Procédé de préparation d'un produit vitaminé aqueux
La présente invention a pour objet un procédé de préparation d'une solution aqueuse vitaminée contenant de la vitamine B12 sous une forme stabilisée et au moins une autre vitamine en présence de laquelle la vitamine B, 2 est normalement instable.
A l'état solide, la vitamine B12, connue également sous le nom de cyanocobalamine, est sous forme de cristaux rouge foncé, hygroscopiques et stables. Ces cristaux sont solubles à raison de 1 g dans environ 80 ml d'eau à 250 C.
La vitamine B12 est pratiquement stable à l'état solide et en solution aqueuse exempte d'autres vitamines, sa stabilité étant maximum aux pH compris entre 4, 5 et 5.
Lorsque la solution aqueuse contient, outre la vitamine B, 2, d'autres vitamines dissoutes et notamment la vitamine C (acide ascorbique), la vitamine B, et la nicotinamide, la vitamine B, 2 dissoute est instable.
Il est connu d'ajouter divers ingrédients additionnels dans la préparation d'une solution aqueuse de vitamine Big et d'autres vitamines, par exemple des tampons, des agents de conservation, des agents aromatisants, etc. Ces ingrédients additionnels peuvent comprendre de l'extrait de foie pouvant contenir du fer sous forme combinée, ou des sels miné- raux pouvant contenir du fer sous forme combinée.
On ajoute l'extrait de foie et lesdits sels minéraux dans un but thérapeutique.
Il est signalé dans la littérature que la vitamine B1, est incompatible avec le sulfate ferreux, avec la vitamine C, la thiamine plus nicotinamide et avec toute substance fortement réductrice. Les composés ferreux en solution avec la vitamine B12 provoquent une destruction rapide de la vitamine B12 présente en concentration thérapeutique. Ce fait a été vérifié par plusieurs auteurs. Il est donc contre-indiqué d'inclure des composés ferreux en proportion thérapeutique, en association avec la vitamine B12, même dans des préparations solides, en raison de leur influence défavorable sur la stabilité de la vitamine B, 2.
La titulaire a par contre découvert que l'on peut stabiliser une solution aqueuse mixte de vitamine B, 2 et d'au moins une autre vitamine, notamment une solution aqueuse mixte contenant de la vitamine B, 2 et de la vitamine C, au moyen de tous les composés ou sels de fer. Le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que l'on ajoute à la solution vitaminée un composé du fer qui réagit avec la vitamine
B12 pour former un complexe stable, la proportion dudit composé du fer correspondant à 15 à 2500 g calculés en fer atomique par ml de solution et la proportion de vitamine B12 a une activité de 0, 5 à 25 Fg par ml de solution.
Le degré atteint de stabilisation de la vitamine B, 2 dépend du composé ou sel de fer particulier utilisé et de sa concentration, spécialement par rapport à la concentration de la vitamine B12 à stabiliser, et de la nature et de la concentration des autres substances présentes en solution. Les composés ou sels stabilisants de fer sont utilisés ici comme agents stabilisants, et non pas comme agents thérapeutiques, c'est pourquoi leur concentration est inférieure au seuil thérapeutique.
Comme mentionné, l'utilisation de concentrations thérapeutiques de composés ferreux est contreindiquée, cependant, ces mêmes, composés ferreux présents à de très basses concentrations ont pour effet inattendu de stabiliser la vitamine B12 en présence d'autres substances normalement considérées comme exerçant une influence défavorable sur la stabilité de la vitamine B12 (c'est-à-dire la vitamine
C, la thiamine et la nicotinamide). Ces concentrations sont bien inférieures aux proportions de fer utilisées couramment dans les préparations destinées à fournir la dose thérapeutique quotidienne minimum de fer (par exemple dans le cas des anémies hypochromes, etc.).
