CN101011559A - 治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法，该中药制剂由下列重量份数的原料药制备而成：夏枯草15～25份，仙鹤草15～25份，白花蛇舌草15～25份，半枝莲15～25份，黄药子10～20份，猪苓10～20份，苦参5～15份，猫爪草10～20份，海浮石10～20份，生晒参5～10份，生黄芪10～20份，灵芝3～7份，水牛角10～20份，羚羊角1～2份，野菊花5～15份，金钱草10～20份，莪术10～20份，干蟾皮3～7份，生甘草1～2份。本发明中药制剂具有扶正祛邪、散结消瘤之功效，主治消化系统、泌尿系统及脑胶体瘤等各型肿瘤，防止术后复发，增强化疗作用，减轻化疗、放疗之后的毒副作用。

Description

治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法

[0001] 技术领域

[0002] 本发明涉及一种治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法。

[0003] 背景技术

[0004] 恶性肿瘤，又被称为癌症，是当今世界上一种发病率高，死亡率高的、对人类健康危害很大的一种疾病。这种疾病不仅治疗难度极大，而且对病人和其家属造成的痛苦也很大，对病人的单位和社会造成的损失也很大。根据有关的统计，中国每年新发恶性肿瘤的病人为165万，死亡105万人左右。

[0005] 目前对恶性肿瘤的治疗方法主要分为二大种类，一类是西方医学的局部手术切除、局部阻断瘤体血液供应、局部注射抑制瘤体生长药物以及全身化的化疗、放疗，另一类则是中医的扶正祛邪、提供机体免疫能力的整体疗法，以达到延长病人生命、提供生存质量并减少病人痛苦的治疗目的。但目前上述两种治疗方法的疗效都不高，恶性肿瘤病人复发并死亡的几率仍高达65％。

[0006] 发明内容

[0007] 本发明所要解决的技术问题是提供一种疗效好、无毒副作用的治疗恶性肿瘤的中药制剂。

[0008] 为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种治疗恶性肿瘤的中药制剂，由下列重量份数的原料药制备而成：

[0009] 夏枯草  15～25份  仙鹤草  15～25份    白花蛇舌草  15～25份

[0010] 半枝莲  15～25份  黄药子  10～20份    猪苓        10～20份

[0011] 苦参    5～15份  猫爪草  10～20份  海浮石  10～20份

[0012] 生晒参  5～10份  生黄芪  10～20份  灵芝    3～7份

[0013] 水牛角  10～20份 羚羊角  1～2份    野菊花  5～15份

[0014] 金钱草  10～20份 莪术    10～20份  干蟾皮  3～7份

[0015] 生甘草  1～2份

[0016] 优选下列重量份数配比：

[0017] 夏枯草  20份  仙鹤草  20份  白花蛇舌草  20份

[0018] 半枝莲  20份  黄药子  15份  猪苓        15份

[0019] 苦参    10份  猫爪草  15份  海浮石      15份

[0020] 生晒参  7份   生黄芪  15份  灵芝        5份

[0021] 水牛角  15份  羚羊角  1份   野菊花      10份

[0022] 金钱草  15份  莪术    15份  干蟾皮      5份

[0023] 生甘草  1份

[0024] 本发明治疗恶性肿瘤的中药制剂的型剂可以为软胶囊。

[0025] 本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种本发明软胶囊制剂的制备方法。

[0026] 本发明软胶囊制剂的制备方法是：

[0027] (a)取生晒参、生黄芪、莪术置于超临界萃取罐中，加入75％的乙醇为夹带剂进行萃取，萃取后将提取液与残留药物分别贮存备用，提取液中乙醇低温回收；

[0028] (b)将萃取后的残留药物和夏枯草、仙鹤草、白花蛇舌草、半枝莲、黄药子、猪苓、苦参、猫爪草、海浮石、灵芝、水牛角、野菊花、金钱草、干蟾皮以及生甘草一起加水浸渍1～2小时后，煎煮二次，每次煎煮时间1～2小时，合并煎出液过滤浓缩至清膏；

