CH716073B1 - Retard-Mischlösung zur Etablierung eines Endometriose-Mausmodells und deren Herstellungsverfahren. - Google Patents
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Abstract
Bereitgestellt werden eine Retard-Mischlösung, die zur Bereitstellung eines exogenen Östrogenträgers für die Etablierung eines Endometriose-Mausmodells verwendet wird, und ein Herstellungsverfahren dafür Die Retard-Mischlösung umfasst: 0,5 -1,0 mg/ml Östrogenpulver, wobei der Rest ein wärmeempfindliches Hydrogel ist; wobei g/ml ein Verhältnis des Östrogenpulvers zum Volumen des wärmeempfindlichen Hydrogels ist, und wobei das warmempfindliche Hydrogel ein wärmeempfindliches Polyethylenglykol (PEG)-Polyester-Diblock-Hydrogel ist. Das Herstellungsverfahren umfasst die folgenden Schritte: 1) Entnahme eines wärmeempfindlichen Polyethylenglykol (PEG)-Polyester-Diblock Hydrogels aus einem Kühlschrank und Auftauen des Hydrogels bei Raumtemperatur zu einer transparenten Flüssigkeit; 2) Hinzugeben eines Östrogenpulvers zu dem Hydrogel; 3) Platzieren auf einen Schüttler und Schütteln, um das Östrogenpulver vollständig mit dem Hydrogel zu vermischen; und 4) Lagern im Kühlschrank nach der Dosierung.
Description
TECHNISCHES GEBIET
[0001] Die vorliegende Erfindung betrifft den biologischen Bereich und insbesondere eine wärmeempfindliche Retard-Mischlösung, die zur Bereitstellung eines stabilen und praktischen exogenen Östrogenträgers für die Etablierung eines Endometriose-Mausmodells verwendet wird.
HINTERGRUND
[0002] Endometriose ist eine wesentliche Ursache von Beckenschmerzen und Unfruchtbarkeit bei reproduktiven Frauen. Bisher ist die Pathogenese von Endometriose unklar, und es besteht ein Mangel an therapeutischen Mitteln. Aus ethischen Gründen ist es schwierig, die Pathogenese, Stoffwechselveränderungen, Medikamentenwirkung und Krankheitsprognose zu erforschen. In vitro Tiermodelle lösen diese Einschränkung im Wesentlichen. Die Verwendung von Endometriose-Mausmodellen ist in verwandter Forschung der Endometriose weit verbreitet.
[0003] Endometriose ist eine östrogenabhängige Erkrankung. Die Entwicklung eines Endometriose-Mausmodells spielt eine grundlegende Rolle bei der Untersuchung der Pathogenese von Endometriose und bei der Entwicklung eines neuen therapeutischen Mittels. Experimentell konstruierte Endometriose-Mausmodelle benötigen einen exogenen Östrogenträger, um das anhaltende Wachstum von ektopischen Läsionen aufrechtzuerhalten. Die vorhandenen exogene Östrogenträger werden vorwiegend in drei Gruppen eingeteilt: 1. intraperitoneale Injektion einer wässrigen Östrogen-Lösung; 2. subkutane Injektion einer Ostrogen-Ollösung; und 3. subkutane Implantation einer Östrogen-Retard-Tablette. Die wässrige Östrogen-Lösung muss täglich oder jeden zweiten Tag intraperitoneal injiziert werden. Die Östrogen-Öllösung kann jede Woche subkutan verabreicht werden, jedoch ist die subkutane Injektion eines medizinischen Öls schwierig und mit hoher lokaler Irritation verbunden. Die anhaltende Freisetzung der Östrogen-Retard-Tablette nach subkutaner Implantation kann eine stabile Östrogenkonzentration im Blut aufrechterhalten, erfordert jedoch eine chirurgische Implantation und bringt hohe Kosten mit sich (100 Tabletten in einer Einzelbox kosten 4.157 US-Dollar, d. h. der Einheitspreis einer einzelnen Tablette liegt durchschnittlich bei 300 Yuan), wodurch deren Verwendung in der experimentellen Forschung beschränkt wird. Ein praktisches und wirtschaftliches Verfahren zum Östrogenersatz mit einer eindeutigen Östrogenträger-Wirkung wird die Erforschung von Endometriose fördern.