Parmi ces composés ou sels de fer stabilisants, on peut citer à titre d'exemple le peptonate de fer, le citrate ammonio-ferrique, le chlorure ferrique, le gluconate ferreux, le glycérophosphate ferrique, le sulfate ferrique, le sulfate ferreux, l'oxyde ferrique, l'oxyde ferreux, les complexes ferreux ou ferriques de composés tels que 1'acide éthylène diamine tétraacétique et ses sels.
Il a été également remarqué que 1'effet stabilisant commence à une certaine concentration minimum de fer (calculée en fer atomique) dans la solution.
Cet effet stabilisant augmente jusqu'à une certaine concentration optimum de fer, calculée en fer atomique, et 1'effet stabilisant décroît au-delà de la concentration optimum, le fer étant toujours calculé en fer atomique. D'autre part, 1'effet stabilisant dé- pend du composé de fer choisi, en plus de sa concentration. L'effet stabilisant dépend également des ingrédients dissous, en dehors de la vitamine B12 en solution.
Dans les exemples ci-dessous, toutes les mesures de pH mentionnées sont effectuées à 20 300 C, au moyen de l'électrode de verre.
On a utilisé dans les exemples 1 à 9 deux solutions aqueuses des compositions suivantes :
Solution 1
5 ml de cette solution contiennent :
Vitamine A...... 3000 unités U. S. P.
Vitamine D...... 1000 unités U. S. P.
Vitamine B1...... 1, 5 mg Vitamine B2...... 1, 2 mg
Vitamine B, 2
(cyanocobalamine)... 6 g
Vitamine C
(acide ascorbique)... 60 mg
Nicotinamide..... 10 mg
On peut ajouter à cette solution des agents aromatisants convenables (par exemple de l'acide citrique, du sucre, de la saccharine, du propylène glycol, de l'essence de citron, etc.), des solubilisants pour la vitamine A et la vitamine D (tels que le polysorbate 80 ), des agents de conservation (par exemple le para-hydroxybenzoate de butyle ou le benzoate de sodium) et des agents épaississants (tels que la carboxyméthylcellulose).
Solution 11
En dehors de la teneur en vitamine B, 2, cette solution a la même composition que la solution I.
5 ml de solution II contiennent 3 jj, g de vitamine B, (cyanocobalamine), c'est-à-dire la moitié de la proportion présente dans la solution I.
On a divisé ces solutions et on a ajouté à des portions séparées du peptonate de fer ou du citrate ammonio-ferrique dans les proportions citées ciaprès. On a ensuite stocké ces portions à 37 C pendant 3 semaines. Après cette période, on a déterminé la concentration de la vitamine Bt2 des. solutions par la méthode microbiologique décrite dans la pharmacopée des U. S. A., XIV, 3e supplément. Cette méthode est normalement exacte à 10-20 % près, ce qui est raisonnable pour une épreuve microbiologique de ce genre.
Tableau 1
Exemple Solution Stabilisant Proportion de Dosage de Bis
No utilisée utilisé stabilisant après stockage à 37o C
1. I Peptonate de fer 0, 1 mg/ml 7, 05 Itg/5 ml
2. I) > 1, 0 5, 46
3. I 10, 0 6, 50
4. 1 Citrate ammonio-ferrique 0, 1 4, 35
5. I 1, 0 2, 58
6. I 10, 0 2, 04
7. II Peptonate de fer 10, 0 3, 19
8.
INéant-1, 78
9. II Néant-0 p
Dans les exemples 10-12, on a utilisé une solution de composition en vitamines suivantes, rapportée à 1 ml :
Vitamine A (palmitate). 8330 unités U. S. P.
Vitamine 2000 unités U. S. P.
VitamineBj..... 3, 33 mg Vitamine B2..... 0, 83 mg
Vitamine Bye..... 1, 67 mg
Vitamine C..... 100 mg
Nicotinamide..... 16, 67 mg
Acide pantothénique
(comme panthénol).. 5 mg
Chlorure de choline... 12 mg Inositol...... 7 mg Vitamine E (mélange de
tocophérol).... 1, 67 mg
Cette solution contenait encore les agents aromatisants suivants : glycérine, propylène glycol, saccharine, arôme de framboise ; les agents solubilisants suivants, pour les vitamines A, D et E : monolaurate de sorbitan-polyoxyéthylène (¸ polysorbate 80 , produit de marque) ; et, comme agent de conservation, de l'acide méthyl-para-hydroxybenzoïque et/ou du benzoate de sodium.