[0029] (c)将上述超临界萃取的提取液、浓缩清膏及磨成80～100目的羚羊角粉混合并加入适量葵花油，置胶体磨，粉碎乳化制成软胶囊。

[0030] 本发明治疗恶性肿瘤的中药制剂具有扶正祛邪、散结消瘤之功效，主治消化系统、泌尿系统及脑胶体瘤等各型肿瘤，防止术后复发，增强化疗作用，减轻化疗、放疗之后的毒副作用，提高生命质量、延长生存期，临床应用取得较好疗效，病人反应良好。

[0031] 下面结合具体实施方式来进一步说明本发明药物的有益效果。

[0032] 具体实施方式

[0033] 制备实施例

[0034] (a)取生晒参7g、生黄芪15g、莪术15g份置于超临界萃取罐中，加入20ml75％的乙醇为夹带剂，萃取后将提取液与残留药物分别贮存备用，提取液中乙醇低温回收；

[0035] (b)将萃取后的残留药物和夏枯草20g、仙鹤草20g、白花蛇舌草20g、半枝莲20g、黄药子15g、猪苓15g、苦参10g、猫爪草15g、海浮石15g、灵芝5g、水牛角15g、野菊花10g、金钱草15g、干蟾皮5g以及生甘草1g一起加水浸渍2小时，煎煮二次，每次煎煮时间1.5小时，合并煎出液过滤浓缩至清膏；

[0036] (ii)将上述超临界萃取的提取液、浓缩清膏及磨成80～100目的羚羊角粉1g加入适量葵花油，置胶体磨，粉碎乳化制成软胶囊。

[0037] 药效试验例

[0038] 材料

[0039] 1、瘤株

[0040] ①小鼠肉瘤S180(S180)，由浙江中医药大学提供。

[0041] ②小鼠肝癌H22(H22)，由浙江中医药大学提供。

[0042] ③小鼠胶质瘤G422(G422)，购自北京中国医学科学院肿瘤医院。

[0043] 2、细胞株

[0044] ①人肝癌细胞株SMMC-7721，购自中国科学院细胞生物学研究所。

[0045] ②人胃癌腺细胞株SGC-7901，购自中国科学院细胞生物学研究所。

[0046] 3、实验动物

[0047] 昆明种小鼠，雄性，体重20±2g，级别为清洁级，浙江中医药大学实验动物中心提供，实验动物使用许可证号：SCXK(浙)2003-0001。

[0048] 4、药品和试剂

[0049] ①本发明软胶囊制剂，内容物为油状浸膏，临用前取内容物配制成37.5mg/Kg、50.0mg/Kg、75.0mg/Kg三种浓度。

[0050] ②环磷酰胺(CTX)粉剂：江苏恒瑞股份有限公司，批号为04111621。

[0051] ③印度墨汁：北京市西中化工厂，批号为020524。

[0052] ④刀豆蛋白(ConA)：sigma公司，批号为040620。

[0053] ⑤四甲基偶氮哇盐(MTT)，宏博生物工程有限公司，批号为041103，配制成浓度为含药量5mg/mL的液体。

[0054] ⑥1640培养基：美国GIBCOBRL公司生产RPMI1640，批号为1243098。

[0055] ⑦DMSO：苏州正兴化工研究院，批号为041116。

[0056] ⑧超级新生牛血清：杭州四季青生物工程材料研究所，批号为041025。

[0057] ⑨吐温-20：温州清明化工厂，批号为020501。

[0058] 5、主要仪器

[0059] ①TC-30型恒温水浴箱，浙江海宁医药器材厂；

[0060] ②Heraeus三气细胞培养箱，德国Heraeus公司；

[0061] ③SW-CJ-IF层流超净工作台，苏州安泰空气技术公司；

[0062] ④XDS-1倒置显微镜系统，重庆光学仪器厂；

[0063] ⑤LD4-ZA型低速离心机，北京医用离心机厂；

[0064] ⑥UR-4100型酶标仪，美国Dnatech公司；

[0065] ⑦DMIL倒置显微镜，德国Leica公司。

[0066] 6、试剂配制

[0067] ①D-Hanks液配制：称取NaCl8.00g，KCl0.40g，Na2HPO4·7H2O0.06g，KH2PO40.06g，NaHCO30.35g，酚红0.02g依次溶于约700ml重蒸水中，然后定容至1L，充分混匀，分装入瓶，包装10磅30分钟高压灭菌。

