自疱疹病毒、HIV病毒、AIDS病毒、流感病毒、H5N1流感病毒、鼻病毒、SARS病毒和呼吸道合胞病毒。
19.权利要求16的方法，其中组合物以选自片剂、胶囊、锭剂、圆锭、硬糖、可咀嚼组合物和牙用产品的形式给药。
20.权利要求16的方法，其中组合物作为鼻喷雾剂或者咽喉喷雾剂给药。
21.权利要求16的方法，其中
第一种成分选自姜粉提取物、姜液体提取物、姜粉、整株姜植物体的至少一部分、姜酊剂、姜中含有的一种或多种化合物及其混合物；
第二种成分选自绿茶粉、绿茶粉提取物、绿茶液体提取物、整株绿茶植物体的至少一部分、绿茶酊剂、绿茶中含有的一种或多种化合物及其混合物。
22.权利要求16的方法，其中第一种成分包含姜根粉，第二种成分包含绿茶提取物。
23.权利要求16的方法，其中每克组合物包含大约1mg至大约20mg的绿茶提取物，以及大约5mg至大约150mg的姜根粉。
24.权利要求16的方法，其中组合物还包含可从姜黄获得的第三种成分。
25.权利要求24的方法，其中可从姜黄获得的成分选自姜黄粉提取物、姜黄液体提取物、姜黄提取物、一种或多种类姜黄素化合物、姜黄中含有的一种或多种其他化合物、姜黄粉、整株姜黄植物体的至少一部分、姜黄酊剂及其混合物。
26.权利要求24的方法，其中可从姜黄获得的成分包含姜黄提取物。
27.权利要求24的方法，其中组合物包含大约1mg至大约20mg的姜黄粉提取物。
28.权利要求16的方法，其中组合物还包含可从辣根的根获得的第四种成分。
29.权利要求16的方法，其中组合物还包含选自乙醇、白藜芦醇、丙二醇和甘油的一种或多种成分。
30.权利要求29的方法，其中组合物包含乙醇。
CNA2005800476619A 2004-12-14 2005-12-14 降低疾病传染性的组合物和方法 Pending CN101111608A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11/012,764 2004-12-14
US11/012,764 US7166435B2 (en) 2001-08-06 2004-12-14 Compositions and methods for reducing the transmissivity of illnesses

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101111608A true CN101111608A (zh) 2008-01-23

Family

ID=36588501

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2005800476619A Pending CN101111608A (zh) 2004-12-14 2005-12-14 降低疾病传染性的组合物和方法

Country Status (12)

Country Link
US (2) US7166435B2 (zh)
EP (1) EP1825007A4 (zh)
JP (1) JP2008523153A (zh)
KR (1) KR20070102487A (zh)
CN (1) CN101111608A (zh)
AU (1) AU2005317104A1 (zh)
CA (1) CA2590340A1 (zh)
IL (1) IL183840A0 (zh)
MX (1) MX2007007075A (zh)
NZ (1) NZ555778A (zh)
WO (1) WO2006065889A2 (zh)
ZA (1) ZA200704718B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110149795A (zh) * 2016-12-02 2019-08-20 西姆莱斯股份公司 化妆品混合物