ZUSAMMENFASSUNG
[0004] Das technische Problem, das durch die vorliegende Erfindung gelöst werden soll, besteht darin, eine wärmeempfindliche Östrogen-Hydrogel-Retard-Mischlösung (kurz gefasst: Retard-Mischlösung) mit einem wärmeempfindlichen Hydrogel als Vektor und deren Herstellungsverfahren bereitzustellen, um die Mängel im Stand der Technik zu überwinden, wodurch ein stabiler, praktischer und kostengünstiger exogener Östrogenträger zur Etablierung eines Endometriose-Mausmodells bereitgestellt wird.
[0005] Die vorliegende Erfindung stellt die folgenden technischen Lösungen bereit: Eine Retard-Mischlösung zur Etablierung eines Endometriose-Mausmodells, umfassend die folgenden Komponenten: 0,5 -1,0 mg/ml Östrogenpulver, wobei der Rest ein wärmeempfindliches Hydrogel ist; wobei mg/ml ein Verhältnis des Östrogenpulvers zum Volumen des wärmeempfindlichen Hydrogels ist, und wobei das wärmeempfindliche Hydrogel ein wärmeempfindliches Polyethylenglykol (PEG)-Polyester-Diblock-Hydrogel ist.
[0006] Eine Retard-Mischlösung zur Herstellung eines Endometriose-Mausmodells, umfassend die folgenden Komponenten: 0,8 mg/ml Östrogenpulver, wobei der Rest das wärmeempfindliche Hydrogel ist.
[0007] Ein Verfahren zur Herstellung einer Retard-Mischlösung, die zur Etablierung eines Endometriose-Mausmodells verwendet wird, umfassend die folgenden Schritte: 1) Entnahme eines wärmeempfindlichen Polyethylenglykol (PEG)-Polyester-Diblock-Hydrogels aus einem Kühlschrank und Auftauen des Hydrogels bei Raumtemperatur zu einer transparenten Flüssigkeit; 2) Hinzugeben eines Östrogenpulvers zu dem Hydrogel gemäß einem Verhältnis des Östrogenpulvers zu dem wärmeempfindlichen Hydrogel; 3) Platzieren auf einen Schüttler und Schütteln, um das Östrogenpulver vollständig mit dem Hydrogel zu vermischen, zum Herstellen einer Retard-Mischlösung; und 4) Lagern der Retard-Mischlösung im Kühlschrank nach der Dosierung. Der Kühlschrank im Schritt 1) und im Schritt 4) wird auf eine Temperatur von unter -30°C eingestellt.
[0008] Die Etablierung des Endometriose-Mausmodells umfasst die folgenden Schritte: 1) Entnahme von Endometrium aus Donor-Mäusen: tägliches intraperitoneales Injizieren von 0,1 ml einer Östrogenlösung (30 µg/ml) in fünf Donor-Mäuse des Institute-of-Cancer-Research (ICR) ab einer Woche vor Transplantation; Töten und Operieren der Mäuse nach einer Woche; Abtrennen der Uteri von den Mäusen; dreifaches Spülen in einer Phosphatpuffer-Salzlösung (PBS); Längsschneiden an der Uteri, um das Endometrium nach außen zu ziehen; Erhalten von zwei gleich langen Abschnitten der Uteri von jeder Maus, und Platzieren im sterilen PBS zur Transplantation; 2) chirurgisches Transplantieren in Empfängermäuse: Anästhesieren von jeder von neun Donor-ICR-Mäusen durch intraperitoneale Injektion, um eine offene Operation durchzuführen; Fixieren des vorbereiteten Abschnitts des Endometriums außen am Mesenterium mit sterilen Nähten; schichtweises Schließen des Baucheinschnitts mit einer durchgehenden Naht, und Zurücksetzen jeder Maus in einen Käfig nach Desinfektion mit PVP-I; Fasten der Mäuse für 24 Stunden, jedoch mit freiem Zugang zu Wasser; reguläres Füttern der Mäuse nach 24 Stunden.
