CN100438882C

CN100438882C - 一种桑黄保健口服液的制备方法

Info

Publication number: CN100438882C
Application number: CNB2005100443547A
Authority: CN
Inventors: 傅海庆; 陈绍军
Original assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Current assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date: 2005-08-02
Filing date: 2005-08-02
Publication date: 2008-12-03
Anticipated expiration: 2025-08-02
Also published as: CN1907301A

Abstract

一种桑黄保健口服液的制备方法，以桑黄菌为出发菌株，进行液体发酵，获得大量的桑黄发酵醪；然后将发酵醪中的菌丝用热水浸提法获得富含桑黄多糖的提取液，并与发酵液一起制成浓缩液；最后将此浓缩液调配成适口性良好的口服液。本发明工艺稳定可靠，适合于工业化生产。通过液体发酵其干菌丝得率高达4.5%，菌丝多糖含量可达9.89%。产品经药效学试验，表明具有很好的增强免疫效果。

Description

一种桑黄保健口服液的制备方法

技术领域

本发明涉及一种口服液的制备方法，特别是用液体发酵法制备桑黄保健口服液的方法。

技术背景桑黄(Phellinus igniarius(L.ex Fr.)Quel)，属担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科、针层孔菌属(Phellinus)，俗称火木层孔菌、针层孔菌、桑耳、桑臣、胡孙眼等，是一种珍贵的药用真菌。在我国传统中药中，主要用以治疗淋病、崩漏、带下，疵瘕积聚，癖软，脾虚泄泻等，在日本则作为利尿剂使用。近年来，国内外学者对桑黄的药理作用作了较为深入的研究，桑黄子实体及其提取物除了具有传统上的药理作用以外，还具有抗癌、抗肿瘤、抗诱变、免疫调节、保肝和抗肝硬化等作用。由于野生桑黄越来越稀少，且外销需求量大。在我国，桑黄的人工栽培研究才刚刚起步，无法满足市场的需求。桑黄加工品在国际医药市场上价格昂贵、供不应求。研究以大量人工发酵菌丝体在生产上应用，这对于保护天然资源、解决资源缺乏，具有十分重要的意义。

经检索，该技术领域有章卫民等的“桑黄菌丝体制品及其生产方法和用途”(专利申请号01127760.2)以及敖宗华等的“大规模液体深层发酵生产桑黄水提取物及多糖工艺”(专利申请号200410013869.6)，他们均对桑黄的液体发酵工艺进行了阐述，并将制成的产品用在肝炎、癌症上。

目前在该领域的技术上存在菌丝产量和菌丝粗多糖含量较低、在发酵产物上没有作有效的提取利用等问题。目前，尚未见将桑黄液体发酵培养物制成具有增强免疫功能的口服液的报道。

发明内容

本发明的目的是利用液体发酵法制备具有保健功效的桑黄口服液。

本发明的一种桑黄保健口服液的制备方法，以桑黄菌为出发菌株，进行液体发酵，获得大量的桑黄发酵醪；然后将发酵醪中的菌丝用热水浸提法获得富含桑黄多糖的提取液，并与发酵液一起制成浓缩液；最后将此浓缩液调配成适口性良好的保健口服液。

本发明的一种桑黄保健口服液的制备方法，包括以下步骤：

1.桑黄菌的液体发酵：

1.1将桑黄保存种用马铃薯培养基(PDA培养基)进行活化、复壮，置25-32℃恒温箱静止培养10-15天，得到生产斜面种，置冰箱中冷藏备用；所述的PDA培养基的配方为(g/L)：去皮马铃薯200，葡萄糖20，琼脂20，加水定容至所需体积，pH自然；

1.2将生产斜面种用摇瓶培养基进行扩大培养，得到生产摇瓶一级种；所述的摇瓶培养基的配方为(g/L)：玉米粉30-60、麸皮粉20-40、KH₂PO₄ 1-3、MgSO₄·7H₂O 1-2、VB₁ 0.05-0.15，加水定容至所需体积，pH自然；培养条件为：以100-200mL/500mL装量，接入1cm²的斜面菌种，旋转式摇床80-200rpm培养7-10d，温度25-32℃；