Families Citing this family (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7166435B2 (en) * 2001-08-06 2007-01-23 The Quigley Corporation Compositions and methods for reducing the transmissivity of illnesses
US20100286462A1 (en) * 2002-12-19 2010-11-11 Araba L.L.C. Apparati and Method for Remediating Biologically Active Particles
US7199090B2 (en) 2003-09-29 2007-04-03 Ethena Healthcare Inc. High alcohol content gel-like and foaming compositions comprising an alcohol and fluorosurfactant
DE102004062775A1 (de) 2004-12-21 2006-06-29 Stockhausen Gmbh Alkoholischer Pumpschaum
EP3292757A1 (en) 2005-03-07 2018-03-14 Deb IP Limited High alcohol content foaming compositions with silicone-based surfactants
US20060204466A1 (en) * 2005-03-08 2006-09-14 Ecolab Inc. Hydroalcoholic antimicrobial composition with skin health benefits
US7507425B2 (en) * 2005-09-27 2009-03-24 The Quigley Corporation Method for the treatment of cachexia
WO2007046966A2 (en) * 2005-10-13 2007-04-26 Milkhaus Laboratory, Inc Methods for the treatment of influenza
US20090186012A1 (en) * 2005-11-16 2009-07-23 Natbio Pty. Ltd. Plant extract
US20070148101A1 (en) * 2005-12-28 2007-06-28 Marcia Snyder Foamable alcoholic composition
GB0602325D0 (en) * 2006-02-06 2006-03-15 Remedy Res Ltd Virucidal compositions and uses
WO2008074028A1 (en) * 2006-12-14 2008-06-19 The Quigley Corporation Methods for treating and reducing the incidence of newcastle disease
US20100028268A1 (en) * 2006-12-14 2010-02-04 The Quigley Corporation Compositions and Methods For Treating Infectious Bronchitis
US11229578B2 (en) 2018-01-09 2022-01-25 E2Bio Life Sciences, Llc Method and device for the enhancement of topical treatments for oral mucositis and other oral conditions
KR101481040B1 (ko) * 2008-03-31 2015-01-14 한국화학연구원 [10]-진저다이온 또는 1-데하이드로-[10]-진저다이온을 포함하는 항 염증용 조성물
US20090324734A1 (en) * 2008-06-26 2009-12-31 Daniel Dickey Throat care composition
US7842725B2 (en) 2008-07-24 2010-11-30 Ecolab USA, Inc. Foaming alcohol compositions with selected dimethicone surfactants
US9540322B2 (en) 2008-08-18 2017-01-10 Yale University MIF modulators
FR2937538B1 (fr) * 2008-10-23 2010-12-31 Muselier Corinne Treger Produit antigrippal
EP2370069B1 (en) * 2008-11-26 2020-09-30 Perio Sciences, LLC Antioxidant compositions for soft oral tissue and methods of formulation and use thereof
WO2010062260A1 (en) * 2008-11-29 2010-06-03 The Thailand Research Fund Virus and target cell interaction inhibition
US20100151056A1 (en) * 2008-12-16 2010-06-17 Hanan Polansky Dietary supplements for decreasing the latent foreign dna load
US20100178364A1 (en) * 2009-01-12 2010-07-15 Hanan Polansky Dietary supplements against latent foreign DNA
US8906414B1 (en) 2009-04-27 2014-12-09 University Of South Florida Methods and compositions for improving bioavailability of epigallocatechin gallate (EGCG)
KR101186264B1 (ko) * 2009-06-12 2012-09-27 한국생명공학연구원 산자나무 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 ｉｌ-6으로 매개되는 질환 또는 라이노바이러스 감염성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101077920B1 (ko) 2009-07-08 2011-10-31 한국생명공학연구원 울금 추출물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 및 치료용 조성물 및 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물
WO2011005043A2 (ko) * 2009-07-08 2011-01-13 한국생명공학연구원 울금 추출물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 및 치료용 조성물 및 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물
US20110052727A1 (en) * 2009-08-31 2011-03-03 Hanan Polansky Anti Influenza Nutritional Supplements
KR101032066B1 (ko) * 2009-10-08 2011-05-02 한국생명공학연구원 호장근 추출물, 이의 분획물 또는 스틸벤계 화합물을 포함하는 감기의 예방 및 치료용 약학 조성물
JP2013508309A (ja) 2009-10-22 2013-03-07 バイオファーマコパ インコーポレイティド 風邪およびインフルエンザの治療のためのショウガおよびアキノキリンソウを含む草本組成物
BR112012015959A2 (pt) * 2009-12-29 2019-09-24 Hills Pet Nutrition Inc composições incluindo gengibre para a melhora ou prevenção de condições inflamatórias
KR101282990B1 (ko) * 2011-05-30 2013-07-04 건국대학교 산학협력단 항 인플루엔자 활성을 갖는 녹차 및 녹차부산물의 지용성 분획과 이로부터 분리된 글리세롤 당지질 화합물
US9421180B2 (en) 2011-09-30 2016-08-23 Perio Sciences, Llc Antioxidant compositions for treatment of inflammation or oxidative damage
JP6572201B2 (ja) * 2013-03-15 2019-09-04 エアーピオ セラピューティクス インコーポレイテッド 眼疾患を処置するための組成物、製剤、および方法
US9439841B2 (en) 2013-06-06 2016-09-13 Ecolab Usa Inc. Alcohol based sanitizer with improved dermal compatibility and feel
NL1040474C2 (en) * 2013-10-31 2015-05-04 Veramed B V Nasal compositions stimulating ciliary activity.
US20160287533A1 (en) * 2013-11-27 2016-10-06 Research Foundation Of The City University Of New York Activity Enhancing Curcumin Compositions and Methods of Use
CN104013888A (zh) * 2014-07-01 2014-09-03 刘德学 治疗痰热郁肺型阻塞性肺气肿的中药组合物及其制备方法
US10537548B2 (en) 2014-08-28 2020-01-21 Caliway Biopharmaceuticals Co., Ltd. Composition and medical product for reducing body weight and body fat, and use of said product
KR101923840B1 (ko) 2014-08-28 2019-02-27 칼리웨이 바이오파마슈티칼스 코., 엘티디. 체중 및 체지방 감소용 조성물 및 의약 생성물, 및 상기 생성물의 용도
KR101687337B1 (ko) * 2015-06-02 2016-12-16 (주)이엘티사이언스 가축 방역용 발판 소독약품 복합조성물 및 그 제조방법
EP3103465A1 (en) * 2015-06-10 2016-12-14 Raman Mehta Formulations for the treatment of mucosal lesions
CN105012831A (zh) * 2015-08-05 2015-11-04 李强 一种用于治疗月经不调的中药组合物
CN117942405A (zh) 2016-02-25 2024-04-30 应用生物实验室公司 保护空气传播的病原体和刺激物的组合物和方法
US20170360815A1 (en) 2016-02-25 2017-12-21 Applied Biological Laboratories, Inc. Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants
ITUA20161822A1 (it) * 2016-03-18 2017-09-18 Indena Spa Composizioni utili nella prevenzione e/o nel trattamento di patologie del cavo orale, delle prime vie aeree e dell’esofago
EP3714889A1 (en) 2019-03-29 2020-09-30 F. Hoffmann-La Roche AG Baloxavir for the prevention of transmission of influenza virus
KR102224051B1 (ko) * 2019-04-04 2021-03-09 한국 한의학 연구원 건강 추출물을 유효성분으로 포함하는 중화항체 생성율 증진용 조성물
CN114845707A (zh) * 2019-10-25 2022-08-02 韩国生命工学研究院 用于预防或治疗猪流行性腹泻病毒感染的包含含有基于类姜黄色素的化合物和甘草提取物或其级分的复合物的组合物
CN111402968B (zh) * 2020-04-01 2023-11-03 上海交通大学 基于分子模拟发现山柰酚在covid-19病毒中的新用途
KR102456749B1 (ko) 2020-04-28 2022-10-21 서울대학교산학협력단 울금 (Curcuma longa) 추출물 또는 이로부터 분리한 세스퀴테르페노이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 돼지 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
WO2022036316A1 (en) * 2020-08-14 2022-02-17 North Carolina State University Methods to use flavonoids for inhibition of sars-cov-2 and treatment of covid-19
US20220080020A1 (en) * 2020-08-22 2022-03-17 Luc Montagnier Compositions and methods for reducing the transmissivity of illnesses using an oral delivery system
CN113975223A (zh) * 2021-08-06 2022-01-28 华中科技大学 一种鼻腔清洗液

