BRPI0412725B1 - Markers for detection of gastric cancer - Google Patents

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BRPI0412725B1
BRPI0412725B1 BRPI0412725-0A BRPI0412725A BRPI0412725B1 BR PI0412725 B1 BRPI0412725 B1 BR PI0412725B1 BR PI0412725 A BRPI0412725 A BR PI0412725A BR PI0412725 B1 BRPI0412725 B1 BR PI0412725B1
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gtm
protein
tumor
markers
qpcr
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BRPI0412725-0A
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John Guilford Parry
John Holyoake Andrew
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Pacific Edge Biotechnology, Ltd.
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Abstract

"marcadores para detecção de câncer gástrico". a presente invenção refere-se a uma detecção precoce de tumores que é uma determinação principal de sobrevivência de pacientes sofrendo de tumores, incluindo tumores gástricos. membros da família do gene gtm podem ser superexpressos em tecido de tumor gástrico e outro tecido de tumor, e então podem ser usados como marcadores para câncer gástrico e outros tipos de câncer. proteínas de gtm podem ser liberadas de células cancerosas e podem atingir concentrações suficientemente altas no soro e/ou outros fluidos para permitir sua detecção. desse modo, métodos e kits de teste para detecção e quantificação de gtm podem prover uma ferramenta valiosa para diagnóstico de câncer gástrico.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MARCADORES PARA DETECÇÃO DE CÂNCER GÁSTRICO".
Pedido Relacionado O presente pedido reivindica prioridade sob 35 U.S.C. 119 para o Pedido de Patente Provisório Norte-americano No. de Série 60/487.906 depositado em 17 de julho de 2003, intitulado "Markers for Detection of Gas-tric Câncer”, registrando Parry John Guilford como inventor. O presente pedido acima é aqui incorporado por referência. Campo da Invenção A presente invenção refere-se à detecção de câncer. Especificamente, a presente invenção refere-se ao uso de marcadores genéticos e/ou de proteína para detecção de câncer, e, mais particularmente, ao uso de marcadores genéticos e/ou de proteína para detecção de câncer gástrico. ANTECEDENTES A sobrevivência de pacientes com câncer é bastante aumentada quando o câncer é detectado e tratado no início. No caso de câncer gástrico, os pacientes diagnosticados com doença no estado inicial têm taxas de sobrevivência de 5 anos de 90%, comparado com aproximadamente 10% para pacientes diagnosticados com doença avançada. No entanto, a maior parte de pacientes com câncer gástrico atualmente se apresenta com doença a-vançada. Desse modo, o desenvolvimento que leva ao diagnóstico precoce de câncer gástrico pode levar a um prognóstico aperfeiçoado para os pacientes. A identificação de marcadores associados a câncer específicos em amostras biológicas, incluindo fluidos do corpo, por exemplo, sangue, urina, lavagens peritoneais e extratos de fezes podem prover uma abordagem valiosa para diagnóstico precoce de câncer, levando a tratamento precoce e prognóstico aperfeiçoado. Marcadores de câncer específicos podem também prover um meio para monitoramento de progressão da doença, permitindo a eficácia de tratamentos cirúrgicos, radioterapêuticos e quimiote-rapêuticos a serem seguidos. No entanto, para vários da maioria dos cânce-res, os marcadores disponíveis sofrem de sensibilidade e especificidade in- suficientes. Por exemplo, os marcadores mais freqüentemente usados para câncer gástrico, ca19-9, ca72-4 e antígeno corioembriônico (CEA) detectam apenas cerca de 15-50% de tumores gástricos de qualquer estágio, declinando para aproximadamente 2-11% para doença em estágio inicial. Desse modo, há uma freqüência muito alta de testes falso negativos que podem levar os pacientes e praticantes de cuidado de saúde a acreditarem que a doença não existe, enquanto que na verdade o paciente pode ter câncer severo que precisa de atenção imediata. Além disso, esses marcadores podem dar sinais falso positivos em até 1/3 dos indivíduos afetados por doença gástrica benigna.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Desse modo, há uma necessidade aguda de métodos melhores para detecção da presença de câncer. Aspectos da presente invenção proveem métodos, composições e dispositivos que podem ser providos para detecção de câncer em estágio inicial e diminuição da freqüência de resultados de teste falso positivo e falso negativo.
Em certas modalidades, a análise molecular pode ser usada para identificar genes que são superexpressos em tecido de tumor gástrico comparado com tecido gástrico não-maligno. Tais análises incluem métodos de microdisposição e reação de cadeia de polimerase quantitativa (qPCR). Os genes e proteínas de câncer codificadas por esses genes são aqui chamados marcadores de tumor gástrico (GTM). Deve ser compreendido que o termo GTM não requer que o marcador seja específico apenas para tumores gástricos. Pelo contrário, a expressão de GTM pode ser aumentada em outros tipos de tumores, incluindo tumores malignos ou não-malignos, incluindo cânceres gástrico, de bexiga, colorretal, pancreático, ovariano, de pele (por exemplo, melanomas), de fígado, esofageal, endometrial e de cérebro, dentre outros. Deve ser compreendido, no entanto, que o termo GTM não inclui marcadores da técnica anterior, ca19-9, ca72-4 e CEA. Alguns GTM são suficientemente superexpressos para serem diagnóstico de câncer gástrico com um alto grau de confiabilidade, e, em outros casos, superexpressão de dois ou mais GTM pode prover diagnóstico confiável de câncer gástrico.
Em certas modalidades, métodos de microdisposição podem ser usados para detectar padrões de superexpressão de um ou mais genes associados com câncer.
Em outras modalidades, reação de cadeia de polimerase quantitativa (qPCR) pode ser usada para identificar a presença de marcadores su-perexpressos em tumor ou outras amostras biológicas.
Algumas das modalidades de detecção de GTM descritas aqui são superexpressas de maneira altamente seletiva em células de tumor e poucas, se alguma, em células de não-tumor, permitindo detecção sensível e precisa de câncer com a medição de apenas um GTM superexpresso. Em outras modalidades, a superexpressão de dois, três ou mais GTM pode ser detectada em uma amostra e pode prover maior certeza de diagnóstico.
Os genes selecionados que codificam proteínas podem ser se-cretados por ou clivados da célula. Essas proteínas, ou sozinhas ou em combinação umas com as outras, têm utilidade como marcadores de soro ou fluido do corpo para o diagnóstico de câncer gástrico ou como marcadores para monitoramento da progressão de doença estabelecida. A detecção de marcadores de proteína pode ser realizada usando métodos conhecidos na técnica e inclui o uso de anticorpos monoclonais, anti-soro policlonal e similar.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A presente invenção é descrita com referência às suas modalidades específicas e com referência às figuras, onde: A Figura 1 mostra uma tabela de marcadores e seqüências de oligonucleotídeo de marcadores para câncer gástrico da presente invenção. A Figura 2 mostra uma tabela de resultados obtidos de estudos realizados usando métodos de microdisposição. A Figura 3 mostra uma tabela de resultados obtidos de estudos realizados usando PCR quantitativa.
As Figuras 4a-4d mostram relações entre resultados de vez log2 obtidos usando métodos de disposição e qPCR, onde os dados são centrados na média normal para quatro marcadores de câncer gástrico. Os qua- drados cinzas correspondem a amostras não-malignas ("normais") e os triângulos pretos a amostras de tumor. A Figura 4a: ASPN. Figura 4b: SPP1. Figura 4c: SPARC. Figura 4d: MMP12.
As Figuras 5a-5w mostram histogramas mostrando a frequência relativa vs. dados de mudança de dobra log2 obtidos de estudos de PCR quantitativa de vários marcadores de tumor. Figura 5a: ASPN; Figura 5b: CST1,2 & 4; Figura 5c: CSPG2; Figura 5d: IGFBP7; Figura 5e: INHBA; Figura 5f: LOXL2; Figura 5g: LUM; Figura 5h: SFRP4; Figura 5i: SPARC; Figura 5j: SPP1; Figura 5k; THBS2; Figura 5I: TIMP1; Figura 5m; adlican; Figura 5n: PSR11; Figura 5o: ASAH1; Figura 5p: SFRP2; Figura 5q: GGH; Figura 5r: MMP12; Figura 5s: KLK10; Figura 5t: LEPRE1; Figura 5u: TG; Figura 5v: EFEMP2 e Figura 5w: TGFBI. A Figura 6 é um hístograma mostrando o número de marcadores com uma expressão maior do que a 95a porcentagem da expressão normal média. Os resultados são baseados em dados de qPCR e são mostrados separadamente para cada amostra de tumor.
As Figuras 7a-7c mostram gráficos que mostram expressão log2 relativa dos marcadores em amostras de tumor individuais e amostras não-malignas comparado com a expressão do gene para o marcador de tumor, CEA. CEA é o marcador de soro atualmente mais usado para monitorar a progressão de câncer gástrico, A Figura 8 mostra uma tabela que complementa a Figura 3. A Figura 8 sumariza os níveis de expressão determinados através de qPCR para os marcadores de tumor candidatos, mas usando os dados em par (isto é, amostras de tumor (T) e não-malignas ("N") do mesmo indivíduo) para prover uma razão de T:N. A Figura 8 também inclui marcadores adicionais não incluídos na Figura 3, a saber, MMP2, CGR11, TGFB1, PCSK5, SER-PINB5, SERPINH1. Para comparação, o nível de expressão do gene marcador de soro estabelecido, CEACAM5 (CEA), é também mostrado. 27 dos 29 marcadores têm uma diferença de T:N maior do que ou igual a CEA. Ainda, comparados com CEA, 29/29 dos marcadores têm uma porcentagem mais alta de amostras em par onde a expressão na amostra de tumor excede a expressão na amostra normal. Três marcadores, CST1,2,44, ASPN e S-FRP4 mostraram discriminação de 100% entre as amostras de tumor e as normais em par. As seqüências de gene desses marcadores, e a localização dos iniciadores e sondas usados para detectá-las, são mostradas aqui.
As Figuras 9a-9d mostram dados de mudança de vez de T:N individual e média para 29 marcadores de câncer gástrico em 40 pacientes com amostras em par.
As Figuras 10a-10ad mostram gráficos de estágio de tumor e mudança de vez log2 na expressão de CEA e outros GTM da presente invenção. A Figura 10a: adlican; Figura 10b: Figura 10b: ASPN; Figura 10c: CSPG2; Figura 10d: CST1,2,4; Figura 10e:EFEMP2; Figura 10f: GGF; Figura 10g: INHBA; Figura 10h: IGFBP7; Figura 10i: KLK10; Figura 10j: LEPRE1; Figura 10k: LUM; Figura 101: LOXL2; Figura 10m: MMP12; Figura 10n; TIMP1; Figura 10o: ASAH1; Figura 10p: SPP1; Figura 10q: SFRP2; Figura 10r: SFRP4; Figura 10s: SPARC; Figura 10t: PRSS11; Figura 10u: THBS2: Figura 10v: TG; Figura 10w: TGFBI; Figura 10x: CGR11; Figura 10y: SER-PINH1; Figura 10z: MMP2;. Figura 10aa: PCSK5; Figura 10ab: SERPINB5; Figura 10ac: TGFBI e Figura 10ad: CEA (CEACAM5).
Figuras 11a -11 ad mostram gráficos de tipo de tumor (difuso (D) ou intestinal (I) e mudança de vez log2 em expressão de 29 GTM da presente invenção e CEA. A Figura 11a: adlican; 11b: ASPN; Figura 11c: CSPG2; Figura 11d: CST1,2,4; Figura 11 e: EFEMP2; Figura 11f: GGH; Figura 11g: INHBA; Figura 11h: IGFBP7; Figura 11t: KLK10; Figura 11j: LEPRE1: Figura 11 k: LUM; Figura 111: LOXL2; Figura 11m: MMP12; Figura 11η: TIMP1; Figura 11o: ASAH1; Figura 11 p: SPP1; Figura 11 q: SFRP2; Figura 11 r: SFRP4: Figura 11s; SPARC; Figura 11 it: PRSS11: Figura 11 u: THBS2; Figura 11 v: TG; Figura I1w: TGFBI; Figura 11x: CGR11: Figura 11y: SERPINH1; Figura 11z: MMP2; Figura 11aa: PCSK5; Figura 11b: SERPINB5; Figura 11 ac: TGFB1 e Figura 11ad: CEA (CEACAM5). A Figura 12 mostra um gráfico tridimensional mostrando 3 marcadores, SERPINH1, CST1,2,4 e INHBA, em uma série de amostras de tumor gástrico e amostras gástricas não-malignas. A Figura 13 mostra uma tabela que mostra o efeito de marcadores múltiplos sobre a habilidade em discriminar precisamente entre tecido de tumor e tecido não-malígno. A tabela foi derivada de distribuições normais derivadas de dados de qPCR. A Figura 14 é um Western blot de 4 marcadores de tumor derivados de tecido de tumor e não-tumor, A Figura 15 é um Western blot do marcador de tumor SPARC em tecido de tumor gástrico e em soro. A Figura 16 é um imunoblot mostrando cistatina SN no sobrena-dante de um tipo de célula gástrica, AGS. DESCRIÇÃO DETALHADA Definições Antes de descrever as modalidades da presente invenção em detalhes, será útil prover algumas definições de termos conforme aqui usado. O termo "GTM" ou "marcador de tumor gástrico” ou "membro da família GTM" significa um gene, fragmento de gene, RNA, fragmento de RNA, proteína ou fragmento de proteína relacionado ou outra molécula de identificação associada com câncer gástrico que não inclui moléculas que são sabidas na técnica anterior estar associadas com câncer gástrico, ca19-19, ca72-4 e CEA. Exemplos de GTMs estão incluído aqui abaixo. O termo "marcador" significa uma molécula que está associada quantitativamente ou qualitativamente com a presença de um fenômeno biológico. Exemplos de "marcadores" são GTMs, no entanto, "marcadores" também incluem metabolitos, subprodutos, sejam relacionados diretamente ou indiretamente a um mecanismo de base da condição. O termo "qPCR" significa reação de cadeia de polimerase quantitativa. O termo "expressão" inclui produção de mRNA a partir de um gene ou porção de um gene e inclui a produção de uma proteína codificada por um RNA ou gene ou porção de um gene, e inclui aparência de um material de detecção associado com expressão. Por exemplo, a ligação de um ligante de ligação, tal como um anticorpo, a um gene ou outro oligonucleotí-deo, uma proteína ou um fragmento de proteína e a visualização do ligante de ligação está incluída no escopo do termo "expressão". Desse modo, densidade aumentada de um ponto em um immunoblot, tal como um Western blot, está incluída no termo "expressão" da molécula biológica de base. O termo "CPN2" significa carboxipeptidase N humana, polipeptí-deo 2, cadeia de 83 kDa; e carboxipeptidase N. O termo "HAPLN4" significa proteína 4 de ligação de glicoproteí-na hialuronana humana. O termo "MMP12" significa metaloproteinase de matriz humana 12. O termo "INHBA" significa inibina humana, beta A (também inclui activina A, activina AB ou polipeptídeo alfa). O termo "IGFBP7" significa fator de crescimento do tipo insulina humano 7. O termo "GGH" significa gama-glutamil hidrolase humana (também conhecida como conjugase, folipoligamaglutamil hidrolase). O termo "LEPRE1" significa proteoglicano enriquecido com leu-cina prolina humana (também conhecido como leprecan 1). O termo "CST4" significa cistatina humana S. O termo "SFRP4" significa proteína 4 -relacionada com frisamen-to (frisamento) secretada. O termo "ASP" significa asporina humana (também conhecida como LRR classe 1). O termo "CGREF1" ou "CGR11" significa regulador de crescimento de célula humano com domínio de mão (de mão) EF 1. O termo "KLK" significa ou calicreína humana 10, variante 1 ou calicreína humana 10, variante 2, ou ambas, a menos que de outro modo especificado. O termo "TIMP1" significa inibidor de metaloproteinase 1 de tecido humano (também conhecido com atividade de potencialização de eritrói-de ou inibidor de colagenase). 0 termo "SPARC" significa proteína secretada humana, rica em cisteína (também conhecida como osteonectina). O termo "TGFBI" significa fator de crescimento de transformação humano, beta-induzido, 68 kDa. O termo "EFEMP2" significa proteína de matriz extracelular 2 do tipo fibuiina contendo EGF humano. O termo "LUM" significa lumican humano. O termo "SNN" significa estanína humana. O termo "SPP1" significa fosfoproteína 1 secretada humana (também conhecida como osteopontina, ou sialoproteína I de osso, ou ativação de linfócito T 1 precoce). O termo "CSPG2" significa proteoglícano condroitina sulfato humano 2 (também conhecido como versican). O termo "ASAH1" significa N-acilesfingosina amidoidrolase humana, variante 1, ou N-acilesfingosina amidoidrolase, variante 2, ou ambas N-acilesfingosina amidoidrolase variantes 1 e 2 (também conhecidas como ceramidase 1 ácida, variantes 1 e 2). O termo "PRSSH" significa protease humana, serina, 11 (também conhecida como protease de serina de ligação de IGF). O termo "SFRP2" significa proteína 2 relacionada com frisamen-to secretada humana. O termo "PLA2G12B" significa fosfolipase A2 humana, grupo XIIB. O termo "SPON2" significa espondina 2 humana, proteína de matriz extracelular. O termo OLFM1" significa olfactomedina 1 humana. O termo "TSRC1" significa repetição de trombospondina humana contendo 1. O termo 'THBS2" significa trombospondina 2 humana. O termo "adlican" significa DKFZp564l 1922. O termo "CST2" significa cistatina SA humana. O termo "CST1" significa cistatina SN humana. 0 termo "LOXL2" significa a enzima 2 do tipo lisil oxídase humana. O termo "TG" significa tiroglobulina humana. O termo "TGFB1" significa fator de crescimento de transformação humano, beta 1. O termo "SERPINH1" significa inibidor de serina ou cisíeína pro-tease humana clade H (também conhecido como proteína de choque de calor 47, membro 1, proteína de ligação de colágeno 1). O termo "SERPINB5" significa inibidor de serina ou cisteína pro-tease humano, clade B (também conhecido como ovalbumina, membro 5). O termo "CEACAM5" ou "CEA” significa molécula de adesão de célula 5 relacionada a antígeno carcinoembriônico humana. O termo "MMP2" significa metaloproteinase de matriz 2 humana (também conhecida como gelatinase A, ou gelatinase de 72 kDa, ou colage-nase do tipo IV de 72 kDa). O termo "PCSK5" significa Pró-proteína convertase humana sub-tilisina/quexina do tipo 5.
Deve ser compreendido que os termos acima podem ser referir à proteína, seqüência de DNA e/ou sequência de RNA. Deve ser compreendido que os termos acima também se referem a proteínas não-humanas, DNA e/ou RNA tendo a mesma seqüência conforme mostrado aqui.
Descrição das Modalidades da Invenção Marcadores para detecção e avaliação de tumores incluindo câncer gástrico são providos, os quais têm uma maior confiabilidade na detecção de câncer gástrico do que os marcadores da técnica anterior. Através do termo "confiabilidade" é incluída a ausência de falsos positivos e/ou falsos negativos. Desse modo, com maior confiabilidade de um marcador, menos falsos positivos e/ou falsos negativos estão associados com diagnósticos feitos usando o marcador. Desse modo, em certas modalidades, são providos marcadores que permitem a detecção de câncer gástrico com confiabilidade maior do que a confiabilidade de marcadores da técnica anterior de cerca de 50%. Em outras modalidades, são providos marcadores que têm confiabilidade maior do que cerca de 70%; em outras modalidades, mais de cerca de 73%, em ainda outras modalidades, mais do que cerca de 80%, ainda em outras modalidades, mais do que cerca de 90%, ainda em outras, mais do que cerca de 95%, em ainda outras modalidades mais do que cerca de 98%, e em certas modalidades, cerca de 100% de confiabilidade.
Desse modo, surpreendentemente a requerente encontrou vários genes e proteínas cuja presença está associada a tumores gástricos. A detecção de produtos de gene (por exemplo, oligonucleotídeos, tal como mRNA) e proteínas e peptídeos traduzidos de tais oligonucleotídeos então podem ser usados para diagnosticar tumores, tal como tumores gástricos. Análise de disposição de amostras tomadas de pacientes com tumores gástricos e de tecidos não-malignos dos mesmos indivíduos levou à surpreendente constatação que em muitos tumores gástricos padrões específicos de superexpressão de certos genes estão associados com a doença.
Marcadores de câncer podem ser também detectados usando anticorpos criados contra marcadores de câncer.
Através de análise da presença e quantidades de expressão de uma pluralidade de marcadores de câncer pode-se então aumentar a sensibilidade de diagnóstico enquanto diminuindo a frequência de resultados falso positivo e/ou falso negativo.
Abordagens Gerais para Detecção de Câncer As abordagens que seguem são métodos não-limitantes que podem ser usados para detectar câncer incluindo câncer gástrico usando membros da família GTM. • Abordagens de microdisposição usando sondas de oligonucleotídeo seletivas para produtos de genes de GTM. • PCR quantitativa de tempo real (qPCR) em amostras de tumor e amostras normais usando iniciadores e sondas específicos. • Ensaios imunológicos ligados à enzima (ELISA). • Anti-soro usando anticorpos antimarcadores em tumores gástricos e metás-tases de nó linfático. • Anti-soro usando anticorpos antimarcadores em outros tumores incluindo mas não limitado a colorretal, pancreático, ovariano, melanoma, fígado, eso-fageal, bexiga, endometrial e cérebro. • Imunodetecção de membros da família de marcador em soros de pacientes com câncer gástrico tomados antes e após a cirurgia para remover o tumor. • Imunodetecção de membros da família de marcador em soros de indivíduos saudáveis e indivíduos com doenças não-maiignas, tal como gastrite, ulceração, metaplasia gástrica e displasia. • Imunodetecção de membros da família de marcador em pacientes com outros cânceres incluindo mas não limitado a colorretal, pancreático, ovariano, melanoma, fígado, esofageal, bexiga, endometrial e cérebro. • Detecção de marcadores em fluidos do corpo, incluindo soro, linfo, fluido peritoneal, fluido cerebroespinhal, fluido sinovial e similar. • Imunodetecção de membros da família de marcador em fluido gástrico, lavagens peritoneais, urina e fezes de pacientes com câncer gástrico. Usando métodos de disposição e/ou qPCR. • Análise de dados de diposição ou qPCR usando computadores. O dado primário é coletado e análise de mudança de vez é realizada através de comparação dos níveis de expressão de gene de tumor gástrico com expressão dos mesmos genes em tecido de não-tumor. Um limiar para conclusão de que a expressão é aumentada é provido (por exemplo, aumento de 1,5x, aumento de 2 vezes, e em modalidades alternativas, aumento de 3 vezes, aumento de 4 vezes ou aumento de 5 vezes). Pode ser compreendido que outros limiares para conclusão de que a expressão aumentada aconteceu podem ser selecionados sem se afastar do escopo da presente invenção. Análise adicional de expressão de gene de tumor inclui combinação daqueles genes que exibem expressão aumentada com perfis de expressão de tumores gástricos para prover diagnóstico de tumores.
Em certos aspectos, a presente invenção provê métodos para detecção de câncer, compreendendo: (a) provisão de uma amostra biológica; e (b) detecção da superexpressão de um membro da família GTM na dita amostra.
Em outros aspectos, a invenção inclui uma etapa de detecção de superexpressão de mRNA de GTM.
Em outros aspectos, a invenção inclui uma etapa de detecção de superexpressão de uma proteína de GTM.
Ainda em outros aspectos, a invenção inclui uma etapa de detecção de superexpressão de um peptídeo de GTM.
Ainda em aspectos adicionais, a invenção inclui um dispositivo para detecção de um GTM compreendendo: um substrato tendo um reagente de captura de GTM sobre ele; e um detector associado com o dito substrato, o dito detector capaz de detectar um GTM associado com o dito reagente de captura, onde o reagente de captura inclui um oligonucleotídeo ou um anticorpo.
Aspectos adicionais incluem estojos para detecção de câncer compreendendo: um substrato; um reagente de captura de GTM, incluindo um ou mais de um oligonucleotídeo específico de GTM e um anticorpo específico de GTM; e instruções para uso.
Aspectos adicionais da invenção incluem método para detecção de um GTM usando qPCR compreendendo: um iniciador adiantado específico para o dito GTM; um iniciador reverso específico para o dito GTM; reagentes de PCR; um frasco de reação; e instruções para uso.
Aspectos adicionais da presente invenção compreendem um kit para detecção da presença de uma proteína ou peptídeo de GTM compreendendo: um substrato tendo um agente de captura para a dita proteína ou peptídeo de GTM; um anticorpo específico para a dita proteína ou peptídeo de GTM; um reagente capaz de marcar anticorpo ligado para a dita proteína ou peptideo de GTM; e instruções para uso.
Aspectos adicionais da presente invenção incluem um método para fabricação de um anticorpo monoclonai compreendendo as etapas de: Ainda em aspectos adicionais, a presente invenção inclui um método para detecção de câncer gástrico compreendendo as etapas de: provisão de uma amostra de um paciente suspeito de ter câncer gástrico; medição da presença de uma proteína de GTM usando um método ELISA.
Conforme aqui descrito, a detecção de tumores pode ser realizada medindo a expressão de um ou mais marcadores específicos de tumor. Foi inesperadamente constatado que a associação entre expressão aumentada de GTMs e a presença de câncer gástrico diagnosticado é extremamente alta. A associação significante mínima detectada tinha um valor p de cerca de 1,6 x 10'6. Muitas dessas associações eram significantes em valores de p de menos do que 10'20. Com significância tão alta, pode não ser necessário detectar expressão aumentada em mais de um GTM. IMo entanto, a redundância nos GTMs desta invenção pode permitir detecção de cânce-res gástricos com uma confiabilidade aumentada, Os métodos providos aqui também incluem ensaios de alta sensibilidade. qPCR é extremamente sensível, e pode ser usado para detectar produtos de gene em número de cópia muito baixo (por exemplo, 1-100) em uma amostra. Com tal sensibilidade, detecção muito precoce de casos que estão associados com câncer gástrico é tornada possível. Métodos Os métodos gerais que seguem foram usados para avaliar a a-dequabilidade de várias abordagens para identificação molecular de marcadores associados com tumores gástricos.
Coleta de Tumor Amostras de tumor gástrico e tecidos gástricos não-malignos foram coletados de espécimes cirúrgicos operados no Seoul National Uni-versity Hospital, Coréia e Dunedin Hospital, Nova Zelândia. O diagnóstico de câncer gástrico foi feito com base nos sintomas, constatações físicas e exame histológico de tecidos.
Extração de RNA
Em algumas modalidades, a expressão de genes associados com tumores gástricos foi analisada através de determinação das mudanças no RNA de amostras tomadas de tumores. Espécimes cirúrgicos congelados foram embebidos em meio OCT. Seções de 60 pm foram fatiadas dos blocos de tecido usando um micrótomo, homogeneizadas em um TriReagente: mistura de água (3:1), então clorofórmio extraído, O RNA total foi então extraído da fase aquosa usando o procedimento RNeasy® (Giagen).RNA foi também extraído de 16 tipos de célula de câncer e agrupado para servir como um RNA de referência.
Preparação de Lâmina de Microdisposição Lâminas de vidro revestidas com epóxi foram obfidas da MWG Biotech AG, Ebersberg, Alemanha) e foram amostradas com -30.000 oligo-nucleotídeos 50mer usando um robô de microdisposição Gene Machines, de acordo com o protocolo do fabricante. Números de referência (No. Oligo MWG) para oligonucleotídeos relevantes e o mRNA de NCBI e seqüências de referência de proteína são mostrados na Figura 2. Seqüências de DNA completas do GTM da presente invenção são mostradas abaixo.
Marcação e Hibridização de RNA cDNA foi transcrito de 10 pg de RNA total usando transcriptase reversa Superscript II (Invitrogen) em reações contendo 5-(3-aminoalil)-2’-d esoxí u ri d í n a-5’-trifo sfato. A reação foi então deionizada em uma coluna Mi-crocon antes de ser incubada com Cy3 ou Cy5 em tampão de bicarbonato por 1 hora em temperatura ambiente. Corantes não-incorporados foram removidos usando uma coluna Quiaquick (Qiagen) e a amostra concentrada para 15 ul em um SpeedVac. cDNAs marcados com Cy3 e cy5 foram então misturados com tampão ULTRAhyb Ambion, desnaturados a 100° C por 2 minutos e hibridizados para as lâminas de microdisposição em câmaras de hibridização a 42° C por 16 horas, As lâminas foram então lavadas e esca-neadas duas vezes em um scanner Αχοη 4000A em dois ajustes de potência para dar dados de fluorescência primários sobre a expressão de gene. Procedimento de Normalização Para comparar a expressão de genes de câncer de tumores e tecidos não-cancerosos, as intensidades de fluorescência média detectadas pelo software Genepix® foram corrigidas através de subtração das intensidades de fluorescência de base local. Pontos com uma intensidade corrigida de base de menos de zero foram excluídos. Para facilitar a normalização, as razões de intensidade e intensidades de ponto gerais foram transformadas log. As razões de intensidade transformadas log foram corrigidas para corante e influência espacial usando regressão local implementada em um pacote LOCFIT®. As razões de intensidade transformadas log foram regressadas simultaneamente com relação à intensidade de ponto geral e localização. Os resíduos da regressão local proveram as mudanças de vez log corrigidas. Para controle de qualidade, as razões de cada microdisposição normalizada foram postas em gráfico com relação à intensidade e localização de ponto. Os pontos foram subseqüentemente visualmente inspecionados quanto a possíveis produtos restantes. Ainda, uma análise de modelo de variância (ANOVA) foi aplicada para a detecção de propensão a "pico-de-ponto1' ("pin-tip"). Todos os resultados e parâmetros da normalização foram inseridos em um banco de dados Postgres para análise estatística.