Vorteilhafte Effekte
[0009] Die vorliegende Erfindung hat die folgenden vorteilhaften Effekte: Die Retard-Mischlösung, die mit dem bereitgestellten wärmeempfindlichen Hydrogel beladen wurde, weist nach subkutaner Injektion in eine ICR-Maus eine lang andauernde retardierende Wirkung auf. Darüber hinaus kann die wöchentliche subkutane Injektion der Retard-Mischlösung mit 0,5 - 1,0 mg/ml Östrogen die Etablierung des Endometriose-Mausmodells effektiv unterstützen und sollte aufgrund von Vorteilen der Wirtschaftlichkeit (5 Yuan pro Injektion), einfacher Handhabung, Zeitersparnis und hervorragender Ergebnisse weiterverbreitet werden.
KURZE BESCHREIBUNG DER ABBILDUNGEN
[0010] ABB. 1 zeigt einen Vergleich des Zustands eines wärmeempfindlichen Hydrogels bei verschiedenen Temperaturen (Abbildung A ist der Zustand des wärmeempfindlichen Hydrogels bei Raumtemperatur, und Abbildung B ist der Zustand des wärmeempfindlichen Hydrogels bei 37°C). ABB. 2 veranschaulicht schematisch ein Freisetzungsmuster bei verschiedenen Konzentrationen der Retard-Mischlösung. ABB. 3 zeigt ein schematisches Diagramm der Freisetzungszeit und Konzentration der Retard-Mischlösung. ABB. 4 veranschaulicht die Gelbildung nach subkutaner Injektion der Retard-Mischlösung in einer Maus. ABB. 5 veranschaulicht eine allgemeine Darstellung von ektopischen Zysten in einer Modellmaus, der tägliche eine Östrogen-Lösung intraperitoneal injiziert wurde, gegenüber einer Modellmaus, der wöchentlich eine Retard-Mischlösung subkutan injiziert wurde. ABB. 6 zeigt einen Vergleich zwischen den Hämatoxylin-Eosin (HE)-Färbeergebnissen von ektopischen Zystengeweben einer Modellmaus, der tägliche eine Östrogen-Lösung intraperitoneal injiziert wurde und einer Modellmaus, der wöchentlich eine Retard-Mischlösung subkutan injiziert wurde, und dem eutopischen Endometrium einer normaler Maus.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG
[0011] Wärmeempfindliches Hydrogel ist ein neuwertiges Material, welches zunehmend als Vektor für Arzneimittel verwendet wird. Der Zustand des wärmeempfindlichen Hydrogels variiert mit der Temperatur. Bei Raumtemperatur ist das wärmeempfindliche Hydrogel eine transparente Lösung, wobei das Arzneimittel leicht in die Lösung eingemischt werden kann. Wenn die Temperatur ansteigt, d. h. bei etwa 37°C, geht das wärmeempfindliche Hydrogel in einen milchig-weißen Gelzustand über, wodurch das Arzneimittel langsam freigesetzt werden kann. Die aus dem wärmeempfindlichen Hydrogelmaterial abgebauten Produkte sind für den menschlichen Körper per se unschädlich, wodurch weder Irritation noch andere nachteilige Immunanworten im Gewebe induziert werden, was es ermöglicht, das wärmeempfindliche Hydrogel als subkutanen Arzneimittelvektor zu benutzen.
[0012] Die weitere Beschreibung steht im Zusammenhang mit dem in den Zeichnungen dargestellten Beispiel.