[0068] ②培养液的配制：将培养基干粉缓慢加入到约300ml三蒸馏水中，边加边搅拌使之溶解；将NaHCO3溶于约200ml三蒸馏水中，再加到上述溶液中，最后定容至1L，用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，无菌条件下分瓶入装，-20℃冰箱保存备用。使用时加双抗(终浓度为青霉素100μ/ml和链霉素100μ/ml)及灭活新生牛血清(终浓度为10％-20％)。

[0069] [药效试验例1]本发明软胶囊制剂对小鼠肝癌H22的抑制作用

[0070] 肿瘤接种：取肝癌H22(H22)细胞腹腔内接种八天的昆明种小鼠，无菌条件下用5ml注射器取吸出1-2ml牛奶状、较粘稠的腹水，先用0.4％苔盼蓝染色，计活细胞率＞90％，然后用血球计数板计数癌细胞数，然后用以D-Hanks稀释调整细胞浓度为5.5×106个/ml。取0.1ml注射于小鼠右前肢腋窝皮下，进行接种。

[0071] 昆明种小鼠，20±2g。腋窝皮下接种24h后，随机分成五组：模型对照组(生理盐水)、本发明软胶囊制剂低剂组(37.5mg/Kg)、本发明软胶囊制剂中剂组(50.0mg/Kg)、本发明软胶囊制剂高剂组(75.0mg/Kg)、环磷酰胺组(CTX10mg/Kg)，每组小鼠15只。各受试药组灌服给药，灌胃容积为0.2ml/10g体重，每天一次，连用12天。CTX采用腹腔注射给药，注射量为0.1ml/10g体重，每天一次，连续12天。第13天，脱颈椎法处死全部小鼠，完整剥取瘤块，取脾脏和胸腺，电子天平(精密度为0.001)称重，计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数。抑瘤率(％)＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％，胸腺指数＝胸腺重(g)×100/体重，脾指数＝脾重量(g)×100/体重。

[0072] 数据处理：各给药组与模型对照组比较，统计学处理采用t检验，用

表示。

[0073] 表1本发明软胶囊制剂对小鼠H22生长的抑制作用

[0074]

[0075] 注：各给药组与模型对照组比较*P＜0.05

[0076] 表2本发明软胶囊制剂对H22小鼠免疫器官重量的影响

[0077]

[0078]

[0079] 注：各给药组与模型对照组比较**P＜0.01

[0080] 表1结果显示，与模型对照组比较，本发明软胶囊制剂三个剂量组的抑瘤率分别为12.01％、24.12％、12.06％，其中本发明软胶囊制剂50.0mg/Kg抑瘤作用较为显著。

[0081] 表2显示，与模型对照组比较，环磷酰胺引起H22小鼠胸腺指数下降(P＜0.01)，而本发明软胶囊制剂对H22小鼠的脾脏指数和胸腺指数无明显影响。

[0082] 综合表1、表2，本发明软胶囊制剂对小鼠H22荷瘤具有一定的抑制作用，且不会引起脾脏、胸腺等免疫器官指数的降低。

[0083] [药效试验例2]本发明软胶囊制剂对小鼠肉瘤S180的抑制作用

[0084] 肿瘤接种：取肉瘤S180细胞腹腔内接种八天的昆明种小鼠，无菌条件下用5ml注射器取吸出1-2ml牛奶状、较粘稠的腹水，先用0.4％苔盼蓝染色，计活细胞率＞90％，然后用血球计数板计数癌细胞数，然后用以D-Hanks稀释调整细胞浓度为5.5×106个/ml。取0.1ml注射于小鼠右前肢腋窝皮下，进行接种。