Análise Estatística Mudanças estatisticamente significantes na expressão de gene em amostras de tumor vs. tecidos normais foram identificadas através de mudanças de vez medidas entre as disposições. Para realizar isso, log2 (razões) foi aumentado para ter o mesmo desvio padrão geral por disposição. Este procedimento de padronização reduziu a variabilidade de classe de tecido dentro da média. O log2 (razão) foi ainda mudado para ter um valor médio de zero para cada oligonucleotídeo para facilitar a inspeção visual de resultados. Um teste de classificação baseado em mudanças de vez foi então usado para melhorar a força do ruído. Este teste consistia em duas etapas: (i) cálculo da classificação da mudança dupla (Rfc) dentro das disposições e ii) subtração da média (Rfc) para tecido normal da média (Rfc) para tecido de tumor. A diferença de ambas classificações médias define a numeração da classificação de mudança de vez na Figura 2. Dois testes estatísticos adicionais foram também realizado neste teste padronizado: 1) Teste t de estudante de duas amostras, com e sem ajuste Bonferroni e 2) teste Wil-coxon.
Análise estatística de Combinações de Marcador Para determinar o valor de uso de combinações de dois ou três dos marcadores para discriminar entre amostras de tumor e não-malignas, os dados de qPCR de 40 amostras em pares (amostras de tumor e não-malignas do mesmo paciente) foram submetidos à análise que segue, Distribuições normais para as amostras não-malignas e de tumor foram geradas usando as médias de amostra e desvios padrão. A probabilidade de que valores tomados dos dados de expressão de tumor excedessem um limiar definido (por exemplo, maior do que 50%, 70%, 73%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ou 100%) na distribuição não-maligna foi então determinada (isto é, sensibilidade). Para combinações de marcadores, a probabilidade de que pelo menos um marcador exceda o limiar foi determinada.
Traduções Nome Símbolo N° de ensaio "ensaio sob questão" Iniciador adiante Iniciador reverso Sonda Asporina (Irr classe) Proteoglicano 2 condroitina suifato (versican) Cistatinas Sn, AS e S Gama-glutamil hidrolise Proteína de ligação 7 de fator de crescimento do tipo insulina calicreína 10 Proteglicano 1 enriquecido em leucina-prolina (leprecan 1) Lumican Lisil oxidase tipo 2 Metaloproteínas de matriz 12 Inibidor de metaloproteinase 1 n-acilesfingosina amidoidrolase Proteína 2 relacionada a frizamento secretada Proteína secreta da ácida rica em cisteína Serina protease 11 (ligação de IGF) Trombospondina 2 Tirogflobulina Regulador de crescimento de célula humana com domínio EF de mão 1 Inibidor de serina ou cisteína protease humana clade B
Fator de crescimento de transformação Proproteína convertase humana suplicisina/quexina do tipo 5 Metaloproteína de matriz 2 Inibidor de serina ou cisteína proteinase humana clade H Adjican Proteína de matriz extracelular 2 do tipo fibulina contendo egf Proteína 4 relacionada a frizamento secretada Cadeia de insulina beta A
Osteopontina Fator de crescimento de transformação beta induzido PCR de Tempo Real Quantitativa Em outras modalidades, PCR de tempo real, ou quantitativa (qPCR), pode ser usada para quantificação absoluta ou relativa de número de cópia de molde de PCR. A sonda Taqman® e os conjuntos de iniciador foram designados usando o Iniciador Express V 2,0® (Applied Biosystems). Onde possível, todas as variantes de união potenciais foram incluídas no amplicon resultante, com preferência de amplicon dada a regiões cobertas pelo oligonucleotídeo de microdisposição derivado de MWG-Biotech. Alternativamente, se o gene alvo fosse representado por um ensaio de expressão Assay-on-Demand® (Applied Biosystems} cobrindo os amplicons desejados, esses seriam usados. O nome do gene, símbolo, o número do "ensaio em questão" Applied Biosystems, iniciador adiantado, iniciador reverso e sequência de sonda usados para qPCR são mostrados na Tabela 1 e na Figura 1. Nos ensaios feitos em casa, a concentração de iniciador foi titulada u-sando um protocolo de marcação verde SYBR e cDNA feito do RNA de referência. A amplificação foi realizada em um sistema de detecção de sequência ABI Prism® 7000 sob condições de cicüzação padrão. Quando produtos de amplificação únicos foram observados nas curvas de dissociação, curvas padrão foram geradas em uma faixa de concentração de 625 vezes usando concentrações de iniciador ótimas e sonda Taqman® de fosfato 5’FAM -3’TAMRA (Proligo) em uma concentração final de 250 nM. Os ensaios dando curvas padrão com coeficientes de regressão acima de 0,98 foram usados em ensaios subseqüentes. Pode ser compreendido que em outras modalidades os coeficientes de regressão não precisam sertão altos. Do contrário, qualquer curva padrão pode ser usada contanto que os coeficientes de regressão sejam suficientemente altos para permitir determinação estatisticamente significante de diferenças em expressão. Tais coeficientes de regressão podem estar acima de cerca de 0,7, acima de cerca de 0,8, acima de cerca de 0,9 ou acima de cerca de 0,95 em modalidades alternativas.
Os ensaios foram realizados em duas placas de 96 cavidades com cada amostra de RNA representada por um único cDNA. Cada placa continha uma curva padrão de cDNA de referência, em uma faixa de con- centração de 625 vezes, em duplicata. A análise consistia em cálculo de ACT (CT do gene alvo - CT do cDNA de referência média). ACT é diretamente proporcional à mudança de vez log2 negativa. As mudanças de vez log2 relativas à mudança de vez log2 não-maligna média foram então calculadas (mudança de vez log2 - mudança de vez log2 normal média). Essas mudanças de vez foram então agrupadas em classes de frequência e postas em gráfico.
Análise de Microdisposição de Genes Marcadores de Câncer RNA de 58 tumores gástricos e 58 amostras de tecido gástrico não-malignas ("normais”) foram marcados com Cy5 e hibridizados em duplicata ou tríplicata com RNA de referência marcado com Cy3. Após normalização, a mudança na expressão em cada um dos 29.718 genes foi então estimada através de três medidas: (0 mudança de vez: a razão da expressão média do gene (não-padronizada) nas amostras de tumor dividida pelo nível médio nas amostras não-malignas. (ii) classificação de mudança de vez e (iii) a probabilidade estatística que as mudanças de vez observadas fossem significantes.
Seleção de Marcadores de Soro para Mal Gástrico Em certas modalidades, o marcador de câncer pode ser encontrado em fluidos biológicos, incluindo soro. Os marcadores de soro foram selecionados de dados de disposição com base em (i) a presença de uma característica de sequência de sinal de proteínas secretadas ou ciivadas do exterior da membrana; (ii) o nível médio de superexpressão (mudança de vez) em tumores comparado com controles não-malignos, (iii) a mudança média na classificação de expressão entre tumores e controles não-malignos e (iv) o grau de sobreposição entre as faixas de expressão no tumor e os controles não-malignos.
Todos os 29 GTMs são sabidos ter uma sequência de peptídeo de sinal na extremidade 5' de suas seqüências de codificação. A seqüência de sinal marca as proteínas de GTM para transporte para um compartimento celular através da membrana do plasma (Gunner von Heijne, Journal of Molecular Biology, 173:243-251 (1984)). Ainda, nenhum dos GTMs tem motivos de sequência de transmembrana que resultariam na proteína de comprimento completo sendo retida dentro da membrana do plasma. Consequentemente, todos os marcadores GTM desta invenção são prováveis de ser secreta-dos no compartimento extracelular, e então podem estar em contato com a vasculatura, ou sendo tomados pelos capilares, ou sendo transportados para o sistema línfático e então para a vasculatura. Como resultado, cada um desses marcadores derivados de tumor estará presente no sangue.
Em seguida, os genes eram excluídos se >50% das amostras de tumor mostrassem níveis de expressão dentro da 95a porcentagem da faixa não-maligna. A variação no grau de superexpressão nas amostras de tumor reflete não apenas a heterogeneidade do tumor, mas também variações no grau de contaminação das amostras de tumor com tecido "normal" incluindo músculo, células estromais e glândulas epiteliais não-malignas. Esta contaminação "normal" variava de 5 a 70% com uma média de aproximadamente 25%. Outros genes foram excluídos por causa de expressão relativa alta em células hematopoiéticas, ou expressão elevada em tecido gástrico metaplás-tico. Pode ser compreendido que dependendo do grau de contaminação pelas células normais ou células que normalmente expressam o marcador, faixas de limiar diferentes podem ser selecionadas, as quais podem prover separação suficiente entre uma fonte de câncer e uma fonte normal.
Os GTM que foram verificados ser úteis incluem genes (DNA), DNA complementar (cDNA), RNA, proteínas e fragmentos de proteína dos marcadores que seguem: carboxipeptidase N, polipeptídeo 2, cadeia de 83 kDa (também conhecida como carboxipeptidase N (CPN2), metaloproteinase de matriz 12 (MMP12), inibina (ΊΝΗΒΑ"), fator de crescimento 7 do tipo insulina ("IGFBP7"), gama-glutamil hídrolase ("GGH"), proteoglicano enriquecido com leucina-prolina ("LEPRE1"), cistatina S ("CST4"), proteína 4 relacionada com frisamento secretada ("SFRP4"), asporina ("ASPN"), regulador de crescimento celular com domínio de mão EF 1 ("CGREF1"), calicreína (KLK10), inibidor de tecido de metaloproteinase 1 (ΊΊΜΡΤ'), proteína rica em cisteína ácida secretada ("SPARC"), fator de crescimento de transformação, β-induzido ("TGFBI"), proteína de matriz extracelular 2 do tipo fibulina conten- do EGF ("EFEMP2"), lumican ("LUM"), estanina {''SNN1'), fosfoproteína 1 se-cretada ("SPPr), proteoglicano 2 condroitina sulfato ("CSPG2"), N-acilesfingosina amidoidrolase ("ASAHr), serina protease 11 ("PRSS11"), proteína 2 relacionada com frisamento secretada ("SFRP2”), fosfolipase A2, grupo XIIB ("PLA2G12B"), espondina 2, proteína de matriz extracelular {"SPON2"), olfactomedina 1 ("OLFM1"), repetição de trombospondina contendo 1 {"TSRC1"), trombospondina 2 ("THBS2"), adlican, cistatina SA ("CST2"), cistatina SN ("CST1"), enzima 2 do tipo lisil oxidase ("LOXL2"), tiroglobulina ("TG"), fator de crescimento de transformação beta-1 ("TGFB1"), inibidor de serina ou cisteína protease clade H ("SERPINH1"), inibidor de serina ou cisteína protease clade B ("SERPINB5"), metaloprotei-nase de matriz 2 { MMP2"), Pró-proteína convertase subtilisina/quexina do tipo 5 "PCSK5") e proteína 4 (''HAPLN4") de ligação de proteoglicano de hia-luronano Sequências de DNA de GTM da presente invenção junto com informação de identificação são mostradas abaixo.
Metaloproteinase de Matriz 12 >gi|4505206|ref|NM_002426.1| Metaloproteinase de matriz 12 de Homo sa-piens {elastase de macrófago) (MMP12), mRNA |qPCR combinação de inici-ador_adiantado [758..780] | qPCR combinação de iniciador adiante [888..864] | qPCR combinação de sonda [786..815] TAGAAGTTTACAATGAAGTTTCTTCTAATACTGCTCCTGCAGGCCA CTGCTTCTGGAGCTCTTCCCCTGAACAGCTCTACAAGCCTGGAAAAAAAT AATGTGCTATTTGGTGAGAGATACTTAGAAAAATTTTATGGCCTTGAGATA AACAAACTTCCAGTGACAAAAATGAAATATAGTGGAAACTTAATGAAGG AAAAAATCCAAGAAATGCAGCACTTCTTGGGTCTGAAAGTGACCGGGCAA CTGGACACATCTACCCTGGAGATGATGCACGCACCTCGATGTGGApTCCC CGATCTCCATCÀTTTCAGGGAAATGCCAGGGGGGCCCGTATGGAGGAAAC ATTATATCACCTACAGAATCAATAATTACACACCTGACATGAACCGTGAG GATGTTGACTACGCAATCCGGAAAGCTTTCCAAGTATGGAGTAATGTTAC CCCCTTGAAATTCAGCAAGATTAACACAGGCATGGCTGACATTTTGGTGG TTTTTGCCCGTGGAGCTCATGGAGACTTCCATGCTTTTGATGGCAAAGGTG GAATCCTAGCCCATGCTTTTGGACCTGGATCTGGCATTGGAGGGGATGCA CAXTTCGATGAGGACGAATTCTGGÀCTACACATTCAGGAGGCACAAACTT GTTCCTCACTGCTGTTCACGAGATTGGCOATTCCTTAGGTCTTGGCCATTCT AGTGATCCAAAGGCTGTAATGTTCCCCACCTÀCAAATATGTCGÀCATCAA CACATTTCGCCTCTCTGCTGATGÀCATACGTGGCATTCAGTCCCTGTATGG AGACCCAAAAGAGAACCAACGCTTGCCAAATCCTGACAATTCAGAACCAG CTCTCTGTGACCCCAATTTGAGTTTTGATGCTGTCACTACCGTGGGAAATA AGATCTTTTTCTTCAAAGACAGGTTCTTCTGGCTGAAGGTTTCTGAGAGAC CAAAGACCAGTGTrAATTTAATTTCTTCCTTATGGCCAACCTTGCCATCTG GCAITGAAGCTGCTTATGAAATTGAAGCCAGAAATCAAGTTTTTCTXTrTA AAGATGACAAATACTGGTTAATTAGCAATTTAAGACCAGAGCCAAATTAT CCCAAGÁGCATACATTCXTTTGGTTTTCCTAACTTTGTGAAAAAAATTGAT GCAGCTGTTtTTAACCCACGTTTTrATAGGACCTACTTCXTTGTAGATAAC CAGTATTGGAGGTATGATGAAAGGAGACAGATGATGGACCCTGGTTATCC CAAACTGATTACCAAGAACTTCCAAGGAATCGGGCCTAAAATTGATGCAG TCTTCTATTCTAAAAACAAATACTACTATTTCTTCCAAGGATCTAACCAAT TTGAATATGACTTCCTACTCCAACGTATCACCAAAACACTGAAAAGCAAT AGCTGGTTTGGTTGTTAGAAATGGTGTAATTAATGGTTTTTGTTAGTTCAC TTCAGCTTAATAAGTATTTATTGCATATTTGCTATGTCCTCAGTGTACCACT ACTTAGAGATATGTATCÀTAAAAATAAAATCTGTAAACCATAGGTAATGA TTATATAAAATACATAATATTTTTCAATTTTGAAAACTCTAATTGTCCATTC TTGCTTGACTCTACTATTAAGTTTGAAAATAGTTACGTTCAAAGCAAGATA ATTCTATXTGAAGCATGCTCTGTAAGTTGCTTCCTAACATCCTTGGACTGA GAAATTATÀCTTACTTCTGGCATAACTAAAATTAAGTATATATATTTTGGC TCAAATAAAATTG SEQEDNO:67 Inibina Beta A
>gi|4504698|ref|NM_002192.11 Inibina de Homo sapiens, beta A (aifa polipeptídeo de activina A, activina AB) (INHBA), mRNA | qPCR ensaio de _combinação_de co ntexto__e m_q u e stã o [457..481] TCCACACACACAAAAAACCTGCGCGTGAGGGGGGAGGAAAAGCAG
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AAGCCATGAGTTTGAAAGGGCCCATCACAGGCACTTTCCTAGCCTAAT SEQID NO:68 Proteína de Ligação 7 de Fator de Crescimento do Tipo Insulina >gi|4504618|ref|NM_001553.1| Proteína de ligação 7 de fator de crescimento do tipo insulina de Homo sapiens (IGFBP7), mRNA | qPCR combinação de iniciador adiante [470..487] | qPCR combinação de inicia-dor_reverso [567..546] j qPCR combinação de sonda [492..517] GCCGCTGCCACCGCÀCCCCGCCATGGAGCGGCCGTCGCTGCGCGCC
CTGCTCCTCGGCGCCGCTGGGCTGCTGCTCCTGCTCCTGCCCCTCTCCTCTT
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GATGCTGGAGAATATGAGTGCCATGCATCCAATTCCCAAGGACAGGCTTC
AGCATCAGCAAAAATTACAGTGGTTGATGCCTTACATGAAATACCAGTGA
AAAAAGGTGAAGGTGCCGAGCXATAAACCTCCAGAATATTATTAGTCTGC
ATGGTTAAAAGTAGTCATGGATAACXACATTACCTGTTCTTGCCTAAXAAG
XXXCXXXXAAXCCAAXCCACXAACACXXXAGXXAXAXTCÀCTGGTXXXACAC
AGAGAAAXACAAAAXAAAGAXCACACAXCAAGACXAXCXACAAAAAIXTA