Le solvant utilisé est un mélange de glycérol, de propylène glycol et d'eau distillée. On a ajoute de la vitamine BW.
(cyanocobalamine) à la solution ainsi préparée, à raison d'une concentration d'environ 14 stg/ml. Le liquide résultant, ci-après désigné Solution III ¯, a été divisé en plusieurs portions, auxquelles on a ajouté les stabilisants cités dans le tableau 2, et que l'on a ensuite stockées à 370 C pendant 3 semaines.
Après le stockage, le dosage de la vitamine B 2 a donné les résultats suivants :
Tableau 2
Exemple Solution Stabilisant Proportion de Dosage de B12
No utilisÚe utilisÚ stabilisant apr¯s stockage Ó 37¯ C
10. III Peptonate de fer 10 mg/ml 14,65 ?g/ml
11. III Citrate ammonio-ferrique 10 11, 40
12. III Néant-0 p
Pour les exemples 13-19, on a utilise une solution aqueuse, ci-après désignée Solution IV ¯, dont 1 ml contient les vitamines suivantes :
Bl......... 100 mg B.......... 1 mg B, ;......... 2 mg Bí) (Cyanocobalamine).. 23 ?g
Nicotinamide..... 100 mg
Acide pantothénique (panthénol).... 10 mg
Alcool benzylique.... 1, 5% (poids/vol.)
On a divisé cette solution en plusieurs portions, auxquelles on a ajouté les stabilisants cités au tableau 3, et que l'on a ensuite stockées à 370 C pendant 3 semaines, après quoi le dosage de la vitamine Bis a donné les résultats suivants :
Tableau 3
Exemple Solution Stabilisant Proportion de Dosage de B12
No utilisÚe utilisÚ stabilisant apr¯s stockage Ó 37¯ C
13.
IV Peptonate de fer 0, 1 mg/ml 25, 2 Fg/ml
14. Il 1, 0 19, 1
15. IV ¯ 10,0 ¯ 18,1 ¯
16. IV Citrate ammonio-ferrique 0, 1 19, 9
17. Il 1, 0 16, 5
18. Il 10, 0 14, 8
19. IV Néant-0 p
Pour les exemples 20-22, on a utilisé une solution ci-après désignée Solution V ¯, dont 1 ml contient les ingrédients suivants :
Vitamine B1 100 mg
Vitamine B2 . . . . . . 1 mg
Vitamine B6 . . . . . . 2 mg
Nicotinamide...... 50 mg Panthénol....... 10 mg
Vitamine B 12 (cyanocobalamine) 15 Fg Vitamine C....... 100 mg
Tampons,
agents de conservation, etc. 6 % (poids/vol.)
Eau distillée q. s.
On a ajouté à la solution du citrate de sodium (2 % poids/vol.), de l'alcool benzylique (1 % poids/ vol.) et de l'éthanolamide d'acide gentisique (3 % poids/vol.), comme tampons et agents de conservation. Le titre initial de la solution a été de 16, 1 ?g de vitamine B12 par ml.
Exemple 20
On a ajouté 0, 5 mg/ml de peptonate de fer à une portion de solution V et on a stocké la solution résultante à 37 C pendant 3 semaines. Après ce stockage, la solution a présenté un titre en vitamine BlS de 15 sxg/ml. Comme cette solution contenait primitivement 15 [ig de cyanocobalamine par ml, l'épreuve microbiologique a montré une concentration égale à 100% de la concentration initiale.
Exemple 21
On a ajouté 12 mg/ml de peptonate de fer à une portion de solution V, puis on a stocké la solution à 37 C pendant 3 semaines. Après le stockage, le dosage de la vitamine B12 a donné 7 llg/ml. Par conséquent, la dose de cyanocobalamine trouvée dans l'épreuve microbiologique s'est élevée pratiquement à 50 % de la concentration primitive.