[0085] 昆明种小鼠，20±2g。腋窝皮下接种24h后，随机分成五组：模型对照组(生理盐水)、本发明软胶囊制剂低剂组(37.5mg/Kg)、本发明软胶囊制剂中剂组(50.0mg/Kg)、本发明软胶囊制剂高剂组(75.0mg/Kg)、环磷酰胺组(CTX10mg/Kg)，每组小鼠15只。各受试药组灌服给药，灌胃容积为0.2ml/10g体重，每天一次，连续12天。CTX组采用腹腔注射给药，隔天一次，连用12天。第13天，脱颈推法处死全部小鼠，完整剥取瘤块，取脾脏和胸腺，电子天平(精密度0.001)称重，计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数。抑瘤率(％)＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％，胸腺指数＝胸腺重(g)、100/体重，脾指数＝脾重量(g)×100/体重。

[0086] 数据处理：各给药组与模型对照组比较，统计学处理采用t检验，用

表示。

[0087] 表3本发明软胶囊制剂对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用

[0088]

[0089] 注：各给药组与模型对照组比较*P＜0.05

[0090] 表4本发明软胶囊制剂对S180小鼠免疫器官重量的影响

[0091]

[0092] 注：各给药组与模型对照组比较*P＜0.05

[0093] 表3显示，与模型对照组比较，本发明软胶囊制剂三个剂量均能抑制肉瘤S180的生长。本发明软胶囊制剂(37.5mg/Kg、50.0mg/Kg、75.0mg/Kg)的抑瘤率分别为23.9％、25.3％、63.5％，其中本发明软胶囊制剂75.0mg/Kg抑瘤作用最为明显(p＜0.05)。

[0094] 表4显示，与模型对照组比较，环磷酰胺引起S180小鼠的胸腺指数下降(p＜0.05)，而本发明软胶囊制剂对S180小鼠的脾脏和胸腺无明显影响。

[0095] 综合表3、表4，结果表明本发明软胶囊制剂对S180肉瘤具有抑制作用。

[0096] [药效试验例3]本发明软胶囊制剂对小鼠G422脑胶质瘤的抑制作用

[0097] 肿瘤接种：取已接种G422脑胶质瘤的昆明种小鼠，无菌条件下解剖出瘤，剪碎后放入组织匀浆器研磨，在显微镜计数板下调整使癌细胞数为2×106个/ml。取0.2ml注射于小鼠右前肢腋窝皮下，进行接种。

[0098] 昆明种小鼠，20±2g。腋窝皮下接种24h后，随机分成五组：模型对照组(生理盐水)、本发明软胶囊制剂低剂组(37.5mg/Kg)、本发明软胶囊制剂中剂组(50.0mg/Kg)、本发明软胶囊制剂高剂组(75.0mg/Kg)、环磷酰胺组(CTX10mg/Kg)，每组小鼠15只。各受试药组灌服给药，灌胃容积为0.2ml/10g体重，每天一次，连续14天。CTX腹腔注射给药，隔天一次，连续7次。第15天脱颈椎法处死全部小鼠，完整剥取瘤块，取脾脏和胸腺，电子天平(精密度0.001)称重，计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数。抑瘤率(％)＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％，胸腺指数＝胸腺重(g)×100/体重，脾指数＝脾重量(g)×100/体重。

[0099] 数据处理：各给药组与模型对照组比较，统计学处理采用t检验，用

表示。

[0100] 表5本发明软胶囊制剂对G422小鼠生长的抑制作用

[0101]

[0102]

[0103] 注：各给药组与模型对照组比较*P＜0.05

[0104] 表6本发明软胶囊制剂对G422小鼠免疫器官重量的影响

[0105]

[0106] 注：各给药组与模型对照组比较*P＜0.05

[0107] 表5显示，本发明软胶囊制剂(37.5mg/Kg、50.0mg/Kg、75.0mg/Kg)的抑瘤率分别为5.57％、9.02％、22.99％，其中本发明软胶囊制剂75.0mg/Kg抑瘤作用较为明显.表明本发明软胶囊制剂对G422生长具有一定的抑制作用。

