BRPI0718639A2 - USES OF A BACTERIA AND CLOSTRIDIUM PERFRINGENS TYPE C CULTURE SUPERVISOR - Google Patents

USES OF A BACTERIA AND CLOSTRIDIUM PERFRINGENS TYPE C CULTURE SUPERVISOR Download PDF

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Marten Hendrik Witvliet
Jozef Franciscus Maria Smeets
Keith Redhead
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Abstract

The present invention relates to the use of a vaccine comprising Clostridium perfringens type C bacterium for protecting swine against Clostridium perfringens type A infection.

Description

"USOS DE UMA BACTÉRIA E DE UM SOBRENADANTE DE CULTURA DE CLOSTRIDIUMPERFRINGENS TIPO C""USES OF A BACTERIA AND CLOSTRIDIUMPERFRINGENS TYPE C CULTURE SUPERVISOR"

A presente invenção refere-se ao uso de bactéria Clostridium perfringens tipo C para a manufatura de uma vacina.The present invention relates to the use of Clostridium perfringens type C bacteria for the manufacture of a vaccine.

Os Clostrídios são bactérias anaeróbicas formadoras de esporos Gram-positivas. Os Clostrídios são largamente reconhecidos como patógenos de animais tanto domésticos como selvagens. Um resumo dos vários Clostrídios e de doenças animais que elas causam é feito por Songer, J. G. em The Clostridium; Capítulo 10: Clostridial Diseases of Animais, Molecular Biology and Pathogenesis, ed. Rood, J.I. et al., Academic Press Ltd. (1997) ISBN 0-12-595020-9.Clostridia are anaerobic bacteria that form Gram-positive spores. Clostridia are widely recognized as pathogens of both domestic and wild animals. A summary of the various clostridia and animal diseases they cause is given by Songer, J. G. in The Clostridium; Chapter 10: Clostridial Diseases of Animals, Molecular Biology and Pathogenesis, ed. Rood, J.I. et al., Academic Press Ltd. (1997) ISBN 0-12-595020-9.

Das espécies Clostrídicas atualmente conhecidas, a Clostridium perfringens é às vezes considerada ser o patógeno bacteriano mais largamente ocorrente e de todas as espécies Clostrídicas ela certamente é a mais importante causa de doença entérica Clostrídica em animais domésticos. A espécie Clostridium perfringens é subdividida em cinco tipos; tipo Α-E, com base nas principais toxinas que eles produzem.Of the currently known Clostridial species, Clostridium perfringens is sometimes considered to be the most widely occurring bacterial pathogen and of all Clostridial species it is certainly the most important cause of Clostridial enteric disease in domestic animals. The species Clostridium perfringens is subdivided into five types; type Α-E based on the major toxins they produce.

Clostridium perfringens tipos AeCe Clostridium difficile são os principais patógenos clostrídicos entéricos de suínos.Clostridium perfringens types AeCe Clostridium difficile are the main enteric clostridial pathogens of swine.

As infecções entéricas clostrídicas e porcos foram mais especificamente descritas por Songer, J. G. e Uzal, F.A. (J. Vet. Diagn. Invest 17: 528-536(2005)).Clostridial enteric infections and pigs have been more specifically described by Songer, J. G. and Uzal, F.A. (J. Vet. Diagn. Invest 17: 528-536 (2005)).

Clostridium perfringens tipo C infecta porcos, gado vacum, frangos, humanos, carneiros, cães e cavalos. Os porquinhos são os mais vulneráveis a infecção por Clostridium perfringens tipo C. Em porquinhos de 1-2 dias de idade, a infecção provoca taxas de morbidez entre 30% - 50% e taxas de fatalidade de 50% - 100%. Porquinhos mais velhos (1-2 semanas de idade) podem ter um curso de infecção mais longo. As porcas são a fonte comum de infecção. A abordagem comum para a proteção de porquinhos é vacinação das porcas com uma vacina de Clostridium perfringens tipo C, a fim de induzir anticorpos que são transferidos para sua descendência via o colostro. Isto resulta em um elevado nível de proteção em porquinhos naquele momento do tempo em que eles são mais vulneráveis a infecção Clostrídica.Clostridium perfringens type C infects pigs, cattle, chickens, humans, sheep, dogs and horses. Little pigs are most vulnerable to Clostridium perfringens type C infection. In 1-2 day old pigs, the infection causes morbidity rates between 30% - 50% and fatality rates of 50% - 100%. Older pigs (1-2 weeks old) may have a longer course of infection. Nuts are the common source of infection. The common approach to guinea pig protection is to vaccinate sows with a Clostridium perfringens type C vaccine to induce antibodies that are transferred to their offspring via colostrum. This results in a high level of protection in little pigs at that time of time when they are most vulnerable to Clostridial infection.