Exemple 22
Après stockage à 37O C pendant 3 semaines, sans aucune addition, une portion de solution V a présenté une teneur en vitamine B12 de moins de 1 g/ml.
Il ressort des exemples 20-22 que la stabilisation de la vitamine Big décroît lorsque la concentration du composé du fer se rapproche du seuil thérapeu- tique. La solution V, qui contient de l'acide ascorbique, de la thiamine, de la nicotinamide, etc., est considérée normalement comme un milieu médiocre en ce qui concerne la stabilité de la vitamine BI2, ce qui est vérifié par 1'exemple 22. L'addition d'une petite proportion de composé du fer (0, 5 llg/ml de peptonate de fer comme dans l'exemple 20), produit une solution de vitamine B12 de bonne stabilité. Une concentration de composé du fer telle que dans 1'exemple 21 donne une stabilité nettement diminuée de la vitamine BX2 par rapport à 1'exemple 20.
Il convient également de relever que la concentration atomique du fer dans 1'exemple 21 a été de 2 mg/ ml. La dose humaine normale de cette préparation est de 1 ml. Cette dernière fournit donc par dose Vg du besoin quotidien minimum en fer de l'adulte.
Cette concentration de fer, en présence des autres ingrédients, a produit cependant une stabilisation de la vitamine B, moins satisfaisante que la proportion beaucoup plus faible utilisée dans 1'exemple 20.
Ceci démontre que la stabilisation maximum de la vitamine B12 est obtenue par l'addition d'un composé de fer en proportion bien inférieure aux proportions thérapeutiques.
ExemDle 23
On a préparé une solution de départ correspondant à celle utilisée dans les exemples 10-12 cidessus, contenant par ml les vitamines suivantes :
Vitamine A (palmitate).. 8330 unités U. S. P.
Vitamine D..... 2000 unités U. S. P.
Vitamine Bai..... 3, 33 mg
Vitamine Bu..... 0, 83 mg
Vitamine B6..... 1, 67 mg
Vitamine C..... 100 mg
Nicotinamide..... 16, 67 mg
Acide pantothénique
(comme panthénol).. 5 mg
Chlorure de choline... 12 mg Inositol....... 7 mg
Vitamine E
(mélange de tocophérols) 1, 67mg
Cette solution contient encore les agents aromatisants suivants : glycérine, propylène glycol, saccharine, arôme de framboise ; les agents solubilisants suivants pour les vitamines A, D et E : monolaurate de sorbitan-polyoxyéthylène ( polysorbate 80 ) ; et (comme agent de conservation, de l'acide mé thyl-para-hydroxybenzoique et/ou du benzoate de sodium.
On a divisé la solution résultante en 3 portions et on a ajouté de la vitamine B, à ces 3 portions comme suit : a. On a ajouté à la première portion 10 Ftg par
ml d'activité de vitamine Bu , type S produit de
marque Merck p, c'est-à-dire de la vitamine
B1, consistant en un produit de fermentation Blo
semi-purifié, dont l'activité est entièrement due
à la cyanocobalamine et qui est mélangé avec
des ingrédients inertes pour rendre le produit
maniable, à raison d'une concentration de 1 mg
d'activité de vitamine B13 par g de poids brut. b.
On a ajouté à la deuxième portion 10 g par ml
d'activité de vitamine B1.,, sous forme d'un pro
duit solide pour administration par voie orale le
produit de marque Calco a > , consistant en un
concentrat semi-purifié de composants d'acti
vité Blo obtenus par fermentation microbiolo
gique, convenant à l'administration par voie
orale et mélangé avec des ingrédients inertes à
raison d'une activité de 1 mg de B13 par g de
poids brut. Ce produit actif en vitamine B12 se
compose d'environ 75-80 % d'hydroxycobala
mine, le complément comprenant surtout de la
cyanocobalamine. c.