XXAXAXAXXXACAGAAGAAAAGCAXGCAXAICATXAAACAAATAAAAXAC XXXXTAXCACAAAAAAAAAAAAAAAA SEQ ED NO: 69 Gama Glutamil HidroEase >gi|4503986|ref|NM_003878.1| gama-glutamii hidrolase de Ho-mo sapiens (conjugase, fosfopoligamaglutamil hidrolase) (GGH), mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [531..547] | qPCR combinação de iniciador_reverso [611..587] | qPCR combinação de sonda [549..577] TGCCGCAGCCCCCGCCCGCCCGCAGAGCTTTTGAAAGGCGGCGGG AGGCGGCGAGCGCCATGGCCAGTCCGGGCTGCCTGCTGTGCGTGCTGGGC CTGCTACTCTGCGGGGCGGCGAGCCTCGAGCTGTCTAGACCCCACGGCGA CACCGCCAAGAAGCCCATCATCGGAATATTAATGCAAAAATGCCGTAATA AAGTCATGAAAAACTATGGAAGATACTATATTGCTGCGTCCTATGTAAAG TACTTGGAGTCTGCAGGTGCGAGAGTTGTACCAGTAAGGCTGGATCTTAC AGAGAAAGACTATGAAATACTnTCAAATCTATTAATGGAATCCmTCCC TGGAGGAAGTGTTGACCTCAGACGCTCAGATTATGCTAAAGTGGCCAAAA TATirrATAACTTGTCCATACAGAGTTTTGATGATGGAGACTÀTTTTCCTGT GTGGGGCACATGGCTTGGATTTGAAGAGCTTTCACTGCTGATTAGTGGAG AGTGCTTATTAACTGCCACÀGATACTGTTGACGTGGCAATGCCGCTGAACT TCACTGGAGGTCAATTGCACAGCAGAATGTTCCAGAATTTTCCTACTGAGT TGTTGCTGTCATTAGCAGTAGAACCTCTGACTGCCAATTTCCATAAGTGGA GCCTCTCCGTGAAGAATTTTACAATGAATGAAAAGTTAAAGAAGTTTTTC AATGTCTTAACTACAAATACAGATGGCAAGATTGAGTTTATTTCAACAAT GGAAGGATATAAGTATCCAGTÀTATGGTGTCCAGTGGCATCCAGAGAAAG CACCTTATGAGTGGAAGAATTTGGATGGCATTTCCCATGCACCTAATGCTG TGAAAACCGCATTTTATITAGCAGAGTTTnTGTTAATGAAGCTCGGAAAA ACAACCATCAmTAAATCTGAATCTGAAGAGGAGAAAGCATTGATTTAT CAGTTCAGTCCAATTTATACTGGAAATATTTCTTCATTTCAGCAATGTTAC ATATTTGATTGAAAGTCTTCAATTTGTTAACAGAGCAAATTTGAATAAITC CATGATTAAACTGTTAGAATAACTTGCTACTCATGGCAAGATTAGGAAGT CACAGATTCTTTTCTATAATGTGCCTGGCTCTGATTCTTCATTATGTATGTG ACTATTTATATAACATTAGATAATTAAATAGTGAGACATAAATAGAGTGC TTTTTCATGGAAAAGCCTTCTTATATCTGAAGATTGAAAAATAAATTTACT GAAATACAAAAAAAAAAAAAAA SEQ Π) NO: 70 Proteoglicano 1 Enriquecido com Leucina Prolina >gi[21361917|ref|NM_022356.2| Proteoglicano enriquecido com leucina-prolina de Homo sapiens (leprecan) 1 (LEPRE1), mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [813..836] | qPCR combinação de inicia-dor_reverso [894..872] | qPCR combinação de sonda [841..870] GGTGGCGGGTGGCTGGCGGTTCCGTTAGGTCTGAGGGÀGCGATGG CGGTACGCGCGTTGAAGCTGCTGACCACACTGCTGGCTGTCGTGGCCGCT GCCTCCCAAGCCGAGGTCGAGTCCGAGGCAGGATGGGGCATGGTGACGCC TGATCTGCTCTTCGCCGAGGGGACCGCAGCCTACGCGCGCGGGGACTGGC CCGGGGTGGTCCTGAGCATGGAACGGGCGCTGCGCTCCCGGGCAGCCCTC CGCGCCCTTCGCCTGCGCTGCCGCACCCAGTGTGCCGCCGACTTCCCGTGG GAGCTGGACCCCGACTGGTCCCCCAGCCCGGCCCAGGCCTCGGGCGCCGC CGCCCTGCGCGACCTGAGCTTCTTCGGGGGCCTTCTGCGTCGCGCTGCCTG CCTGCGCCGCTGCCTCGGGCCGCCGGCCGCCCACTCGCTCAGCGAAGAGA TGGAGCTGGAGTTCCGCAAGCGGAGCCCCTACAACTACCTGCAGGTCGCC TACTTCAAGATCAACAAGTTGGAGAAAGCTGTTGCTGCAGCACACACCTT CTTCGTGGGCAATCCTGAGCACÀTGGAAATGCAGCAGAACCTAGACTATT ACCAAACCATGTCTGGAGTGAAGGAGGCCGACTTCAAGGATCTTGAGACT CAACCCCATATGCAAGAATTTCGACTGGGAGTGCGACTCTACTCAGAGGA ACAGCCACAGGAAGCTGTGCGCCACCTAGAGGCGGCGCTGCAAGAATACT TTGTGGCCTATGAGGAGTGCCGTGCCCTCTGCGAAGGGCCCTATGACTAC GATGGCTACAACTACCTTGÀGTACAACGCTGACCTCTTCCAGGCCATCÀC AGATCATTACATCCAGGTCCTCAACTGTAAGCAGAACTGTGTCACGGAGC TTGCTTCCCACCCAAGTCGAGAGAAGCCCTTTGAAGACTTCCTCCCATCGC ATTATAATTATCTGCAGTTTGCCTACTATAACATTGGGAATTATACACAGG CTGTTGAATGTGCCAAGACCTATCTTCTCTTCTTCCCCAATGACGAGGTGA TGAACCAAAATXTGGCCTAITATGCAGCTATGCTrGGAGAAGAACACACC . AGATCCATCGGCCCCCGTGAGAGTGCCAAGGAGTACCGACAGCGAAGCCT ACTGGAAAAAGAACTGCTfTTCrrCGCTTATGATGTTTTTGGAATTCCCTTT GTGGATCCGGATTCÀTGGACTCCAGGAGAAGTGATTCCCAAGAGATTGCA AGAGAAACAGAAGTCAGAACGGGAAACAGCCGTACGCATCTCCCAGGAG ATTGGGAACCTTATGAAGGAAATCGAGACCCTTGTGGAAGAGAAGACCA AGGAGTCACTGGATGTGAGCAGACTGACCCGGGAAGGTGGCCCCCTGCTG TATGAAGGCATCAGTCTCACCATGAACTCCAAACTCCTGAATGGTTCCCA GCGGGTGGTGATGGACGGCGTAATCrCTGACCACGAGTGTCAGGAGCTGC AGAGACTGACCAATGTGGCAGCAACCTCAGGAGATGGCTACCGGGGTCA GACCTCCCCACATACTCCCAATGAAAAGTTCTATGGTGTCACTGTCTTCAA AGCCCTCAAGCTGGGGCAAGAAGGCAAAGTTCCTCTGCAGAGTGCCCACC TGTACTACAACGTGACGGAGAAGGTGCGGCGCATCATGGAGTCCTACTTC CGCCTGGATACGCCCCTCTACTTTTCCTACTCTCATCTGGTGTGCCGCACT GCCATCGAAGAGGTCCAGGCAGAGAGGAAGGATGATAGTCATCCAGTCC ACGTGGACAACTGCATCCTGAATGCCGAGACCCTCGTGTGTGTCAAAGAG CCCCCAGCCTACACCTTCCGCGACTACAGCGCCATCCTTTACCTAAATGGG GACTTCGATGGCGGAAACTTTTATTTCACTGAACTGGATGCCAAGACCGT GACGGCAGAGGTGCAGCCTCAGTGTGGAAGAGCCGTGGGATTCTCTTCAG GCACTGAAAACCCACATGGAGTGAAGGCTGTCACCAGGGGGCAGCGCTGT GCCATCGCCCTGTGGTTCACCCTGGACCCTCGACACAGCGAGCGGGTGAG AGCAGCTCGAGCGGGTGAGAGCAGCTGGTGCTGTGGTGACCCGTTCCCAG
AGCGCCCTTGGTTTGCCTTTCTCTTCCCCAAATCCCATTGCCAGTGGCTGA
GACACGAAAGGAGCACTTGGGACACCAGCTCCAACGCCCTGTCATTATGG
TCÀCATTGCCTTGTCCTCCCTGGGCCTGCTGTGAACGGGATCCAGGTGGGG
AAAGAGGTCAAGACAGGGAGCGATGCXGAGTTCTTGGTTCCCTCCTTGGG
CCCCACTTCAGCTGTCCTTTTCCAGAGAGTAGGACCTGCTGGGAAGGAGA
TGAGCCTGGGGCCATTAAGGAACCTTCCTTGTCCCCTGGGAAGTAGCAGC
TGAGAGATAGCGAGTGTCTGGAGCGGAGGCCTCTCTGAATGGGCAGGGGT
TTGTCCTTGCAGGACAGGGTGCAGGCAGATGACCTGGTGAAGATGCTCTT
CAGCCCAGAAGAGATGGTCCTCTCCCAGGAGCAGCCCCTGGATGCCCAGC
AGGGCCCCCCCGAACCTGCACAAGAGTCTCTCTCAGGCAGTGAATCGAAG
CCCAAGGATGAGCTATGACAGCGTCCAGGTCAGACGGATGGGTGACTAGA
CCCATGGAGAGGAACTCTTCTGCACTCTGAGCTGGCCAGCCCCTCGGGGC
TGCAGAGCAGTGAGCCTACATCTGCCACTCAGCCGAGGGGACCCTGCTCA
CAGCCTTCTACATGGTGCTACTGCTCTTGGAGTGGACATGACCAGACACC
GCACCCCCTGGATCTGGCTGAGGGCTCAGGACACAGGCCCAGCCACCCCC
AGGGGCCTCCACAGGCCGCTGCATAACAGCGATACAGTACTTAAGTGTCT
GTGTAGACAACCAAAGAATAAATGATTCATGGTTTTTTXT SEQEDNO: 71 Cistatina S >gi|19882254jref|NM_001899.2| Cistatina S de Homo sapiens (CST4), mRNA | qPCR combinação de iniciador adiante [343..361] | qPCR combinação de Íniciador_reverso [434..411] | qPCR combinação de sonda [382..410] GGCTCTCACCCTCCTCTCCTGCAGCTCCAGCTTTGTGCTCTGCCTCT GAGGAGACCATGGCCCGGCCTCTGTGTACCCTGCTACTCCTGATGGCTACC CTGGCTGGGGCTCTGGCCTCGAGCTCCAAGGAGGAGAATAGGATAATCCC AGGTGGCATCTATGATGCAGACCTCAATGATGAGTGGGTACAGCGTGCCC TTCACTTCGCCATCAGCGAGTACAACAAGGCCACCGAAGATGAGTACTAC AGACGCCCGCTGCAGGTGCTGCGAGCCAGGGAGCAGACCTTTGGGGGGGT GAATTACTTCTTCGACGTAGAGGTGGGCCGCACCATATGTACCAAGTCCC AGCCCAACTTGGACACCTGTGCCTTCCATGAACAGCCAGAACTGCAGAAG AAACAGTTGTGCTCTTTCGAGATCTACGAAGTTCCCTGGGAGGACAGAAT GTCCCTGGTGAATTCCAGGTGTCAAGAAGCCTAGGGGTCTGTGCCAGGCC AGTCACACCGACCACCACCCACTCCCACCCACTGTAGTGCTCCCACCCCTG GACTGGTGGCCCCCACCCTGCGGGAGGCCTCCCCATGTGCCTGTGCCAAG AGACAGACAGAGAAGGCTGCAGGAGTCCTTTGTTGCTCAGCAGGGCGCTC TGCCCTCCCTCCTTCCTTCTTGCTTCTAATAGACCTGGTACATGGTACACAC ACCCCCÀCCTCCTGCAATTAAACAGTAGCATCGCC SEQ Π) NO: 72 Proteína 4 Relacionada com frisamento Secretada >gi|8400733|ref|NM_003014.2| Proteína 4 relacionada com frisamento secretada de Homo sapiens (SFRP4), mRNA | qPCR ensai-o_em_combínação_de contexto_em_questão [1079..1103] GGCGGGTTCGCGCCCCGAAGGCTGAGAGCTGGCGCTGCTCGTGCCC
TGTGTGCCAGACGGCGGAGCTCCGCGGCCGGACCCCGCGGCCCCGCTTTG
CTGCCGACTGGAGTTTGGGGGAAGAAACTCTCCTGCGCCCCAGAAGATTT
CTTCCTCGGCGAAGGGACAGCGAAAGATGAGGGTGGCAGGAAGAGAAGG
CGCTTTCTGTCTGCCGGGGTCGCAGCGCGAGAGGGCAGTGCCATGTTCCTC
TCCATCCTAGTGGCGCTGTGCCTGTGGCTGCACCTGGCGCTGGGCGTGCGC
GGCGCGCCCTGCGAGGCGGTGCGCATCCCTATGTGCCGGCACATGCCCTG
GAACATCACGCGGATGCCCAACCACCTGCACCACAGCACGCAGGAGAAC
GCCATCCTGGCCATCGAGCAGTACGAGGAGCTGGTGGACGTGAACTGCAG
CGCCGTGCTGCGCTTCTTCTTCTGTGCCATGTACGCGCCCATTTGCACCCT
GGAGTTCCTGCACGACCCTATCAAGCCGTGCAAGTCGGTGTGCCAACGGG
CGCGCGACGACTGCGAGCCCCTCATGAAGATGTACAACCACAGCTGGCCC
GAAAGCCTGGCCTGCGACGAGCTGCCTGTCTATGACCGTGGCGTGTGCAT
TTCGCCTGAAGCCATCGTCACGGACCTCCCGGAGGATGTTAAGTGGATAG
ACATCACACCAGACATGATGGTACAGGAAAGGCCTCTTGATGTTGACTGT
AAACGCCTAAGCCCCGATCGGTGCAAGTGTAAAAAGGTGAAGCCAACTTT
GGCAACGTATCTCAGCAAAAACTACAGCTATGTTATTCATGCCAAAATAA
AAGCTGTGCAGAGGAGTGGCTGCAATGAGGTCACAACGGTGGTGGATGTA
AAAGAGATCTTCAAGTCCTCATCACCCATCCCTCGAACTCAAGTCCCGCTC
ATTACAAATTCTTCTTGCCAGTGTCCACACATCCTGCCCCATCAAGATGTT
CTCATCATGTGTTACGAGTGGCGTTCAAGGATGATGCTTCTTGAAAATTGC
TTAGTTGAAAAATGGAGAGATCAGCTTAGTAAAAGATCCATACAGTGGGA
AGAGAGGCTGCAGGAACAGCGGAGAACAGTTCAGGACAAGAAGAAAACA
GCCGGGCGCACCAGTCGTAGTAAXCCCCCCAAACCAAAGGGAAAGCCTCC
TGCTCCCAAACCAGCCAGTCCCAAGAAGAACATTAAAACTAGGAGTGCCC
AGAAGAGAACAAACCCGAAAAGAGTGTGAGCTAACTAGTTTCCAAAGCG
GAGACTTCCGACXTCCTTACAGGATGAGGCTGGGCATTGCCTGGGACAGC
CTATGTAAGGCCATGTGCCCCTTGCCCTAACAACTCACTGCAGTGCTCTTC
ATAGACACATCTTGCAGCATTTTTCTTAAGGCTATGCTTCAGTnTTCTTTG
TAAGCCATCACAAGCCATAGTGGTAGGTTTGCCCTTTGGTACAGAAGGTG
AGTrAAAGCTGGTGGAAAAGGCTTATTGCATTGCATTCAGAGTAACCXGT
GXGCAXACXCXAGAAGAGXAGGGAAAAXAAXGCTTGXXACAAXXCGACCX
AAXAXGTGCAXTGXAAAAXAAAXGCCAXAXXXCAAACAAAACACGXAAXX
XTnTACAGXAXGXXTXAXXACCXTTrGÀTAXCXGXTGXTGCAAXGTXAGXG axgxxxxaaaaxgtgaxgaaaaxaxaaxgxxxxtaagaaggaacagxagt GGAAXGAAXGTTAAAAGATCXTTAXGXGXTXAXGGXCXGCAGAAGGATTTX
XGXGAXGAAAGGGGATXXXXXGAAAAATrAGAGAAGTAGCAXAXGGAAAA
XTAXAAXGXGXTTnTXACCAAXGACXXCAGXXTCXGXTTTTAGCXÀGAAAC
XXAAAAACAAAAATAATAAXAAAGAAAAATAAATAAAAAGGAGAGGCAG
ACAAXGXCXGGAXXCCXGTTTXXXGGTTACCXGAXXXCCAXGAXCAXGAXGC TTCTTGTCAACACCCTCXTAAGCAGCACCAGAAACAGXGAGTTTGTCTGTÀ CCATTAGGAGXXAGGTACXAATXAGTTGGCTAATGCXCAAGTAnTXATAC
CCACAAGAGAGGXATGXCACXCATCXTACTTCCCAGGACATCCACCCTGA
GAAXAATTTGACAAGCITAAAAAXGGCCTXCATGXGAGXGCCAAAXXXXGT
XrrXCXXCAXXXAAAXAXXTXCTXXGCCXAAAXACATGTGAGAGGAGXXAA
AXAXAAAXGXACAGAGAGGAAAGXTGAGXTCCACCXCXGAAAXGAGAAXX
ACXXGACAGXXGGGAXACXXXAAXCAGAAAAAAAGAACXXATXXGCAGCA
XXXXAXCAACAAAXXXCAXAAXTGXGGACAATXGGAGGCArrTATTTXAAA
AAACAATTTXATXGGCCXXTXGCXAACACAGXAAGCAXGTÀTnTAXAAGG
CAXXCAAXAAATGCACAACGCCCAAAGGAAAXAAAATCCXATCXAAXCCT
ACTCTCCACXACACAGAGGXAAXCACTATTAGXATTTXGGCATATTAXICX
CCAGGXGXXXGCXXAXGCACXXAXAAAAXGAXXXGAACAAAXAAAACXAG
GAACCTGXAXACATGXGXXXCAXAACCXGCCXCCXTXGCTXGGCCCnTAXX
GAGATAAGXXXTCCXGXCAAGAAAGCAGAAACCATCTCAXXTCXAACAGC
XGXGXXAXAXXCCATAGXAXGCAXXACXCAACAAACXGTTGTGCTATXGGA TACTTAGGTGGTTTCTTCACTGACMTACTGAATAAACATCTCACCGGAAT TC SEQIDNO; 73 Asporína >gi|41350213|ref|NM__017680.3j Asporina de Homo sapiens (LRR classe 1) (ASPN), mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [798..823] | qPCR combinação de iniciador_reverso [934..912] | qPCR combinação de sonda [842..875] AGTACTAACATGGACTAATCTGTGGGAGCAGTTTATTCCAGTATCA CCCAGGGTGCAGCCACACCAGGACTGTGTTGMGGGTGTTTTTTTTCTTTT AAATGTAATACCTCCTCATCTTTTCTTCTTACACAGTGTCTGAGAACATTT ACATTATAGATAAGTAGTACATGGTGGATAACTTCTACTTTTAGGAGGACT ACTCTCTTCTGACAGTCCTÀGACTGGTCTTCTACACTAAGACÀCCATGAAG GAGTATGTGCTCCTATTATTCCTGGCTITGTGCTCTGCCAAACCCTTCTTTA GCCCTTCACACATCGCACTGAAGAATATGATGCTGAAGGATATGGAAGAC ACAGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGAGGA CAACTCTCTTTITCCAACAAGAGAGCCAAGAAGCCATTITITTCCATTTGA TCTGTTTCCAATGTGTCCATTTGGATGTCAGTGCTATTCACGAGTTGTACA ■ TTGCTCAGATTTAGGTTTGACCTCAGTCCCAACCAACATTCCATTTGATAC TCGAATGCTTGATCTTCAAAACAATAAAATTAAGGAAATCAAAGAAAATG ATTTTAAAGGACTCACTTCACTTTATGGTCTGATCCTGAACAACAACAAGC TAACGAAGATTCACCCAAAAGCCTTTCTAACCACAAAGAAGTTGCGAAGG CTGTATCTGTCCCACAATCAACTAAGTGAAATACCACTTAATCTTCCCAAA TCATTAGCAGAACTCAGAATTCATGAAAATAAAGTTAAGAAAATACAAAA GGACACATTCAAAGGAATGAATGCTTTACACGTTTTGGAAATGAGTGCAA ACCCTCTTGATAATAATGGGATAGAGCCAGGGGCATTTGAAGGGGTGACG GTGTTCCÁTATCAGAATTGCAGAAGCAAAACTGACCTCAGTTCCTAAAGG CTTACCACCAACTTTATTGGAGCTTCACTTAGATrATAATAAAATTTCAAC AGTGGAACTTGAGGATTTTAAACGATACAAAGAACTACAAAGGCTGGGCC TAGGAAACAACAAAATCACAGATATCGAAAATGGGAGTCTTGCTAACATA CCACGTGTGAGAGAAATACATTTGGAAAACAATAAACTAAAAAAAATCCC TTCAGGATTACCAGAGTTGAAATACCTCCAGATAATCTTCCTTCATTCTAA TTCAATTGCAAGAGTGGGAGTAAATGACTTCTGTCCAACAGTGCCAAAGA TGAAGAAATCTTTATACAGTGCAATAAGTTTATTCAACAACCCGGTGAAA TACTGGGAAATGCAACCTGCAACATTTCGTTGTGTTTTGAGCAGAATGAGT GTTCAGCTTGGGAACTTTGGAATGTAATAATTAGTAATTGGTAATGTCCAT TTAATATAAGATTCAAAAATCCCTACATTTGGAATACTTGAACTCTATTAA TAATGGTAGTATTATATATACAAGCAAATATCTATTCTCAAGTGGTAAGTC CACTGACTTATTTTATGACAAGAAATTrCAACGGAATTTTGCCAAACTATT GATACÀTAAGGGTTGAGAGAAACAAGCATCTATTGCAGTTTCnTTTGCGT ACAAATGATCTTACATAAATCTCATGCTTGACCATTCCTTTCTTCATAACA AAAAAGTAAGATATTCGGTATTTAACACTTTGTTATCAAGCATATTTTAAA AAGAACTGTACTGTAAATGGAATGCTTGACTTAGCAAAATTTGTGCTCTTT CATTTGCTGTTAGAAAAACAGAATTAACAAAGACAGTAATGTGAAGAGTG CATTACACTATTCTTATTCTTTAGTAACTTGGGTAGTACTGTAATATTTTTA ATCATCTTAAAGTATGATTTGATATAATCTTATTGAAATTACCTTATCATG TCTTAGAGCCCGTCTTTATGTTTAAAACTAATTTCTTAAAATAAAGCCTTC AGTAAATGTTCATTACCAACTTGATAAATGCTACTCATAAGAGCTGGTTTG GGGCTATAGCÀTATGCTTTITTrTTTTTAATTATTACCTGATTTAAAAATCT
CTGTAAAAACGTGTAGTGTTTCATAAAATCTGTAACTCGCATTTTAATGAT
CCGCTATTATAAGCnTTAATAGCATGAAAATTGTTAGGCTATATAACATT
GCCACTTCAACTCTAAGGAATATnTTGAGATATCCCTTTGGAAGACCTTG
CTTGGAAGAGCCTGGACACTAACAATTCTACACCAAATTGTCTCXTCAAAT
ACGTATGGACTGGATAACTCTGAGAAACACATCTAGTATAACTGAATAAG
CAGAGCATCAAATTAAACAGACAGAAACCGAAAGCTCTATATAAATGCTC
AGAGTTCnTATGTATTTCTTATTGGCATTCAACATATGTAAAATCAGAAA
ACAGGGAAATrrTCATTAAAAATATTGGTTTGAAATAAAAAAAAAAAAAA SEQIDNO: 74 Regulador de Crescimento Celular de Domínio I de mão EF >gi[33589823|ref|NM_006569.2| Regulador de crescimento celular com domínio de mão 1 EF de Homo sapiens (CGREF1), mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [378..394 | qPCR combinação de inicia- dor_reverso [455.431] | qPCR combinação de sonda [396.,415] CGCGCAGCCCCTCCGGCCGCGGGCGCAGCGGGGGCGCTGGTGGAG
CTGCGAAGGGCCAGGTCCGGCGGGCGGGGCGGCGGCTGGCACTGGCTCC
GGACTCTGCCCGGCCAGGGCGGCGGCTCCAGCCGGGAGGGCGACGTGGA
GCGGCCACGTGGAGCGGCCCGGGGGAGGCTGGCGGCGGGAGGCGAGGCG
CGGGCGGCGCAGCAGCCAGGAGCGCCCACGGAGCTGGACCCCCAGAGCC
GCGCGGCGCCGCAGCAGXTCCAGGAAGGATGTTACCTTTGACGATGACAG
TGTTAATCCTGCTGCTGCTCCCCACGGGTCAGGCTGCCCCAAAGGATGGA
GTCACAAGGCCAGACTCTGAAGTGCAGCATCAGCTCCTGCCCAACCCCTT
CCAGCCAGGCCAGGAGCAGCTCGGACTTCTGCAGAGCTACCTAAAGGGAC
TAGGAAGGACAGAAGTGCAACTGGAGCATCTGAGCCGGGAGCAGGTTCT
CCTCTACCTCTTTGCCCTCCATGACTATGACCAGAGTGGÀCAGCTGGATGG
CCTGGAGCTGCTGTCCATGTTGACAGCTGCTCTGGCCCCTGGAGCTGCCAA
CTCTCCTACCACCAACCCGGTGATATTGATAGTGGACAAAGTGCTCGAGA
CGCAGGACCTGAATGGGGATGGGCTCATGACCCCTGCTGAGCTCATCAAC
TTCCCGGGAGTAGCCCTCÀGGCACGTGGAGCCCGGAGAGCCCCTTGCTCC
ATCTCCTCAGGAGCCACAAGCTGTTGGAAGGCAGTCCCTATTAGCTAAAA
GCCCATTAAGACAAGAAACACAGGAAGCCCCTGGTCCCAGAGAAGAAGC
AAAGGGCCAGGTAGAGGCCAGAAGGGAGTCTTTGGÀTCCTGTCCAGGAG
CCTGGGGGCCAGGCAGAGGCTGATGGAGATGTTCCAGGGCCCAGAGGGG
AAGCIGAGGGCCAGGCAGAGGCTAAAGGAGATGCCCCTGGGCCCAGAGG
GGAAGCTGGGGGCCAGGCAGAGGCTGAAGGAGATGCCCCCGGGCCCAGA
GGGGAAGCTGGGGGCCAGGCAGAGGCCAGGGAGAATGGAGAGGAGGCC
AAGGAACTTCCAGGGGAAACACTGGAGTCTAAGAACACCCAAAATGACTT
TGAGGTGCACATTGTTCAAGTGGAGAATGATGAGATCTAGATCTTGAAGA
TACAGGTACCCCACGAAGTCTCAGTGCCAGAACATAAGCCCTGAAGTGGG
CAGGGGAAATGTACGCTGGGACAAGGACCATCTCTGTGCCCCCTGTCTGG
TCCCAGTAGGTATCAGGTCTTTCTGTGCAGCTCAGGGAGACCCTAAGTTAA
GGGGCAGATTACCAATAAAGAACTGAATGAATTCATCCCCCCGGGCCACC
TCTCTACCCGTCCAGCCTGCCCAGACCCTCTCAGAGGAACGGGGTTGGGG
ACCGAAAGGACAGGGATGCCGCCTGCCCAGTGTTTCTGGGCCTCACGGTG
CTCCGGCAGCAGAGCGCATGGTGCTAGCCATGGCCGGCTGCAGAGGACCC
AGTGAGGAAAGCTCAGTCTATCCCTGGGCCCCAAACCCTCACCGGTTCCC
CCTCACCTGGTGTTCAGACACCCCATGCTCTCCTGCAGCTCAGGGCAGGTG
ACCCCATCCCCAGTAATATTAATCATCACTAGAACTmTGAGAGCCITGT
ACACATCAGGCATCATGCTGGGCATTTTÀTATATGATnTATCCTCACAAT
AATTCTGTAGCCAAGCÀGÁATTGGTTCCATTTGACAGATGAAGAAATTGA
GGCAGATTGCGTTAAGTGCTGTACCCTAAGGTGATATGCAGCTAATTAAA
TGGCAGATTTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SEQtDNO: 75 Ca_ licreína 10, Variante de Transcrição 1 >gi|22208981|ref|NM_002776.3| Calicreína 10 de Homo sapiens (KLK10), variante de transcrito 1, mRNA | qPCR combinação de inicia- dor_adiante [851..874] | qPCR combinação de iniciador_reverso [950..931] | qPCR combinação de sonda [890.,914] CATCCTGCCACCCCTAGCCTTGCTGGGGACGTGAACCCTCTCCCCG CGCCTGGGAAGCCTTCTTGGCACCGGGACCCGGAGAATCCCCACGGAAGC CAGTTCCAAAAGGGATGAAAAGGGGGCGTTTGGGGCACTGGGAGAAGCC TGTATTCCÁGGGCCCCTCCCAGAGCAGGAATCTGGGACCCAGGAGTGCCA GCCTCACCCACGCAGATCCTGGCCATGAGAGCTCCGCACCTCCACCTCTCC GCCGCCTCTGGCGCCCGGGCTCTGGCGAAGCTGCTGCCGCTGCTGATGGC GCAACTCTGGGCCGCAGAGGCGGCGCTGCTCCCCCAAAACGACACGCGCT TGGACCCCGAAGCCTATGGCTCCCCGTGCGCGCGCGGCTCGCAGCCCTGG CAGGTCTCGCTCTTCAACGGCCTCTCGTTCCACTGCGCGGGTGTCCTGGTG GACCAGAGTTGGGTGCTGACGGCCGCGCACTGCGGAAACAAGCCACTGTG GGCTCGAGTAGGGGATGACCACCTGCTGCTTCTTCAGGGAGAGCAGCTCC GCCGGACCACTCGCTCTGTTGTCCATCCCAAGTACCACCAGGGCTCAGGC CCCATCCTGCCAAGGCGAACGGATGAGCACGATCTCATGTTGCTGAAGOT GGCCAGGGCCGTAGTGCTGGGGCCCCGCGTCCGGGCCCTGCAGCTTCCCT ACCGCTGTGCTCAGCCCGGAGACCAGTGCCAGGTTGCTGGCTGGGGCACC ACGGCCGCCCGGAGAGTGAAGTACAACAAGGGCCTGACCTGCTCCAGCAT CACTATCCTGAGCCCTAAAGAGTGTGAGGTCTTCTACCCTGGCGTGGTCAC CAACAACATGATATGTGCTGGACTGGACCGGGGCCAGGÀCCCTTGCCAGA GTGACTCTGGAGGCCCCCTGGTCTGTGACGAGACCCTCCAAGGCATCCTCT CGTGGGGTGTTTACCCCTGTGGCTCTGCCCAGCATCCAGCTGTCTACACCC AGATCTGCAAATACATGTCCTGGATCAATAAAGTCATACGCTCCAACTGA TCCAGATGCTACGCTCCAGCTGATCCAGATGTTATGCTCCTGCTGATCCAG ATGCCCAGAGGCTCCATCGTCCATCCTCTTCCTCCCCAGTCGGCTGAACTC TCCCCTTGTCTGCACTGTTCAAACCTCTGCCGCCCTCCACACCTCTAAACA TCTCCCCTCTCACCTCATTCCCCCACCTATCCCCATTCTCTGCCTGTACTGA AGCTGAAATGCAGGAAGTGGTGGCAAAGGTTTATTCCAGAGAAGCCAGG AAGCCGGTCATCACCCAGCCTCTGAGAGCAGTTACTGGGGTCACCCAACC TGACTTCCTCTGCCACTCCCTGCTGTGTGACTTTGGGCAAGCCAAGTGCCC TCTCTGAACCTCAGTTTCCTCATCTGCAAAATGGGAACAATGACGTGCCTA CCTCTTAGACATGTTGTGAGGAGACTATGATATAACATGTGTATGTAAATC TTCATGGTGATTGTCATGTAAGGCTTAACACAGTGGGTGGTGAGTTCTGAC TAAAGGTTACCTGTTGTCGTGA SEQID NO: 76 Calicreína 10, Variante de Transcrição 2 >gi|22208983|ref|NM_145888.1] Calicreína 10 de Homo sapiens (KLK10), variante de transcrito 2, mRNA j qPCR combinação de inicia-dor_adiante [714..737] | qPCR combinação de iniciador_reverso [813..794] | qPCR combinação de sonda [753..777] ACCAGCGGCAGACCACAGQCAGGGfCAGAGGCACGTCTGGGTCCCC TCCCTCCTTCCTATCGGCGACTCCCAGGATCCTGGCCATGAGAGCTCCGCA CCTCCACCTCTCCGCCGCCTCTGGCGCCCGGGCTCTGGCGAAGCTGCTGCC GCTGCTGATGGCGCAACTCTGGGCCGCAGAGGCGGCGCTGCTCCCCCAAA ACGACACGCGCTTGGACCCCGAAGCCTATGGCTCCCCGTGCGCGCGCGGC TCGCAGCCCTGGCAGGTCTCGCTCTTCAACGGCCTCTCGTTCCACTGCGCG GGTGTCCTGGTGGACCAGAGTTGGGTGCTGACGGCCGCGCACTGCGGAAA CAAGCCACTGTGGGCTCGAGTAGGGGATGACCACCTGCTGCITCTTCAGG GAGAGCAGCTCCGCCGGACCACTCGCTCTGTTGTCCATCCCAAGTACCAC CAGGGCTCAGGCCCCATCCTGCCAAGGCGAACGGATGAGCACGATCTCAT GTTGCTGAAGCTGGCCAGGCCCGTAGTGCTGGGGCCCCGCGTCCGGGCCC TGCAGCTTCCCTACCGCTGTGCTCAGCCCGGAGACCAGTGCCAGGTXGCTG GCTGGGGCACCACGGCCGCCCGGAGAGTGAAGTACAACAAGGGCCTGAC CTGCTCCAGCATCACTATCCTGAGCCCTAAAGAGTGTGAGGTCTTCTACCC TGGCGTGGTCACCAACAACATGATATGXGCTGGACTGGACCGGGGCCAGG ACCCTTGCCAGAGTGACTCTGGAGGCCCCCTGGTCTGTGACGAGACCCTC CAAGGCATCCTCTCGTGGGGTGTTTACCCCTGTGGCTCTGCCCAGCATCCA GCTGTCTACACCCAGATCTGCAAATACATGTCCTGGATCAATAAAGTCAT ACGCTCCAACTGATCCAGATGCTACGCTCCAGCTGATCCÁGATGTTATGCT CCTGCTGATCCAGATGCCCAGAGGCTCCATCGTCCATCCTCTTCCTCCCCA GTCGGCTGAACTCTCCCCTTGTCTGCACTGTTCAAACCTCTGCCGCCCTCC ACACCTCTAAACATCTCCCCTCTCACCTCATTCCCCCACCTATCCCCATTCT CTGCCTGTACTGAAGCTGAAATGCAGGAAGTGGTGGCAAAGGTTTATTCC AGAGAAGCCAGGAAGCCGGTCATCACCCAGCCTCTGAGAGCAGTTACTGG GGTCACCCAACCTGACTTCCTCTGCCACTCCCTGCTGTGTGACTTTGGGCA AGCCAAGTGCCCTCTCTGAACCrCAGTTTCCTCATCTGCAAAATGGGAACA ATGACGTGCCTACCTCTTAGACATGTTGTGAGGAGACTATGATATAACAT GTGTATGTAAATCTTCATGGTGATTGTCATGTAAGGCTTAACACAGTGGGT GGTGAGTTCTGACTAAAGGTTACCTGTTGTCGTGA SEQID NO: 77 Inibidor de Metaloproteinase de Tecido 1 >gi|4507508|ref|NM_003254.1| Inibidor de metaloproteinase de tecido 1 de Homo sapiens (atividade de potencialização de eritróide, inibidor de colagenase) (TIMP1), mRNA | qPCR combinação de inicíador_adiante [221..241] | qPCR combinação de iniciador_reverso [359..340] | qPCR combinação de sonda [251 ..283] AGGGGCCTTAGCGTGCCGCATCGCCGAGATCCAGCGCCCAGAGAG