[0108] 表6显示，与模型对照组比较，环磷酰胺不能升高G422小鼠的胸腺指数，而本发明软胶囊制剂(50.0mg/Kg)能升高小鼠胸腺指数(P＜0.05)，本发明软胶囊制剂(50.0mg/Kg、75.0mg/Kg)能升高G422小鼠的脾脏指数(P＜0.05)。表明本发明软胶囊制剂能增重脾脏、胸腺等免疫器官。

[0109] 综合表5、表6，本发明软胶囊制剂对小鼠G422具有抑制作用，且对脾脏、胸腺等免疫器官具有增强作用。

[0110] [药效试验例4]本发明软胶囊制剂对S180腹水瘤小鼠存活时间的影响

[0111] 肿瘤接种：取肉瘤S180细胞腹腔内接种八天的昆明种小鼠，无菌条件下用5ml注射器抽吸出1-2ml牛奶状、较粘稠的腹水，先用0.4％苔盼蓝染色，计活细胞率＞90％，然后用血球计数板计数癌细胞数，然后用以D-Hanks液稀释调整细胞浓度为1×107个/ml。每只小鼠取0.2ml，进行腹腔注射。

[0112] 昆明种小鼠，20±2g。腋窝皮下接种24h后，随机分成五组：模型对照组(生理盐水)、本发明软胶囊制剂低剂组(37.5mg/Kg)、本发明软胶囊制剂中剂组(50.0mg/Kg)、本发明软胶囊制剂高剂组(75.0mg/Kg)、环磷酰胺组(CTX10mg/Kg)，每组小鼠12只。各受试药组灌服给药，灌胃容积为0.2ml/10g体重，每天一次，连续10天。CTX腹腔注射给药，隔天一次，连续5次。观察记录各组小鼠死亡时间，即存活时间。计算受试药组及环磷酰胺组的小鼠生命延长百分率，生命延长率(％)＝(对照组平均生存天数-给药组平均生存天数)/对照组平均生存天数×100％。

[0113] 数据处理：各给药组与模型对照组比较，统计学处理采用t检验，用

表示。

[0114] 表7本发明软胶囊制剂对S180腹水瘤小鼠体重的影响

[0115]

[0116] 注：各给药组与模型对照组比较**P＜0.01；与模型对照组比较#P＞0.05

[0117] 表8本发明软胶囊制剂对S180腹水瘤小鼠存活时间的影响

[0118]

[0119]

[0120] 注：各给药组与模型对照组比较**P＜0.01；*P＜0.05

[0121] 表7显示，与模型对照组比较，环磷酰胺给药后S180腹水瘤小鼠体重下降(P＜0.01)，而本发明软胶囊制剂三个剂量组的小鼠体重无明显变化(P＞0.05)。

[0122] 表8显示，与模型对照组比较，本发明软胶囊制剂(50.0mg/Kg、75.0mg/Kg)能延长S180腹水瘤小鼠的存活时间(P＜0.05)。

[0123] 综合表7、表8，本发明软胶囊制剂能延长S180腹水瘤小鼠的存活时间，且不会引起体重下降。

[0124] [药效试验例5]本发明软胶囊制剂对H22小鼠化疗的增效作用

[0125] 肿瘤接种：取肝癌H22(H22)细胞腹腔内接种八天的昆明种小鼠，无菌条件下用5ml注射器抽吸出1-2ml牛奶状、较粘稠的腹水，先用0.4％苔盼蓝染色，计活细胞率＞90％，然后用血球计数板计数癌细胞数，然后用以D-Hanks液稀释调整细胞浓度为5.5×106个/ml。取0.1ml注射于小鼠右前肢腋窝皮下，进行接种。