Tais vacinas são baseadas em toxóides. Usualmente elas são vacinas de sobrenadante destoxificadas, em que nenhuma célula está presente. As vacinas toxóides foram descritas por Springer, S. e Selbitz, H.-J. (FEMS Immun. and Medicai Microbiol. 24: 333 - 336 (1999)).Such vaccines are based on toxoids. Usually they are detoxified supernatant vaccines in which no cells are present. Toxoid vaccines have been described by Springer, S. and Selbitz, H.-J. (FEMS Immun. And Medical Microbiol. 24: 333-336 (1999)).

Clostridium perfringens tipo A infecta cordeiros, cabras, bezerros, frangos, porcos, cavalos, cães e humanos. Em porcos totalmente desenvolvidos, a Clostridium perfringens tipo A é um membro da flora normal do intestino. Portanto, é atualmente presumido que os porcos totalmente desenvolvidos não são adversamente afetados pela presença da Clostridium perfringens tipo A no intestino. Ela pode, entretanto, causar enterocolite necrótica em suínos eClostridium perfringens type A infects lambs, goats, calves, chickens, pigs, horses, dogs and humans. In fully developed pigs, Clostridium perfringens type A is a member of the normal gut flora. Therefore, it is currently assumed that fully developed pigs are not adversely affected by the presence of Clostridium perfringens type A in the intestine. It can, however, cause necrotic enterocolitis in pigs and

porcos neonatais e desmamados. As vacinas para a proteção de porcos contra Clostridium perfringens tipo A são raras. Há atualmente somente uma (licenciada condicionalmente) vacina comercialmente disponível.neonatal and weaned pigs. Vaccines for the protection of pigs against Clostridium perfringens type A are rare. There is currently only one (conditionally licensed) commercially available vaccine.

Uma das razões para isto pode ser o fato de, como dito acima, a Clostridium perfringens tipo A ser um membro da flora normal. Portanto, não se esperaria que acionasse o sistema imune. Como conseqüência, não se esperaria que a produção de anticorpos fosse induzida contra Clostridium perfringens tipo A. Se os anticorpos fossem induzidos, Clostridium perfringens tipo A não sobreviveria no intestino, muito menos seria um membro da flora normal. Como uma outra conseqüência, não se esperaria, naturalmente, que as porcas transmitissem qualquer proteção para sua descendência através do colostro. Seja qual for a razão, parece que a Clostridium perfringens tipo A não induz suficiente estimulação imune.One reason for this may be that, as stated above, Clostridium perfringens type A is a member of the normal flora. Therefore, it would not be expected to trigger the immune system. As a consequence, antibody production would not be expected to be induced against Clostridium perfringens type A. If antibodies were induced, Clostridium perfringens type A would not survive in the gut, much less be a member of normal flora. As another consequence, naturally, sows would not be expected to transmit any protection to their offspring through colostrum. Whatever the reason, it seems that Clostridium perfringens type A does not induce sufficient immune stimulation.

Foi agora surpreendentemente constatado que as vacinas de Clostridium perfringens tipo C, compreendendo sobrenadante de cultura destoxificado, são muito capaz de induzir proteção cruzada contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.It has now surprisingly been found that Clostridium perfringens type C vaccines, comprising detoxified culture supernatant, are very capable of inducing cross-protection against Clostridium perfringens type A infection.

Mais surpreendente, foi constatado que a vacinação de porcas com sobrenadante de cultura de Clostridium perfringens tipo C resulta em uma significativa proteção de seus porquinhos contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.More surprisingly, it has been found that vaccination of sows with Clostridium perfringens type C culture supernatant results in significant protection of their piglets against Clostridium perfringens type A infection.

Mesmo mais surpreendente, descobriu-se que mesmos as porcas têm um melhor desempenho após esta vacinação. Isto é surpreendente porque era geralmente suposto, como mencionado acima, que os porcos totalmente desenvolvidos, tais como porcas, não eram adversamente afetados por infecção por Clostridium perfringens tipo A. Este achado pela primeira vez prova que ocorre ao contrário.Even more surprising, even nuts have been found to perform better after this vaccination. This is surprising because it was generally assumed, as mentioned above, that fully developed pigs, such as sows, were not adversely affected by Clostridium perfringens type A infection. This finding for the first time proves to be the opposite.