1.3将生产摇瓶一级种用5-20％的接种量，按步骤1.2所述的摇瓶培养基配方和培养条件，再次扩大培养4-6天，得生产摇瓶二级种；

1.4将生产摇瓶二级种转接入装有发酵培养基的种子罐进行扩大培养得到发酵一级种；所述的发酵培养基配方为(g/L)：黄豆粉30-60、玉米粉20-40、麸皮粉3-6、酵母粉3-5、CaSO₄ 5-10、K₂SO₄ 0-2、Na₂HPO₄0-2、ZnSO₄·7H₂O 0-0.5、FeSO₄·7H₂O 0-1、VB₁ 0-0.5，加水定容至所需体积，pH 5-8；培养条件为：接种量1-10％，罐温25-32℃，罐压0.03-0.07MPa，搅拌转速80-200rpm，通气量1∶0.3-1.0v/v.min，发酵培养3-4d；

1.5按步骤1.4所述的发酵培养基配方和培养条件，将发酵一级种转接入装有发酵培养基的发酵罐培养，发酵4-6天放罐，得发酵醪。

2.浓缩液的制备：

2.1将发酵醪经板框压滤后，得到发酵液和富含菌丝的滤渣A；

2.2将滤渣A加入2-5倍重量的水，置95-100℃水浴中提取1-2h，经板框压滤得提取液C和滤渣B；将该滤渣B再重复提取、过滤1-2次，得提取液D。

2.3合并所述发酵液、提取液C和提取液D，50-70℃，0.05-0.095MPa低温真空浓缩至可溶性固形物为2-8％，得浓缩液。

3.口服液的调制：

3.1将所述浓缩液煮沸，离心去除其中的不溶物质后，按重量比加入蛋白糖100-400ppm，食用磷酸150-300ppm，乙基麦芽酚0-150ppm；

3.2将调配好的口服液装瓶、锁盖、杀菌，经检验合格后即为产品。

本发明的一种桑黄保健口服液的制备方法，工艺稳定可靠，适合于工业化生产。制备方法的配方成分，筛选了适合桑黄菌丝生长的原料及配比，并且将不溶性原料磨成150目的细粉，原料得到充分的利用，发酵生产获得大量产物，其干菌丝得率高达4.5％，菌丝粗多糖含量可达9.89％。

将本发明的桑黄保健口服液，按徐叔云等的《药理实验方法学》(1982年)方法进行增强免疫的药效学试验，其结果如下：

1、桑黄口服液对小鼠免疫器官重量的影响(见表1)：

桑黄口服液对小鼠胸腺无明显影响；桑黄口服液小剂量(10mL/kg)使小鼠肾上腺重量明显减轻；大剂量(40mL/kg)桑黄口服液使小鼠脾脏重量明显增加，说明桑黄口服液具有提高网状内皮系统功能的作用。

表1桑黄口服液对小鼠免疫器官重量的影响(mg/10g体重，n＝10)

注：*表示显著性水平达0.05，**表示显著性水平达0.01，生理盐水组作对照，下同。

2、桑黄口服液对小鼠碳粒廓清率的影响(见表2)：

桑黄口服液20和40mL/kg小鼠灌胃给药可显著提高小鼠碳粒廓清能力，使廓清指数K和吞噬指数a明显高于生理盐水组，经统计学处理，差异具有显著性意义。

表2桑黄口服液对小鼠碳粒廓清率的影响(n＝10)

3、桑黄口服液对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(见表3)：

桑黄口服液20和40mL/kg小鼠灌胃给药，可提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力，使巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率由对照组的13.7％分别提高到22.2和34.7％，差别具有显著性意义，说明桑黄口服液具有提高巨噬细胞吞噬能力的作用。

表3桑黄口服液灌胃给药对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响(n＝6)

以上实验表明，桑黄口服液大剂量(40mL/kg)使小鼠脾脏重量显著增加；桑黄口服液20mL/kg和40mL/kg剂量组能明显提高碳廓清指数K和吞噬指数a，并能明显提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力，使巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率由对照组的13.7％分别提高到22.2％和34.7％。这些结果说明，桑黄口服液具有提高网状内皮系统功能的作用，可显著提高小鼠碳粒廓清能力，并具有提高巨噬细胞吞噬能力的作用，即产品具有显著提高免疫功能的作用。

本发明通过液体发酵的方法，能获得大量的所需产物，用热水提取法能获得富含桑黄多糖的浓缩液，配制成具有显著增强免疫功能保健口服液。该工艺的应用，还能够保护天然资源、缓解目前野生桑黄资源严重缺乏的问题，部分代替桑黄子实体进行应用。