[0126] 昆明种小鼠，20±2g。腋窝皮下接种24h后，称重，随机分成五组：模型对照组(生理盐水)、两组为单用环磷酰胺组(5mg/Kg、10mg/Kg)，另设两组为联合用药(环磷酰胺10mg/Kg+扶正消瘤软胶囊37.5mg/Kg、环磷酰胺10mg/Kg+扶正消瘤软胶囊50.0mg/Kg)，每组小鼠10只。环磷酰胺隔天腹腔注射一次，连续5次，其余均灌服给药，每天一次，连续10天。第11天脱颈椎法处死全部小鼠，完整剥取瘤块，取脾脏和胸腺，计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数。抑瘤率(％)＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％，胸腺指数＝胸腺重(g)×100/体重，脾指数＝脾重量(g)×100/体重。

[0127] 数据处理：各给药组与模型对照组比较，统计学处理采用t检验，用X±S表示。

[0128] 表9本发明软胶囊制剂对H-22小鼠生长的化疗增效作用

[0129]

[0130] 注：各给药组与模型对照组比较*P＜0.05

[0131] 表9显示，与模型对照组比较，CTX5mg/Kg、CTX10mg/Kg、CTX10mg/Kg+本发明软胶囊制剂37.5mg/Kg、CTX10mg/Kg+本发明软胶囊制剂50.0mg/Kg四个组的抑瘤率分别为31.55％、34.37％、46.95％、12.54％。本发明软胶囊制剂37.5mg/Kg与环磷酰胺联合治疗H-22具协同作用，能明显增加环磷酰胺10mg/Kg的抑瘤率，抑瘤率高达46.95％。

[0132] [药效试验例6]本发明软胶囊制剂对S180肉瘤小鼠化疗增效的影响

[0133] 肿瘤接种：取肉瘤S180细胞腹腔内接种八天的昆明种小鼠，无菌条件下用5ml注射器抽吸出1-2ml牛奶状、较粘稠的腹水，先用0.4％苔盼蓝染色，计活细胞率＞90％，然后用血球计数板计数癌细胞数，然后用以D-Hanks液稀释调整细胞浓度为5.5×106个/ml。取0.1ml注射于小鼠右前肢腋窝皮下，进行接种。

[0134] 昆明种小鼠，20±2g。腋窝皮下接种24h后，称重，随机分成五组：模型对照组(生理盐水)、两组为单用环磷酰胺组(5mg/Kg、10mg/Kg)，另设两组为联合用药(环磷酰胺10mg/Kg+本发明软胶囊制剂37.5mg/Kg、环磷酰胺10mg/Kg+本发明软胶囊制剂50.0mg/Kg)，每组小鼠10只。环磷酰胺隔天腹腔注射一次，连续5次，其余均灌服给药，每天一次，连续10天。第11天脱颈椎法处死全部小鼠，完整剥取瘤块，取脾脏和胸腺，计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数。抑瘤率(％)＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％，胸腺指数＝胸腺重(g)×100/体重，脾指数＝脾重量(g)×100/体重。

[0135] 数据处理：各给药组与模型对照组比较，统计学处理采用t检验，用

表示。

[0136] 表10本发明软胶囊制剂对肉瘤S180小鼠生长的化疗增效作用

[0137]

[0138] 注：各给药组与模型对照组比较*P＜0.05

[0139] 表10显示，与模型对照组比较，CTX5mg/Kg、CTX10mg/Kg、CTX10mg/Kg+本发明软胶囊制剂37.5mg/Kg、CTX10mg/Kg+本发明软胶囊制剂50.0mg/Kg四个组的抑瘤率分别为25.84％、33.21％、21.98％、36.60％。本发明软胶囊制剂与环磷酰胺联合治疗S180起协同作用，本发明软胶囊制剂50.0mg/Kg能够增加环磷酰胺10mg/Kg的抑瘤率。