On a ajouté à la troisième portion 10 ttg par
ml d'activité de vitamine B12 sous la forme de
cyanocobalamine cristalline U. S. P.
On a encore subdivisé chacune des portions a., b. et c. en trois portions et on a ajouté du peptonate de fer à certaines d'entre elles, dans les proportions citées ci-dessous. On a opéré les dosages au moment de la préparation et après stockage de trois semaines à 37 C.
Les résultats ont été les suivants :
Tableau 4
Dosages
Teneur en après 3 semaines de stockage
Portion vitamine Bis a 37"C, avec :
au départ 0, 0 0, 1 mg/ml 1 mglml
de peptonate de fer ajouté
a. 10, 4 pg/nil 0 0 8, 2Fg/ml
b. 8, 7 > 0 0 9, 1) >
c. 11, 4 0 9, 7 au
Les chiffres ci-dessus montrent que 1 mg par ml de peptonate de fer stabilise chacun des trois types de vitamines Bl,,, également bien dans, l'une ou l'au- tre des préparations décrites ci-dessus.
Exemple 24
On a préparé une solution multivitaminée dont 1 ml contient les ingrédients suivants (Solution VI) :
Vitamine A (palmitate).. 8300 unités U. S. P.
Vitamine D..... 2000 unités U. S. P.
Vitamine Bai..... 3, 33 mg
Vitamine B..... 0, 83 mg
Vitamine B, ;..... 1, 67 mg
Vitamine C..... 100 mg
Nicotinamide..... 16, 67 mg
Acide pantothénique
(comme panthénol).. 5 mg
Vitamine E
(mélange de tocophérols) 1, 67mg
Dans cette préparation, qui est semblable à celle utilisée dans les exemples 10-12, on n'a pas, ajouté de chlorure de choline ni d'inositol et on a utilisé les mêmes agents aromatisants et le même solvant que dans les exemples 10-12.
On a ajouté à cette préparation de la vitamine B13 (cyanocobalamine) de manière à obtenir une concentration d'environ 4 [ig par ml. On a divisé cette solution en 13 portions et on a ajouté à ces portions des composés du fer comme décrit cidessous. Après stockage de 3 semaines, à 37O C, on a dosé la vitamine Bfi3 et on a obtenu les résultats suivants :
Tableau 5
Proportion Proportion Dosage en Bis
Stabilisant du de fer après stockage stabilisant par ml de 3 sem. à 37O C
a. Néant.............-0 0 b. Chlorure ferrique.......... 1 mg/ml200 g/ml2, 24 Fg/rnl
c.
Chlorure ferrique avec peptone de buf.. 1/2 200 2, 23 d. Gluconate ferreux......... 1 116 1, 89
e. Gluconate ferreux avec peptone de boeuf.. 1 116 1, 80
f. Glycérophosphate ferrique....... 1 180 2, 84
g. Citrate ammonio-ferrique....... 1 160 2, 24 h. Sulfate ferrique.......... 1 280 3, 35
i.
Sulfate ferreux.......... 1 200 2, 76
j. Peptonate de fer.......... 0, 01 1, 6 0 k. .......... 0, 1 16 0
........ 1, 0 160 1, 38 Rg/ml m. > > .......... 10, 0 1600 4, 18
Les résultats ci-dessus montrent que tous les composes de fer utilisés stabilisent la vitamine B12 dans cette préparation, qui contient de l'acide ascorbique, de la thiamine, de la nicotinamide et d'autres vitamines.
Lorsqu'on n'utilise pas de stabilisant, la vitamine Btg se décompose rapidement. Les résultats obtenus avec le peptonate de fer (de j à m) montrent qu'une proportion minimum de fer est nécessaire pour stabiliser la vitamine B12 dans cette préparation et que 1'effet stabilisant augmente avec la proportion de fer dans le domaine des concentrations de cette expérience. En général, et sauf quelques exceptions, les chiffres ci-dessus indiquent une stabilisation accrue de la vitamine Bls dans cette préparation lorsque la concentration en fer augmente dans le domaine limité des concentrations expérimentées, quel que soit le type de composé du fer utilisé.