[0013] I. Das Verfahren zur Herstellung der Retard-Mischlösung mit wärmeempfindlichem Hydrogel als Vektor, die durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird, umfasst die folgenden Schritte: 1. Wichtige Reagenzien und Vorrichtung
Wärmeempfindliches Polyethylenglykol (PEG)-Polyester-Diblock-Hydrogel (mPEG-PLGA, Shanghai Funing Technology Co., Ltd.); und
βEstradiol (β-Östradiol) (Sigma-Aldrich, Milano, Italy). 2. Herstellung der wärmeempfindlichen Östrogen-Hydrogel-Retard-Mischlösung 1) Eine Flasche mit wärmeempfindlichen Hydrogel wurde bei -30°C aus einem Kühlschrank entnommen und bei Raumtemperatur zu einer transparenten Flüssigkeit aufgetaut, und dosiert, um wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden. Während der Handhabung sollte vermieden werden, die Wand des Röhrchens direkt mit den Händen zu berühren, um einer Gelbildung vorzubeugen. 2) Acht Milligramm β-Östradiol-Pulver wurden abgewogen und in 10 ml des wärmeempfindlichen Hydrogels gegeben, auf einen Schüttler platziert und geschüttelt, um das Östrogenpulver vollständig mit dem wärmeempfindlichen Hydrogel zu vermischen. Die erhaltene Mischlösung wurde in 1,5 ml EP-Röhrchen gegeben und im Kühlschrank bei -30°C aufbewahrt. 3. Verwendung der wärmeempfindlichen Östrogen-Hydrogel-Retard-Mischlösung 1) Die vorbereitete 0,8 mg/ml wärmeempfindliche Östrogen-Hydrogel-Retard-Mischlösung wurde aus dem Kühlschrank bei -30°C entnommen und bei Raumtemperatur aufgetaut. Während der Handhabung sollte vermieden werden, die Wand des Röhrchens direkt mit den Händen zu berühren, um einer Gelbildung vorzubeugen. 2) Nachdem die Mäuse modelliert wurden, wurde die wärmeempfindliche Östrogen-Hydrogel-Retard-Mischlösung subkutan in den Rücken der Modellmäuse injiziert; für eine bessere Gelbildung in situ, wurden die Mäuse für 30 s immobilisiert; 0,2 ml der 0,8 mg/ml Retard-Mischlösung wurden wöchentlich in jede Maus injiziert.
II. Analyse und Forschung
1. Zustandsänderung des wärmeempfindlichen Hydrogels bei unterschiedlichen Temperaturen
[0014] Es ist aus ABB. 1 ersichtlich, dass das wärmeempfindliche Hydrogel bei Raumtemperatur eine transparente Flüssigkeit ist (Abbildung A wurde bei 25°C aufgenommen), während es bei 37°C ein milchig-weißes Gel ist (Abbildung B).
2. Freisetzungsmuster der Retard-Mischlösung in den Mäusen
[0015] Um das Freisetzungsmusters der Retard-Mischlösung in ICR-Mäusen nach subkutaner Injektion zu untersuchen, wurden die Östrogenkonzentrationen im Blut der Mäuse nach Injektion der Retard-Mischlösung mit unterschiedlichen Östrogenkonzentrationen zu unterschiedlichen Zeitpunkten beobachtet.
2.1 Konzentrationseffekt
[0016] ICR-Mäusen wurde subkutan 0,2 ml einer 0, 0,15, 0,3, 0,6, 0,9, 1,5 und 3 mg/ml Retard-Mischlösung injiziert; drei Tage später wurden die Östrogenkonzentrationen im Blut jeweils wie folgt gemessen: A: 11 pg/ml, B: 19 pg/ml, C: 267 pg/ml, D: 323 pg/ml, E: 1.076 pg/ml, F: 2.784 pg/ml und G: 3.377 pg/ml. Die Östrogenkonzentrationen im Blut der Mäuse standen im linearen Zusammenhang mit den Konzentrationen der Retard-Mischlösungen (ABB. 2). Es wurde in der Literatur angegeben, dass 21 Tage nach subkutaner Implantation von niedrig dosierten Östrogen-Retard-Tabletten in Mäusen, die Östrogenkonzentration im Blut bis zu 792,5 ± 743,3 mg/ml (14) betragen könnte. Anhand des Diagramms der Freisetzungsmuster von verschiedener Konzentration der Retard-Mischlösung, erlangten die Erfinder eine stabile Östrogenkonzentration im Blut bei einer wöchentlichen subkutanen Injektion von 0,8 mg/ml wärmeempfindlicher Retard-Mischlösung, um das Wachstum von ektopischen Läsionen zu unterstützen.