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2850151B2 (ja) 1990-02-02 1999-01-27 日研フード本社株式会社 抗酸化ミネラル飲料及びその製造法
US5120538A (en) 1990-02-05 1992-06-09 Pt Darya-Varia Laboratoria Combinations of compounds isolated from curcuma spp as anti-inflammatory agents
SE468893B (sv) 1991-09-04 1993-04-05 Tetra Alfa Holdings Oeppningsanordning foer foerpackningsbehaallare
CN1060012A (zh) 1991-09-20 1992-04-08 沈阳市铁西区科发医药饮料技术服务部 一种口香糖的制作方法
US5248504A (en) 1992-03-02 1993-09-28 Friedman William H Method of treatment for nasal and sinus dysfunction
CN1072823A (zh) 1992-06-13 1993-06-09 文士开 果酶茶的配制方法
US6063381A (en) 1993-05-19 2000-05-16 Staggs; Jeff J. Therapeutic uses of pungent botanicals and their related compounds
US5401504B1 (en) 1993-12-28 1998-04-21 Univ Mississippi Medical Cente Use of tumeric in wound healing
CN1116068A (zh) 1994-01-25 1996-02-07 刘俊松 天然乳化果茶主剂的制备方法
CA2185825A1 (en) 1994-03-18 1995-09-28 Fujio Suzuki Agent for the treatment of infections
US5494668A (en) 1994-07-11 1996-02-27 Patwardhan; Bhushan Method of treating musculoskeletal disease and a novel composition therefor
US5707630A (en) 1996-01-04 1998-01-13 Sabina International, Ltd. Herbal compound for relief of PMS through menopausal symptoms
US5861415A (en) 1996-07-12 1999-01-19 Sami Chemicals & Extracts, Ltd. Bioprotectant composition, method of use and extraction process of curcuminoids
JPH11155538A (ja) * 1997-11-27 1999-06-15 Uenoya Bikouen:Kk 生姜湯の製造方法
JP2000157209A (ja) 1998-11-27 2000-06-13 Kagetoshi Kawauchi 振り掛け健康食品
US6174542B1 (en) 1999-07-01 2001-01-16 Pms Mood Food, Inc. Dietary supplements and food products for treating symptoms of PMS
US6264995B1 (en) 1999-10-19 2001-07-24 Thomas Newmark Herbal composition for reducing inflammation and methods of using same
US6261607B1 (en) 1999-10-19 2001-07-17 Thomas Newmark Composition for promoting prostate health containing selenium and herbal extracts
US6291533B1 (en) 1999-12-22 2001-09-18 Vitamerica, Inc. Dietary supplements for each specific blood type
US6841544B2 (en) 2000-02-23 2005-01-11 Bioselect Innovations, Inc. Composition and method for treating the effects of diseases and maladies
US6274177B1 (en) 2000-08-26 2001-08-14 National Science Council Method of preparing an extract potent in anti-inflammation and anti-platelet aggregation from Zingiber officinale and pharmaceutical compositions containing said extract
US6391346B1 (en) 2001-04-05 2002-05-21 Thomas Newmark Anti-inflammatory, sleep-promoting herbal composition and method of use
US7396546B2 (en) * 2001-08-06 2008-07-08 The Quigley Corporation Anti-microbial compositions and methods of using same
US6596313B2 (en) 2001-08-06 2003-07-22 The Quigley Corporation Nutritional supplement and methods of using it
US6592896B2 (en) 2001-08-06 2003-07-15 The Quigley Corporation Medicinal composition and method of using it
US7166435B2 (en) 2001-08-06 2007-01-23 The Quigley Corporation Compositions and methods for reducing the transmissivity of illnesses
EP1545470A4 (en) * 2002-08-06 2009-07-01 The Quigley Corp ANTIMICROBIAL COMPOSITIONS AND METHOD OF USE DAF R