Portanto, uma primeira forma de realização da presente invenção refere-se ao uso de uma bactéria Clostridium perfringens tipo C para a manufatura de uma vacina para a proteção de porcos totalmente desenvolvidos contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.Therefore, a first embodiment of the present invention relates to the use of a Clostridium perfringens type C bacterium for the manufacture of a vaccine for the protection of fully grown pigs against Clostridium perfringens type A infection.

Uma segunda forma de realização da presente invenção refere- se ao uso de uma bactéria Clostridium perfringens tipo C para a manufatura de uma vacina para a proteção de porcas contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.A second embodiment of the present invention relates to the use of a Clostridium perfringens type C bacterium for the manufacture of a vaccine to protect sows against Clostridium perfringens type A infection.

Uma terceira forma de realização da presente invenção refere- se ao uso de uma bactéria Clostridium perfringens tipo C para a manufatura de uma vacina para porcas, para a proteção de leitões contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.A third embodiment of the present invention relates to the use of a Clostridium perfringens type C bacterium for the manufacture of a sow vaccine for the protection of piglets against Clostridium perfringens type A infection.

Uma quarta forma de realização da presente invenção refere-se ao uso de uma bactéria Clostridium perfringens tipo C para a manufatura de uma vacina para a proteção de leitões contra infecção por Clostridium perfringens tipo A. Como o técnico hábil entenderá, de feto o uso de uma bactéria Clostridium perfringens tipo C, para a manufatura de uma vacina é um processo de duas etapas: a bactéria Clostridium perfringens tipo C é usada para crescimento em um meio de cultura, a fim de obter-se o sobrenadante de cultura que é a base para a manufatura da vacina de acordo com a presente invenção.A fourth embodiment of the present invention relates to the use of a Clostridium perfringens type C bacterium for the manufacture of a vaccine for the protection of piglets against Clostridium perfringens type A infection. As the skilled artisan will understand, the use of Clostridium perfringens type C bacteria for the manufacture of a vaccine is a two-step process: Clostridium perfringens type C bacteria is used for growth in a culture medium to obtain the culture supernatant that underlies it. for the manufacture of the vaccine according to the present invention.

Portanto, outra forma de realização da presente invenção refere-se ao uso de um sobrenadante de cultura de Clostridium perfringens tipo C para a manufatura de uma vacina para a proteção de porcos totalmente desenvolvidos contra infecção por Clostridium perfringens tipo A. Ainda outra forma de realização da presente invenção refere-seTherefore, another embodiment of the present invention relates to the use of a Clostridium perfringens type C culture supernatant for the manufacture of a vaccine for the protection of fully grown pigs against Clostridium perfringens type A infection. Still another embodiment of the present invention relates to

ao uso de um sobrenadante de cultura de Clostridium perfringens tipo C, para a manufatura de uma vacina para a proteção de porcas contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.the use of a Clostridium perfringens type C culture supernatant for the manufacture of a vaccine to protect sows against Clostridium perfringens type A infection.

Repetindo, outra forma de realização da presente invenção refere-se ao uso de um sobrenadante de cultura de Clostridium perfringens tipo C para a manufatura de uma vacina para porcas, para a proteção de leitões contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.Again, another embodiment of the present invention relates to the use of a Clostridium perfringens type C culture supernatant for the manufacture of a sow vaccine for the protection of piglets against Clostridium perfringens type A infection.

Também uma forma de realização da presente invenção refere- se ao uso de um sobrenadante de cultura de Clostridium perfringens tipo C para a manufatura de uma vacina para a proteção de leitões contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.Also an embodiment of the present invention relates to the use of a Clostridium perfringens type C culture supernatant for the manufacture of a vaccine for the protection of piglets against Clostridium perfringens type A infection.

Dentro do tipo de toxina de Clostridium perfringens tipo C pode ser feita uma divisão entre aquelas cepas que produzem toxina beta-2 e aquelas cepas que não produzem. Cerca de 50% de todas as cepas de Clostridium perfringens tipo C produzem esta toxina.Within the toxin type of Clostridium perfringens type C a division can be made between those strains producing beta-2 toxin and those strains that do not. About 50% of all Clostridium perfringens type C strains produce this toxin.