ACACCAGAGAACCCACCATGGCCCCCTTTGAGCCCCTGGCTTCTGGCATCC
TGTTGTTGCTGTGGCTGATAGCCCCCAGCAGGGCCTGCACCTGTGTCCCAC
CCCACCCACAGACGGCCTTCTGCAATTCCGACCTCGTCATCAGGGCCAAG
TTCGTGGGGACACCAGAAGTCAACCAGACCACCTTATACCAGCGTTATGA
GATCAAGATGACCAAGATGTATAAAGGGTTCCAAGCCTTAGGGGATGCCG
CTGACATCCGGTTCGTCTACACCCCCGCCATGGAGAGTGTCTGCGGATACT
TCCACAGGTCCCACAACCGCAGCGAGGAGTTTCTCATTGCTGGAAAACTG
CAGGATGGACTCTTGCACATCACTACCTGCAGTTTCGTGGCTCCCTGGAAC
AGCCTGAGCTTAGCTCAGCGCCGGGGCTTCACCAAGACCTACACTGTTGG
CTGTGAGGAATGCACAGTGTTTCCCTGTTTÀTCCATCCCCTGCAAACTGCA
GAGTGGCACTCÀTTGCTTGTGGACGGACCAGCTCCTCCAAGGCTCTGAAA AGGGCTTCCAGTCCCGTCACCTTGCCTGCCTGCCTCGGGAGCCAGGGCTGT GCACCTGGCAGTCCCTGCGGTCCCAGATAGCCTGAATCCTGCCCGGAGTG GAACTGAAGCCTGCACAGTGTCCACCCTGTTCCCACTCCCATCTTTCTTCC GGACAATGAAATAAAGAGTTACCACCCAGC SEQID NO: 78 Proteína Secretada, Ácida, Rica em Cisteína >gi|48675809|ref|NM_003118.2| Proteína secretada, ácida, rica em cisteína 10 de Homo sapiens (osteonectina) (SPARC), mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [788..810] | qPCR combinação de iniciador_reverso [915..898] | qPCR combinação de sonda [818.839] GTTGCCTGTCXCTAAACCCCTCCACATTCCCGCGGTCCTTCAGACTG
CCCGGAGÀGCGCGCTCTGCCTGCCGCCTGCCTGCCTGCCACTGAGGGTTCC
CAGCACCATGAGGGCCTGGATCTTCTTTCTCCnTGCCTGGCCGGGAGGGC
CTTGGCAGCCCCTCAGCAAGAAGCCCTGCCTGATGÀGACAGAGGTGGTGG
AAGAAACTGTGGCAGAGGTGACTGAGGTATCTGTGGGAGCTÁATCCTGTC
CAGGTGGAAGTAGGAGAATTTGATGATGGTGCAGAGGAAACCGAAGAGG
AGGTGGTGGCGGAAAATCCCTGCCAGAACCACCACTGCAAACACGGCAA
GGTGTGCGAGCTGGATGAGAACAACACCCCCATGTGCGTGTGCCAGGACC
CCACCAGCTGCCCAGCCCCCATTGGCGAGTTTGAGAAGGTGTGCAGCAAT
GACAACAAGÀCCTTCGACTCTTCCTGCCACTTCTTTGCCACAAAGTGCACC
CTGGAGGGCACCAAGAAGGGCCACAAGCTCCACCTGGACTACATCGGGCC
TTGCAAATACATCCCCCCTTGCCTGGACTCTGAGCTGACCGAATTCCCCCT
GCGCATGCGGGACTGGCTCAAGAACGTCCTGGTCACCCTGTATGAGAGGG
ATGAGGACAACAACCTTCTGACTGAGAAGCAGAAGCTGCGGGTGAAGAA
GATCCATGAGAATGAGAAGCGCCTGGAGGCAGGAGACCACCCCGTGGAG
CTGCTGGCCCGGGACTTCGAGAAGAACTATAACATGTACATCTTCCCTGTA
CACTGGCAGTTCGGCCAGCTGGACCAGCACCCCÀTTGACGGGTACCTCTC
CCACACCGAGCTGGCTCCACTGCGTGCTCCCCTCATCCCCATGGAGCATTG
CACCACCCGCTTTTTCGAGACCTGTGACCTGGACAATGACAAGTACATCG
CCCTGGATGAGTGGGCCGGCTGCTTCGGCÀTCAAGCAGAAGGATATCGAC
AAGGATCTTGTGATCTAAATCCACTCCTTCCACAGTACCGGATTCTCTCTT
TAACCCTCCCCTTCGTGTTTCCCCCAATGTTTAAAATGTrrGGATGGTTTGT
TGXTCTGCCTGGAGACAAGGTGCTAACATAGATTTAAGTGAATACATTAA
CGGTGCTAAAAATGAAAAITCTAACCCAAGACATGACATTCTTAGCTGTA
ACTTAACTATTAÀGGCCTTTTCCACACGCATTAATAGTCCCATnTTCTCTT
GCCATTTGTAGCTTTGCCCATTGTCTTATTGGCACATGGGTGGACACGGAT
CTGCTGGGCTCTGCCTTAAACACACATTGCAGCTTCAACTTTTCTCTTTAGT
GTTCTGTnGAAACTAATACTTACCGAGTCAGACTTTGTGTTCATTTCATTT
CAGGGTCTTGGCTGCCTGTGGGCTTCCCCAGGTGGCCTGGAGGTGGGCAA
AGGGAAGTAACAGACACACGÀTGTTGTCAAGGATGGTTTTGGGACTAGAG
GCTCAGTGGTGGGAGAGATCCCTGCAGAACCCACCAACCAGAACGTGGTT
TGCCTGAGGCTGTAACTGAGAGAAAGATTCTGGGGOGTGTTATGAAAAT
ATAGACATTCTCACATAAGCCCAGTTCATCACCATTTCCTCCTTTACCTTTC
AGTGCAGTTTCTTTTCACATTAGGCTGTTGGTTCAAACTTTTGGGAGCACG
GACTGTCAGTTCTCTGGGAAGTGGTCAGCGCATCCTGCAGGGCTTCTCCTC
CTCTGTCTTTTGGAGAACCAGGGCTCTTCTCAGGGGCTCTAGGGACTGCCA
GGCTGTTTCAGCCAGGAAGGCCAAAATCAAGAGTGAGATGTAGAAAGTTG
TAAAATAGAAAAAGTGGAGTTGGTGAATCGGTTGTTCTTTCCTCACATTTG
GATGATTGTCATAAGGTTTTTAGCATGTTCCTCCTTTrCTTCACCCTCCCCT
TTTTTCTTCTATTMTCAAGAGAA/íCTTCAAAGrrAATGGGATGGTCGGAT
CTCACAGGCTGAGAACTCGTTCACCTCCAAGCATTTCATGAAAAAGCTGC
TTCTTATTAATCATACAAACTCTCACCATGATGTGAAGAGTTTCACAAATC
CTTCAAAATAAAAAGTAATGACTTAGAAACTGCCTTCCTGGGTGATTTGC
ATGTGTCTTAGTCTTAGTCACCTTATTATCCTGACACAAAAACACATGAGC
ATACATGTCTACACATGACTACACAAATGCAAACCTTTGCAAACACATTA
TGCXTTTGCACACACACACCTGTACACACACACCGGCATGTTTATACACAG
GGAGTGTATGGTTCCTGTAAGCACTAAGTTAGCTGTTITCATTTAATGACC
TGTGGTTTAACCCTTTTGATCACTACCACCATTATCAGCACCAGACTGAGC
AGCTATATCCTTTTATTAATCATGGTCATTCATTCATTCATTCATTCACAAA
ATATTTATGATGTATTTACTCTGCACCAGGTCCCATGCCAAGCACTGGGGA
CACÀGTTATGGCAAAGTAGACAAAGCATTTGTTCATTTGGAGCTTAGAGT
CCAGGAGGAATACATTAGATAATGACACAATCAAATATAAATTGCAAGAT
GTCACAGGTGTGATGAAGGGAGAGTAGGAGAGACCATGAGTATGTGTAA
CAGGAGGACACAGCATTATTCTAGTGCTGTACTGTTCCGTACGGCAGCCA
CTACCCACATGTAACTnTTAAGATTTAAATTTAAATTAGTTAACATTCAA
AACGCAGCTCCCCAATCACACTAGCAACATTTCAAGTGCTTGAGAGCCAT
GCATGATTAGTGGTTACCCTATTGAATAGGTCAGAAGTAGAATCTTTTCAT
CATCACAGAAAGTTCTATTGGACAGTGCTCTTCTAGATCATCATAAGACTA
CAGAGCACTTTTCAAAGCTCATGCATGTTCATCATGITAGTGTCGTATTTT
GAGCTGGGGTTTTGAGACTCCCCTTAGAGATAGAGAAACAGACCCAAGAA
ATGTGCTCAATTGCAATGGGCCACATACCTAGATCTCCAGATGTGATTTCC
CCTCTCTTATTTTAAGTTATGTTAAGATTACTAAAACAATAAAAGCTCCTA
AAAAATCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SEQIDNO: 79 Fator de Crescimento de Transformação, Beta-induzido >gi|4507466|ref|NM_000358.1| Fator de crescimento de transformação de Homo sapiens, Beta-induzido, 68 kDa (TGFBI), mRNA | qPCR ensai- o_em_combinação_de contexto_em_questão [170..194] GCTTGCCCGTCGGTCGCTAGCTCGCTCGGTGCGCGTCGTCCCGCTCC
ATGGCGCTCTTCGTGCGGCTGCTGGCTCTCGCCCTGGCTCTGGCCCTGGGC
CCCGCCGCGACCCrGGCGGGTCCCGCCAAGTCGCCCTACCAGCTGGTGCT
GCAGCACAGCAGGCTCCGGGGCCGCCAGCACGGCCCCAACGTGTGTGCTG
TGCAGAAGGTTATTGGCACTAATAGGAAGTACTTCACCAACTGCAAGCAG
TGGTACCAAAGGAAAATCTGTGGCAAATCAACAGTCATCAGCTACGAGTG
CTGTCCTGGATATGAAAAGGTCCCTGGGGAGAAGGGCTGTCCAGCAGCCC
TACCACTCTCAAACCTTTACGAGACCCTGGGAGTCGTTGGATCCACCACCA
CTCAGCTGTACACGGACCGCACGGAGAAGCTGAGGCCTGAGATGGAGGG
GCCCGGCAGCTTCACCATCTTCGCCCCTAGCAACGAGGCCTGGGCCTCCTT
GCCAGCTGAAGTGCTGGACTCCCTGGTCAGCAATGTCAACATTGAGCTGC
TCAATGCCCTCCGCTACCATATGGTGGGCAGGCGAGTCCTGACTGATGAG
CTGAAACACGGCATGACCCTCACCTCTATGTACCAGAATTCCAACATCCA
GATCCACCACTATCCTAATGGGATTGTAACTGTGAACTGTGCCCGGCTCCT
GAAAGCCGACCACCATGCAACCAACGGGGTGGTGCACCTCATCGATAAGG
TCATCTCCACCATCACCAACAACATCCAGCAGATCATTGAGATCGAGGAC
ACCTTTGAGACCCTTCGGGCTGCTGTGGCTGCATCAGGGCTCAACACGAT
GCTTGAAGGTAACGGCCAGTACACGCTTTTGGCCCCGACCAATGAGGCCT
TCGAGAAGATCCCTAGTGAGACTTTGAACCGTATCCTGGGCGACCCAGAA
GCCCTGAGAGACCTGCTGAACAACCACATCTTGAAGTCAGCTATGTGTGC
TGAAGCCATCGTTGCGGGGCTGTCTGTAGAGACCCTGGAGGGCACGACAC
TGGAGGTGGGCTGCAGCGGGGACATGCTCACTATCAACGGGAAGGCGATC
ATCTCCAATAAAGACATCCTAGCCACCAACGGGGTGATCCACTACATTGA
TGAGCTACTCATCCCAGACTCAGCCAAGACACTATTTGAATTGGCTGCAG
AGTCTGATGTGTCCACAGGCATTGACCTTTTCAGACAAGCCGGCCTCGGCA
ATCATCTCTCTGGAAGTGAGCGGTTGACCCTCCTGGCTCCCCTGAATTCTG
TATTGAAAGATGGAACCCCTCCAATTGATGCCCATACAAGGAATTTGCTTC
GGAACCACATAATTAAAGACCAGCTGGCCTCTAAGTATCTGTACCATGGA
CAGACCCTGGÁAACTCTGGGCGGCAAAAAACTGAGAGTTTTTGTTTATCG
TAATAGCCTCTGCATTGAGAACAGCTGCATCGCGGCCCACGACAAGAGGG
GGAGGTACGGGACCCTGTTCACGATGGACCGGGTGCTGACCCCCCCAATG
GGGACTGTCATGGATGTCCTGAAGGGAGACAATCGCTTTAGCATGCTGGT
AGCTGCCATCCAGTCTGCAGGACTGACGGAGACCCTCAACCGGGAAGGÀG
TCTACACAGTCTTTGCTCCCACAAATGAAGCCnCCGAGCCCTGCCACCAA
GAGAACGGAGCAGACTCTTGGGAGATGCCAAGGAACTTGCCAACATCCTG
AAATACCACATTGGTGATGAAATCCTGGTTAGCGGAGGCATCGGGGCCCT
GGTGCGGCTAAAGTCTCTCCAAGGTGACAAGCTGGAAGTCAGCTTGAAAA
ACAATGTGGTGAGTGTCAACAAGGAGCCTGTTGCCGAGCCTGACATCATG
GCCACAAATGGCGTGGTCCATGTCATCACCAATGTTCTGCAGCCTCCAGCC
AACAGACCTCAGGAAAGAGGGGATGAACTTGCAGACTCTGCGCTTGAGAT
CTTCAAACAAGCATCAGCGTTTTCCAGGGCTTCCCAGAGGTCTGTGCGACT
AGCCCCTGTCTATCAAAAGTTATTAGAGAGGATGAAGCATTAGCTTGAAG
CACTACAGGAGGAATGCACCACGGCAGCTCTCCGCCAATTTCTCTCAGAT
TTCCACAGAGACTGTTTGAATGTmCAAAACCMGTATCACACTTTAATG
TACATGGGCCGCACCATAATGAGATGTGAGCCTTGTGCATGTGGGGGAGG
AGGGAGAGAGATGTACTnTTAAATCATGTTCCCCCTAAACATGGCTGTTA
ACCCACTGCATGCAGAAACTTGGATGTCACTGCCTGACATTCACTTCCAGA
GAGGACCTATCCCAAATGTGGAATTGACTGCCTATGCCAAGTCCCTGGAA
AAGGAGCTTCAGTATTGTGGGGCTCATAAAACATGAATCAAGCAATCCAG
CCTCATGGGAAGTCCTGGCACAGTTTTTGTAAAGCCCXTGCACAGCTGGA
GAAATGGCATCATTATAAGCTÀTGAGTTGAAATGTTCTGTCAAATGTGTCT
CACATCTACACGTGGCTTGGAGGCTTTTÀTGGGGCCCTGTCCAGGTAGAA
AAGAAATGGTATGTAGAGCTTAGATTTCCCTATTGTGACAGAGCCATGGT GTGTTTGTAATAATAAAACCAAAGAAACATA SEQ E) NO: 80 Proteína de Matriz Extracelular do Tipo Fibulina Contendo EGF 2 >gi|8393298|ref|NM_016938.11 Proteína de Matriz Extracelular do Tipo Fibulina Contendo EGF 2 de Homo sapiens (EFEM2), mRNA | qPCR ensai- o_em_combinação_de contexto_em_questão [1248..1272] CAAGCTTGGCACGAGGGCAGGCATTGCCCGAGCCAGCCGAGCCGC
CAGAGCCGCGGGCCGCGCGGGTGTCGCGGGCCCAACCCCAGGATGCTCCC
CTGCGCCTCCTGCCTACCCGGGTCTCTACTGCTCTGGGCGCTGCTACTGTT
GCTCTTGGGATCAGCTTCTCCTCAGGATTCTGAAGAGCCCGACAGCTÀCAC
GGAATGCACAGATGGCTATGAGTGGGACCCAGACAGCCAGCACTGCCGG
GATGTCAACGAGTGTCTGACCATCCCTGAGGCCTGCAAGGGGGAAATGAA
GTGCATCAACCACTACGGGGGCTACTTGTGCCTGCCCCGCTCCGCTGCCGT
CATCAACGACCTACÁCGGCOAGGGA.CCCCCGCCACCAGTGCCTCCCGCTC
AACACCCCAACCCCTGCCCACCAGGCTATGAGCCCGACGATCAGGACAGC
TGTGTGGATGTGGACGAGTGTGCCCAGGCCCTGCACGACTGTCGCCCCAG
CCAGGACTGCCATAACTTGCCTGGCTCCTATCAGTGCACCTGCCCTGATGG
TTACCGCAAGATCGGGCCCGAGTGTGTGGACATAGACGAGTGCCGCTACC
GCTACTGCCAGCACCGCTGCGTGAACCTGCCTGGCTCCTTCCGCTGCCAGT
GCGAGCCGGGCTTCCAGCTGGGGCCTAACAACCGCTCCTGTGTTGATGTG
AACGAGTGTGACATGGGGGCCCCATGCGAGCAGCGCTGCTTCAACTCCTA
TGGGACCTTCCTGTGTCGCTGCCACCAGGGCTATGAGCTGCATCGGGATG
GCTTCTCCTGCAGTGATATTGATGAGTGTAGCTACTCCAGCTACCTCTGTC
AGTACCGCTGCGTCAACGAGCCAGGCCGTTTCTCCTGCCACTGCCCACAG
GGTTACCAGCTGCTGGCCACACGCCTCTGCCAAGACATTGATGAGTGTGA
GTCTGGTGCGCACCAGTGCTCCGAGGCCCAÀACCTGTGTCAACTTCCATG
GGGGCTACCGCTGCGTGGACACCAACCGCTGCGTGGAGCCCTACATCCAG
GTCTCXGAGAACCGCTGTCTCTGCCCGGCCTCCAACCCTCTATGTCGAGAG
CAGCCTTCATCCAXTGTGCACCGCTACATGACCATCACCTCGGAGCGGAG
AGTACCCGCTGACGTGTTCCAGATCCAGGCGACCTCCGTCTACCCCGGTGC
CTACAATGCCTTTCAGATCCGTGCTGGAAACTCGCAGGGGGACTnTACAT
TAGGCAAATCAACAACGTCAGCGCCAXGCXGGXCCTCGCCCGGCCGGTGA
CGGGCCCCCGGGAGTACGTGCTGGACCTGGAGATGGTCACCATGAATTCC
CTCATGAGCTACCGGGCCAGCTCTGTACTGAGGCTCACCGTCTTTGTAGGG
GCCTACACCTTCTGAGGAGCAGGAGGGAGCCACCCTCCCTGCAGCTACCC
TAGCTGAGGAGCCTGTTGTGAGGGGCAGAATGAGAAAGGCCCAGGGGCC
CCCATTGACAGGAGCTGGGAGCTCTGCACCACGAGCTTCAGTCACCCCGA
GAGGAGAGGAGGTAACGAGGAGGGCGGACTCCAGGCCCCGGCCCAGAGA
XXXGGÀCXXGGCXGGCXXGCAGGGGXCCTAAGAAACTCCACTCTGGACAG
CGCCAGGAGGCCCTGGGTXCCATTCCTAACTCTGCCTCAAACTGTACATTT
GGAXAAGCCCXAGXAGXTCCCTGGGCCTGTTTTTCTATAAAACGAGGCAAC XGG SEQIDNO: 81 Lumican >gi|21359858|ref|NM_002345.2] Lumican de Homo sapaiens (LUM), mRNA | qPCR combinação de iniciador adiante [61.84] | qPCR combinação de iniciador_reverso [182..162] | qPCR combinação de sonda [117..152] GXAXCACTCAGAAXCTGGCAGCCAGXXCCGXCCXGACAGAGXXCAC
AGCAXAXAXXGGXGGAXXCTTGXCCAXAGXGCAXCXGCXXXAAGAAXXAAC
GAAAGCAGTGXCAAGACAGXAAGGAXTCAAACCAXXXGCCAAAAAXGAGX
CTAAGXGCATTXACTCTCTXCCXGGCATTGAXrGGTGGXACCAGTGGCCAG
XACXAXGATTATGATnTCCCCXAXCAATXTAXGGGCAAXCAXCACCAAAC
XGXGCACCAGAAXGXAACXGCCCXGAAAGCXACCCAAGXGCCAXGXACXG
XGAXGAGCXGAAAXXGAAAAGXGTACCAATGGXGCCTCCXGGAATCAAGT
AXCTTrACCXXAGGAAXAACCAGAXTGACCAXAXXGAXGAAAAGGCCTrXG
AGAATGTAACTGATCTGCAGTGGCXCATXCXAGAXCACAACCTTCTAGAA
AACXCCAAGAXAAAAGGGAGAGXXTXCTCXAAAXXGAAACAACXGAAGAA
GCXGCAXAXAAACCACAACAACCXGACAGAGTCXGXGGGCCCACTTCCCA
AAXCXCXGGAGGAXCTGCAGCXXACXCAXAACAAGAXCACAAAGCXGGGC
XCXXXXGAAGGAXXGGXAAACCTGACCTXCAXCCATCTCCAGCACAAXCGG
CTGAAAGAGGAXGCTGTXXCAGCXGCXTXTAAAGGTCTXAAAXCACTCGAA
TACCTTGACTTGAGCTTCAATCAGATAGCCAGACTGCCTTCTGGTCTCCCT
GTCTCTCTTCTAACTCTCTACTTAGACAACAATAAGATCAGCAACATCCCT
GATGAGTATTTCAAGCGTTXTAATGCATTGCAGTATCTGCGTTTATCTCAC
AACGAACTGGCTGATAGTGGAATACCTGGAAATTCTTTCAATGTGTCATCC
CTGGTTGAGCTGGATCTGTCCTATAACAAGCTTAAAAACATACCAACrGTC
AATGAAAACCTTGAAAACTATTACCTGGAGGTCAATCAACTTGAGAAGTT
TGACATAAAGAGCXTCTGCAAGATCCTGGGGCCATTATCCXACTCCAAGA
TCAAGCATTTGCGTTTGGATGGCAATCGCATCTCAGAAACCAGTCTTCCAC
CGGATATGTATGAATGTCTACGTGTTGCTAACGAAGTCACTCTTAATTAAT
ATCTGTATCCTGGAACAATATTrTATGGTTATGTrTTTCTGTGTGTCAGTTT
TCATAGTATCCATATTITATrÀCTGTTTATTACITCCAIGAATTTTAAAàTC
TGAGGGAAATGTTTTGTAAACATTTArrTTTTrfAAAGAAAAGATGAAAG
GCAGGCCTATTTCATCACAAGAACACACACATATACACGAATAGACATCA
AACTCAATGCTTTATTTGTAAATTTAGTGTTTTTTTATTTCTACTGTCAAAT
GÀTGTGCAAAACCTTTTACTGGTTGCATGGAAATCAGCCAAGTTTTATAAT
CCTTAAATCTTAATGTTCCTCAAAGCTTGGATTAAATACATATGGATGTTA
CTCTCTTGCACCAAATTATCTTGATACATTCAAATTTGTCTGGTTAAAAAA
TAGGTGGTAGATATTGÀGGCCAAGAATATTGCAAAATACATGAAGCTTCA
TGCACTTAAAGAAGTATTTTTAGAATAAGAArrTGCATACrTACCTAGTGA
AACTTTTCTAGAATTATTTTTCACTCTAAGTCATGTATGTTTCTCTTTGATT
ATTTGCATGTTATGTTTAATAAGCTACTAGCAAAATAAAACATAGCAAAT GAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SEQ Π) NO; 82 Estanina >gi|29893560|ref|NM_003498.3| Estanina de Homo sapiens (SNN), mRNA | TACCTTGACTTGAGCTTCAATCAGATAGCCAGACTGCCTTCTGGTCTCCCT
GTCTCTCTTCTAACTCTCTACTTAGACAACAATAAGATCAGCAACATCCCT
GATGAGTATTTCAAGCGTTTTAATGCATXGCAGTATCTGCGTTTATCTCAC
AACGAACTGGCTGATÀGTGGAATACCTGGAAATTCTTTCAATGTGTCATCC ctggttgagctggatctgtcctataacaagcttaaaaacataccaactgtc AATGAAAACCTTGAAAACTATTACCTGGAGGTCAATCAACTTGAGAAGTT
TGACATAAAGAGCTTCTGCAAGATCCTGGGGCCATTATCCTACTCCAAGA
TCAAGCATTTGCGTTTGGATGGCAATCGCATCTCAGAAACCAGTCTTCCAC
CGGATATGTATGAATGTCXACGTGTTGCTAACGAAGTCACTCTTAATTAAT
ATCTGTATCCTGGMCAATATITTATGGITATGTTTTTCTGTGTGTCAGTTT
TCATAGTATCCATATTrTATTACTGTTTATTACTTCCATGAATTTTAAAATC
TGAGGGAAATGTTTTGTAAACATTTATTTITfTTAAAGAAAAGATGAAAG
GCAGGCCTATTTCATCACAAGAACACACACATATACACGAATAGACATCA
AACTCAATGCnTATTTGTAAATTTAGTGnTTTTTATTTCTACTGTCAAAT
GATGTGCAAAACCTTTTACTGGTTGCATGGAAATCAGCCAAGTTTTÀTAAT
CCTTAAATCXTAATGTTCCTCAAAGCTTGGATTAAATACATATGGATGTTA
CTCrCTTGCACCAAATTATCTTGATACATTCAAATITGTCrGGTTAAAAAA
TAGGTGGTAGATATTGÀGGCCAAGAATATTGCAAAATACATGAAGCTTCA
TGCACTTAAAGAAGTATTTTTAGAATAAGAATTTGCATACTTACCTAGTGA
AACTTTTCTAGAATTATTTTTCACTCTAAGTCATGTATGTTTCTCTTTGATT
ATTTGCATGTTATGTTTAATAAGCTACTAGCAAAATAAAACATAGCAAAT GAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SEQ E) NO; 82 AGCGGGGCCGGACCGGGCGGGCGGAGCCGGGCCCGCGGGGCTGCT
GCGGGGCGATCGGGCCGGGCCGCTGCCGCGCCATGGACTCCCGTGTCCAG
CCTGAGTTCCAGCCTCACTGAGTGGCCÀCCCCCAAAGTGCTGCCÀGCCGA
GGAAGCCCCCAGCACTGACCATGTCTATTATGGACCACAGCCCCACCACG
GGCGTGGTCACAGTCATCGTCATCCTCATTGCCATCGCGGCCCTGGGGGCC
TTGATCCTGGGCTGOTGGTGCTACCTGCGGCTGCAGCGCATCAGCCAGTCA
GAGGACGAGGAGAGCATCGTGGGGGATGGGGAGACCAAGGAACCCTTCC
TGCTGGTGCAGTATTCGGCCAAGGGACCGTGCGTGGAGAGAAAGGCCAA
GCTGATGACTCCCAACGGCCCGGAAGTCCACGGCTGAGCCAGGATGCAAG
GCTCCTGGTCCTGTTTGCAGCCGGCCAAGAGGCGCTGGGAGGGGCAAAAC
CATACGGATGCGCTGCTGTCTGAGAGGAAGGGCTGACACTTGCTGGCATG
GCCTCTGCGGGCTTCGTCATCGCATGCACTGATGCCCGGGGACCTGGCTGT
CCTGGGCTTCCCCTCGGCCTCCAGGTGAGGCTGCCCATTGCAGGCACTGG