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110149795A (zh) * 2016-12-02 2019-08-20 西姆莱斯股份公司 化妆品混合物
CN110149795B (zh) * 2016-12-02 2023-10-03 西姆莱斯股份公司 化妆品混合物

Also Published As

Publication number Publication date
US7405046B2 (en) 2008-07-29
JP2008523153A (ja) 2008-07-03
US20050147697A1 (en) 2005-07-07
IL183840A0 (en) 2007-10-31
AU2005317104A1 (en) 2006-06-22
WO2006065889A3 (en) 2006-08-03
NZ555778A (en) 2009-12-24
EP1825007A4 (en) 2009-08-05
EP1825007A2 (en) 2007-08-29
US7166435B2 (en) 2007-01-23
ZA200704718B (en) 2008-11-26
WO2006065889A2 (en) 2006-06-22
CA2590340A1 (en) 2006-06-22
KR20070102487A (ko) 2007-10-18
MX2007007075A (es) 2007-09-04
US20070104808A1 (en) 2007-05-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101111608A (zh) 降低疾病传染性的组合物和方法
WO2011055881A1 (ko) 인플루엔자 바이러스 유래 질병의 예방 또는 치료용 조성물
KR100743861B1 (ko) 솔잎 추출물을 함유하는 바이러스로 인한 인간 질환의 치료및 예방용 조성물
CN101384271A (zh) 接骨木提取物的应用
KR102402794B1 (ko) 소나무 목부로부터 추출한 오일을 유효성분으로 함유하는 항바이러스 조성물
García-Salazar et al. Broad antiviral spectrum of glycyrrhizic acid for human and veterinary medicine: reality or fiction?
KR100743862B1 (ko) 솔잎 추출물을 함유하는 바이러스로 인한 동물 질환의치료 및 예방용 조성물
US20100028268A1 (en) Compositions and Methods For Treating Infectious Bronchitis
US20100247685A1 (en) Methods For Treating and Reducing the Incidence of Newcastle Disease
KR100597711B1 (ko) 백화사설초 및 영지버섯 추출물을 함유하는 기능성 조성물
KR100881035B1 (ko) 맨드라미 추출물을 함유하는 바이러스로 인한 인간 질환의치료 및 예방용 조성물
US7390515B2 (en) Methods of treating viral infections using berry juice fractions
KR100881033B1 (ko) 맨드라미 추출물을 함유하는 바이러스로 인한 동물 질환의치료 및 예방용 조성물
WO2007046642A1 (en) Composition comprising an extract of pine needle for preventing and treating human disease caused by viruses and the use thereof
WO2012139521A1 (zh) 一种防治甲型流感的中药组合物及其制备方法和用途
El-Hamid et al. In vitro antiviral activity of commercial products of herbal extracts against highly pathogenic avian influenza (H5N1) virus.
Machamacha Antiviral potential of hadjod (Cissus quadrangularis) extract against newcastle disease virus.
KR100504272B1 (ko) 백화사설초 및 영지버섯 추출물을 포함하는 바이러스 질환의 예방 및 치료용 조성물
Kumar et al. 9 Medicinal Plants/Herbs and Influenza Virus
Dankar Studies on a Newly Emerging H9N2-avian Influenza Outbreak in Poultry of Lebanon

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20080123