Verificou-se que uma bactéria Clostridium perfringens tipo C que produza toxina beta-2 é mesmo mais adequada do que uma bactéria Clostridium perfringens tipo C que não produz toxina beta-2. Tais cepas e sua identificação são i.a. descritas por Fisher, D. J. et al. (Inf. & Immun. 74: 5200 -5210 (2006)).A Clostridium perfringens type C bacterium that produces beta-2 toxin has been found to be even more suitable than a Clostridium perfringens type C bacterium that does not produce beta-2 toxin. Such strains and their identification are i.a. described by Fisher, D. J. et al. (Inf. & Immun. 74: 5200-5210 (2006)).

Assim, uma forma preferida desta forma de realização refere- se ao uso em que uma bactéria Clostridium perfringens tipo C é usada que produz toxina beta-2.Thus, a preferred embodiment of this embodiment relates to the use in which a Clostridium perfringens type C bacterium is used which produces beta-2 toxin.

As vacinas manufaturadas como descrito acima não são deThe vaccines manufactured as described above are not of

forma alguma as únicas vacinas que são administradas a porcos no processo de criação de porcos comerciais. As vacinas clostrídicas são freqüentemente dadas cerca do mesmo tempo que vacinas contra outros organismos e vírus patogênicos de porcos. Assim, em outra forma de realização preferida, a vacinaby no means are the only vaccines that are administered to pigs in the process of rearing commercial pigs. Clostridial vaccines are often given at about the same time as vaccines against other pathogenic organisms and pig viruses. Thus, in another preferred embodiment, the vaccine

manufaturada como descrito na presente invenção adicionalmente compreende um ou mais antígenos derivados de organismos ou vírus patogênicos de porcos, anticorpos contra aqueles antígenos ou informação genética codificando tais antígenos. Tais organismos ou vírus são preferivelmente selecionados doManufactured as described in the present invention further comprises one or more antigens derived from pathogenic pig organisms or viruses, antibodies against those antigens or genetic information encoding such antigens. Such organisms or viruses are preferably selected from the

grupo de vírus da pseudo-raiva, vírus PRRS, vírus de influenza de porcinos, parvo vírus de porcino, vírus da gastroenterite transmissível, Rotavírus, Escherichia eoli, Erysipelothrix rhusiopathiae, Bordetella bronchiseptiea, Salmonella typhimurium, Salmonella eoleraesuis, Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Myeoplasma hyopneumoniae, Braehyspira hyodyserenteriae e Actinobacillus pleuropneumoniae.pseudorabies virus group, PRRS virus, porcine influenza virus, silly porcine virus, transmissible gastroenteritis virus, Rotavirus, Escherichia eoli, Erysipelothrix rhusiopathiae, Bordetella bronchiseptiea, Salmonella typhimurium, Salmonella eoleraesuis, Haemophilus parasuis, Streptococcus suis, Myeoplasma hyopneumoniae, Braehyspira hyodyserenteriae and Actinobacillus pleuropneumoniae.

Portanto, uma forma mais preferida desta forma de realização refere-se a uma vacina manufaturada como descrito na presente invenção, que adicionalmente compreenda um ou mais antígenos derivados de organismos ou vírus patogênicos de porco, em que estes organismos ou vírus são selecionados do grupo de vírus da pseudo-raiva, vírus PRRS, vírus de influenza de porcino, parvo vírus de porcino, vírus da gastroenterite transmissível, Rotavírus, Escheriehia eoli, Erysipelothrix rhusiopathiae, Bordetella bronchiseptiea, Salmonella typhimurium, Salmonella eholeraesuis, Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Myeoplasma hyopneumoniae, Braehyspira hyodysenteriae e Actinobacillus pleuropneumoniae.Therefore, a more preferred embodiment of this embodiment relates to a manufactured vaccine as described in the present invention which additionally comprises one or more antigens derived from pathogenic pig organisms or viruses, wherein these organisms or viruses are selected from the group of pseudorabies virus, PRRS virus, porcine influenza virus, silly porcine virus, transmissible gastroenteritis virus, Rotavirus, Escheriehia eoli, Erysipelothrix rhusiopathiae, Bordetella bronchiseptiea, Salmonella typhimurium, Salmonella eholeraesuis , Myeoplasma hyopneumoniae, Braehyspira hyodysenteriae and Actinobacillus pleuropneumoniae.