[0140] [药效试验例7]本发明软胶囊制剂对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响

[0141] MTT法检测本发明软胶囊制剂对肝癌细胞株SMMC-7721增殖的抑制作用。

[0142] 取对数生长期细胞，制成8×103个/孔接种于96孔培养板，每孔200ul，分别为本发明软胶囊制剂组(浓度为1.25，1.875，2.5，3.125mg/ml的加药培养基)，空白对照组200ul培养液，每孔设4复孔，37℃、5％CO2继续培养48小时后，培养结束前4h，每孔加入浓度为5mg/ml的MTT20μl，于培养箱中孵育4h后，吸取上清，每孔加入200μl的DMSO，充分震荡，酶标仪检测各孔的光密度吸收值，计算肿瘤细胞生长抑制率。

[0143] 数据处理：各给药组与空白对照组比较，统计学处理采用t检验，用

表示。

[0144] 表11对肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响

[0145]

[0146] 注：各给药组与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01

[0147] 表11显不，与空白对照组比较，本发明软胶囊制剂三个剂量组对肝癌细胞SMMC的增殖均有明显的抑制作用(P＜0.05)；抑瘤率分别为26.27％、19.00％、37.20％。表明本发明软胶囊制剂对人肝癌细胞SMMC-7721具有细胞毒作用。

[0148] [药效试验例8]本发明软胶囊制剂对H22小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响

[0149] 肿瘤接种：取肝癌H22(H22)细胞腹腔内接种八天的昆明种小鼠，无菌条件下用5ml注射器抽吸出1-2ml牛奶状、较粘稠的腹水，先用0.4％苔盼蓝染色，计活细胞率＞90％，然后用血球计数板计数癌细胞数，然后用以D-Hanks液稀释调整细胞浓度为5.5×106个/ml。取0.1ml注射于小鼠右前肢腋窝皮下，进行接种。

[0150] 昆明种小鼠，20±2g。腋窝皮下接种24h后，随机分成六组：正常对照组、模型对照组(生理盐水)、本发明软胶囊制剂低剂组(37.5mg/Kg)、本发明软胶囊制剂中剂组(50.0mg/Kg)、本发明软胶囊制剂高剂组(75.0mg/Kg)、环磷酰胺组(CTX10mg/Kg)，每组小鼠15只。各受试药组灌服给药，灌胃容积为0.2ml/10g体重，每天一次，连续12天。CTX组采用腹腔注射给药，注射量为0.1ml/10g体重，每天一次，连用12天。

[0151] 对脾淋巴细胞增殖反应的影响：第13天脱颈椎法处死全部小鼠。无菌条件取小鼠脾，捻碎，加D-Hanks液2ml冲洗细胞，1200r/min离心细胞5min，弃上清液，用培养液洗2次，制成脾细胞悬液，调整细胞浓度为2×106个/ml备用。将每一份脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μlConA液(相当于7.5μg/ml)，另一孔作为对照，置5％CO2、37℃CO2孵箱中培养72h。培养结束前4h，加入MTT(5mg/ml)10μl/孔。培养结束后，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，再加入0.7mlDMSO。然后分装到96孔培养板中(200μl/孔)，每个孔设平行孔3个。用酶标仪，以570nm波长测定光密度值(OD)。

[0152] 数据处理：模型对照组与正常对照组比较，各给药组与模型对照组比较，统计学处理采用t检验，用

表示。

[0153] 表12本发明软胶囊制剂对H-22小鼠脾淋巴细胞转化的影响

[0154]

[0155] 注：模型对照组与正常对照组比△△P＜0.01；△P＜0.05

[0156] 各给药组与模型对照组比较**P＜0.01；*P＜0.05

[0157] 表12显示，与正常对照组比较，模型对照组的小鼠脾淋巴细胞转化率降低(P＜0.01)。与模型组比较，环磷酰胺不能升高小鼠脾淋巴细胞转化率，而本发明软胶囊制剂(50.0mg/Kg、75.0mg/Kg)能显著提高小鼠脾淋巴细胞转化率(P＜0.05)。表明本发明软胶囊制剂能够提高小鼠脾淋巴细胞转化，增强免疫。