Dans certains types de préparations vitaminées, il peut ne pas être recommandable d'ajouter des proportions appréciables de composés du fer donnant des proportions appréciables d'ions ferreux ou ferriques en solution (par exemple, le chlorure ferrique). On connaît en effet l'influence défavorable des ions ferriques sur la stabilité de certaines vitamines (par exemple, la vitamine A, le chlorhydrate de pyridoxine, etc.). On sait cependant que le fer peut être présent dans ces solutions s'il se trouve sous la forme de complexes ou de chélates. Ceux-ci lient les ions ferriques et/ou ferreux en des formes solubles qui ne sont que très peu dissociées en formes ioniques du fer. Plusieurs des stabilisants utilisés dans les exemples ci-dessus sont constitués par de tels complexes (par exemple, le citrate ammonio-ferrique, le peptonate de fer, etc.).
L'un de ces, agents chélatants efficaces est l'acide éthylène diamine tétra-acétique et ses sels ( AEDT ou Versène (R) produits de marque). Ce complexe est d'une telle efficacité qu'il a été recommandé pour être utilisé comme stabilisant pour le complexe B, l'acide ascorbique et pour d'autres préparations vitaminées, afin de prévenir la décomposition de ces vitamines en présence de fer ionique. On l'utilise fréquemment comme stabilisant dans ces préparations en raison de cette propriété.
Cependant, même en présence de AEDT, les composés du fer stabili sent encore la vitamine B12 dans des préparations multivitaminées. Cet effet inattendu et surprenant est de grande importance pratique car il permet l'utili- sation de composés du fer dans des préparations multivitaminées, pour stabiliser la vitamine B1o, bien que le fer soit combiné de manière si effective dans la forme chélatée que les autres vitamines de la préparation manifestent une excellente stabilité.
Ceci ressort de 1'exemple 25 ci-dessous.
Tableau 6
EMI6.1
<SEP> Portion <SEP> Stabilisant <SEP> Proportion <SEP> du <SEP> Proportion <SEP> de <SEP> Proportion <SEP> de <SEP> Dosage <SEP> de <SEP> B12
<tb> <SEP> stabilisant <SEP> fer <SEP> par <SEP> ml <SEP> ¸ <SEP> AEDT <SEP> ¯ <SEP> apr¯s <SEP> 3 <SEP> semaines <SEP> de
<tb> <SEP> stockage <SEP> Ó <SEP> 37¯ <SEP> C
<tb> <SEP> a. <SEP> nÚant <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 1,1 <SEP> ?g/5 <SEP> ml
<tb> <SEP> b. <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> mg/ml <SEP> 0.8 <SEP> ¯
<tb> <SEP> b.
<SEP> F <SEP> <SEP> j <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> mglml <SEP> 0, <SEP> 8 <SEP> <SEP>
<tb> <SEP> c. <SEP> chlorure <SEP> ferrique <SEP> hexahydraté <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> mg/ml0, <SEP> 1 <SEP> mg/ml <SEP> 1 <SEP> mg/ml <SEP> 3, <SEP> 6 <SEP> <SEP>
<tb> <SEP> d. <SEP> p <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> p <SEP> 0 <SEP> 3, <SEP> 7 <SEP> <SEP>
<tb> <SEP> e. <SEP> peptonate <SEP> de <SEP> fer <SEP> 0, <SEP> 6 <SEP> <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> <SEP> <SEP> 1 <SEP> mg/ml <SEP> 3, <SEP> 7 <SEP> <SEP>
<tb> <SEP> f.