Em seguida a infecção por Clostridium perfringens, os leitões freqüentemente sofrem de infecção por Eseheriehia eoli. Eseheriehia eoli é a causa de outra doença entérica severa em leitões. Portanto, os leitões ou porcas grávidas são freqüentemente vacinadas com vacinas de Eseheriehia eoli. As vacinas de Eseheriehia eoli são comumente usadas no campo e elas são comercialmente disponíveis. Uma vacina de combinação compreendendo tanto sobrenadante de cultura de Clostridium perfringens tipo C como componentes de vacinas de Eseheriehia eoli é altamente desejável porque ela protege contra infecção por Clostridium perfringens tipo C, Clostridium perfringens tipo A e Eseheriehia eoli.Following Clostridium perfringens infection, piglets often suffer from Eseheriehia eoli infection. Eseheriehia eoli is the cause of another severe enteric disease in piglets. Therefore, pregnant piglets or sows are frequently vaccinated with Eseheriehia eoli vaccines. Eseheriehia eoli vaccines are commonly used in the field and they are commercially available. A combination vaccine comprising both Clostridium perfringens type C culture supernatant and components of Eseheriehia eoli vaccines is highly desirable because it protects against infection with Clostridium perfringens type C, Clostridium perfringens type A and Eseheriehia eoli.

Portanto, uma forma mais preferida desta forma de realização refere-se a uma vacina manufaturada como descrito na presente invenção, que adicionalmente compreende um ou mais antígenos derivados do organismo patogênico de porco Eseheriehia eoli.Therefore, a more preferred embodiment of this embodiment relates to a manufactured vaccine as described in the present invention, which additionally comprises one or more antigens derived from the Eseheriehia eoli pig pathogen.

A invenção é exemplificada em uma maneira não limitante nos seguintes exemplos. ExemplosThe invention is exemplified in a non-limiting manner in the following examples. Examples

Produção de antígeno de Clostridium perfringens tipo CClostridium perfringens type C antigen production

Uma cepa de Clostridium perfringens tipo C padrão, cepa 587 (também designada CWC l/S, da Weybridge U.K. Collection), foi cultivada em um fermentador até o início da fase de crescimento estacionário. A cultura foi centrifugada e a pelota contendo as células bacterianas foi descartada. Formaldeído foi adicionado ao sobrenadante a uma concentração final de 0,5% v/v para inativar as toxinas, seguido por concentração por meio de ultra filtragem e filtragem de 0,2 μιη. Preparação da vacinaA standard C-type Clostridium perfringens strain, strain 587 (also called Weybridge U.K. Collection CWC l / S), was grown in a fermenter until the beginning of the steady growth phase. The culture was centrifuged and the pellet containing the bacterial cells was discarded. Formaldehyde was added to the supernatant at a final concentration of 0.5% v / v to inactivate the toxins, followed by concentration by ultra filtration and 0.2 μιη filtration. Vaccine Preparation

Uma vacina foi formulada misturando-se o antígeno Clostridium perfringens tipo C e um adjuvante baseado em cotoferol. Cada dose da vacina (2 ml) consistiu de 20 μΐ de um concentrado de sobrenadante de cultura toxóide de antígeno Clostridium perfringens tipo C concentrado 17 vezes. A vacina satisfazia a monografia 0363 da European Pharmacopoeia (vacina de Clostridium perfringens para uso veterinário) referente a segurança e potência das vacinas tipo C.A vaccine was formulated by mixing Clostridium perfringens type C antigen and a cotoferol-based adjuvant. Each vaccine dose (2 ml) consisted of 20 μΐ of a Clostridium perfringens antigen toxoid culture supernatant concentrate concentrate type 17 concentrated 17 times. The vaccine complied with European Pharmacopoeia monograph 0363 (Clostridium perfringens vaccine for veterinary use) concerning the safety and potency of type C vaccines.

Adicionalmente, neste experimento, antígenos de Escherichia coli (fímbrias F4ab, F4ac, F5 e F6 e toxina instável ao calor) foram adicionados para suprimir possível infecção por Eseheriehia coli. Estes componentes são conhecidos na arte e o técnico hábil saberia como produzir uma vacina com base nestes componentes.Additionally, in this experiment, Escherichia coli antigens (F4ab, F4ac, F5 and F6 fimbriae and heat-unstable toxin) were added to suppress possible Eseheriehia coli infection. These components are known in the art and the skilled artisan would know how to produce a vaccine based on these components.

Alternativamente, entretanto, o técnico hábil poderia usar uma vacina de Eseheriehia coli comercialmente disponível e pronta para uso, tal como Porcilis Porcoli DF (obtenível através da Intervet Int. B.V., Wim de Korverstraat 35, Boxmeer, Países Baixos).Alternatively, however, the skilled technician could use a commercially available ready-to-use Eseheriehia coli vaccine such as Porcilis Porcoli DF (obtainable from Intervet Int. B.V., Korverstraat Wim 35, Boxmeer, The Netherlands).