2.2 Zeiteffekt
[0017] Nachdem es vorläufig bestimmt wurde, dass eine 0,8 mg/ml Retard-Mischlösung in die Mäuse subkutan injiziert werden sollte, wurde aus den Augäpfeln jeweils an den Tagen 1, 3, 5, 7 und 14 durch Enukleation Blut abgenommen, und die Östrogenkonzentrationen im Blut wurden jeweils wie folgt gemessen: a: 4.714 pg/ml, b: 768 pg/ml, c: 453 pg/ml, d: 562 pg/ml und e: 32 pg/ml. Nachdem sich 0,2 ml der (0,8 mg/ml) Retard-Mischlösung nach subkutaner Injektion geliert hat, wurde die anfängliche Burst-Freisetzung an Tag 1 beobachtet, gefolgt von einer langsamen Freisetzung. Die Östrogenkonzentration im Blut blieb nahe dem in der Literatur angegebenen Wert von 792,5 ± 743,3 pg/ml, und der Zeitraum mit anhaltender Freisetzung betrug 7 Tage (ABB. 3).
3. Modellierender Effekt der Retard-Mischlösung auf das Endometriose-Mausmodell
3.1 Etablierung eines Endometriose-Mausmodells
[0018] 1) Entnahme von Endometrium aus Donor-Mäusen: Fünf ICR-Mäusen wurden vor der Transplantation täglich eine Woche lang intraperitoneal 0,1 ml einer Östrogenlösung (30 µg/ml) injiziert. Nach einer Woche wurden die Mäuse durch zervikale Dislokation getötet und operiert. Ein etwa 1 cm langer hypogastrischer Einschnitt wurde schichtweise unter Verwendung einer sterilen Augenschere durchgeführt, um die Uteri jeder Maus zu isolieren. Mesometrium und Blutgefässe wurden abgetrennt. Der Uterus wurde an der Verbindung zwischen Uterus und Ovarien und oberhalb der Zervix abgetrennt, und dreifach in einer Phosphatpuffer-Salzlösung (PBS) gespült. Der Uterus wurde längs geschnitten, um das Endometrium nach außen zu ziehen. Von jeder Maus wurden zwei gleich lange Abschnitten des Uterus (der Uterus einer Maus ist Y-förmig) erhalten, die zur Transplantation im sterilen PBS platziert wurden. 2) Chirurgisches Transplantieren in Empfängermäuse: jede der neun Donor-ICR-Mäuse wurde durch intraperitoneale Injektion anästhetisiert, um eine offene Operation durchzuführen. Ein etwa 1 cm langer hypogastrischer Einschnitt wurde schichtweise unter Verwendung von einer sterilen Augenschere durchgeführt, um das Mesenterium der Maus freizulegen. Der vorbereitete Abschnitt vom Endometrium wurde außen am Mesenterium mit sterilen Nähten fixiert, und der Baucheinschnitt wurde mit einer durchgehenden Naht schichtweise geschlossen. Jede Maus wurde nach Desinfektion mit PVP-I zurück in einen Käfig gesetzt. Die Mäuse haben 24 Stunden gefastet, jedoch wurde freier Zugang zu Wasser zugelassen. Die Mäuse wurden nach 24 Stunden regulär gefüttert.