GCAGGCCTGACCTTGCTGGGGCTCATGGCCCTGTAGCGCTTTTGTTACTTG
AATGTCTAGCXGAGCCTGTTTTTGATGGAGCTACTACTGTAATGCGTGAAC
TAACAAACCTGTGAACTGTAAArAGGCCCCTGGAAGCACGTGCTTAAGCC
CTTTTGCTGATTTTTAAAAATATCATCTAGCGCACACGGGACTGGTATTCT
GGCTGTACTAATGACAAGCTGAGTCAAGACCCTGGAGGGTCATAGGCTTG
TAAAGGCCCACGCCACACTCGGCAGGGGTCTCTCATGTGTGTCCATCTGC
GTGTATGTCAAGGAAGTGAGATGCCAATTTGGGGTCTTGAGGCTGACCAG
TTGGGGTGCTTGGGTGATCTCTGCTTCATTAGTCATGGGTGGAAGAAAAA
CCACACCCCCCGCACCCCTCCGTTCTTTCTGCATAGACTCACTTGTTAAAT
AGCAGTTCTGTTGAGAGTGGAGTTACTGCAGGGAAGCTACCGGACCTGCC
TGGGAGCCAGTGAAGGGCGAGTCAGGGCACGCGTCCTGGAGGCTGCCAG
CGTCCTTGTAGCAGAGCAGTTTCTTGCCGCTTGOGTCTTCAGCACGCCAAG
CCCCCCACCAACCCTCCACCCGGAGTGAAGGCTTCGCTGAAATTGCTTTGG
TCCTCATAGAGCCTGTGGTGGCTACTTTTGGTCTGAAACCCACTTGGCCCA
GGAAAGAGAAAAGGTTGTATGTTTTGTGTTGGTGTITCCTATTTTCTGCAC
TGGAGGGGAGGGGACTGTTGAGGTTCTGTCTTTTTTCTTCTTTTCCTCTTCC
CTCTTCACATCACTTGGCTTCCTTTCCTCTCTGATGAGCGTCCGGCTATGGG
GTTCTGACTTCACTTTCCTCAGCGGGTCTCCAGTCCCCTGACCCAGCTCTA
AAGGCACTTAGGACCCAGGGAACATTTCTCACGTGCACATTCCCCTAAGA
GCCACCAGACTGCTTCCTGCCAGCCTGTGCTTGCGGCAGGGAGCCGGGGC
AGGGCAGAGGTGAACITGAAGTTCAGGACTTGACTCTCCCACAGGTGGTG
AGCTGGTGGCTCTCTGGTGAGCTAGTGTCTCCACAGCCTGTCTCCAAGGCC
TCCCCTATGTACATTTCAGTGAGCTCACTTTGATnTTAATCCCACCACAA
GCACATACTAATTTTATTTATGATTCAAATGTGACTCGTGCCTGCCCATCC
CTGTAATAGATGGAAGGTCAGCCCCGGCTTAACCACAGAGCACTGGCCCT
TCATGGCTGAGCTCAGAGCTCTGGCCTCCTGCTCAGACTAAAGGCACCTCC
TCTGGCCTCACCCAAGCCTCTTCTAAAAACCATGTTGAATGAATCCACGTT
CTGGAACCCCGAGGCGGGAGAAGTAGGGAGCTGTTCGTTTAAGCAGCATA
CACCTAAATTGGGGGTTTAAACATTAAGTAGGAGCTTGGGGTGGAAGAGG
GACAGCCGGCTGGGCCACCTGAGCAGAAGGTGGTAATGAAACACCTCAG
CTGGGCTCXTGGGAGACCTTAGGAAGCAGGAGAGGCAACACCTCTGGCTA
CTGATGGTGTGGCAAGTTCAGAAGAGGTGGTGGTGGGGTAGGCGTGATGT
CAGCAGAAGCCCTGCAGGCTGGGTGGGCAGGACACGTGGTGGGGGCCAC
TGAAACCAGGCCTAGGAGGGAGAACAAGTTCCAAAGGTGCCGACTGGAA
GAAGGGGGTAAAAGTTTGCTTTGGTGAGTGAGAAAAGGCTGGGGCGTGTG
ATCCATCCCCTCACGTTTCAGAACTTCCAGGCTTTCTACCTCGACTCTCAC
CACAGCCAGCACATACACCTAGGCTGTTTTTCCTTCCTCCACACCTGAGGG
ACGCAGCAACAGCTAGGÀTCTGCATTTTCAGGTTCCGAGCCTGACCCCTG
GAACTGACCAGCGCTCGATTGTCAGCCTTGGCCTGGGGTnTGACCTTGCC
AGTGAAGTTTCGGTTTTGAAGTGATTAAATGTCAGTTCCTCATCAGTTTCA
CTTCTGGAGGTTTTCTTATCCTACTCCCTGGTGCCAGGGACGTACCTGGGA
GTTTGAATCAGGCCCATTTGAGCGTGGCAGCCGTGTTGGGTGAAGGTCCG
GGGCTCGGTGAGGCACTGGGGGGGTTTTCGGGAGGAAAATGAAAATGCTT
CTAGAATGAGTGAACCACATCATAGCTCTCACTGTTXTITCAATAGCTACT
TTTTTTAGCAGACACCAGAGCCACACTCAAATGGCTAAGTAGGTTATGAC
CTCTCTGGATTATTrTTGAATGCCCAACTGTTGCATTCAAGTTTTCTGACTA
ATAAGAAATTAAGCATTCATCCTTCGTATCACTGCAGAAGCAACAGTGGG
GGCACAGGGAGGGAACTCTTGACACTGAGCCACTAAAATATGGACTAATT
ITTTGGACAAATCTrCAAACGGACTGTGCTACTGTAITTGTCTCAAAGCTA
CCAAGTTTGTGCAATAAGTGGAAGGGATGTCATCCTTCTTCAATAAATGCT
GAATGACATTCAAGCTGATTTTCTAGACCACTGAGAAAATCTTTATTTACA
ATAAATTTCAATAAAATTTGCATAAATATATTCCCAAAAAAAAAAAAAAA AAAAAAGAAAAAAAAAAAAA SEQ Π) NO: 83 Fosfoproteína Secretada 1 >gi|38146097|ref|NM_000582.2| Fosfoproteína 1 secretada de Homo sapiens (osteopontina, sialoproteína I de osso, ativação de linfócito T 1 precoce) (SPP1), mRNA | qPCR ensaio_em_combinação_de contex-to_em_questão [253..277] CTCCCTGTGTTGGTGGAGGATGTCTGCAGCAGCATTTAAATTCTGG GAGGGCTTGGTTGTCAGCAGCAGCAGGAGGAGGCAGAGCACAGCATCGT CGGGACCAGACTCGTCTCAGGCCAGTTGCAGCCTTCTCAGCCAAACGCCG ACCAAGGAAAACTCACTACCATGAGAATTGCAGTGATTTGCTTTTGCCTCC TAGGCATCACCTGTGCCATACCAGTTAAACAGGCTGATTCTGGAAGTTCTG AGGAAAAGCAGCTTTACAACAAATACCCAGATGCTGTGGCCACATGGCTA AACCCTGACCCATCTCAGAAGCAGAATCTCCTAGCCCCACAGACCCTTCC AAGTAAGTCCAACGAAAGCCATGACCACATGGATGATATGGATGATGAA GATGATGATGACCATGTGGACAGCCAGGACTCCATTGACTCGAACGACTC TGATGATGTAGATGACACTGATGATTCTCACCAGTCTGATGAGTCTCACCA TTCTGATGAATCTGATGAACTGGTCACTGATTTTCCCÀCGGAGCTGCCÀGC AACCGAAGTTTTCACTCCAGTTGTCCCCACAGTAGACACATATGATGGCC GAGGTGATAGTGTGGTTTATGGACTGÀGGTCAAAATCTAAGAAGTTTCGC AGACCTGACATCCAGTACCCTGATGCTACAGACGAGGACATCACCTCACA CATGGAAAGCGAGGAGTTGAATGGTGCATACAAGGCCATCCCCGTTGCCC AGGACCTGAACGCGCCTTCTGATTGGGACAGCCGTGGGAAGGACAGTTAT GAAACGAGTCAGCTGGATGACCAGAGTGCTGAAACCCACAGCCACAAGC AGTCCAGATTATATAAGCGGAAAGCCAATGATGAGAGCAATGAGCATTCC GATGTGATTGATAGTCAGGAACTTTCCAAAGTCAGCCGTGAATTCCACAG CCATGAATTTCACAGCCATGAAGATATGCTGGTTGTAGACCCCAAAAGTA AGGAAGAAGAXAAÀCACCXGAAAXXXCGTAXXXCXCAXGAATTAGAXAGX GCATCTTCTGAGGTCAATTAAAAGGAGAAAAAATACAATTTCTCACTTTG CATTTAGTCAAAAGAAAAAATGCTTTATAGCAAAATGAAAGAGAACATGA AATGCTTCTrrCXCAGTTTATTGGTTGAATGTGTATCTAITTGAGTCTGGAA ATAACTAATGTGTTTGATAATTAGTTTAGTTTGTGGCTTCATGGAAACTCC CTGTAAACTAAAAGCTTCAGGGTTATGTCTATGTTCATTCTATAGAAGAAA TGCAAACTATCACTGTATTTTAATATTTGTTATTCTCTCATGAATAGAAATT TATGTAGAAGCAAACAAAATACTTTTACCCACTTAAAAAGAGAATATAAC ÀTTTTATGTCACTATAATCTTTTGTTTTTTAAGTTAGTGTATATrTTGTTGT GATTATCTTnTGXGGTGTGAATAAATCTTTTATCTTGAATGTAATAAGAA TrXGGXGGXGXCAATXGCXXAXTTGXXXXCCCACGGXTGXCCAGCAAXXAAX AAAACAXAACCXXXXTXACXGCCTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA AAAAAAAAA SEQIDNO:84 Proteoglicano 2 Condroitina Sulfato >gi|21361115]ref|NM_004385.2| Proteoglicano 2 condroitina sulfato de Homo sapiens (versican) (CSPG2), mRNA | qPCR combinação de inícia-dor_adiante [10087..10106] | qPCR combinação de iníciador_reverso [10185..10163] | qPCR combinação de sonda [10139..10161] GCXGCCCCGAGCCXIXCXGGGGAAGAACTCCAGGCGXGCGGACGCA
ACAGCCGAGAACATTAGGXGXXGXGGACAGGAGCTGGGACCAAGATCTTC
GGCCAGCCCCGCAXCCXCCCGCAXCXXCCAGCACCGXCCCGCACCCXCCGC
ATCCXXCCCCGGGCCACCACGCTTCCXAXGTGACCCGCCTGGGCAACGCCG
AACCCAGXCGCGCAGCGCXGCAGXGAATXXXCCCCCCAAACXGCAAXAAG
CCGCCXXCCAAGGCCAAGÀXGTXCATAAAXATAAAGAGCATCXXAXGGAT
GTGXTCAACCXXAAXAGTAACCCATGCGCXACAXÀAAGTCAAAGTGGGAA
AAAGCCCACCGGXGAGGGGCXCCCTCXCXGGAAAAGTCAGCCXACCXXGT
CATTTTTCAACGATGCCTACTTTGCCACCCAGTTACAACACCAGTGAATTT
CTCCGCATCAAATGGTCTAAGATTGAAGTGGACAAAAATGGAAAAGATTT
GAAAGAGACTACTGTCCTTGTGGCCCAAAATGGAAATATCAAGATTGGTC
AGGACTACAAAGGGAGAGTGTCTGTGCCCACACATCCCGAGGCTGTGGGC
GATGCCTCCCTCACTGTGGTCAAGCTGCTGGCAAGTGATGCGGGTCTTTAC
CGCTGTGACGTCATGTACGGGATTGAAGACACACAAGACACGGTGTCACT
GACTGTGGATGGGGTTGTGTTTCACTACAGGGCGGCAACCAGCAGGTACA
CACTGAATTTTGAGGCTGCTCAGAAGGCTTGTTTGGACGTTGGGGCAGTC
ATAGCAACTCCAGAGCAGCTCTTTGCTGCCTATGAAGATGGATTTGAGCA
GTGTGACGCAGGCTGGCTGGCTGATCAGACTGTCAGATATCCCATCCGGG
CTCCCAGAGTAGGCTGTTATGGAGATAAGATGGGAAAGGCAGGAGTCAG
GACTTATGGATTCCGTTCTCCCCAGGAAACTTACGATGTGTATTGITATGT
GGATCATCTGGATGGTGATGTGTTCCACCTCACTGTCCCCAGTAAATTCAC
CTTCGAGGAGGCTGCAAAAGAGTGTGAAAACCAGGATGCCAGGCTGGCA
ACAGTGGGGGAACTCCÀGGCGGCATGGAGGAACGGCTTTGACCAGTGCG
ATTACGGGTGGCTGTCGGATGCCAGCGTGCGCCACCCTGTGACTGTGGCC
AGGGCCCAGTGTGGAGGTGGTCTACTTGGGGTGAGAACCCTGTATCGTTT
TGÀGAACCAGACAGGCTTCCCTCCCCCTGATAGCAGATTTGATGCCTACTG
CTTTAAACCTAAAGAGGCXACAACCATCGATXTGAGTATCCTCGCAGAAA
CTGCATCACCCAGTTTATCCAAAGAACCACAAATGGTTTCTGATAGAACT
ACACCAATCATCCCTTTAGTTGATGAATTACCTGTCATTCCAACAGAGTTC
CCTCCCGTGGGAAATATTGTCAGTTTTGAACAGAAAGCCACAGTCCAACC
TCAGGCTATCACAGATAGTTTAGCCACCAAATTACCCACACCTACTGGCA
GTACCAAGAAGCCCTGGGATATGGATGACTACTCACCTTCTGCTTCAGGA
CCTCTTGGAAAGCTAGACATATCAGAAATTAAGGAAGAAGTGCTCCAGAG
TACAACTGGCGTCTCTCATTATGCTACGGATTCATGGGATGGTGTCGTGGA
AGATAAACAAACACAAGAATCGGTTACACAGATTGAACAAATAGAAGTG
GGTCCTTTGGTAACATCTATGGAAATCTTAAAGCACATTCCTTCCAAGGAA
TTCCCTGTAACTGAAACACCATTGGTAACTGCAAGAATGATCCTGGAATC
CAAAACTGAAAAGAAAATGGTAAGCACTGTTTCTGAATTGGTAACCACAG
GTCACTATGGATTCACCTTGGGAGAAGAGGATGATGAAGACAGAACACTT
ACAGTTGGATCTGATGAGAGCACCTTGATCTTTGACCAAATTCCTGAAGTC
ATTACGGTGTCAAAGACTTCAGAAGACACCATCCACACTCATTTAGAAGA
CTTGGAGTCAGTCTCAGCATCCACAACTGTTTCCCCTTTAATTATGCCTGA
TAATAATGGATCATCCATGGATGACTGGGAAGAGAGACAAACTAGTGGTA
GGATAACGGAAGAGTTTCTTGGCAAATATCTGTCTACTACACCTTTTCCAT
CACAGCATCGTACAGAAATAGAATTGTTTCCTTATTCTGGTGATAAAATAT
TAGTAGAGGGAATTTCCACAGTTATTTATCCTTCTCTACAAACAGAAATGA
CACATAGAAGAGAAAGAACAGAAACACTAATACCAGAGATGAGAACAGA
TACTTATACAGATGAAATACAAGAAGAGATCACTAAAAGTCCATTTATGG
GAAAAACAGAAGAAGAAGTCTTCTCTGGGATGAAACTCTCTACATCTCTC
TCAGAGCCAATTCATGTTACAGAGTCTTCTGTGGAAATGACCÁAGTCTTTT
GATTTCCCAACATTGATAACAAAGTTAAGTGCAGAGCCAACAGAAGTAAG
AGATATGGAGGAAGACTTTACAGCAACTCCAGGTACTACAAAATATGATG
AAAATATTACAACAGTGCTTTTGGCCCATGGTACnTAAGTGTTGAAGCAG
CCACTGTATCAAAATGGTCATGGGATGAAGATAATACAACATCCAAGCCT
TTAGAGTCTACAGAACCTTCAGCCTCTTCAAAATTGCCCCCTGCCTTACTC
ACAACTGTGGGGATGAATGGAAAGGATAAAGACATCCCAAGTTTCACTGA
AGATGGAGCAGATGAATTTACTCTTATTCCAGATAGTACTCAAAAGCAGT
TAGAGGAGGTTACTGATGAAGACATAGCAGCCCATGGAAAATTCACAATT
AGATXTCAGCCAÂCTACATCAACTGGTATTGCAGAAAAGTCMCTTTGAG
AGATTCTACAACTGAAGAAAAAGTTCCACCTATCACAAGCACTGAAGGCC
AAGTTTATGCAACCATGGAAGGAAGTGCTTTGGGTGAAGTAGMGATGTG
GACCTCTCTAAGCCAGTATCTACTGTTCCCCAATTTGCACACACTTCAGAG
GTGGAAGGATTAGCATTTGTTAGTTATAGTAGCACCCAAGAGCCTACTAC
TTATGTAGACTCTTCCCATACCATrCCTCTTTCTGTAAnCCCAAGACAGA
CTGGGGAGTGTTAGTACCTTCTGTTCCATCAGAAGATGAAGTTCTAGGTGA
ACCCTCTCAAGACATACTTGTCATTGATCAGACTCGCCTTGAAGCGACTAT
TTCTCCAGAAACXATGAGAACAACAAAAATCACAGAGGGAACAACTCAG
GAAGAATTCCCTTGGAAAGAACAGACTGCAGAGAAACCAGTTCCTGCTCT
CAGTTCTACAGCTTGGACTCCCAAGGAGGCAGTAACACCACTGGATGAAC
AAGAGGGCGATGGATCAGCATATACAGTCTCTGAAGATGAATTGTTGACA
GGTTCTGAGAGGGTCCCAGTTTTAGAAACAACTCCAGTTGGAAAAATTGA
TCACAGTGTGTCTTATCCACCAGGXGCTGTAACTGAGCACAAAGTGAAAA
CAGAXGAAGTGGTAACACXAACACCACGCAXTGGGCCAAAAGXÀTCTTTA
AGXCCAGGGCCTGAACAAAAATAXGAAACAGAAGGXAGXAGTACAACAG
GATrTACATCAXCTTTGÀGTCCTXXTAGTACCCACAXXACCCAGCTXAXGG
AAGAAACCACTACXGAGAAAACAXCCCTAGAGGATAXXGATTTAGGCTCA
GGATTATTTGAAAAGCCCAAAGCCACAGAACXCAXAGAAXXTTCAACAAT
CAAAGXCACAGTTCCAAGTGAXÀXXACCÀCTGCCTTCAGXXCAGXAGACA
GACXXCACACAACXTCAGCAXXCAAGCCATCXTCCGCGAXCACTAAGAAA
CCACCTCTCATCGACAGGGAACCTGGTGAAGAAACAACCAGTGACATGGT
AATCAXTGGAGAATCAACATCXCAXGXXCCXCCCACTACCCTTGAAGAXAX
XGTAGCCAAGGAAACAGAAACCGATATXGATAGAGAGTATXTCACGACXT
CAAGXCCXGCXGCXACACAGCCAAGAAGACCACCCACXGXGGAAGACAAA
GAGGCCTTTGGACCTCAGGCGCXTXCTACGCCACAGCCCCCAGCAAGCAC
AAAAXTTCACCCTGACATXAATGTXXATATTAXXGAGGTCAGAGAAAATAA
GACAGGTCGAATGAGTGATTTGAGXGXAATXGGXCATCCAAXAGATXCAG
AAXCXAAAGAAGAXGAAGCTTGXAGTGAAGAAACAGAXCCAGTGCATGAT
CXAAXGGCTGAAAXTTXACCXGAAXXCCCTGACATAAXTGAAAXAGACCTA
XACCACAGXGAAGAAAATGAAGAAGAAGAAGAAGAGTGXGCAAAXGCTA
CTGATGTGACAACCACCCCAXCXGXGCAGXACATAAAXGGGAAGCAXCTC
GTTACCACXGTGCCCAAGGACCCAGAAGCTGCAGAAGCTAGGCGTGGCCA
GTXTGAAAGXGXXGCACCTXCXCAGAAXXXCXCGGACAGCTCXGAAAGTGA
XACTCAXCCATXXGXAAXAGCCAAAACGGAAXTGTCTACTGCTGXGCAACC
TAAXGAATCTACAGAAACAACTGAGTCTCXTGAAGXTACATGGAAGCCXG
AGACXTACCCTGAAACAXCAGAACAXXXTXCAGGTGGTGAGCCTGAXGTXX
TCCCCACAGTCCCATTCCATGAGGAArrTGAAAGTGGAACAGCCAAAAAA
GGGGCAGAATCAGXCACAGAGAGAGAXACXGAAGXTGGXCAXCAGGCAC
ATGAACAXACXGAACCTGTAXCXCTGTTTCCXGAAGAGXCTTCAGGAGAGA
XTGCCATXGACCAAGAATCXCAGAAAATAGCCXXTGCAAGGGCXACAGAA
GXAACAXTXGGXGAAGAGGTAGAAAAAAGTACTXCXGXCACAXACACTCC
CACXAXAGTTCCAAGTTCTGCATCAGCAXATGXXXCAGAGGAAGAAGCAG
XTACCCXAAXAGGAAAXCCXXGGCCAGATGACCXGXTGTCXACCAAAGAA
AGCXGGGTAGAAGCAACTCCXAGACAAGXXGXAGAGCTCXCAGGGAGXTC
XTCGAXXCCAAITACAGAAGGCXCXGGAGAAGCAGAAGAAGAXGAAGAXA
CAAXGTTCACCAXGGTAACXGAXXTATCACAGAGAAAXACTACXGATACA
CXCAITACXTrAGACACXAGCAGGAXAATCACAGAAAGCXXXTTXGAGGXX
CCTGCAACCACCAXTTATCCAGTTTCTGAACAACCXXCTGCAAAAG1GGTG
CCTACCAAGTTTGTAAGTGAAACAGACACTXCXGAGTGGArfTCCAGTACC
ACTGTTGAGGAAAAGAAAAGGAAGGAGGAGGAGGGAACTACAGGTACGG
CTTCTACATTTGAGGTATATTCATCTACACAGAGATCGGATCAATTAATTT
TACCCTTTGAATTAGAAAGTCCAAATGTAGCTACATCTAGTGATTCAGGTA
CCAGGAAAAGTTTTATGTCCTTGACAACACCAACACAGTCTGAAAGGGAA
ATGACAGATTCTACTCCTGTCTTTACAGAAACAAATACATTAGAAAATTTG
GGGGCACAGACCACTGAGCACAGCAGTATCCATCAACCTGGGGTTCAGGA
AGGGCTGACCACTCTCCCACGTAGTCCTGCCTCTGTCTTTATGGAGCAGGG
CTCTGGAGAAGCTGCTGCCGACCCAGAAACCACCACTGTTTCTTCATTTTC
ATTAAACGTAGAGTATGCAATTCAAGCCGAAAAGGAAGTAGCTGGCACTT
TGTCTCCGCATGTGGAAACTACATTCTCCACTGAGCCAACAGGACTGGTTT
TGAGTACAGTAATGGACAGAGTAGTTGCTGAAAATATAACCCAAACATCC
AGGGAAATAGTGATTTCAGAGCGATTAGGAGAACCAAATTÁTGGGGCAG
AAATAAGGGGCTTTTCCACAGGTTTTCCTTTGGAGGAAGATTTCAGTGGTG
ACTTTAGAGAATACTCAACAGTGTCTCATCCCATAGCAAAAGAAGAAACG
GTAATGATGGAAGGCTCTGGAGATGCAGCATTTAGGGACACCCAGACTTC
ACCATCTACAGTACCTACTTCAGTTCACATCAGTCACATATCTGACTCAGA
AGGACCCAGTAGCACCATGGTCAGCACTTCAGCCTTCCCCTGGGAAGAGT
XTACATCCTCAGCTGAGGGCTCAGGTGAGCAACTGGTCACAGTCAGCAGC
TCTGTTGTTCCAGTGCTTCCCAGTGCTGTGCAAAAGTTTTCTGGTACAGCT
TCCTCCATTATCGACGAAGGATTGGGAGAAGTGGGTACTGTCAATGAAAT
TGATAGAAGATCCACCATTTTACCAACAGCAGAAGTGGAAGGTACGAAAG
CTCCAGTAGAGAAGGAGGAAGTAAAGGTCAGTGGCACAGTTTCAACAAA
CTTTCCCCAAACTATAGAGCGAGCCAAATTATGGTCTAGGCAAGAAGTCA
ACCCTGTAAGACAAGAAATTGAAAGTGAAACAACATCAGAGGAACAAAT
TCAAGAAGAAAAGTCATTTGAATCCCCTCAAAACTCTCCTGCAACAGAAC
AAACAATCTTTGATTCACAGACATTTACTGAAACTGAACTCAAAACGACA
GAITATTCTGTACTAACAACAAAGAAAACTTACAGTGATGATAAAGAAAT
GAAGGAGGAAGACACTTCTTTAGTTAACATGTCTACTCCAGATCCAGATG
CAAATGGCTTGGAATCTTACACAACTCTCCCTGAAGCTACTGAAAAGTCA
CATTmTCTTAGCTACTGCATTAGTAACTGAATCTATÀCCAGCTGAACAT
GTAGTCACAGATTCACCAATCAAAAAGGAAGAAAGTACAAAACATTTTCC
GAAAGGCATGAGACCAACAATTCAAGAGTCAGATACTGAGCTCTTATTCT
CTGGACTGGGATCAGGAGAAGAAGTTTTACCTACTGTACCAACAGAGTCA
GTGAATTTTACTGAAGTGGAACAAATCAATAACACATTATATCCCCACAC
TTCTCAAGTGGAAAGTACCTCAAGTGACAAAATTGAAGACTTTAACAGAA
TGGAAAATGTGGCAAAAGAAGTTGGACCACTCGTATCTCAAACAGACATC
TnGAAGGTAGTGGGTCAGTAACCAGCACAACATTAATAGAAATTTTAAG
TGACACTGGAGCAGAAGGACCCACGGTGGCACCTCTCCCTTTCTCCACGG
ACATCGGACATCCTCAAAATCAGACTGTCAGGTGGGCAGAAGAAATCCAG
ACTAGTAGACCACAAACCATAACTGAACAAGACTCTAACAAGAATTCTTC
AACAGCAGAAATTAACGAAACAACAACCTCATCTACTGATTTTCTGGCTA
GAGCTTATGGnTTGAAATGGCCAAAGAATTTGTTACATCAGCACCAAAA
CCATCTGACTTGTATTATGAACCTTCTGGAGAAGGATCTGGAGAAGTGGA
TATTGTTGATTCATTTCACACTTCTGCAACTACTCAGGCAACCAGACAAGA
AAGCAGCACCACATTTGTITCTGATGGGTCCCTGGAAAAACATCCTGAGG
TGCCAAGCGCTAAAGCTGTTACTGCTGATGGATTCCCAACAGXTTCAGTGA
TGCTGCCTCTTCATTCAGAGCAGAACAAAAGCTCCCCTGATCCAACTAGC
ACACTGTCAAATACAGTGTCATATGAGAGGTCCACAGACGGTAGTTTCCA
AGACCGTTTCAGGGAATTCGAGGATTCCACCTTAAAACCTAACAGAAAAA
AACCGACTGAAAATATTATCATAGACCTGGACAAAGAGGACAAGGATTTA
AGTCGAGGCGCTGATCCCTAAAATGGCGAACATGTGTTTTCATGATrTCAG
CCAAAGTCCTAACTTCCTGTGCCTTTCCTATCACCTCGAGAAGTAATTATC
AGTTGGTTTGGATnTTGGACCÂCCGTTCAGTCATnTGGGTTGCCGTGCT
CCCAAAACATTTTAAATGAAAGTATTGGCATTCAAAAAGACAGCÀGACAA
AATGAAAGAAAATGAGAGCAGAAAGTAAGCATXTCCAGCCTATCTAATTT
CTTTAGTTTTCTAnTGCCTCCAGTGCAGTCCATTTCCTAATGTATACCAGC
CTACTGTACTATTTAAAATGCTCAATTTCAGCACCGATGGCCATGTAAATA
AGATGATTTAATGTTGATTTTAATCCTGTATATAAAATAAAAAGTCACAAT
GAGTTTGGGCATATTTAATGATGATTATGGAGCCTTAGAGGTCTTTAATCA
TTGGTTCGGCTGCTTTTATGTAGTTTAGGCTGGAAATGGTTICACTTGCTCT TTGACTGTCAGCAAGACTGAAGATGGCTTTTCCTGGACAGCTAGAAAACÀ CAAAATCTTGTAGGTCATTGCACCTATCTCAGCCATAGGTGCAGTTTGCTT
CTACATGATGCTAAAGGCTGCGAATGGGATCCTGATGGAACTAAGGACTC
CAATGTCGAACTCTTCTTTGCTGCATTCCTTTTTCTTCACTTACAAGAAAGG CCTGAATGGAGGACTTTTCTGTAACCAGG SEQ E> NO: 85 Amidoidrolase 1 de N-acilesfingosina >gi|30089929|ref|NM_004315.2| Amidoidrolase 1 de N-acilesfingosina de Homo sapiens (ceramidase ácida) 1 (ASAH1), variante de transcrito 2, mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [1212.1228] | qPCR combinação de iniciador_reverso [1290..1266] | qPCR combinação de sonda [1233..1260] ggactttgaaatccaacccggtcAcctacccgcgcgactgtgtcca CGGATGGCACGAAAGCCAAGCGAGTCCCCCTGCCGAGCTACTCGCGTCCG
CCTCCTCCCAAGCTGAGCTCTGCTCCGCCCACCTGAGTCCTTCGCCAGTTA
GGAGGAAACACAGCCGCTTAATGAACTGCTGCATCGGGCTGGGAGAGAA
AGCTCGCGGGTCCCACCGGGCCTCCTACCCAAGTCXCAGCGCGCTTTTCAC CGAGGCCTCAATTCXGGGÀTTTGGCAGCTTTGCTGTGAAAGCCCAATGGÀ CAGAGGACXGCAGAAAAXCAACCXAXCCXCCXXCAGGACCAACGXACAGÀ GGXGCAGTXCCAXGGXACACCAXAAAXCXTGACXXACCACCCTACAAAAG
ATGGCAXGAAXTGAXGCXXGACAAGGCACCAAIGCTAAAGGTTAXAGXGA
ATTCTCXGAAGAAXAXGAXAAATACAXXCGXGCCAAGXGGAAAAGXXAXG
CAGGXGGXGGATGAAAAAXXGCCXGGCCXACXXGGCAACTXTCCXGGCCCX
XXXGAAGAGGAAAXGAAGGGXAXXGCCGCXGXXÀCXGAXATÁCCXXXAGG
AGAGAXTATrTCATTCAAXAXTTIXTATGAAXXATTTACCAXXXGTACTTCA
AXAGTAGCAGAAGACAAAAAAGGXCAXCXAATACATGGGAGAAACAXGG
AXXXXGGAGXAXXXCXXGGGXGGAACAXAAATAATGAXACCXGGGTCAXAA
CXGAGCAACXAAAÀCCXXXAACAGXGAATXXGGÀXXXCCAAAGAAACAAC
AAAACXGXCXXCAAGGCXXCAAGCXXXGCXGGCXAXGTGGGCATGXXAACA
GGAXICAAACCAGGACXGXXCAGXCXXACACXGAAXGAACGXXXCAGTAXA
ÀAXGGXGGXXAXCXGGGTATTCTAGAAXGGAXXCXGGGAAAGAAÀGAXGC
CAXGXGGAXAGGGXXCCXCÀCXAGAACAGTTCXGGAAAAXAGCACAAGXX
AXGAAGAAGCCAAGAAXXXATTGACCAAGACCAAGATATXGGCCCCAGCC