具体实施例为充分公开本发明的一种桑黄保健口服液的制备方法，下面结合实施例加以说明。

实施例：一种桑黄保健口服液的制备方法，包括以下步骤：

1.桑黄菌的液体发酵：

1.1将桑黄保存种用马铃薯培养基(PDA培养基)进行活化、复壮，置(28±1)℃恒温箱静止培养15天，得到生产斜面种，然后置冰箱中冷藏备用；

1.2将生产斜面种用摇瓶培养基进行扩大培养，得到生产摇瓶一级种；所述的摇瓶培养基的配方为(g/L)：玉米粉50、麸皮粉30、KH₂PO₄ 3、MgSO₄·7H₂O 1.5、VB₁ 0.1，加水定容至所需体积，pH自然；其培养条件为：以160mL/500mL装量，接入约1cm²的斜面菌种，旋转式摇床140rpm培养8d，温度(28±1)℃；

1.3将生产摇瓶一级种用15％的接种量，按步骤1.2所述的摇瓶培养基配方和培养条件，再次用摇瓶培养基进行扩大培养5天，得到生产摇瓶二级种；

1.4将生产摇瓶二级种转接入装有发酵培养基的200L种子罐进行扩大培养得到发酵一级种；所述发酵培养基配方为(kg/100L)：黄豆粉4、玉米粉3、麸皮粉0.5、酵母粉0.4、CaSO₄ 1、K₂SO₄ 0.1、Na₂HPO₄ 0.15、ZnSO₁·7H₂O 0.01、FeSO₄·7H₂O 0.05、VB₁ 0.01，加水定容至100L，pH为7；其培养条件为：接种量4L，罐温(28±1)℃，罐压0.05MPa，搅拌转速100rpm，通气量1∶0.5v/v.min，发酵培养4d；

1.5按步骤1.4所述的发酵培养基配方和培养条件，将发酵一级种全部转接入装有2500L发酵培养基的5000L发酵罐中培养，发酵6天放罐，得发酵醪。此时，测定干菌丝得率可达4.5％以上，菌丝粗多糖含量可达9.89％以上。

2.浓缩液的制备：

2.1将发酵醪经板框压滤后，得到发酵液和富含菌丝的滤渣E；

2.2将滤渣E加入3倍重量的水，置(95±1)℃水浴中提取1.5h，经板框压滤得提取液G和滤渣F；将滤渣F再重复提取、过滤1次，得提取液H；

2.3合并所述发酵液、提取液G和提取液H，50℃ 0.09MPa低温真空浓缩至可溶性固形物为3％，得浓缩液。

3.口服液的调制：

3.1将所述浓缩液煮沸，离心去除其中的少量不溶物质后，按重量比加入蛋白糖300ppm，食用磷酸150ppm，乙基麦芽酚100ppm；

3.2调配好的口服液趁热用250mL盐水瓶灌装、锁盖，经水浴杀菌并检验合格后即成为产品；水浴杀菌的公式为：5’-10’/100℃。

所得产品呈浅黄色、酸甜可口；含有丰富的矿物元素和17种以上的氨基酸，多糖含量达5mg/mL以上；具有显著的增强免疫功能。

以上所有培养基中的不溶性原料，宜磨成150目的细粉；所有培养基配方中的化学原料均为固体分析纯。

Claims

1、一种桑黄保健口服液的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：

1.1桑黄菌的液体发酵：

1.1.1将桑黄保存种用马铃薯培养基进行活化、复壮，置25-32℃恒温箱静止培养10-15天，得到生产斜面种，置冰箱中冷藏备用；

1.1.2将生产斜面种用摇瓶培养基进行扩大培养，得到生产摇瓶一级种；所述的摇瓶培养基的配方为g/L：玉米粉30-60、麸皮粉20-40、KH₂PO₄1-3、MgSO₄·7H₂O 1-2、VB₁ 0.05-0.15、pH自然；培养条件为：以100-200mL/500mL装量，接入1cm²的斜面菌种，旋转式摇床80-200rpm培养7-10d，温度25-32℃；