3.2 Unterschiedlicher Östrogenersatz
[0019] Neun Empfängermäuse wurden aufgeteilt auf eine PBS-Injektionsgruppe (täglich intraperitoneal injiziert mit 0,1 ml PBS), eine Östrogen-Injektionsgruppe (täglich intraperitoneal injiziert mit 0,1 ml Östrogen, 30 µg/ml) und eine Retard-Mischlösungs-Injektionsgruppe (wöchentlich subkutan injiziert mit 0,2 ml einer 0,8 mg/ml Retard-Mischlösung).
3.3 Beobachtung der Ergebnisse
[0020] Nachdem die obigen drei Gruppen 21 Tage experimentell behandelt wurden, wurden die Mäuse zur Beobachtung der Ergebnisse getötet.
1) Allgemeiner Zustand der Modellmäuse
[0021] Es gab insgesamt neun Mäuse in den Versuchsgruppen. Die Mäuse der drei Gruppen überlebten den Modellierungsprozess, wobei die Baucheinschnitte ohne Anzeichen einer Infektion ausgezeichnet abheilten. In den Mäusen der Retard-Mischlösungs-Injektionsgruppe wurden keine signifikanten Anzeichen einer Infektion an den subkutanen Injektionsstellen beobachtet.
[0022] Nachdem die Retard-Mischlösung in die Mäuse subkutan injiziert wurde, wurde die Gelbildung in ABB. 4 festgehalten.
2) Allgemeine Beobachtung der ektopischen Zysten
[0023] ABB. 5 veranschaulicht eine allgemeine Darstellung der ektopischen Zysten in einer Modellmaus, der tägliche eine Östrogen-Lösung intraperitoneal injiziert wurde, gegenüber einer Modellmaus, der wöchentlich eine Retard-Mischlösung subkutan injiziert wurde, wobei: Abbildungen A und B veranschaulichen ektopische Zysten von den Mäusen der Östrogen-Injektionsgruppe; Abbildungen C und D veranschaulichen ektopische Zysten von den Mäusen der Retard-Mischlösungs-Injektionsgruppe.
[0024] Die Mäuse der Östrogen-Injektionsgruppe und der Retard-Mischlösungs-Injektionsgruppe zeigten ektopische Zystenbildung mit einzelnen kugelförmigen Läsionen, grauweißen festen zystischen Verdickungen und Neovaskularisierung. In der Östrogen-Injektionsgruppe betrug die Läsion 5 mm im mittleren Durchmesser. In der Retard-Mischlösungs-Injektionsgruppe betrug die Läsion 5 mm im mittleren Durchmesser, wobei es keinen signifikanten Unterschied zwischen den beiden Gruppen gab.
[0025] In den Mäusen der PBS-Injektionsgruppe wurde keine signifikante Bildung ektopischer Zysten beobachtet (Abbildungen weggelassen).
3) Pathologische Beobachtung von ektopischen Zysten
[0026] Die ektopische Zysten aus den Mäusen der Östrogen-Injektionsgruppe und der Retard-Mischlösungs-Injektionsgruppe wurden jeweils in Paraffin geschnitten. Nach HE-Färbung wurden unter dem Mikroskop typische drüsenförmige und interstitielle Gewebestrukturen beobachtet (ABB. 6).
[0027] ABB. 6 veranschaulicht einen Vergleich zwischen den HE-Färbegebnissen von ektopischen Zystengeweben einer Modellmaus, der tägliche eine Östrogen-Lösung intraperitoneal injiziert wurde und einer Modellmaus, der wöchentlich eine Retard-Mischlösung subkutan injiziert wurde, und dem eutopischen Endometrium einer normaler Maus, wobei: Abbildungen A und B veranschaulichen das HE-Färbeergebnis des eutopischen Endometriums einer normalen Maus; Abbildungen C und D veranschaulichen das HE-Färbeergebnis einer Läsion im Endometrium einer Modellmaus, der die Östrogen-Lösung intraperitoneal injiziert wurde; Die Platten E und F veranschaulichen das HE-Färbeergebnis einer Läsion im Endometrium einer Modellmaus, der die Retard-Mischlösung subkutan injiziert wurde.