A vacina de controle compreende os mesmos componentes, exceto quanto ao antígeno de Clostridium perfringens tipo C, que não estava presente no grupo de controle. Proteção de porcasThe control vaccine comprises the same components except for Clostridium perfringens type C antigen, which was not present in the control group. Nut Protection

Uma fazenda de produção de porcos holandesa, em que havia um surto clínico de Clostridium perfringens tipo A, foi selecionada para um estudo duplo cego de eficácia de campo aleatorizado. O isolado de Clostridium perfringens tipo A da fazenda foi constatado produzir tanto toxina-α como toxina β2.A Dutch pig farm with a clinical outbreak of Clostridium perfringens type A was selected for a double-blind randomized field efficacy study. Clostridium perfringens type A isolate from the farm was found to produce both α-toxin and β2 toxin.

As porcas foram vacinadas IM durante a gravidez, a aproximadamente 6 e 2 semanas antes de parir, com uma vacina contendo antígenos de Escheriehia coli somente (grupo de controle) ou com uma vacina contendo antígenos de Escherichia coli e antígeno de Clostridium perfringens tipo C (grupo de teste). As vacinas foram codificadas por cor (vacina de teste 2x, vacina de controle lx) para assegurar cegueira, e a distribuição das porcas através dos grupos era de aproximadamente 2:1 (Tabela 1).Sows were vaccinated IM during pregnancy, approximately 6 and 2 weeks before calving, with a vaccine containing Escheriehia coli antigens only (control group) or with a vaccine containing Escherichia coli antigens and Clostridium perfringens type C antigen ( test group). Vaccines were color coded (2x test vaccine, 1x control vaccine) to ensure blindness, and the distribution of sows across the groups was approximately 2: 1 (Table 1).

Tabela 1. Tamanhos de grupoTable 1. Group sizes

Grupo Número de porcas Número de leitões nascidos vivos por porca Número total de leitões Controle 41 11,6 453 Teste 77 12,1 904Group Number of sows Number of live-born piglets per sow Total number of piglets Control 41 11.6 453 Test 77 12.1 904

Do dia da primeira vacinação até o tempo de desmamar dos leitões (3-4 semanas após parir), as porcas foram observadas a cada 3 dias quanto à saúde geral, ingestão de alimentos e diarréia. Para facilitar a análise estatística, um sistema de classificação clínica foi usado (Tabela 2). Os leitões nascidos das porcas vacinadas foram observados diariamente durante a primeira semana de vida, uma vez cada três dias a partir de uma semana até desmamar e semanalmente em seguida até o final do período de amamentação. Saúde geral, ingestão de alimentos, diarréia e mortalidade foram registrados (Tabela 2). Tabela 2. Sistema de classificação usado para porcas e leitões:From the day of the first vaccination until the weaning time of piglets (3-4 weeks after calving), sows were observed every 3 days for overall health, food intake and diarrhea. To facilitate statistical analysis, a clinical classification system was used (Table 2). Piglets born from vaccinated sows were observed daily during the first week of life, once every three days from one week until weaning and weekly thereafter until the end of the suckling period. Overall health, food intake, diarrhea and mortality were recorded (Table 2). Table 2. Grading system used for sows and piglets:

Classificação Clínica Conduta Apetite Consistência Fecal Composição Fecal 0 Normal Normal Normal Normal 1 Deprimida Ligeira inapetência Mole Muco presente 2 Letárgica Inapetência marcante Líquida Muco com sangue presente 3 Moribundo Não mamando Aquosa Sangue presente com depósitos intestinaisClinical Classification Conduct Appetite Fecal Consistency Fecal Composition 0 Normal Normal Normal Normal 1 Depressed Mild Inappetence Mucus Present 2 Lethargic Marked Inappetence Liquid Mucus Present 3 Moribund Non-Sucking Aqueous Blood Present with Intestinal Deposits

ResultadosResults

Tabela 3. Observações clínicas das porcasTable 3. Clinical observations of sows

Classificação (N) O 1 2 3 Média Comportamento Geral Controle 687 99 51 20 0,30 Teste 1623 33 0 0 0,02 Apetite Controle 597 139 71 49 0,50 Teste 1598 47 9 0 0,04 Consistência Fecal Controle 385 250 153 68 0,89 Teste 1564 67 17 7 0,07 Composição Fecal Controle 780 71 4 0 0,09 Teste 1647 8 0 0 0,01 A Tabela 3 mostra o efeito da vacinação com uma vacina compreendendo os antígenos de Clostridium perfringens tipo C comparados com vacinação com uma vacina sem antígenos de Clostridium perfringens tipo C.Rating (N) O 1 2 3 Average Overall Behavior Control 687 99 51 20 0.30 Test 1623 33 0 0 0.02 Appetite Control 597 139 71 49 0.50 Test 1598 47 9 0 0.04 Fecal Consistency Control 385 250 153 68 0.89 Test 1564 67 17 7 0.07 Fecal Composition Control 780 71 4 0 0.09 Test 1647 8 0 0 0.01 Table 3 shows the effect of vaccination with a vaccine comprising Clostridium perfringens type C antigens compared vaccinated with a Clostridium perfringens type C antigen-free vaccine.