[0158] 以上进行了S180肉瘤、肝癌H22、脑胶质瘤G422等多种瘤株的体内外抑制试验、化疗增效试验以及免疫试验。

[0159] (1)体内抑瘤试验表明：①本发明软胶囊制剂(37.5mg/Kg、50.0mg/Kg、75.0mg/Kg)三个剂量组对S180肉瘤均有抑制作用，抑瘤率分别为23.9％、25.3％、63.5％；50.0mg/Kg、75.0mg/Kg能延长S180腹水瘤小鼠的生命期；环磷酰胺会引起S180小鼠体重与胸腺指数的下降，而本发明软胶囊制剂不会引起体重与胸腺指数下降；本发明软胶囊制剂50.0mg/Kg与环磷酰胺10mg/Kg联合治疗S180起协同作用。②本发明软胶囊制剂50.0mg/Kg对H22小鼠的抑瘤率为24.12％：本发明软胶囊制剂37.5mg/Kg与环磷酰胺10mg/Kg联合治疗H22起协同作用，抑瘤率高达46.95％。③本发明软胶囊制剂75.0mg/Kg对G422脑胶质瘤的抑瘤率为22.99％，且能升高小鼠的脾脏指数：50.0mg/Kg能升高小鼠的脾脏指数、胸腺指数。

[0160] (2)体外抑瘤试验表明，本发明软胶囊制剂对人肝癌细胞SMMC-7721具细胞毒作用。

[0161] (3)免疫试验表明，环磷酰胺不能促进H-22小鼠T淋巴细胞的转化，而本发明软胶囊制剂能促进H-22小鼠T淋巴细胞的转化。

[0162] 综上所述，本发明软胶囊制剂对S180肉瘤、H22肝癌、G422脑胶质瘤具有抑制作用，延长S180小鼠的生命期，提高G422、H22小鼠的免疫功能，与环磷酰胺联合用药能增强抑制小鼠S180和H22的生长。

Claims (4)

1、一种治疗恶性肿瘤的中药制剂，其特征在于由下列重量份数的原料药制备而成：

夏枯草  15～25份   仙鹤草  15～25份     白花蛇舌草  15～25份

半枝莲  15～25份   黄药子  10～20份     猪苓        10～20份

苦参    5～15份    猫爪草  10～20份     海浮石      10～20份

生晒参  5～10份    生黄芪  10～20份     灵芝        3～7份

水牛角  10～20份   羚羊角  1～2份       野菊花      5～15份

金钱草  10～20份   莪术    10～20份     干蟾皮      3～7份

生甘草  1～2份

2、根据权利要求书1所述的治疗恶性肿瘤的中药制剂，其特征在于由下列重量份数的原料药制备而成：

夏枯草  20份    仙鹤草  20份      白花蛇舌草  20份

半枝莲  20份    黄药子  15份      猪苓        15份

苦参    10份    猫爪草  15份      海浮石      15份

生晒参  7份     生黄芪  15份      灵芝        5份

水牛角  15份    羚羊角  1份       野菊花      10份

金钱草  15份    莪术    15份      干蟾皮      5份

生甘草  1份

3、根据权利要求书1或2所述的治疗恶性肿瘤的中药制剂，其特征在于其型剂为软胶囊。

4、权利要求书3所述治疗恶性肿瘤的中药制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(a)取生晒参、生黄芪、莪术置于超临界萃取罐中，加入75％的乙醇为夹带剂进行萃取，萃取后将提取液与残留药物分别贮存备用，提取液中乙醇低温回收；

(b)将萃取后的残留药物和夏枯草、仙鹤草、白花蛇舌草、半枝莲、黄药子、猪苓、苦参、猫爪草、海浮石、灵芝、水牛角、野菊花、金钱草、干蟾皮以及生甘草一起加水浸渍1～2小时后，煎煮二次，每次煎煮时间1～2小时，合并煎出液过滤浓缩至清膏；

(c)将上述超临界萃取的提取液、浓缩清膏及磨成80～100目的羚羊角粉混合并加入适量葵花油，置胶体磨，粉碎乳化制成软胶囊。