[0028] Aus der Figur ist ersichtlich, dass die nach dem vorliegenden Verfahren hergestellte Retard-Mischlösung das Wachstum der Läsion im Endometrium der Mäuse aus der subkutanen Injektionsgruppe unterstützte. Es gab keinen signifikanten Unterschied zwischen der dadurch gebildeten Läsion und der Läsion, die sich durch das zuvor bereitgestellte Verfahren bildet. Die nach dem vorliegenden Verfahren hergestellte Retard-Mischlösung könnte zur Etablierung des Endometriose-Mausmodell verwendet werden.
[0029] Schlussfolgerung: Die vorliegende Erfindung untersucht die Veränderung des Östrogenspiegels im Blut als Funktion der Injektionskonzentration und der Zeit nach einer subkutanen Injektion der Retard-Mischlösung in Mäusen. Zudem bestimmt die vorliegende Erfindung, dass durch die subkutane Injektion einer 0,5 - 1,0 mg/ml Retard-Mischlösung (Injektion von 0,2 ml alle sieben Tage) in Mäusen, ein Endometriose-Mausmodell mit typischen pathologischen Merkmalen der Endometriose erfolgreich etabliert werden kann.
Claims (4)
1. Retard-Mischlösung für die Etablierung eines Endometriose-Mausmodells, wobei die Retard-Mischlösung die folgenden Komponenten umfasst:
0,5 -1,0 mg/ml Ostrogenpulver, wobei der Rest ein wärmeempfindliches Hydrogel ist; wobei mg/ml ein Verhältnis des Östrogenpulvers zum Volumen des wärmeempfindlichen Hydrogels ist, und wobei das wärmeempfindliche Hydrogel ein wärmeempfindliches Polyethylenglykol (PEG).-Polyester-Diblock-Hydrogel ist.
2. Retard-Mischlösung nach Anspruch 1, umfassend die folgenden Komponenten:
0,8 mg/ml Östrogenpulver, wobei der Rest das wärmeempfindliche Polyethylenglykol PEG-Polyester-Diblock-Hydrogel ist, wobei mg/ml ein Verhältnis des Östrogenpulvers zum Volumen des wärmeempfindlichen Hydrogels ist.
3. Verfahren zur Herstellung einer Retard-Mischlösung für die Etablierung eines Endometriose-Mausmodells, umfassend die folgenden Schritte:
1) Entnahme eines wärmeempfindlichen Polyethylenglykol PEG-Polyester-Diblock-Hydrogels aus einem Kühlschrank und Auftauen des Hydrogels bei Raumtemperatur zu einer transparenten Flüssigkeit, wobei der Kühlschrank auf eine Temperatur von unter -30°C eingestellt ist;
2) Zugeben eines Östrogenpulvers zu dem Hydrogel in einem Verhältnis des Ostrogenpulvers zu dem wärmeempfindlichen Hydrogel, worin das Ostrogenpulver 0,5 - 1,0 mg/ml beträgt und der Rest das wärmeempfindliche Hydrogel ist, wobei mg/ml ein Verhältnis des Östrogenpulvers zum Volumen des wärmeempfindlichen Hydrogels ist;
3) Platzieren auf einen Schüttler und Schütteln, um das Östrogenpulver vollständig mit dem Hydrogel zu vermischen, zum Herstellen der Retard-Mischlösung; und
4) Lagern der Retard-Mischlösung im Kühlschrank nach der Dosierung, wobei der Kühlschrank auf eine Temperatur von unter -30°C eingestellt ist.
4. Verfahren zur Herstellung einer Retard-Mischlösung für die Etablierung eines Endometriose-Mausmodells nach Anspruch 3, wobei der Schritt der Hinzugabe des Östrogenpulvers zu dem Hydrogel folgendes umfasst:
Abwiegen von 8 mg Östrogenpulver und Hinzugeben zu 10 ml des wärmeempfindlichen Hydrogels, wobei das Östrogenpulver ein β-Östradiol-Pulver ist.
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