1.1.3将生产摇瓶一级种用5-20％的接种量，按步骤1.1.2所述的培养基配方和培养条件，再次扩大培养4-6天；得生产摇瓶二级种；

1.1.4将生产摇瓶二级种转接入装有发酵培养基的种子罐进行扩大培养得到发酵一级种；所述的发酵培养基配方为g/L：黄豆粉30-60，玉米粉20-40，麸皮粉3-6，酵母浸出汁3-5，CaSO₄ 5-10，K₂SO₄ 0-2，Na₂HPO₄ 0-2，ZnSO₄·7H₂O 0-0.5，FeSO₄·7H₂O 0-1，VB₁ 0-0.5，pH为5-8；培养条件为：接种量1-10％，罐温25-32℃，罐压0.03-0.07MPa，搅拌转速80-200rpm，通气量1∶0.3-1.0v/v.min，发酵培养3-4d；

1.1.5按步骤1.1.4所述的培养基配方和培养条件，将发酵一级种转接入装有发酵培养基的发酵罐培养，发酵4-6天放罐，得发酵醪；

1.2.浓缩液的制备：

1.2.1将发酵醪经板框压滤后，得到发酵液和富含菌丝的滤渣A；

1.2.2将滤渣A加入2-5倍重量的水，置95-100℃水浴中提取1-2h，经板框压滤得提取液和滤渣B；将该滤渣B再重复提取、过滤1-2次，得提取液；

1.2.3合并所述发酵液和提取液，50-70℃，0.05-0.095MPa低温真空浓缩至可溶性固形物为2-8％，得浓缩液；

1.3.口服液的调制：

1.3.1将所述浓缩液煮沸，离心去除其中的不溶物质后，按重量比加入蛋白糖100-400ppm，食用磷酸150-300ppm，乙基麦芽酚0-150ppm；

1.3.2将调配好的口服液装瓶、锁盖、杀菌经检验合格后即为产品。

2、根据权利要求1所述的一种桑黄保健口服液的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：

2.1.桑黄菌的液体发酵：

2.1.1将桑黄保存种用马铃薯培养基进行活化、复壮，置28±1℃恒温箱静止培养15天，得到生产斜面种，然后置冰箱中冷藏备用；

2.1.2将生产斜面种用摇瓶培养基进行扩大培养，得到生产摇瓶一级种；所述的摇瓶培养基的配方为g/L：玉米粉50、麸皮粉30、KH₂PO₄ 3、MgSO₄·7H₂O 1.5、VB1 0.1、pH自然；其培养条件为：以160mL/500mL装量，接入约1cm²的斜面菌种，旋转式摇床140rpm培养8d，温度28±1℃；

2.1.3将生产摇瓶一级种用15％的接种量，按步骤2.1.2所述的培养基配方和培养条件，再次用摇瓶培养基进行扩大培养5天，得到生产摇瓶二级种；

2.1.4将生产摇瓶二级种转接入装有发酵培养基的种子罐进行扩大培养得到发酵一级种；所述发酵培养基配方为g/L：黄豆粉40，玉米粉30，麸皮粉5，酵母浸出汁4，CaSO₄ 10，K₂SO₄ 1，Na₂HPO₄ 1.5，ZnSO₄·7H₂O 0.1，FeSO₄·7H₂O 0.5，VB₁ 0.1，pH为7；其培养条件为：接种量4％，罐温28±1℃，罐压0.05MPa，搅拌转速100rpm，通气量1∶0.5v/v.min，发酵培养4d；

2.1.5按步骤2.1.4所述的培养基配方和培养条件，将发酵一级种转接入装有发酵培养基的发酵罐培养，发酵6天放罐，得发酵醪；

2.2.浓缩液的制备：

2.2.1将发酵醪经板框压滤后，得到发酵液和富含菌丝的滤渣C；

2.2.2将滤渣C加入3倍重量的水，置95±1℃水浴中提取1.5h，经板框压滤得提取液E和滤渣D；将滤渣D再重复提取、过滤1次，得提取液F；

2.2.3合并所述发酵液、提取液E和提取液F，50℃0.09MPa低温真空浓缩至可溶性固形物为3％，得浓缩液；

2.3.口服液的调制：

2.3.1将所述浓缩液煮沸，离心去除其中的少量不溶物质后，按重量比加入蛋白糖300ppm，食用磷酸150ppm，乙基麦芽酚100ppm；

2.3.2调配好的口服液趁热用250mL盐水瓶灌装、锁盖，经水浴杀菌并检验合格后即成为产品；水浴杀菌的公式为：5’-10’/100℃。

3、根据权利要求1或2所述的一种桑黄保健口服液的制备方法，其特征在于所有培养基中的不溶性原料，宜磨成150目的细粉。