XACXXXAXCCXGGGAGGCAACCAGXCXGGGGAAGGXXGXGXGATXACACG
AGACAGAAAGGAAXCAXTGGAXGXATAXGAACXCGATGCTAAGCAGGGXA
GAXGGXATGXGGXACAAACAAAXXAXGACCGXXGGAAACAXCCCIXCXXCC
TTGAXGAXCGCAGAACGCOXGCAAAGAXGXGXCTGAACCGCACCAGCCAA
GAGAAXAXCXGAXTXGAAACCAXGXAXGATGTCCXGTCAACAAAACCXGXC
CTCAACAAGCTGACCGTATACACAACCTTGATAGATGTTACCAAAGGTCA
ATTCGAAACTTACCTGCGGGACTGCCCTGACCCTTGTATAGGTTGGTGAGC
ACACGTCTGGCCTACAGAATGCGGCCTCTGAGACATGAAGACACCATCTC
CATGTGACCGAACACTGCAGCTGTCTGACCTTCCAAAGACTAAGACTCGC
GGCAGGTTCTCTTTGAGTCAAAAGCTTGTCTTCGTCCATCTGTTGACAAAT
GACAGACCTTITrTTTTCCCCCATCAGTTGATTTTTCTTATTTACAGATAAC
TTCTTTAGGGGAAGTAAAACAGTCATCTAGAATTCÀCTGAG1TTTGTTTCA
CnTGACATTTGGGGATCTGGTGGGCAGTCGAACCATGGTGAACTCCACCT
CCGTGGAATAAATGGAGATTCAGCGTGGGTGTTGAATCCAGCACGTCTGT
GTGAGTAACGGGACAGTAAACACTCCACATTCTTCAGTTTTTCACTTCTAC
CrACATATrTGTATGTTTTTCTGTATAACAGCCTTTTCCTTCTGGTTCTAAC
TGCTGTTAAAAXTAATATATCATTATCTTTGCTGTTATTGACAGCGATATA
ATTTTATTACATATGATTAGAGGGATGÀGACAGACATTCACCTGTATATTT
CTTTTAATGGGCACAAAATGGGCCCTTGCCTCTAAATAGCACTTTTTGGGG
TTCAAGAAGTAATCAGTATGCAAAGCAATCTTTTATACAATAATTGAAGT
GTTCCCTTTTTCATAATTÀCTGTACTTCCCAGTAACCCTAAGGAAGTTGCT
AACTTAAAAAACTGCATCCCACGTTCTGTTAATTTAGTAAATAAACAAGTC
AAAGACTTGTGGAAAATAGGAAGTGAACCCATATTTTAAATTCTCATAAG
TAGCATTCATGTAATAAACAGGTTTTTAGXTTGTTCTTCAGATTGÀTAGGG
AGTTTTAAAGAAATTTTAGTAGTTACrAAAATTATGTTACTGTATTTTTGA
GAAATCAAACTGCTTATGAAAAGTACTAATAGAACTTGTTAACCTTTCTAA
CCTTCACGATTAACTGTGAAATGTACGTCATTTGTGCAAGACCGTTTGTCC
ACTTCATTXTGTATAATCACAGTTGTGTTCCTGACACTCAATAAACAGTCA TTGGAAAGAGTGCCAGTCAGCAGTCATGCA SEQID NO: 86 Amidoidrolase 1 de N-acilesfingosína Variante de Transcrito 1 >g i1300899271ref | N M_177924.11 Amidoidrolase 1 de N-acilesfingosina de Homo sapiens (ceramidase ácida) 1 (ASAH1), variante de transcrito 1, mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [1050..1066] | qPCR combinação de iniciador_reverso [1128..1104] | qPCR combinação de sonda [1071..1098] AAGMTTTATTGACCAAGACCAAGATATTGGCCCCAGCCTACTTTATCCTG
GGAGGCAACCAGTCrGGGGAAGGTTGTGTGATTACACGAGACAGAAAGG
AATCATTGGATGTATATGAACTCGATGCTAAGCAGGGTAGATGGTATGTG
GTACAAACAAATTATGACCGTTGGAAACATCCCTTCTTCCTXGATGATCGC
AGAACGCCTGCAAAGATGTGTCTGAACCGCACCAGCCAAGAGAATATCTC
ATTTGAAACCATGTATGATGTCCTGTCAACAAAACCTGTCCTCAACAAGCT
GACCGTATACACAACCTTGATAGATGTTACCAAAGGTCAATTCGAAACIT
ACCTGCGGGACTGCCCTGACCCTTGTATAGGTTGGTGAGCACACGTCTGG
CCTACAGAATGCGGCCTCTGAGACATGAAGACACCATCTCCATGTGACCG
AACACTGCAGCTGTCTGACCTTCCAAAGACTAAGACTCGCGGCAGGTTCT
CTTTGAGTCAAAAGCTTGTCTTCGTCCATCTGTTGACAAATGACAGACCTT
TTTJTITCCCCCATCAGTTGATTTTTCTTATTTACAGATAACTTCTTTAGGG
GAAGTAAAACAGTCATCTAGAATTCACTGAGTTTTGTTTCACTrTGACATT
TGGGGATCTGGTGGGCAGTCGAACCATGGTGAACTCCACCTCCGTGGAAT
AAATGGAGATTCAGCGTGGGTGTTGAATCCAGCACGTCTGTGTGAGTAAC
GGGACAGTAAACACTCCACATTCTTCAGTnTTCACTTCTACCTACATATT
TGTATGTTTTTCTGTATAACAGCCTTTTCCTTCTGGTTCTAACTGCTGTTAA
AATTAATATATCATTATCTTTGCTGTTATTGACAGCGATATAATTTTATTAC
ATATGATTAGAGGGATGAGACAGACATTCACCTGTATATTTCTTTTAATGG
GCACAAAATGGGCCCTTGCCTCTAAATAGCACTXTTTGGGGTTCAAGAAG
TAATCAGTATGCAAAGCAATCTTTTATACAATAATTGAAGTGTTCCCTTTT
TCATAATTACTGTACTTCCCAGTAACCCTAAGGAAGTTGCTAACTTAAAAA
ACTGCÀTCCCACGTTCTGTXAATTTAGTAAATAAACAAGTCAAAGACTTGT
GGAAAATAGGAAGTGAACCCATATTTTAAATTCTCATAAGTAGCATTCAT
GTAATAAACAGGTTTTTAGTrTGTTCTTCAGATTGATAGGGAGTTTTAAAG
AAATTTTAGTAGTTACTAAAAXTATGTTACTGTATTTTTCAGAAATCAAAC
TGCTTATGAAAAGTACTAATAGAACTTGTTAACCTTTCTAACCTTCACGAT TAACTGTGAAATGTACGTCATTTGTGCAAGACCGTTTGTCCACTTCATTTr GTATAATCACAGTTGTGTTCCTGACACTCAATAAACAGTCATTGGAAAGA GTGCCAGTCAGCAGTCATGCA SEQID NO; 87 Protease, Serina 11 >gi|21327712|ref|NM_002775.2| Protease, serina 11 de Homo sapiens (ligação de IGF) (PRSS11), mRNA | qPCR combinação de inicia-dor_adiante [1030..1048] | qPCR combinação de iniciador_reverso > [1106..1083] | qPCR combinação de sonda [1080..1050] CCGGCCCTCGCCCTGTCCGCCGCCACCGCCGCCGCCGCCAGAGTCG
CCATGCAGATCCCGCGCGCCGCTCTTCTCCCGCTGCTGCTGCTGCTGCTGG
CGGCGCCCGCCTCGGCGCAGCTGTCCCGGGCCGGCCGCTCGGCGCCTTTG
GCCGCCGGGTGCCCAGACCGCTGCGAGCCGGCGCGCTGCCCGCCGCAGCC
GGAGCACTGCGAGGGCGGCCGGGCCCGGGACGCGTGCGGCTGCTGCGAG
GTGTGCGGCGCGCCCGAGGGCGCCGCGTGCGGCCTGCAGGAGGGCCCGTG
CGGCGAGGGGCTGCAGTGCGTGGTGCCCTTCGGGGTGCCAGCCTCGGCCA
CGGTGCGGCGGCGCGCGCAGGCCGGCCTCTGTGTGTGCGCCAGCÀGCGAG
CCGGTGTGCGGCAGCGACGCCAACACCTACGCCAACCTGTGCCAGCTGCG
CGCCGCCAGCCGCCGCTCCGAGAGGCTGCACCGGCCGCCGGTCATCGTCC
TGCAGCGCGGAGCCTGCGGCCAAGGGCAGGAAGATCCCAACAGTTTGCGC
CATAAATATAACTTTATCGCGGACGTGGTGGAGAAGATCGCCCCTGCCGT
GGTTCATATCGAATTGTTTCGCAAGCTTCCGTTTTCTAAACGAGAGGTGCC
GGTGGCTAGTGGGTCTGGGTTTÀTTGTGTCGGAAGATGGACTGATCGTGA
CAAATGCCCACGTGGTGACCAACAAGCACCGGGTCAAAGTTGAGCTGAAG
AACGGTGCCACTTACGAAGCCAAAATCAAGGATGTGGATGAGAAAGCAG
ACATCGCACTCATCAAAATTGACCACCAGGGCAAGCTGCCTGTCCTGCTG
CTTGGCCGCTCCTCAGAGCTGCGGCCGGGAGAGTTCGTGGTCGCCATCGG
AAGCCCGTTTTCCCTTCAAAACACAGTCACCACCGGGATCGTGAGCACCA
CCCAGCGAGGCGGCAAAGAGCTGGGGCTCCGCAACTCAGACATGGACTA
CATCCAGACCGACGCCATCÀTCAACTATGGAAACTCGGGAGGCCCGTTAG
TAAACCTGGACGGTGAAGTGATTGGAATTAACACTTTGAAAGTGACAGCT
GGAATCTCCTTTGCAATCCCATCTGATAAGATTAAAAAGTTCCTCACGGAG
TCCCATGACCGACAGGCCAAAGGAAAAGCCATCACCAAGAAGAAGTATA
TTGGTATCCGAATGATGTCACTCACGTCCAGCAAAGCCAAAGAGCTGAAG
GACCGGCACCGGGACTTCCCAGACGTGATCTCAGGAGCGTATATAATTGA
AGTAATTCCTGATACCCCAGCAGAAGCTGGTGGTCTCAAGGAAAACGACG
TCATAATCAGCATCAATGGACAGTCCGTGGTCTCCGCCAATGATGTCAGC
GACGTCATTAAAAGGGAAAGCACCCTGAACATGGTGGTCCGCAGGGGTA
ATGAAGATATCATGATCACAGTGATTCCCGAAGAAATTGACCCATAGGCA
GAGGCATGAGCTGGACTTCATGTTTCCCTCAAAGACTCTCCCGTGGATGAC
GGATGAGGACTCTGGGCTGCTGGAATAGGACACTCAAGACTTTTGACTGC
CATTTTGTTTGTTCAGTGGAGACTCCCTGGCCAACAGAATCCTTCTTGATA
GTTTGCAGGCAAAACAAATGTAATGTTGCAGATCCGCAGGCAGAAGCTCT
GCCCTTCTGTATCCTATGTATGCAGTGTGCTTTTTCTTGCCAGCTTGGGCCA
TTCTTGCTTAGACAGTCAGCATXTGTCTCCTCCTTTAACTGAGTCATCATCT
TAGTCCAACTAATGCAGTCGATACAATGCGTAGATAGAAGAAGCCCCACG
GGAGCCAGGATGGGACTGGTCGTGTTTGTGCTTTTCTCCAAGTCAGCACCC
AAAGGTCAATGCACAGAGACCCCGGGTGGGTGAGCGCTGGCTTCTCAAAC
GGCCGAAGTTGCCTCTTTTÀGGAATCTCTTTGGAATTGGGAGCACGATGAC TCTGAGTTTGAGCTATTAAAGTACTTCTTACACATTG SEQID NO: 88 Proteína Relacionada com frisamento Secretada 2 >gi|42656988|ref|XM_050625.4| Proteína relacionada com frisamento secretada 2 de Homo sapiens (SFRP2), mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [686..703] | qPCR combinação de intciadorjeverso [750..728] | qPCR combinação de sonda [705..726] CCGGGTCGGAGCCCCCCGGAGCTGCGCGCGGGCTTGCAGCGCCTCG
CCCGCGCTGTCCTCCCGGTGTCCCGCXTCTCCGCGCCCCAGCCGCCGGCTG
CCAGCTTTTCGGGGCCCCGAGTCGCACCCÀGCGAAGAGAGCGGGCCCGGG
ACAAGCTCGAACTCCGGCCGCCTCGCCCXTCCCCGGCTCCGCTCCCTCTGC
CCCCTCGGGGTCGCGCGCCCACGATGCTGCAGGGCCCTGGCTCGCTGCTG
CTGCTCTTCCTCGCCTCGCACTGCTGCCXGGGCTCGGCGCGCGGGCTCTTC
CTCTTTGGCCAGCCCGACTTCTCCTACAAGCGCAGCAATTGCAAGCCCATC
CCTGCCAACCTGCAGCTGTGCCACGGCATCGAATACCAGAACATGCGGCT
GCCCAACCTGCTGGGCCACGAGACCATGAAGGAGGTGCTGGAGCAGGCC
GGCGCTTGGATCCCGCTGGTCATGAAGCAGTGCCACCCGGACACCAAGAA
GTTCCTGTGCTCGCTCTTCGCCCCCGTCTGCCTCGATGACCTAGACGAGAC
CATCCAGCCATGCCACTCGCTCTGCGTGCAGGTGAAGGACCGCTGCGCCC
CGGTCATGTCCGCCTTCGGCTTCCCCTGGCCCGACÀTGCTTGAGTGCGACC
GTTTCCCCCAGGACAACGACCTTTGCATCCCCCTCGCTAGCAGCGACCACC
TCCTGCCAGCCACCGAGGAAGCTCCAAAGGTATGTGAAGCCTGCAAAAAT
AAAAATGATGATGACAACGACATAATGGAAACGCTTTGTAAAAATGATTT
TGCACTGAAAATAAAAGTGAAGGAGATAACCTACATCAACCGAGATACC
AAAATCATCCTGGAGACCAAGAGCAAGACCATTTACAAGCTGAACGGTGT
GTCCGAAAGGGACCTGAAGAAATCGGTGCTGTGGCTCAAAGACAGCTTGC
AGTGCACCTGTGAGGAGATGAACGACATCAACGCGCCCTATCTGGTCATG
GGACAGAAACAGGGTGGGGAGCTGGTGATCACCTCGGTGAAGCGGTGGC
ÀGAAGGGGCAGAGAGAGTTCAAGCGCATCTCCCGCAGCATCCGCAAGCT
GCAGTGCTAGTCCCGGCATCCTGATGGCTCCGACAGGCCTGCTCCAGAGC
ACGGCTGACCATTTCTGCTCCGGGATCTCAGCTCCCGTTCCCCAAGCACAC
TCCTAGCTGCTCCAGTCTCAGCCTGGGCAGCTTCCCCCTGCCTTTTGCACG
TTTGCATCCCCAGCATTTCCTGAGTTATAAGGCCACAGGAGTGGATAGCTG
mTCACCTAAAGGAAAAGCCCACCCGAATCTTGTAGAAATATTCAAACT AATAAAATCATGAATATTTTTATGAAGTTTAAAAA SEQ D NO: 89 Fosfolipase A2, Grupo XIIB
>gi|45505134|ref|NM_032562,2( Fosfolipase A2 de Homo sapi-ens, grupo XIIB (PLA2G12B), mRNA TGTCCCTGGAATTCTGGGACACTGGCTGGGGTTTGAGGAGAGAAGC CAGTACCTACCTGGCTGCAGGATGAAGCTGGCCAGTGGCTTCTTGGTTTTG TGGCTCAGCCTTGGGGGTGGCCTGGCTCAGAGCGACACGAGCCCTGACAC GGAGGAGTCCTATTCAGACTGGGGCCTTCGGCACCTCCGGGGAAGCTTTG AATCCGTCAATAGCTACTTCGATTCTTTTCTGGAGCTGCTGGGAGGGAAGA ATGGAGTCTGTCAGTACAGGTGCCGATATGGAAAGGCACCAATGCCCAGA CCTGGCTACAAGCCCCAAGAGCCCAATGGCTGCGGCTCCTÀTTTCCTGGGT CTCAAGGTACCAGAAAGTATGGACTTGGGCATTCCAGCAATGACAAAGTG CTGCAACCAGCTGGATGTCTGTTATGACACTTGCGGTGCCAACAAATATC GCTGTGATGCAAAATTCCGATGGTGTCTCCACTCGATCTGCTCTGACCTTA AGCGGAGTCTGGGCTTTGTCTCCAAAGTGGAAGCAGCCTGTGATTCCCTG GTTGACACTGTGTTCAACACCGTGTGGACCTTGGGCTGCCGCCCCTTTATG AATAGTCAGCGGGCAGCTTGCATCTGTGCAGAGGAGGAGAAGGAAGAGT TATGAGGAAGAAGTGATTCCTTCCTGGTTTTGAGTGACACCACAGCTGTCA GCCTTCAAGATGTCAAGTCTTCGAGTCAGCGTGACTCATTCATTCTTCCAA CAGTTTGGACACCACAAAGCAGGAGAAAGGGAACAmTTCTACAGCTGG AAAGTGAGTCCXATCCTTTGAGGAAATTTGAAAAAAGACATGGAGTGGTT TGAAAGCTACTCTTCATTTAAGACTGCTCTCCCCAACCAAGACACATTTGC CTGGAAATTCAGTTCnAGCTTAAAGÀCTAAAATGCAAGCAAACCCTGCA ATTCCTGGACCTGATAGTTATATTCATGAGTGAAATTGTGGGGAGTCCAGC CATTTGGGAGGCAATGACTTTCTGCTGGCCCATGTTTCAGTTGCCAGTAAG CTTCTCACATTTAATAAAGTGTACTTTTTAGAACATT SBQID NO: 90 Espondina 2, Proteína de Matriz Extracelular >gi|6912681|ref|NM_012445.1| Espondina 2 de Homo sapiens, proteína de matriz extracelular (SPON2), mRNA
GCACGAGGGAAGAGGGTGATCCGACCCGGGGAAGGTCGCTGGGCA
GGGCGAGTTGGGAAAGCGGCAGCCCCCGCCGCCCCCGCAGCCCCTTCTCC
TCCnTCTCCCACGTCCTATCTGCCTCTCGCTGGAGGCCAGGCCGTGCAGC
ATCGAAGACAGGAGGAACTGGAGCCTCATTGGCCGGCCCGGGGCGCCGG
eCTCGGGCTTAAATAGGAGCTCCGGGCTCTGGCTGGGACCCGACCGCTGC
CGGCCGCGCTCCCGCTGCTCCTGCCGGGTGATGGAAAACCCCAGCCCGGC
CGCCGCCCTGGGCAAGGCCCTCTGCGCTCTCCTCCTGGCCACTCTCGGCGC
CGCCGGCCAGCCTCTTGGGGGAGAGTCCATCTGTTCCGCCAGAGCCCCGG
CCAAATACAGCATCACCTTCACGGGCAAGTGGAGCCAGACGGCCTTCCCC
AAGCAGTACCCCCTGTTCCGCCCCCCTGCGCAGTGGTCTTCGCTGCTGGGG
GCCGCGCATAGCTCCGACTACAGCATGTGGAGGAAGAACCAGTACGTCAG
TAACGGGCTGCGCGACTTTGCGGAGCGCGGCGAGGCCTGGGCGCTGATGA
AGGAGATCGAGGCGGCGGGGGAGGCGCTGCAGAGCGTGCACGCGGTGTT
TTCGGCGCCCGCCGTCCCCAGCGGCACCGGGCAGACGTCGGCGGAGCTGG
AGGTGCAGCGCAGGCACTCGCTGGTCTCGTXTGTGGTGCGCATCGTGCCC
AGCCCCGACTGGTTCGTGGGCGTGGACAGCCTGGACCTGTGCGACGGGGA
CÇGTTGGCGGGAACAGGCGGCGCTGGACCTGTACCCCTACGACGCCGGGA
CGGACAGCGGCTTCACCTTCTCCTCCCCCAACTTCGCCACCATCCCGCAGG
ACACGGTGACCGAGATAACGTCCTCCTCTCCCAGCCACCCGGCCAACTCC
TTCTACTACCCGCGGCTGAAGGCCCTGCCTCCCATCGCCAGGGTGACACTG
GTGCGGCTGCGACAGAGCCCCAGGGCCTTCATCCCTCCCGCCCCAGTCCT
GCCCAGCAGGGACAATGAGÀTTGTAGAOAGCGCCTCAGTTCCAGAAACGC
CGCTGGACTGCGAGGTCTCCCTGTGGTCGTCCTGGGGACTGTGCGGAGGC
CACTGTGGGAGGCTCGGGACCAAGAGCAGGACTCGCTACGTCCGGGTCCA
GCCCGCCAACAACGGGAGCCCCTGCCCCGAGCTCGAAGAAGAGGCTGAG
TGCGTCCCTGATAACTGCGTCTAAGACCAGAGCCCCGCAGCCCCTGGGGC
CCCCGGAGCCATGGGGTGTCGGGGGCTCCTGTGCAGGCTCATGCTGCAGG
CGGCCGAGGCACAGGGGGTTTCGCGCTGCTCCTGACCGCGGTGAGGCCGC
GCCGACCATCTCTGCACTGAAGGGCCCTCTGGTGGCCGGCACGGGCATTG
GGAAACAGCCTCCTCCTTTCCCAACCTTGCTTCTTAGGGGCCCCCGTGTCC
CGTCTGCTCTCAGCCTCCTCCTCCTGCAGGATAAAGTCATCCCCAAGGCTC
CAGCTACTCTAAATTATGGTCTCCITATAAGTTATTGCTGCTCCAGGAGAT
TGTCCTTCATCGTCCAGGGGCCTGGCTCCCACGTGGTTGCAGATACCTCAG
ACCTGGTGCTCTAGGCTGTGCTGAGCCCACTCTCCCGAGGGCGCATCCAA
GCGGGGGCCACTTGAGAAGTGAATAAATGGGGCGGITTCGGAAGCGTCA
GTGTTTCCATGTTATGGATCTCTCTGCGTTTGAATAAAGACTATCTCTGTTG CTCAC SEQIDNO: 91 Olfactomedina 1, Variante de Transcrito 3 >gi|34335282|ref|NM_058199.2| Olfactomedina 1 de Homo sapi- ens (OLFM1), variante de transcrito 3, mRNA
CCCGCCCCCGCCCCTTCCGAGCAAACTTTTGGCACCCACCGCAGCC
CAGCGCGCGTTCGTGCTCCGCAGGGCGCGCCTCTCTCCGCCAATGCCAGG
CGCGCGGGGGAGCCATTAGGAGGCGAGGAGAGAGGAGGGCGCAGCTCCC
GCCCAGCCCAGCCCTGCCCAGCCCTGCCCGGAGGCAGACGCGCCGGAACC
GGGACGCGATAAATATGCAGAGCGGAGGCTTCGCGCAGCAGAGCCCGCG
CGCCGCCCGCTCCGGGTGCTGAATCCAGGCGTGGGGÀCACGAGCCAGGCG
CCGCCGCCGGAGCCAGCGGAGCCGGGGCCAGAGCCGGAGCGCGTCCGCG
TCCACGCAGCCGCCGGCCGGCCAGCACCCAGGGCCCTGCATGCCAGGTCG
TTGGAGGTGGCAGCGAGACATGCACCCGGCCCGGAAGCTCCTCAGCCTCC
TCTTCCTCATCCTGATGGGCACTGAACTCACTCAAAATAAAAGAGAAAAC
AAAGCAGAGAAGATGGGAGGGCCAGAGAGCGAGAGGAAGACCACAGGA
GAGAAGACACTGAACGAGCTTCCCTTGTTTTGCCTGGAAGCCCACGCTGG
CTCCCTGGCTCTGCCCAGGATGTGCAGTCCAAATCCCAATCCAGCAGTGG
GGTTATGTCGTCCCGCTTACCCTCAGAGCCCTTCTCCTGGTGCTGCCCAGA
CGATCAGCCAGTCCCTCCTGGAGAGGTTCTGCATGGCCTCTAGGAGAGAA
GTnTCTTGGCCCCAGGAAGGCCTGGTGGAGGGTGGTGGTTGTGCACTGTT
GCTGGACAGATGCATTCATTCATGTGCACACACACACACACACATGCACA
CACAGGGGAGCAGATACCTGCAGAGAAGAGCCAACCAGGTCCTGATTAG
TGGCAAGCTGCCCCACAAAGGGCTATGCCTGTGTCTTATTGAGACACCTTG
GCAAAGAGATGGCTGATTCTGGGTGGTCCTGGACATGGCCGCACCOAAGG
GCCCTCCAAGCCTTAATGGCACCCTGAAGCCTCCATGCCCAGGCCAAAAG ATGCTTTTCCTCCCTAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SEQK)NO:92 Repetição de Trombospondina Contendo 1 >gi|38016903|ref|NM_019032.2| Repetição de trombospondina contendo 1 (TSRC1), mRNA
GGGGCCCCAGTGGCCGCCGCGGAGCGAGGTTGCCTGGAGAGAGCG
CCTGGGCGCAGAAGGGTTAACGGGCCACCGGGGGCTCGCAGAGCAGGAG
GGTGCTCTCGGACGGTGTGTCCCCCACTGCACTCCTGAACTTGGAGGACA
GGGTCGCCGCGAGGGACGCAGAGAGCACCCTCCACGCCCAGATGCCTGCG
TAGTTTTTGTGACCAGTCCGCTCCTGCCTCCCCCTGGGGCAGTAGAGGGGG
AGCGATGGAGAACTGGACTGGCAGGCCCTGGCTGTATCTGCTGCTGCTTC
TGTCCCTCCCTCAGCTCTGCTTGGATCAGGAGGTGTTGTCCGGACACTCTC
TTGÀGACACCTACAGAGGAGGGCCAGGGCCCCGAAGGTGTCTGGGGACCT
TGGGTCCAGTGGGCCTCTTGCTCCCAGCCCTGCGGGGTGGGGGTGCAGCG
CAGGAGCCGGACATGTCAGCTCCCTACAGTGCAGCTCCACCCGAGTCTGC
CCCTCCCTCCCCGGCCCCCAAGACATCCAGAAGCCCTCCTCCCCCGGGGCC AGGGTCCCAGACCCCÀGACTTCTCCAGAAACCCTCCCCTTGTACAGGACÀ CAGTCTCGGGGAAGGGGTGGCCCACTTCGAGGTCCCGCTTCCCACCTAGG
GAGAGAGGAGACCCAGGAGATTCGAGCGGCCAGGAGGTCCCGGCTTCGA
GACCCCATCAAGCCAGGAATGTTCGGTTATGGGAGAGTGCCCTTTGCATT
GCCACTGCACCGGAACCGCAGGCACCCTCGGAGCCCACCCAGATCTGAGC
TGTCCCTGATCTCTTCTAGAGGGGAAGAGGCTATTCCGTCCCCTACTCCAA
GAGCAGAGCCATTCTCCGCAAACGGCAGCCCCCAAACTGAGCTCCCTCCC
ACAGAACTGTCTGTCCACACCCCATCCCCCCAAGCAGAACCTCTAAGCCC
TGAAACTGCTCAGACAGAGGTGGCCCCCAGAACCAGGCCTGCCCCCCTAC
GGCATCACCCCAGAGCCCAGGCCTCTGGCACAGAGCCCCCCTCACCCACG
CACTCCTTAGGAGAAGGTGGCTTCTTCCGTGCATCCCCTCAGCCACGAAG
GCCAAGTTCCCAGGGTTGGGCCAGTCCCCAGGTAGCAGGGAGACGCCCTG
ATCCTTTTCCTTCGGTCCCTCGGGGCCGAGGCCAGCAGGGCCAAGGGCCTT
GGGGAACGGGGGGGACTCCTCACGGGCCCCGCCTGGAGCCTGACCCTCAG
CACCCGGGCGCCTGGCTGCCCCTGCTGAGCAACGGCCCCCATGCCAGCTC
CCTCTGGAGCCTCTTTGCTCCCAGTAGCCCTATTCCAAGATGTTCTGGGGA
GAGTGAACAGCTAAGAGCCTGCAGCCAAGCGCCCTGCCCCCCTGAGCAGC
CAGACCCCCGGGCCCTGCAGTGCGCAGCCTTTAACTCCCAGGAATTCATG
GGCCAGCTGTATCAGTGGGAGCCCTTCACTGAAGTCCAGGGCTCCCAGCG
CTGTGAACTGAACTGCCGGCCCCGTGGCTTCCGCTTCTATGTCCGTCACAC
TGAAAAGGTCCAGGATGGGACCCTGTGTCAGCCTGGAGCCCCTGACATCT
GXGXGGCTGGACGCXGXCXGAGCCCCGGCXGXGAXGGGAXCCXXGGCICXG
GCAGGCGTCCTGATGGCTGTGGAGTCTGTGGGGGTGATGATTCTACCTGTC
GCCTTGTTTCGGGGAACCTCACTGACCGAGGGGGCCCCCTGGGCTATCAG
AAGATCTTGTGGATTCCAGCGGGAGCCTTGCGGCTCCAGATTGCCCAGCT
CCGGCCTAGCTCCAACTACCTGGCACTTCGTGGCCCTGGGGGCCGGTCCAT
CATCAATGGGAACTGGGCTGTGGATCCCCCTGGGTCCTACAGGGCCGGCG
GGACCGTCTTTCGATATAACCGTCCTCCCAGGGAGGAGGGCAAAGGGGAG
AGTCTGTCGGCTGAAGGCCCCACCACCCAGCCTGTGGATGTCTATATGATC
TTTCAGGAGGAAAACCCAGGCGTTTTTTATCAGTATGTCATCTCTTCACCT
CCTCCAATCCTTGAGAACCCCACCCCAGAGCCCCCTGTCCCCCAGCTTCAG
CCGGAGATTCTGAGGGTGGAGCCCCCACITGCTCCGGCACCCCGCCCAGC
CCGGACCCCAGGCACCCTCCAGCGTCAGGTGCGGATCCCCCAGATGCCCG
CCCCGCCCCATCCCAGGACACCCCTGGGGTCTCCAGCTGCGTACTGGAAA
CGAGTGGGACACTCTGCATGCTCAGCGXCCTGCGGGAAAGGTGTCTGGCG
CCCCATTTTCCTCXGCATCTCCCGTGAGTCGGGAGAGGAACTGGATGAAC
GCAGCXGXGCCGCGGGXGCCAGGCCCCCAGCCXCCCCTGAACCCXGCCAC
GGCACCCCAXGCCCCCCATACXGGGAGGCXGGCGAGXGGACAXCCXGCAG
CCGCXCCXGXGGCCCCGGCACCCAGCACCGCCAGCXGCAGXGCCGGCAGG
AAXXXGGGGGGGGXGGCXCCXCGGXGCCCCCGGAGCGCXGXGGACAXCXC
CCCCGGCCCAACAXCÀCCCAGXCXXGCCAGCXGCGCCXCTGXGGCCAXXGG
GAAGXXGGCXCXCCXXGGAGCCAGXGCXCCGXGCGGXGCGGCCGGGGCCA
GAGAAGCCGGCAGGXXCGCXGXGXXGGGAACAACGGXGAXGAAGXGAGC
GAGCAGGAGXGXGCGXCAGGCCCCCCGÇAGCCCCCCAGCAGAGAGGCCXG
XGACAXGGGGCCCXGXÀCXACXGCCXGGXXCCACÀGCGACXGGAGCXCCA
AGXGCXCAGCCGAGXGXGGGACGGGAAXCCAGCGGCGCXCXGXGGXCTGC
CXXGGGAGXGGGGCÀGCCCXCGGGCCAGGCCAGGGGGAAGCAGGAGCAG
GAACXGGGCAGAGCXGTCCAACAGGAAGCCGGCCCCCXGACAXGCGCGCC
XGCAGGCXGGGGCCCXGXGAGAGAACXXGGCGCXGGXACACAGGGCCCXG
GGGXGAGXGCXCCTCCGAAXGTGGCXCTGGCACACAGCGXAGAGACATCA