Como segue sem dúvida pela Tabela 3, a vacinação com aAs no doubt follows from Table 3, vaccination with

vacina compreendendo os antígenos de Clostridium perfringens tipo C resultou em uma melhoria muito significativa do status de saúde das porcas. Proteção da descendência de porcas vacinadasA vaccine comprising Clostridium perfringens type C antigens resulted in a very significant improvement in the health status of sows. Protection of offspring of vaccinated sows

A taxa de mortalidade também das ninhadas das porcas que tinham sido vacinadas com a vacina compreendendo os antígenos de Clostridium perfringens tipo C foi comparada com aquela das ninhadas de porcas que tinham sido vacinadas com uma vacina sem antígenos de Clostridium perfringens tipo C.The mortality rate of sow litters that had been vaccinated with the vaccine comprising Clostridium perfringens type C antigens was also compared to that of sow litters that had been vaccinated with a Clostridium perfringens type C antigen-free vaccine.

Como conclui-se sem dúvida pela Tabela 4, a taxa de mortalidade das ninhadas das porcas que tinham sido vacinadas com a vacina compreendendo os antígenos de Clostridium perfringens tipo C foi significativamente mais baixa do que no grupo de controle.As Table 4 undoubtedly concludes, the litter mortality rate of sows that had been vaccinated with the vaccine comprising Clostridium perfringens type C antigens was significantly lower than in the control group.

Além disso, a Tabela 5 mostra que os leitões das porcas que tinham sido vacinadas com a vacina compreendendo os antígenos de Clostridium perfringens tipo C tinham significativamente mais baixas classificações clínicas do que os do grupo de controle.In addition, Table 5 shows that piglets from sows that had been vaccinated with the vaccine comprising Clostridium perfringens type C antigens had significantly lower clinical ratings than those in the control group.

Tabela 4. Mortalidade semanal das ninhadas de controle e de testeTable 4. Weekly mortality of control and test litters

Idade (dias) Controle Teste 0-6 29 22 7-13 3 3 14-21 7 2 21-27 6 1 28-34 2 1 35-41 0 0 42-48 1 1 49-55 1 1 56-62 0 0 63-70 0 0 Total (%) 50 (11,04) 31 (3,43) Tabela 5. Observações clínicas dos leitõesAge (days) Control Test 0-6 29 22 7-13 3 3 14-21 7 2 21-27 6 1 28-34 2 1 35-41 0 0 42-48 1 1 49-55 1 1 56-62 0 0 63-70 0 0 Total (%) 50 (11.04) 31 (3.43) Table 5. Clinical observations of piglets

Classificação (N) 0 1 2 3 Média Comportamento Geral Controle 336 232 137 73 0,93 Teste 1159 271 55 11 0,28 Apetite Controle 426 166 128 58 0,77 Teste 1336 125 31 4 0,13 Consistência Fecal Controle 544 118 71 40 0,49 Teste 1419 48 17 12 0,08 Composição Fecal Controle 636 104 31 6 0,24 Teste 1414 70 10 1 0,06Rating (N) 0 1 2 3 Average Overall Behavior Control 336 232 137 73 0.93 Test 1159 271 55 11 0.28 Appetite Control 426 166 128 58 0.77 Test 1336 125 31 4 0.13 Fecal Consistency Control 544 118 71 40 0.49 Test 1419 48 17 12 0.08 Fecal Composition Control 636 104 31 6 0.24 Test 1414 70 10 1 0.06

Conclusão: os dados mostram que a vacinação de porcas com uma vacina contendo antígenos de Clostridium perfringens do tipo C resulta em uma melhora significante do estado de saúde de ambas as porcas vacinadas e sua prole em face de um surto de Clostridium perfringens tipo A.Conclusion: Data show that vaccination of sows with a vaccine containing Clostridium perfringens type C antigens results in a significant improvement in the health status of both vaccinated sows and their offspring in the face of an outbreak of Clostridium perfringens type A.