<SEP> <SEP> 0, <SEP> 6 <SEP> <SEP> <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> <SEP> <SEP> 0 <SEP> 4, <SEP> 3 <SEP> <SEP>
<tb> <SEP> g. <SEP> <SEP> citrate <SEP> ammonio-ferrique <SEP> 0, <SEP> 7 <SEP> <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> <SEP> 1 <SEP> mg/ml <SEP> i <SEP> 4, <SEP> 1 <SEP> <SEP>
<tb> <SEP> h. <SEP> 0, <SEP> 7 <SEP> <SEP> <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> <SEP> <SEP> 0 <SEP> f <SEP> 4, <SEP> 0 <SEP> <SEP>
<tb>
Il ressort des chiffres figurant au tableau 6 que la vitamine Bls de cette préparation (qui contient les vitamines A, C, D, la thiamine, la nicotinamide, et d'autres vitamines)
est instable sans l'addition d'un composé du fer. Une addition d'un composé répondant à l'un quelconque des trois types de composés du fer utilisés (complètement ionisés comme le chlorure ferrique, partiellement ionisés comme le citrate ammonio-ferrique ou non ionisés comme le peptonate de fer) contribue notablement à la stabilité de la vitamine B12. Une addition de AEDT sans fer (portion b) ne stabilise pas la préparation. L'addition simultanée d'un composé du fer avec de 1' AEDT ne réduit pas de façon appréciable 1'effet stabilisant des composés du fer sur la vitamine B12.
Il convient de relever que les proportions de AEDT ajoutées dans tous les cas, sont en excès par rapport aux proportions requises pour chélater la quantité totale de fer ajouté. Dans les portions c, e et g, la proportion de AEDT ajoutée a été suffisante pour protéger les autres vitamines contre la décomposition produite par le fer de sorte qu'il ne s'est pas produit de diminution appréciable des activités de la vitamine A, de la thiamine, de la pyridoxine, de l'acide ascorbique, de la riboflavine et d'autres vitamines.
Les valeurs ci-dessus font donc ressortir le principe consistant à utiliser un agent apte à former un complexe du fer, pour protéger les composants vitamineux autres, que la vitamine B12 d'une instabilité éventuelle résultant de l'utilisation du fer comme stabilisant. En dehors de 1' AEDT on utiliser Exemple 25
On a préparé une solution identique aux solutions I et II, sauf que la concentration initiale de la vitamine B, (cyanocobalamine) a été de 4, 0 Zg pour 5 ml. On a divisé cette solution, désignée ci-après solution VII, en plusieurs portions et on a ajouté les stabilisants et 1' AEDT comme cité au tableau 6.
Après, stockage de 3 semaines à 37e C, on a dosé la vitamine Bl,,, et on a obtenu les résultats suivants : d'autres agents de séquestration ou de formation de complexes, soit seuls soit en combinaison. Parmi les nombreux agents formateurs de complexes convenant à cet effet, on peut citer l'acide éthylène diamine 6-méthanol triacétique et ses sels ( Versénol R) > ), l'acide d-saccharique et ses sels, l'ion cyanure (ou ferro-ou ferri-cyanure), les sels de l'acide pyrophosphorique, de l'acide hexamétaphosphorique, de l'acide tripolyphosphorique, de l'acide lactobionique, de l'acide tartrique, de l'acide citrique, etc., et le dextran ou macrose, l'alginate de sodium et d'autres sels analogues d'hydrates de carbone.
Des essais ont démontré l'utilité de ces agents formateurs de complexes, pour la stabilisation des vitamines autres que la vitamine Bta contre l'altération causée par le stabilisant contenant du fer, tout en ne portant pas préjudice à 1'effet stabilisant désiré du fer sur la vitamine Bla.
Les essais mentionnés ci-dessus s'appliquent à des solutions dont le solvant comprend de 1'eau et dans lesquelles la concentration initiale de l'acide ascorbique dissous est supérieure à la concentration initiale de la cyanocobalamine dissoute. Dans les solutions expérimentées, 1'acide ascorbique dissous était en concentration suffisante pour amener la dé- composition de la cyanocobalamine dissoute, entraînant une destruction substantielle ou complète de la cyanocobalamine, mise en évidence par le dosage microbiologique à la fin d'une période de stockage de 3 semaines à 37 C, cela en l'absence d'une proportion convenable d'agent stabilisant ajouté.