XCXGTGXAXCCAAACXGGGGACGGAGXTCAACGXGACTTCXCCGAGCAAC
XGXXCXCACCXCCCCAGGCCCCCXGCCCXGCAGCCCXGXCAAGGGCAGGCC
TGCCAGGACCGATGGXXXXCCACGCCCXGGAGCCCAXGTXCXCGCXCCXGC
CAAGGGGGAACGCAGACACGGGAGGXCCAGIGCCXGAGCACCAACCAGA
CCCXCAGCACCCGAXGCCCXCCXCAACXGCGGCCCXCCAGGAAGCGCCCCX
GXAACAGCCAACCCXGCAGCCAGCGCCCXGAXGAXCAAXGCAAGGACAGC
XCXCCACAXXGCCCCCXGGXGGXACAGGCCCGGCXCXGCGXCXACCCCXAC
XACACAGCCACCXGXXGCCGCXCXXGCGCACAXGXCCXGGAGCGGXCXCCC
CAGGAXCCCXCCXGAAAGGGGXCCGGGGCACCXTCACGGXXTTCXGXGCCA
CCAXCGGXCACCCATTGAXCGGCCCACXCXGAACCCCCXGGCXCXCCAGCC
XGXCCCÁGXCXCAGCAGGGAXGXCCXCCAGGXGACAGAGGGXGGCAAGGX
GACXGACACAAAGXGACTXXCAGGGCXGXGGXCAGGCCCAXGXGGXGGXG
XGAXGGGXGXGXGCACAXAXGCCXCAGGXGXGCXXXXGGGACXGCATGGAX
AXGXGXGXGCXCAAACGXGXAXCACTXXXCAAAAAGAGGXXACACAGACX
GAGAAGGACAAGACCXGXXXCCTTGAGACXTXCCXAGGTGGAAAGGAAAG
CAAGXCXGCAGXXCCXXGCXAAXCXGAGCXACXXAGAGXGXGGXCICCCCA
CCAACTCCAGTTXXGXGCCCTAAGCCXCATXXCXCAXGXXCAGACCXCACA
XCTXCXAAGCCGCCCXGXGXCXCXGACCCCTXCXCAXXXGCCXAGXAXCXCX
GCCCCXGCCXCCCXAAXXAGCXAGGGCXGGGGXCAGCCACTGCCAAXCCTG
CCXXACXCAGGAAGGCAGGAGGAAAGAGACXGCCXCXCCAGAGCAAGGC
CCAGCXGGGCAGAGGGXGAAAAAGAGAAAXGXGAGCAXCCGCXCCCCCA CCACCCCGCCCAGCCCCTAGCCCCACTCCCTGCCTCCTGAAATGGTTCCCA CCCAGAACTAATTTATTTTTTATTAAAGATGGTCATGACAAATGAAAAAA AAAAAAAAAAAAA SEQID NO: 93 Trombospondina2 >gi1403176271ref|NM 003247.21 Trombospondina 2 de Homo sapiens (THBS2) , mRNA j qPCR combinação de iniciador_adiante [3558..3580] | qPCR combinação de iniciadorjeverso [3682..3655] | qPCR combinação de sonda [3597..3623] GAGGAGGAGACGGCATCCAGTACAGAGGGGCTGGACTTGGACCCC
TGCAGCAGCCCTGCACAGGAGAAGCGGCATATAAAGCCGCGCTGCCCGG
GAGCCGCTCGGCCACGTCCACCGGAGCATCCTGCACTGCAGGGCCGGTCT
CTCGCTCCAGCAGAGCCTGCGCCTTTCTGACTCGGTCCGGAACACTGAAA
CCAGTCATCACTGCATCTTTTTGGCAAACCAGGAGCTCAGCTGCAGGAGG
CAGGATGGTCTGGAGGCTGGTCCTGCTGGCTCTGTGGGTGTGGCCCAGCA
CGCAAGCTGGTOACCAGGACAAAGACACGACCTTCGACCTTTTCAGTATC
AGCAACATCAACCGCAAGACCATTGGCGCCAAGCAGTTCCGCGGGCCCGA
CCCCGGCGTGCCGGCTTACCGCTTCGTGCGCTTTGACTACATCCCACCGGT
GAACGCAGATGACCTCAGCAAGATCACCAAGATCATGCGGCAGAAGGAG
GGCTTCTTCCTCACGGCCCAGCTCAAGCAGGACGGCAAGTCCAGGGGCAC
GCTGTTGGCTCTGGAGGGCCCCGGTCTCTCCCAGAGGCAGTTCGAGATCG
TCTCCAACGGCCCCGCGGACACGCTGGATCTCACCTACTGGATTGACGGC
ACCCGGCATGTGGTCTCCCTGGAGGACGTCGGCCTGGCTGACTCGCAGTG
GAAGAACGTCACCGTGCAGGTGGCTGGCGAGACCTACAGCTTGCACGTGG
GCTGCGACCTCATAGACAGCTTCGCTCTGGACGAGCCCTTCTACGAGCAC
CTGCAGGCGGAAAAGAGCCGGATGTACGTGGCCAAAGGCTCTGCCAGAG
AGAGTCACTTCAGGGGTTTGCTTCAGAACGTCCACCTAGTGTTTGAAAACT
CTGIGGAAGATATTCTAAGCAAGAAGGGTTGCCAGCAAGGCCAGGGAGCT
GAGATCAACGCCATCAGTGAGAACACAGAGACGCTGCGCCTGGGTCCGCA
TGTCACCACCGAGTACGTGGGCCCCAGCTCGGAGAGGAGGCCCGAGGTGT
GCGAACGCTCGTGCGAGGAGCTGGGAAACATGGTCCAGGAGCTCTCGGG
GCTCCACGTCCTCGTGAACCAGCTCAGCGAGAACCTCAAGAGAGTGTCGA
ATGATAACCAGTTTCTCTGGGAGCTCATTGGTGGCCCTCCTAAGACAAGG
AACATGTCAGCTTGCTGGCAGGATGGCCGGTTCTTTGCGGAAAATGAAAC
GTGGGTGGTGGACAGCTGCACCACGTGTACCTGCAAGAAATTTAAAACCA
TTTGCCACCAAATCACCTGCCCGCCTGCAACCTGCGCCAGTCCATCCTTTG
TGGAAGGCGAATGCTGCCCTTCCTGCCTCCACTCGGTGGACGGTGAGGAG
GGCTGGTCTCCGTGGGCAGAGTGGACCCAGTGÇTCCGTGACGTGTGGCTC
TGGGACCCAGCAGAGAGGCCGGTCCTGTGACGTCACCAGCAACACCTGCT
TGGGGCCCTCCATCCAGACACGGGCTTGCAGTCTGAGCAAGTGTGACACC
CGCATCCGGCAGGACGGCGGCTGGAGCCACTGGTCÀCCTTGGTCTTCATG
CTCTGTGACCTGTGGAGTTGGCAATATCACACGCATCCGTCTCTGCAACTC
CCCAGTGCCCCAGATGGGGGGCAAGAATTGCAAAGGGAGTGGCCGGGAG
ACCAAAGCCTGCCAGGGCGCCCCATGCCCAATCGATGGCCGCTGGAGCCC
CTGGTCCCCGTGGTCGGCCTGCACTGTCACCTGTGCCGGTGGGATCCGGG
AGCGCACCCGGGTCTGCAACAGCCCTGAGCCTCAGTACGGAGGGAAGGCC
TGCGTGGGGGATGTGCAGGAGCGTCAGATGTGCAACAAGAGGAGCTGCC
CCGTGGATGGCTGTTTATCCAACCCCTGCTTCCCGGGAGCCCAGTGCAGCA
GCTTCCCCGATGGGTCCTGGTCATGCGGCTCCTGCCCTGTGGGCTTCTTGG
GCAATGGCACCCACTGTGAGGACCTGGACGAGTGTGCCCTGGTCCCCGAC
ATCTGCTTCTCCACCAGCAAGGTGCCTCGCTGTGTCAACACTCAGCCTGGC
"TTCCACTGCCTGCCCTGCCCGCCCCGATACAGAGGGAACCAGCCCGTCGG
GGTCGGCCTGGAAGCAGCCAAGACGGAAAAGCAAGTGTGTGAGCCCGAA
AACCCATGCAAGGACAAGACACACAACTGCCACAAGCACGCGGAGTGCA
TCTACCTGGGCCACTTCAGCGACCCCATGTACAAGTGCGAGTGCCAGACA
GGCTACGCGGGCGACGGGCTCATCTGCGGGGAGGACTCGGACCTGGACG
GCTGGCCCAACCTCAATCTGGTCTGCGCCACCAACGCCACCTACCACTGC
ATCAAGGATAACTGCCCCCATCTGCCAAATTCTGGGCAGGAAGACTTTGA
CAAGGACGGGATTGGCGATGCCTGTGATGATGACGATGACAATGACGGTG
TGACCGATGAGAAGGACAACTGCCAGCTCCTCTTCAATCCCCGCCAGGCT
GACTÀTGACAÀGGATGAGGTTGGGGACCGCTGTGACAACTGCCCTTACGT
GCACAACCCTGCCCAGATCGACACAGACAACAATGGAGAGGGTGACGCC
TGCTCCGTGGACATTGATGGGGACGATGTCTTCAATGAACGAGACAATTG
TCCCTACGTCTACAACACTGACCAGAGGGACACGGATGGTGACGGTGTGG
GGGATCACTGTGACAACTGCCCCCTGGTGCACAACCCTGACCAGACCGAC
GTGGACAATGACCTTGTTGGGGACCAGTGTGACAACAACGAGGACATAGA
TGACGACGGCCACCAGAACAACCAGGACAACTGCCCCTACATCTCCAACG
CCAACCAGGCTGACCATGACAGAGACGGCCAGGGCGACGCCTGTGACCCT
GATGATGACAACGATGGCGTCCCCGATGACAGGGACAACTGCCGGCTTGT
GTTCAACCCAGACCAGGAGGACTTGGACGGTGATGGACGGGGTGATATÍT
GTAAAGATGATTTTGACAATGACAACATCCCAGATATTGATGATGTGTGT
CCTGAAAACAATGCCATCAGTGAGACAGACTTCAGGAACTTCCAGATGGT
CCCCTTGGATCCCAAAGGGACCACCCAAATTGATCCCAACTGGGTCATTC
GCCATCAAGGCAAGGAGCTGGTTCAGACAGCCAACTCGGACCCCGGCATC
GCTGTAGGTTTTGACGAGTTTGGGTCTGTGGACTTCAGTGGCACATTCTÀC
GTAAACACTGACCGGGACGACGACTATGCCGGCTTCGTCTTTGGTTACCA
GTCAAGCAGCCGCTTCTATGTGGTGATGTGGAAGCAGGTGACGCAGACCT
ACTGGGAGGACCAGCCCACGCGGGCCTATGGCTACTCCGGCGTGTCCCTC
AAGGTGGTGAACTCCACCACGGGGACGGGCGAGCACCTGAGGAACGCGC
TGTGGCACACGGGGAACACGCCGGGGCAGGTGCGAACCTTATGGCACGA
CCCCAGGAACATTGGCTGGAAGGACTACACGGCCTATAGGTGGCACCTGA
CTCACAGGCCCAAGACTGGCTACATCAGAGTCTTAGTGCATGAAGGAAAA
CAGGTCATGGCAGACTCAGGACCTATCTATGACCAAACCTACGCTGGCGG
GCGGCTGGGTCTATTTGTCTTCTCTCAAGAAATGGTCTATTTCTCAGACCT
CAAGTACGAATGCAGAGATATTTAAACAAGATTTGCTGCATTTCCGGCAA
TGCCCTGTGCATGCCÀTGGTCCCTAGACACCTCAGTTCATTGTGGTCCTTG
TGGCTTCTCTCTCTAGCAGCACCTCCTGTCCCTTGACCTTAACTCTGATGGT
TCTTCACCTCCTGCCAGCAACCCCAAACCCAAGTGCCTTCAGAGGATAAA
TATCAATGGAACTCAGAGATGAACATCTAACCCACTAGAGGAAACCAGTT
TGGTGATATATGAGACTTTATGTGGAGTGAAAATTGGGCATGCCATTACA
TTGCTTTTTCTTGTTTGrrTAAAAAGAATGACGTTTACATATAAAATGTAA
TTACTTATTGTATTTATGTGTATATGGAGTTGAAGGGAATACTGTGCATAA
GCCATTATGATAAATTAAGCATGAAAAATATTGCTGAACTACTTTTGGTGC
TTAAAGTTGTCACTATTCTTGAATTAGAGTTGCTCTACAATGACACACAAA
TCCCATTAAATAAATTATAAACAAGGGTCAATTCAAATTTGAAGTAATGTT
TTAGTAAGGAGAGATXAGAAGACAACAGGCATAGCAAATGACATAAGCT
ACCGATTAACTAATCGGAACATGTAAAACAGTTACAAAAATAAACGAACT
CTCCTCTTGTCCTACAATGAAAGCCCTCATGTGCAGTAGAGATGCAGTTTC
ATCAAAGAACAAACATCCTTGCAAATGGGTGTGACGCGGTTCCAGATGTG
GATTTGGCAAAACCTCATTTAAGTAAAAGGTTAGCAGAGCAAAGTGCOGT
GCTTTAGCTGCTGCTTGTGCCGCTGTGGCGTCGGGGAGGCTCCTGCCTGAG
CTTCCTTCCCCAGCTTTGCTGCCTGAGAGGAACCAGAGCAGACGCACAGG
CCGGAAAAGGCGCATCTAACGCGTATCTAGGCTTTGGTAACTGCGGACAA
GrrGCTTmCCTGAríTGATGATACAlTTCATrAAGGTTCCAGTTATAAAT
ATTTTGTTAATATTTATTAAGTGACTATAGAATGCAACTCCAXT1'ACCAGT
AACTTATTTTAAATATGCCTAGTAACACATATGTAGTATAATTTCTAGAAA
CAAACATCTAATAAGTATATAATCCTGTGAAAATATGAGGCTTGÀTAATA
TTAGGTTGTCACGATGAAGCATGCTAGAAGCTGTAACAGAATACATAGAG
AATAATGAGGAGTTTATGATGGAACCTTAAATATATAATGTTGCCAGCGA
TTTTAGTTCAATATTTGTTACTGTTATCTATCTGCTGTATATGGAATTCTTT
TAATTCAAACGCTGAAAAGAATCAGCATTTAGTCTTGCCAGGCACACCCA
ATAATCAGTCATGTGTAATATGCACAAGTTTGTTTTTGTTTnGTTrnTTT
GTTGGTTGGTTTGTTfTTTTGCTTTAAGTTGCATGATCTTTCTGCAGGAAAT
AGTCACTCATCCCACTCCACATAAGGGGTTTAGTAAGAGAAGTCTGTCTGT
CTGATGATGGATAGGGGGCAAATCTTnTCCCCTTTCTGTTAATAGTCATC
ACAITTCTATGCCAAACAGGAACAATCCATAACTTTAGTCTTAATGTACÀC
ATTGCArrrTGATAAAATTAATTnGTrGTnCCTTTGAGGTTGATCGTTGT
GTTGTTGTTTTGCTGCACTTnTACnTlTTGCGTGTGGAGCTGTATTCCCG
AGACCAACGAAGCGTTGGGATACTTCATTAAATGTAGCGACTGTCAACAG
CGTGCAGGTTTTCTGTTTCTGTGTTGTGGGGTCAACCGTACAATGGTGTGG
GAGTGACGATGATGTGAATATTTAGAATGTACCATATrTTTTGTAAATTAT
TTATGTTTTTCTAAACAAATTTATCGTATAGGTTGATGAAACGTCATGTGT
TTTGCCAAAGACTGTAAATATTTATTTATGTGTTCÀCATGGTCAAAATrTC
ACCACTGAAACCCTGCACTTAGCTAGAACCTCATTTTTAAAGATrAACAAC
AGGAAATAAATTGTAAAAAAGGTTTTCTATACATGAAAAAAAAAAAAAA AAAA SEQID NO: 94 Adlican >gi|18390318|ref|NM_015419.1| Adlican de Homo sapiens (DKFZp564l1922), mRNA | qPCR ensaio_em_combinação_de contex-to_em_questão [694..718] ATGCCCAAGCGCGCGCACTGGGGGGCCCTCTCCGTGGTGCTGATCC
TGCTTTGGGGCCATCCGCGAGTGGCGCTGGCCTGCCCGCATCGTTGTGCCT
GCTACGTCCCCAGCGAGGTCCACTGCACGTTCCGÀTCCCTGGCTTCCGTGC
CCGCTGGCÀTTGCTAGACACGTGGAAAGAATCAATTTGGGGTTTAATAGC
ATACAGGCCCTGTCAGAAACCTCATTTGCAGGACTGACCAAG1TGGAGCT
ACTTATGATTCACGGCAATGAGATCCCAAGCATCCCCGATGGAGCTTTAA
GAGACCTCAGCTCTCTTCAGGTTTTCAAGTTCAGCTACAACAAGCTGAGA
GTGATCACAGGACAGACCCTCCAGGGTCTCTCTAACTTAATGAGGCTGCA
CATTGACCACAACAAGATCGÀGTTTATCCACCCTCAAGCTTTCAACGGCTT
AACGTCTCTGAGGCTACTCCATTTGGAAGGAAATCTCCTCCACCAGCTGCA
CCCCAGCÀCCTTCTCCACGTTCACATTTTTGGATTATTTCAGACTCTCCACC
ATAAGGCACCTCTACTTAGCAGAGAACATGGTTAGAACTCTTCCTGCCAG
CATGCTTCGGAACATGCCGCTTCTGGAGAATCTTTACTTGCAGGGAAATCC
GTGGACCTGCGATTGTGAGATGAGATGGTTTTTGGAATGGGATGCAAAAT
CCAGAGGAATTCTGAAGTGTAAAAAGGACAAAGCTTATGAAGGCGGTCA
GTTGTGTGCAATGTGCTTCAGTCCAAAGAAGTTGTACAAACATGAGATAC
ACAAGCTGAAGGACATGACTTGTCTGAAGCCTTCAATAGAGTCCCCTCTG
AGACAGAACAGGAGCAGGAGTATTGAGGAGGAGCAAGAACAGGAAGAG
GATGGTGGCAGCCAGCTCATCCTGGAGAAATTCCAACTGCCCCAGTGGAG
CATCTCTTTGAATATGACCGACGAGCACGGGAACATGGTGAACTTGGTCT
GTGACATCAAGAAACCAATGGATGTGTACAAGATTCACTTGAACCAAACG
GATCCTCCAGATATTGACATAAATGCAACAGTTGCCTTGGACITTGAGTGT
CCAATGACCCGAGAAAACTATGAAAAGCTATGGAAATTGATAGCATACTA
CAG1GAAGTTCCCGTGAAGCTACACAGAGAGCTCATGCTCAGCAAAGACC
CCAGAGTCAGCTACCAGTACAGGCAGGATGCTGATGAGGAAGCTCTTTAC
TACACAGGTGTGAGAGCCCAGATTCTTGCAGAACCAGAATGGGTCATGCA
GCCATCCATAGATATCCAGCTGAACCGACGTCAGAGTACGGCCAAGAAGG
TGCTACTTTCCTACTACACCCAGTATTCTCAAACAATATCCACCAAAGATA
CAAGGCÀGGCTCGGGGCAGAAGCTGGGTAATGATTGAGGCTAGTGGAGCT
GTGCAAAGAGATCAGACTGTCCTGGAAGGGGGTCCATGCCAGTTGAGCTG
CAACGTGAAAGCTTCTGAGAGTCCATCTÀTCTTCTGGGTGCTTCCAGATGG
CTCCATCCTGAAAGCGCCCATGGATGACCCAGACAGCAAGXTCTCCATTCT
CAGCAGTGGCTGGCTGAGGATCAAGTCGATGGAGCCATCTGACTCAGGCT
TGTACCAGTGCATTGCTCAAGTGAGGGATGAAATGGACCGCATGGTATAT
AGGGTACTTGTGCAGTGTCCCTCCACTCAGCCAGCCGAGAAAGACACAGT
GACAATTGGCAAGAACCCAGGGGAGTCGGTGACATTGCCTTGCAATGCTT
TAGCAATACCCGAAGCCCACCTTAGCTGGATTCTTCCAAACAGAAGGATA
ATTAATGATTTGGCTAACACATCACATGTATACATGTTGCCAAATGGAACT
CTTTCCATCCCAAAGGTCCAAGTCAGTGATAGTGGTTACTACAGATGTGTG
GCTGTCAACCAGCAAGGGGCAGACCATTTTACGGTGGGAATCACAGTGAC
CAAGAAAGGGTCTGGCTTGCCATCCAAAAGAGGCAGACGCCCAGGTGCA
AAGGCTCTTTCCAGAGTCAGAGAAGACATCGTGGAGGATGAAGGGGGCTC
GGGCATGGGAGATGAAGAGAACACTTCAAGGAGACTTCTGCATCCAAAG
GACCAAGAGGTGTTCCXCAAAACAAAGGATGATGCCATCAATGGAGACA
AGAAAGCCAAGAAAGGGAGAAGAAAGCTGAAACTCTGGAAGCATTCGGA
AAAAGAACCAGAGACCAATGTTGCAGAAGGTCGCAGAGTGTTTGAATCTA
GACGAAGGATAAACATGGCAAACAAACAGATTAATCCGGAGCGCTGGGC
TGATATTTTAGCCAAAGTCCGTGGGAAAAATCTCCCTAAGGGCACAGAAG
TACCCCCGTTGATTAAAACCACAAGTCCTCCATCCTTGAGCCTAGAAGTCA
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AACCAGTGCTGAAGAATCCTCAGCAGATGTACCTCTACTTGGTGAAGAAG
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GGAAGTTGTTGATGACCTTTCTGAGAAGACTGAGGAGATAACTTCCACTG
AAGGAGACCTGAAGGGGACAGCAGCCCCTACACTTATATCTGAGCCTTAT
GAACCATCTCCTACTCTGCACACATTAGACACAGTCTATGAAAAGCCCAC
CCATGAAGAGACGGCAACAGAGGGTTGGTCTGCAGCAGATGTTGGATCGT
CACCAGAGCCCACATCCAGXGAGTATGAGCCTCCATTGGATGCTGTCTCCT
XGGCXGAGXCTGAGCCCAXGCAATACXXXGACCCAGAXTXGGAGACXAAG
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GGAXXCXACXAXAGGGGAACCAGGXGXCCCAGGCCAAXCACAXCTACAAG
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CCTCCTAGACAAAGACACCACAACAGTAACAACMCACCAAGGCAAÁAA
GTTGCTCCGTCATCCACCATGAGCACTCACCCTTCTCGAAGGAGACCCAAC
GGGAGAAGGAGATTACGCCCCAACAAAITCCGCCACCGGCACAAGCAAA
CCCCACCCACAACTTTTGCCCCATCAGAGACTTTTTCTACTCAACCAACTC
AAGCACCTGACATTAAGATTTCAAGTCAAGTGGAGAGTTCTCTGGTTCCTA
CAGCITGGGTGGATAACACAGTTAATÀCCCCCAAACAGTTGGAAATGGAG
AAGAATGCAGAACCCACATCCAAGGGAACACCACGGAGAAAACACGGGA
AGAGGCCAAACAAACATCGATATACCCCTTCTACAGTGAGCTCAAGAGCG
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TACTCCCAGTTCAGAAACTATACnTTGCCTAGAACTGTTTCTCTGAAAAC
TGAGGGCCCTTATGATTCCTTAGATTACATGACAACCACCAGAAAAATAT
ATTCATCTTACCCTAAAGTCCAAGÀGACACTTCCAGTCACATATAAACCCA
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CATAAAAGTGACATTTTAGTCACTGGTGAATCAATTACTAATGCCATACCA
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CCTGTAGGCTTTCCAGGAACTCCAACCTGGAATCCCTCAAGGACGGCCCA
GCCTGGGAGGCTACAGACAGACATACCTGTTACCACTTCTGGGGAAAATC
TTACAGACCCTCCCCTTCTTAAAGAGCTTGAGGATGTGGATTTCACTTCCG
AGTTTTTGTCCTCTTTGACAGTCTCCACACCATTTCACCAGGAAGAAGCTG
GTTCTTCCACAACTCTCTCAAGCÀTAAAAGTGGAGGTGGCTTCAAGTCAG
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GAAGGAGCCAGCATCCTCGTCCCCATCCACAATTCTCATGTCTTTGGGACA
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ACAGAAGCAACCCCAGTCAACAATGAAGGAACACAGCATATGTCAGGGC
CAAATGAATTATCAACACCCTCTTCCGACCGGGATGCATTTAACTTGTCTA
CAAAGCTGGAATTGGAAAAGCAAGTATTTGGTAGTAGGÀGTCTACCACGT
GGCCCAGATAGCCAACGCCAGGATGGAAGAGTTCATGCTTCTCATCAACT
AACCAGAGTCCCTGCCAAACCCATCCTACCAACAGCAACAGTGAGGCTAC
CTGAAATGTCCACACAAAGCGCTTCCAGATACTTTGTAACTTCCCAGTCAC
CTCGTCACTGGACCAACAAACCGGAAATAACTACATATCCTTCTGGGGCT
TTGCCAGAGAACAAACAGTTTÀCAACTCCAAGATTATCAAGTACAACAAT
TCCTCTCCCATTGCACATGTCCAAACCCAGCATTCCTAGTAAGTTTACTGA
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ACATCCCTGAGGCAAGAAACCCAGTTGGAAAGCCTCCCAGTCCAAGAATT
CCTCATrATTCCAATGGAAGACTCCCTTTCTTTACCAACAAGACTCTTTCTT
TTCCACAGTTGGGAGTCACCCGGAGACCCCAGATACCCACTTCTCCTGCCC
CAGTAATGAGAGAGAGAAAAGTTATTCCAGGTTCCTACAACAGGATACAT
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TCCTCAGGAAGCTTCCACCAGAGCAGCTCAAAGTTCTTTGCAGGAGGACC
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TGAGGCAACAGGAAAACCAAAGCCTTTCGTTACTTGGACAAAGGTTTCCA
CAGGAGCTCTTATGACTCCGAATACCAGGATACAACGGTTTGAGGTTCTC
AAGAACGGTACCTTAGTGATACGGAAGGTTCAAGTACAAGATCGAGGCCA
GTATATGTGCACCGCCAGCAACCTGCACGGCCTGGACAGGATGGTGGTCT
TGCTTTCGGTCACCGTGCAGCAACCTCAAATCCTAGCCTCCCACTACCAGG
ACGTCACTGTCTACCTGGGAGACACCATTGCAATGGAGTGTCTGGCCAAA GGGACCCCAGCCCCCCAAATTTCCIGGATCTTCCCTGACAGGAGGGTGTG GCAAACTGTGTCCCCCGTGGAGAGCCGCATCACCCTGCACGAAAACCGGA CCCTTTCCATCAAGGAGGCGTCCTTCTCAGACAGAGGCGTCTATAAGTGC GTGGCCAGCAATGCAGCCGGGGCGGACAGCCTGGCCATCCGCCTGCACGT GGCGGCACTGCCCCCCGTTATCCACCAGGAGAAGCTGGAGAACATCTCGC TGCCCCCGGGGCTCAGCATTCACATTCACTGCACTGCCAAGGCTGCGCCCC TGCCCAGCGTGCGCTGGGTGCTCGGGGACGGTACCCAGATCCGCCCCTCG CAGTTCCTCCACGGGAACTTGTTTGTTTTCCCCAACGGGACGCTCTACATC CGCAACCTCGCGCCCAAGGACAGCGGGCGCTATGAGTGCGTGGCCGCCAA CCTGGTAGGCTCCGCGCGCAGGACGGTGCAGCTGAACGTGCAGCGTGCAG CAGCCAACGCGCGCATCACGGGCACCTCCCCGCGGAGGACGGACGTCAG GTACGGAGGAACCCTCAAGCTGGACTGCAGCGCCTCGGGGGACCCCTGGC CGCGCATCCTCTGGAGGCTGCCGTCCAAGAGGATGATCGACGCGCTCTTC AGTTTTGATAGCAGAATCAAGGTGTTTGCCAATGGGACCCTGGTGGTGAA ATCAGTGACGGACAAAGATGCCGGAGATTACCTGTGCGTAGCTCGAAATA AGGTTGGTGATGACTACGTGGTGCTCAAAGTGGATGTGGTGATGAAACCG GCCAAGATTGAACAÇAAGGAGGAGAACGACCACAAAGTCTTCTACGGGG GTGACCTGAAAGTGGACTGTGTGGCCACCGGGCTTCCCAATCCCGAGATC TCCTGGAGCCTCCCAGACGGGAGTCTGGTGAACTCCTTCATGCAGTCGGA TGACAGCGGTGGACGCACCAAGCGCTATGTCGTCTTCAACAATGGGACAC TCTACTTTAACGAAGTGGGGATGAGGGAGGAAGGAGACTACACCTGCTTT GCTGAAAATCAGGTCGGGAAGGÀCGAGATGAGAGTCAGAGTCAAGGTGG TGACAGCGCCCGCCACCATCCGGAACAAGACTTACTTGGCGGTTCAGGTG ' CCCTATGGAGACGTGGTCACTGTAGCCTGTGAGGCCAAAGGAGAACCCAT GCCCAAGGTGACTXGGTTGTCCCCAACCAACAAGGTGATCCCCACCTCCrC TGAGAAGTATCAGATATACCAAGATGGCACTCTCCTTATTCAGAAAGCCC AGCGTTCTGACAGCGGCAACTACACCTGCCTGGTCAGGAACAGCGCGGGA GAGGATAGGAAGACGGTGTGGATTCACGTCAACGTCCAGCCACCCAAGAT CAACGGTAACCCCAACCCCATCACCACCGTGCGGGAGATAGCAGCCGGGG GCAGTCGGAAACTGATTGACTGCAAAGCTGAAGGCATCCCCACCCCGAGG GTGTTATGGGCTTTTCCCGAGGGTGTGGTTCTGCCAGCTCCATACTATGGA AACCGGATCACTGTCCATGGCAACGGTTCCCTGGACATCAGGAGTTTGAG GAAGAGCGACTCCGTCCAGCTGGTATGCATGGCACGCAACGAGGGAGGG GAGGCGAGGTTGATCGTGCAGCTCACTGTCCTGGAGCCCATGGAGAAACC CATCTTCCACGACCCGATCAGCGAGAAGATCACGGCCATGGCGGGCCACA CCATCAGCCTCAACTGCTCTGCCGCGGGGACCCCGACACCCAGCCTGGTG TGGGTCCTTCCCAATGGCACCGATCTGCAGAGTGGACAGCAGCTGCAGCG CTTCTACCACAAGGCTGACGGCATGCTACACATTAGCGGTCTCTCCTCGGT GGACGCTGGGGCCTACCGCTGCGTGGCCCGCAATGCCGCTGGCCACACGG AGAGGCTGGTCTCCCTGAAGGTGGGACTGAAGCCAGAAGCAAACAAGCA GTATCATAACCTGGTCAGCATCATCAATGGTGAGACCCTGAAGCTCCCCT GCACCCCTCCCGGGGCTGGGCAGGGACGTTTCTCCTGGACGCTCCCCAAT GGCÀTGCATCTGGAGGGCCCCCAAACCCTGGGACGCGTTTCTCTTCTGGA CAATGGCACCCTCACGGTTCGTGAGGCCTCGGTGTTTGACAGGGGTACCT ATGTATGCAGGATGGÀGACGGAGTACGGCCCTTCGGTCACCAGCATCCCC GTGATTGTGATCGCCTATCCTCCCCGGATCACCAGCGAGCCCACCCCGGTC ATCTACACCCGGCCCGGGAACACCGTGAAACTGAACTGCATGGCTATGGG GATTCCCAAAGCTGACATCACGTGGGAGTTACCGGATAAGTCGCATCTGA AGGCAGGGGTTCAGGCTCGTCTGTATGGAAACAGATTTCTTCACCCCCAG