Claims (12)

1. Uso de uma bactéria Clostridium perfringens tipo C, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de uma vacina para a proteção de porcos totalmente desenvolvidos contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.1. Use of a Clostridium perfringens type C bacterium, characterized in that it is for the manufacture of a vaccine to protect fully developed pigs against Clostridium perfringens type A infection. 2. Uso de uma bactéria Clostridium perfringens tipo C, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de uma vacina para a proteção de porcas contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.2. Use of Clostridium perfringens type C bacteria, characterized in that it is for the manufacture of a vaccine to protect sows against Clostridium perfringens type A infection. 3. Uso de uma bactéria Clostridium perfringens tipo C, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de uma vacina para porcas para a proteção de leitões contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.3. Use of a Clostridium perfringens type C bacterium, characterized in that it is for the manufacture of a sow vaccine to protect piglets against Clostridium perfringens type A infection. 4. Uso de uma bactéria Clostridium perfringens tipo C, dito uso caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de uma vacina para a proteção de leitões contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.4. Use of a Clostridium perfringens type C bacterium, said use characterized by the fact that it is for the manufacture of a vaccine to protect piglets against Clostridium perfringens type A infection. 5. Uso de um sobrenadante de cultura de Clostridium perfringens tipo C, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de uma vacina para a proteção de porcos totalmente desenvolvidos contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.5. Use of a Clostridium perfringens type C culture supernatant, characterized in that it is for the manufacture of a vaccine for the protection of fully developed pigs against Clostridium perfringens type A infection. 6. Uso de um sobrenadante de cultura de Clostridium perfringens tipo C, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de uma vacina para a proteção de porcas contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.6. Use of a Clostridium perfringens type C culture supernatant, characterized in that it is for the manufacture of a vaccine to protect sows against Clostridium perfringens type A infection. 7. Uso de um sobrenadante de cultura de Clostridium perfringens tipo C, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de uma vacina para porcas para a proteção de leitões contra infecção por Clostridium perfringens tipo A.7. Use of a Clostridium perfringens type C culture supernatant, characterized in that it is for the manufacture of a sow vaccine to protect piglets against Clostridium perfringens type A infection. 8. Uso de um sobrenadante de cultura de Clostridium perfringens tipo C, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de uma vacina para a proteção de leitões contra infecção por Clostridium perfringens tipo Α.8. Use of a Clostridium perfringens type C culture supernatant, characterized in that it is for the manufacture of a vaccine for the protection of piglets against Clostridium perfringens type infecção infection. 9. Uso de acordo com a reivindicação 1 a 8, caracterizado pelo fato de uma bactéria Clostridium perfringens tipo C ser usada, que produz toxina beta-2.Use according to claims 1 to 8, characterized in that a Clostridium perfringens type C bacterium is used which produces beta-2 toxin. 10. Uso de acordo com as reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de para a manufatura de dita vacina serem usados adicionalmente um ou mais antígenos derivados de organismos ou vírus patogênicos de porco, anticorpos contra esses antígenos ou informação genética codificando tais antígenos.Use according to claims 1 to 9, characterized in that for the manufacture of said vaccine one or more antigens derived from pathogenic pig organisms or viruses, antibodies against such antigens or genetic information encoding such antigens are additionally used. 11. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de dito organismo ou vírus patogênico ser selecionado do grupo de vírus da Pseudo-raiva, vírus PRRS, vírus da influenza de Porcino, parvo vírus de Porcino, vírus da gastroenterite transmissível, Rotavírus, Escherichia eoli, Erysipelothrix rhusiopathiae, Bordetella bronchiseptica, Salmonella choleraesuis, Salmonella typhimurium, Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Myeoplasma hyopneumoniae, Braehyspira hyodisenteriae e Actinobacillus pleuropneumoniae.Use according to claim 10, characterized in that said organism or pathogenic virus is selected from the group of Pseudorabies virus, PRRS virus, Porcino influenza virus, Silly Porcino virus, Transmissible gastroenteritis virus, Rotavirus. , Escherichia eoli, Erysipelothrix rhusiopathiae, Bordetella bronchiseptica, Salmonella choleraesuis, Salmonella typhimurium, Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Myeoplasma hyopneumoniae, Braehyspira hyodisenteriaus pleuropneumum and Actinobacum. 12. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de dito organismo patogênico de porco ser Eseheriehia eoli.Use according to claim 10, characterized in that said pathogenic organism of pig is Eseheriehia eoli.
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