GGATCACTGACCATCCAGCATGCCACACAGAGAGATGCCGGCTTCTACAA
GTGCATGGCAAAAAACATTCTCGGCAGTGACTCCAAAACAACTTACATCC
ACGTCTTCTGAAATGTGGATTCCAGAATGATTGCTTAGGAACTGACAACA
AAGCGGGGTTTGTAAGGGAAGCCAGGTTGGGGAATAGGAGCTCTTAAATA
ATGTGTCACAGTGCATGGTGGCCTCTGGTGGGTTTCAAGTTGAGGTTGATC
TTGATCTACAATTGTTGGGAAAAGGAAGCAATGCAGACACGAGAAGGAG
GGCTCAGCCTrGCTGAGACACTTTCTTTTGTGTTTACATCATGCCAGGGGC
TTCATTCAGGGTGTCTGTGCTCTGACTGCAATTTTTCTTCTTTTGCAAATGC
CACTCGACTGCCTTCATAAGCGTCCATAGGATATCTGAGGAACATTCATCA
AAAATAAGCCATAGACATGAACAACACCTCACTACCCCATTGAAGACGCA TCACCTAGTTAACCTGCTGCAGTTnTACATGATAGACTTTGTTCCAGATr GACAAGTCATCTTTCAGTTATTTCCTCTGTCACTTCAAAACTCCAGCTTGC
CCAATAAGGATTTAGAACGAGAGTGACTGATATATATATATATATTTTAAT
TCAGAGTTACATACATÀCAGCTACCATTTTATATGAAAAAAGAAAAACAT
TTCTTCCTGGAACTCACTTTITATATAATGTTTTATATATATATTTTTTCCTT
TCAAATCAGACGATGAGACTAGAAGGAGAAATACTTTCTGTCTTATTAAA
ÀTrAATAAATTÀTTGGTCTTTACAAGACTTGGATACATTACAGCAGACATG
GAAATATAÀTmAAAAAATTTCTCTCCAACCTCCTXCAAATTCAGTCACC
ACTGTTATATTACCTTCTCCÁGGAACCCTCCAGTGGGGAAGGCTGCGATAT
TAGATTTCCTTGTATGCAAAGTTTTTGTTGAAAGCTGTGCTCAGAGGAGGT
GAGAGGAGAGGAAGGAGAAAACTGCATCATAACTTTACAGAATTGAATC
TAGAGTCTTCCCCGAAAAGCCCAGAAACTTCTCTGCAGTATCTGGCTTGTC
CATCTGGTCTAAGGTGGCTGCTTCTTCCCCAGCCATGAGTCAGTTTGTGCC
CAXGMXAAXACACGACCXGTIAXXXCCAXGACTGCTITACXGXAXXXXTA
AGGTCAATATACTGTACATITGATMTAAAATAATATTCTCCCAAAAAAA AAA SEQIDNO:95 Cistatina SA >gi|19882252|ref|NM_001322.2| Cistatina SA de Homo sapiens (CST2), mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [302..320] | qPCR combinação de iniciador_reverso [393..3T0] | qPCR combinação de sonda i [341.369] GCCTCCGAGGAGACCATGGCCTGGCCCCTGTGCACCCTGCTGCTCC TGCTGGCCACCCAGGCTGTGGCCCTGGCCTGGAGCCCCCAGGAGGAGGAC AGGATAATCGAGGGTGGCATCTATGATGCAGACGTCAATGATGAGCGGGT ACAGCGTGCCCTTCACTTTGTCATCAGCGAGTATAACAAGGCCACTGAAG ATGAGTACTACAGACGCCTGCTGCGGGTGCTACGAGCCAGGGAGCAGATC GTGGGCGGGGTGAATTACTTCTTCGACATAGAGGTGGGCCGAACCATATG TACCAAGTCCCAGCCCAACTTGGACACCTGTGCCTTCCATGAACAGCCAG AACTGCAGAAGAAACAGTTGTGCTCTTTCCAGATCTACGAAGTTCCCTGG GAGGACAGAAXGTCCCTGGTGAATTCCAGGTGTCAAGAAGCCTAGGGATC XGXGCCAGGGAGTCACACTGACCACCXCCTACXCCCACCCCXXGTAGXGCT CCCACCCCXGGACXGGXGGCCCCCACCCXGXGGGAGGXCXCCCCAXGCACC ' XGCAGCAGGAGAAGACAGAGAAGGCXGCAGGAGGCCXXXGXXGCXCAGC AGGGGACXCXGCCCTCCCXCCXXCCITTXGCnCTCAXAGCCCXGGTACAXG GTACACACACCCCCACCXCCTGCAATXÀAACAGTAGCAXCACCXC SEQ DD NO; 96 Cistatina SN >gi|19882250|ref|NM_001898.2| Cistatina SN de Homo sapiens (CST1), mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [358..376] j qPCR combinação de iniciador_reverso [449..426] | qPCR combinação de sonda [397..425] GGGCTCCCTGCCTCGGGCTCTCACCCTCCTCTCCTGCAGCTCCAGCT TTGTGCTCTGCCTCTGAGGAGACCATGGCCCAGTATCTGAGTACCCTGCTG CTCCTGCTGGCCACCCTAGCTGTGGCCCTGGCCTGGAGCCCCAAGGAGGA GGATAGGATAATCCCGGGTGGCATCTATAACGCAGACCTCAATGATGAGT GGGTACAGCGTGCCCTTCACTTCGCCATCAGCGAGTATAACAAGGCCACC AAAGATGACTACTACAGACGTCCGCTGCGGGTACTAAGAGCCAGGCAACA GACCGTTGGGGGGGTGAATTACTTCTTCGACGTAGAGGTGGGCCGCACCA TATGTACCAAGTCCCAGCCCAACTTGGACACCTGTGCCTTCCATGAACAGC CAGAACTGCAGAAGAAACAGTTGTGCTCTTTCGAGATCTACGAAGTTCCC TGGGAGAACAGAAGGTCCCTGGTGAAATCCAGGTGTCAAGAATCCTAGGG ATCTGTGCCAGGCCATTCGCACCAGCCACCÀCCCACTCCCACCCCCTGTAG TGCTCCCACCCCTGGACTGGTGGCCCCCACCCTGCGGGAGGCCTCCCCATG TGCCTGCGCCAAGAGACAGACAGAGAAGGCTGCAGGAGTCCTTTGTTGCT CAGCAGGGCGCTCTGCCCTCCCTCCTTCCTTCTTGCTTCTAATAGCCCTGGT ACATGGTACACACCCCCCCACCTCCTGCAATTAAACAGTAGCATCGCCTCC CTCTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SEQIDNO:97 Enzima 2 do Tipo Lisil Oxidase >gi|4505010|ref|NM_002318.1| Enzima 2 do tipo lisil oxidase de Homo sapiens (LOXL2), mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [2205..2223] | qPCR combinação de iniciadorj-everso [2286..2269] | qPCR combinação de sonda [2261 ..2229] ACTCCAGCGCGCGGCTACCTACGCTTGGTGCTTGCTTTCTCCAGCCÁ TCGGAGACCAGAGCCGCCCCCTCTGCTÇGAGAAAGGGGCTCAGCGGCGGC GGAAGCGGAGGGGGACCACCGTGGAGAGCGCGGTCCCAGCCCGGCCACT GCGGATCCCTGAAACCAAAAAGCTCCTGCTGCTTCTGTACCCCGCCTGTCC CTCCCAGCTGCGCÀGGGCCCCTTCGTGGGATCATCAGCCCGAAGACAGGG ATGGAGAGGCCTCTGTGCTCCCACCTCTGCAGCTGCCTGGCTATGCTGGCC CTCCTGTCCCCCCTGAGCCTGGCACAGTATGACAGCTGGCCCCATTACCCC GAGTACTTCCAGCAACCGGCTCCTGAGTATCACCAGCCCCAGGCCCCCGC CAACGTGGCCAAGATTCAGCTGCGCCTGGCTGGGCAGAAGAGGAAGCAC AGCGAGGGCCGGGTGGAGGTGTACTATGATGGCCAGTGGGGCACCGTGTG CGATGACGACTTCTCCATCCACGCTGCCCACGTCGTCTGCCGGGAGCTGG GCTATGTGGAGGCCAAGTCCTGGACTGCCAGCTCCTCCTACGGCAAGGGA ΟΑΑΟΟΟαϋΟΑΤΟΤΟαπΑΟΑσΑΑΤΟΤΟσΑΟΤΟΪΑϋΤΟαΟΑΑΟΟΑΟΟΟΟΑΟ CCTTGCAGCATGCÀCCTCCAATGGCTGGGGCGTCACTGACTGCAAGCÀCA CGGAGGATGTCGGTGTGGTGTGCAGCGACAAAAGGATTCCTGGGTTCAAA ' TTTGACAATTCGTTGATCAACCAGATAGAGAACCTGAATATCCAGGTGGA GGACATTCGGATTCGAGCCATCCTCTCAACCTACCGCAAGCGCACCCCAG TGATGGAGGGCTACGTGGAGGTGAAGGAGGGCAAGACCTGGAAGCAGAT CTGTGACAAGCACTGGACGGCCAAGAATTCCCGCGTGGTCTGCGGCATGT ttggcttccctggggagaggacaiAcaataccaaagtgtacaaaatgttt GCCTCACGGAGGAAGCAGCGCTACTGGCCATTCTCCATGGACTGCACCGG
CACAGAGGCCCACATCTCCAGCTGCAAGCTGGGCCCCCAGGTGTCACTGG
ACCCCATGAAGAATGTCACCTGCGAGAATGGGCTGCCGGCCGTGGTGAGT
TGTGTGCCTGGGCAGGTCTTCAGCCCTGACGGACCCTCGAGATTCCGGAA
AGCATACAAGCCAGAGCAACCCCTGGTGCGACTGAGAGGCGGTGCCTACA
TCGGGGAGGGCCGCGTGGAGGTGCTCAAAAATGGAGAATGGGGGACCGT
CTGCGACGACAAGTGGGACCTGGTGTCGGCCAGTGTGGTCTGCAGAGAGC
TGGGCTTTGGGAGTGCCAAAGAGGCAGTCACTGGCTCCCGACTGGGGCAA
GGGATCGGACCCATCCACCTCAACGAGATCCAGTGCACAGGCAATGAGAA
GTCCATTATAGACTGCAAGTTCAATGCCGAGTCTCAGGGCTGCAACCACG
AGGA.GGATGCTGGTGTGAGATGCMCACCCCTGCCATGGGCTTGCAGAAG
AAGCTGCGCCTGAACGGCGGCCGCAATCCCTACGAGGGCCGAGTGGAGGT
GCTGGTGGAGAGAAACGGGTCCCTTGTGTGGGGGATGGTGTGTGGCCAAA
ACTGGGGCATCGTGGAGGCCATGGTGGTCTGCCGCCAGCTGGGCCTGGGA
TTCGCCAGCAACGCCTTCCAGGAGACCTGGTATTGGCACGGAGATGTCAA
CAGCAACAAAGTGGTCATGAGTGGAGTGAAGTGCXCGGGAACGGAGCTG
TCCCTGGCGCACTGCCGCCACGACGGGGAGGACGTGGCCTGCCCCCAGGG
CGGAGTGCAGTACGGGGCCGGAGTTGCCTGCTCAGAAACCGCCCCTGÀCC
TGGTCCTCAATGCGGAGATGGTGCAGCAGACCACCTACCTGGAGGACCGG
CCCATGTTCATGCTGCAGTGTGCCATGGAGGAGAACTGCCTCTCGGCCTCA
GCCGOGCAGACCGACCCCACCACGGGCTACCGCCGGCTCGTGCGCTTCTC CTCCCAGATCCACAACAATGGCCAGTCCGACTTCCGGCCCAAGAACGGCC ■ GCCACGCGTGGATCTGGCACGACTGTCACAGGCACTACCACAGCATGGAG
GTGTTCACCCACTÀTGACCTGCTGAACCTCAATGGCACCAAGGTGGCAGA
GGGCCACAAGGCCAGCTTCTGCTTGGAGGACACAGAATGTGAAGGAGAC
ATCCAGAAGAATTACGAGTGTGCCAACTTCGGCGATCAGGGCATCACCAT
GGGCTGCTGGGACATGTACCGCCATGACATCGACTGCCAGTGGGTTGACA
TCACTGACGTGCCCCCTGGAGACTACCTGTTCCÀGGTTGTTÀTTAACCCCA
ACTTCGAGGTTGCAGAATCCGATTACTCCAACAACATCATGAAATGCAGG
AGCCGCTATGACGGCCACCGCATCTGGATGTACAACTGCCACATAGGTGG
TTCCTTCAGCGAAGAGACGGAAAAAAAGTTTGAGCACTTCAGCGGGCTCT
TAAACAACCAGCTGTCCCCGCAGTAAAGAAGCCTGCGTGGTCAACTCCTG
TCTTCAGGCCACACCACATCTTCCÁTGGGACTTCCCCCCAACAACTGAGTC
TGAACGAATGCCACGTGCCCTCACCCAGCCCGGCCCCCACCCTGTCCAGA
CCCCTACAGCTGTGTCTAAGCTCAGGAGGAAAGGGACCCTCCCATCATTC
ATGGGGGGCTGCTACCTGACCCTTGGGGCCTGAGAAGGCCTTGGGGGGGT
GGGGTTTGTCCACAGAGCTGCTGGAGCAGCACCAAGAGCCAGTCTTGACC
GGGATGAGGCCCACAGACAGGTTGTCATCAGCTTGTCCCATTCAAGCCAC
CGAGCTCACCACAGACACAGTGGAGCCGCGCTCTTCTCCAGTGACACGTG
GACAAATGCGGGCTCATCAGCCCCCCCAGAGAGGGTCAGGCCGAACCCCA
TTTCTCCTCCTCTTAGGTCATnTCAGCAAACTTGAATATCTAGACCTCTCT
TCCAATGAAACCCTCCAGTCTATTATAGTCACATAGATAATGGTGCCACGT
GTTITCTGATTTGGTGAGCTCAGACTTGGTGCTTCCCTCTCCACAACCCCC
ACCCCTTGTnTTCAAGATACTATTÀTTATATTTTCACAGACTTTTGAAGCA
CAAATTTATTGGCATTTAATATTGGACATCTGGGCCCTTGGAAGTACAAAT
CTAAGGAAAAACCAACCCACTGTGTAAGTGACTCATCTTCCTGTTGTTCCA attctgtgggtttttgattcaacggtgctataaccagggtcctgggtgaca GGGCGCTCACTGAGCACCATGTGTCATCACAGACACTTACACATACTTGA AACTTGGAATAAAAGAAAGATTTATG SEQIDNO:98 Tiroglobulina >gi|33589851|reflNM_003235.3| Tiroglobulina de Homo sapiens (TG), mRNA | qPCR combinação de iniciador adiante [886.905] | qPCR combinação de iniciadorjeverso [962..941] | qPCR combinação de sonda [915..939] GCAGXGGXXTCXCCXCCXTCCXCCCAGGAAGGGCCAGGAAAATGGC
CCTGGTCCTGGAGATCTTCACCCTGCTGGCCTCCATCTGCTGGGTGTCGGC
CAATATCTTCGAGTACCAGGTTGATGCCCAGCCCCTTCGTCCCTGTGAGCT
GCAGAGGGAAACGGCCTTTCTGMGCAAGCAGACTACGTGCCCCAGTGTG
CAGAGGATGGCAGCTTCCAGACTGTCCAGTGCCAGAACGACGGCCGCTCC
TGCTGGTGTGTGGGTGCCAACGGCAGTGAAGTGCTGGGCAGCAGGCAGCC
AGGACGGCCTGTGGCTTGTCTGTCATTTTGTCAGCTACAGAAACAGCAGA
TCTTACTGAGTGGCTACATTAACAGCACAGACACCTCCTACCTCCCTCAGT
GTCAGGATTCAGGGGACTACGCGCCTGTTCAGTGTGATGTGCAGCATGTC
CAGTGCTGGTGTGTGGACGCAGAGGGGATGGAGGTGTATGGGACCCGCCA
GCTGGGGAGGCCAAAGCGATGTCCAAGGAGCTGTGAAATAAGAAATCGT
CGTCTTCTCCACGGGGTGGGAGATAAGTCACCACCCCAGTGTTCTGCGGA
GGGAGAGTTTATGCCTGTCCAGTGCAAATTTGTCAACACCACAGACATGA
TGATTTTTGATCTGGTCCACAGCTACAACAGGTrTCCAGATGCATTTGTGA
CCTTCAGTTCCTTCCAGAGGAGGTTCCCTGAGGTATCTGGGTATTGCCACT
GTGCTGACAGCCAAGGGCGGGAACTGGCTGAGACAGGTTTGGAGTTGTTA
CXGGATGAAAXIXAXGACACCATXTXXGCTGGCCXGGACCXXCCXTCCACC
TTCACTGAAACCACCCTGTACCGGATACTGCAGAGACGGTTCCTCGCAGTT
CAATCAGTCAXCXCTGGCAGATTCCGATGCCCCACAAAATGTGAAGTGGA
GCGGXrXACAGCAACCAGCXTXGGXCACCCCXAXGTTCCAAGCXGCCGCCG
AAAXGGCGACXAXCAGGCGGXGCAGXGCCAGACGGAAGGGCCCXGCXGGT
GXGXGGACGCCCAGGGGAAGGAAAXGCAXGGAACCCGGCAGCAAGGGGA
GCCGCCAXCXXGXGCTGAAGGCCAAXCXXGXGCCXCCGAAAGGCAGCAGG
CCXXGTCCAGACXCTACXTTGGGACCXCAGGCXACXXCAGCCAGCACGACC
XGXXCTCXXCCCCAGAGAAAAGAXGGGCCTCXCCÀAGAGIAGCCAGAIXX
GCCACAXCCXGCCCACCCACGAXCAAGGAGCXCXXXGXGGACXCXGGGCXX
CXCCGCCCAAXGGXGGÀGGGACAGAGCCAACAGXXXXCXGXCXCAGAAAA
XCXTCTCAAAGAAGCCAXCCGAGCAATTXTXCCCXCCCGAGGGCXGGCTCG
XCXXGCCCTTCAGXTTACCACCAACCCAAAGAGACXCCAGCAAAACCXTTX
TGGAGGGAAAXrXXTGGXGAAXGXIGGCCAGXXTAACXXGXCXGGAGCCCX
TGGCACAAGAGGCACArrXAACTTCAGTCAATTTXXCCAGCAACXTGGXCT
XGCAAGCTXCTXGAAXGGAGGGAGACAAGAAGAXXXGGCCAAGCCACXCX
CXGXGGGAXXAGAXrCAAAXrCXXCCACAGGAACCCCXGAAGCXGCXAAG
AAGGATGGTACTATGAATAAGCCAACXGTGGGCAGCTXTGGCXXTGAAAX
XAACCTACAAGAGAACCAAAATGCCCTCAAATTCCTTGCTXCXCXCCXGGA
GCXXCCAGAAXXCCXTCXCXTCXXGCAACAXGCXAXCXCXGXGCCAGAAGA
XGXGGCAAGAGAXXTAGGXGAXGXGAXGGAAACGGXACXCGACXCCCAGA
CCXGXGAGCAGACACCXGAAAGGCXAXXXGXCCCAXCAXGCACGACAGAA
GGAAGCXATGAGGATGXCCAAXGCXTXXCCGGAGAGXGCXGGTGTGXGAA xxccxggggcaaagagctxccaggcxcaagagxcagagaxggacágccaa GGIGCCCCACAGACTGXGAAAAGCAAAGGGCXCGCAXGCAAAGCCXCAXG ggcagccagccxgctggcxccacctxgxttgxcccxgcxtgtactagxgag GGACAXXXCCXGCCXGICCAGXGCXXCAACICAGAGTGCXACXGXGXXGAX
GCXGAGGGXCAGGCCAXTCCXGGAACXCGAAGXGCAAXAGGGAAGCCCAA
GAAATGCCCCACGCCCTGTCAATTACAGTCTGAGCAAGCTTTCCTCAGGA
CGGTGCAGGCCCTGCTCTCTAACTCCAGCATGCTACCCACCCTTTCCGACA
CCTACATCCCACAGTGCAGCACCGATGGGCAGTGGAGACAAGTGCAATGC
AATGGGCCTCCTGAGCAGGTCTTCGAGTTGTACCAACGATGGGAGGCTCA
GAACAAGGGCCAGGATCTGACGCCTGCCAAGCTGCTAGTGAAGATCATGA
GCTACAGAGAAGCAGCTTCCGGAAACTTCAGTCTCTTTATTCAAAGTCTGT
ATGAGGCTGGCCAGCAAGATGTCTTCCCGGTGCrGTCACAATACCCTTCTC
TGCAAGATGTCCCACTAGCAGCACTGGAAGGGAAACGGCCCCAGCCCAG
GGAGAATATCCTCCTGGAGCCCTACCTCTTCTGGCAGATCTTAAATGGCCA
ACTCAGCCAATACCCGGGGTCCTACTCAGACTTCAGCACTCCTTTGGCACA
TTTTGATCTTCGGAACTGCTGGTGTGTGGATGAGGCTGGCCAAGAACTGG
AAGGAATGCGGTCXGAGCCAAGCAAGCTCCCAACGTGTCCTGGCTCCTGT GAGGAAGCAAAGCTCCGTGTACTGCAGTTCATTAGGGAAACGGAAGAGÀ TTGTTTCAGCTTCCAACAGTTCTCGGTTCCCTCTGGGGGAGAGTTTCCTGG
TGGCCAAGGGAATCCGGCTGAGGAATGAGGACCTCGGCCTTCCTCCGCTC
TTCCCGCCCCGGGAGGCTTTCGCGGAGTTTCTGCGTGGGAGTGATTACGCC
ATTCGCCTGGCGGCTCAGTCTACCTTAAGCTTCTATCAGAGACGCCGCTTT
TCCCCGGACGACTCGGCTGGAGCATCCGCCCTTCTGCGGTCGGGCCCCTAC
ATGCCACAGTGTGATGCGTTTGGAAGTTGGGAGCCTGTGCAGTGCCACGC
TGGGACTGGGCACTGCTGGTGTGTAGATGAGAAAGGAGGGTTCATCCCTG
GCTCACTGACTGCCCGCTCTCTGCAGATTCCACAGTGCCCGACAACCTGCG
ÀGAAATCTCGAACCAGTGGGCTGCTTTCCAGTTGGAAACAGGCTAGATCC
CAAGAAAACCCATCTCCAAAAGACCTGTTCGTCCCAGCCTGCCTAGAAAC
AGGAGAATATGCCAGGCTGCAGGCATCGGGGGCTGGCACCTGGTGTGTGG
ÀCCCTGCATCAGGAGÀAGAGTÍXjCGGCCTGGCTCGAGCAGCAGTGCCCAG
TGCCCAAGCCTCTGCAATGTGCTCAAGAGTGGAGTCCTCTCTAGGAGAGT
CAGCCCAGGCTATGTCCCAGCCTGCAGGGCAGAGGATGGGGGCTTTTCCC
CAGTGCAATGTGACCAGGCCCAGGGCAGCTGCTGGTGTGTCATGGACAGC
GGAGAAGAGGTGCCTGGGACGCGCGTGACCGGGGGCCAGCCCGCCTGTG AGAGCCCGCGGTGTCCGCTGCCÀTTCAACGCGTCGGAGGTGGTTGGTGGÀ ACAATCCTGTGTGAGACAATCTCGGGCCCCACAGGCTCTGCCATGCAGCA
GTGCCAATTGCTGTGCCGCCAAGGCTCCTGGAGCGTGTTTCCACCAGGGC
CATTGATATGTAGCCTGGAGAGCGGACGCTGGGAGTCACAGCTGCCTCAG
CCCCGGGCCTGCCAACGGCCCCAGCTGTGGCAGACCATCCAGACCCAAGG
GCACTTTCAGCTCCAGCTCCCGCCGGGCAAGATGTGCAGTGCTGACTACG
CGGGTTTGCTGCAGACTTTCCAGGTnTCATATTGGATGAGCTGACAGCCC
GCGGCTTCTGCCAGATCCAGGTGAAGACfTTTGGCACCCTGGTTTCCATTC
CTGTCTGCAACAACTCCTCTGTGCAGGTGGGTTGTCTGACCAGGGAGCGTT
TAGGAGTGAATGTTACATGGAAATCACGGCTTGAGGACATCCCAGTGGCT
TCTCTTCCTGACTTACATGACATTGAGAGAGCCTTGGTGGGCAAGGATCTC
CTTGGGCGCTTCACAGATCTGATCCAGAGTGGCTCATTCCAGCTTCATCTG
GACTCCAAGACGTTCCCAGCGGAAACCATCCGCTTCCTCCAAGGGGACCA
CTTTGGCACCTCTCCTAGGACACGGTTTGGGTGCTCGGAAGGATTCTACCA
AGTCTTGACAAGTGAGGCCAGTCAGGACGGACTGGGATGCGTTAAGTGCC
ATGAAGGAAGCTATTCCCAAGATGAGGAATGCATTCCTTGTCCTGTTGGA
TTCTACCAAGAACAGGCAGGGAGCTTGGCCTGTGTCCCATGTCCTGTGGG
CAGAACGACCATTTCTGCCGGAGCTTTCAGCCAGACTCÀCTGTGTCACTGA
CTGTCAGAGGAACGAAGCAGGCCTGCAATGTGACCAGAATGGCCAGTATC
GAGCCAGCCAGAAGGACAGGGGCAGTGGGAAGGCCTTCTGTGTGGACGG
CGAGGGGCGGAGGCTGCCATGGTGGGAAACAGAGGCCCCTCTTGAGGAC
TCÀCAGTGTTTGATGATGCAGAAGTTTGAGAAGGTTCCAGAATCAAAGGT
GATCTTCGACGCCAATGCTCCTGTGGCTGTCAGATCCAAAGTTCCTGATTC
TGAGTTCCCCGTGATGCAGTGCTTGACAGATTGCACAGAGGACGAGGCCT
GCAGCTTCTTCÀCCGTGTCCACGACGGAGCCAGAGATTTCCTGTGATTTCT
ATGCTTGGACAAGTGACAATGTTGCCTGCATGACTTCTGACCAGAAACGA
GATGCACTGGGGAACTCAAAGGCCACCAGCTTTGGAAGTCTTCGCTGCCA
GGTGAAAGTGAGGAGCCATGGTCAAGATTCTCCAGCTGTGTATTTGAAAA
AGGGCCAAGGATCCACCACAACACTTCAGAAACGCTTTGAACCCACTGGT
TTCCAAAACATGCTTTCTGGATTGTACAACCCCATTGTGTTCTCAGCCTCA
GGAGCCAATCTAACCGATGCTCACCTCTTCTGTCTTCTTGCATGCGACCGT
GATCTGTGTTGCGATGGCTTCGTCCTCACACAGGTTCAAGGAGGTGCCATC
ATCTGTGGGTTGCTGAGCTCACCCAGTGTCCTGCTTTGTAATGTCAAAGAC
TGGATGGATCCCTCTGAAGCCTGGGCTAATGCTACATGTCCTGGTGTGACA
TATGACCAGGAGAGCCACCAGGTGATATTGCGTCTTGGAGACCAGGAGTT
CATCAAGAGTCTGACACCCTTAGAAGGAACTCAAGACACCTTTACCAATT
TTCAGCAGGTTTATCTCTGGAAAGATTCTGACATGGGGTCTCGGCCTGAGT
CTATGGGATGTAGAAAAAACACAGTGCCAAGGCCAGCATCTCCAACAGA
AGCAGGTTTGACAACAGAACTTTTCTCCCCTGTGGACCTCAACCAGGTCAT
TGTCAATGGAAATCAATCACTATCCAGCCAGAAGCACTGGCTTTTCAAGC
ACCTGTTTTCAGCCCAGCAGGCAAACCTATGGTGCCTTTCTCGTTGTGTGC
AGGAGCACTCTTTCTGTCAGCTCGCAGAGATAACAGAGAGTGCATCCTTG
TACTTCACCTGCACCCTCTACCCAGAGGCACAGGTGTGTGATGACATCATG
GAGTCCAATACCCAGGGCTGCAGACXGATCCTGCCTCAGATGCCAAAGGC
CCTGTTCCGGAAGAAAGTTATACTGGAAGATAAAGTGAAGAACTTTTACA
CTCGCCTGCCGTTCCAAAAACTGATGGGGATATCCATTAGAAATAAAGTG
CCCATGTCTGAAAAATCTATTTCTAATGGGTTCTTTGAATGTGAACGACGG
TGCGATGCGGACCCATGCTGCACTGGCTTTGGATTTCTAAATGTTTCCCAG
TTAAAAGGAGGAGAGGTGACATGTCTCACTCTGAACAGCTTGGGAATTCA
GATGTGCAGTGAGGAGAATGGAGGAGCCTGGCGCATrTTGGACTGTGGCT
CTCCTGACATTGAAGTCCACACCTATCCCTTCGGATGGTACCAGAAGCCCA
TTGCTCAAAATAATGCTCCCAGTTTTTGCCCTTTGGTTGTTCTGCCTTCCCT
CACAGAGAAAGTGTCTCTGGAATCGTGGCAGTCCCTGGCCCTCTCTTCAGT
GGTTGTTGATCCATCCATTAGGCACTTTGATGTTGCCCATGTCAGCACTGC
TGCCACCAGCAATITCTCTGCTGTCCGAGÀCCTCTGTTTGTCGGAATGTTC
CCAACATGAGGCCTGTCTCATCACCACTCTGCAAACCCAACTCGGGGCTG
TGAGATGTATGTTCTATGCTGATACXCAAAGCTGCACACATAGTCTGCAGG
GTCGGAACTGCCGACTTCTGCTTCGTGAAGAGGCCACCCACATCIACCGG
AAGCCAGGAATCTCTCTGCTCAGCTATGAGGCATCTGTACCTTCTGXGCCC
ATXXCCACCCAXGGCCGGCXGCXGGGCAGGXCCCAGGCCAXCCAGGXGGG
XACCXCAXGGAAGCAAGTGGACCAGXTCCXXGGAGTTCCAXAXGCXGCCCC
GCCCCXGGCAGAGAGGCACXXCCAGGCACCAGAGCCCTXGAACXGGACAG
GCXCCXGGGAXGCCAGCAAGCCAAGGGCCAGCXGCXGGCAGCCAGGCACC
AGAACAXCCACGXCXCCXGGAGXCAGXGAAGAXXGXXXGXAXCXCAAXGXG
XXCAXCCCXCAGAAXGXGGCCCCXAACGCGXCTGXGCXGGXGXXCXXCCAC
AACACCAXGGACAGGGAGGAGAGTGAAGGATGGCCGGCXATCGACGGCT
CCXXCXXGGCXGCTGXXGGCAACCXCAXCGXGGXCACXGCCAGCTACCGAG
XGGGXGXCXXCGGCXXCCXGAGXXCXGGAXCCGGAGAGGXGAGXGGCAACX
GGGGGCXGCXGGACCAGGXGGCGGCXCXGACCXGGGTGCAGACCCACAXC
CGAGGAXXTGGCGGGGACCCXCGGCGCGXGXCCCXGGCAGCAGACCGXGG
CGGGGCXGATGXGGCCAGCAXCCACCXXCXCACGGCCAGGGCCACCAACX
CCCAACTTTTCCGGAGAGCTGTGCTGATGGGAGGCTCCGCACTCTCCCCGG
CCGCCGTCATCAGCCATGAGAGGGCTCAGCAGCAGGCAAITGCTTTGGCA
AAGGAGGTCAGTTGCCCCATGTCATCCAGCCAAGAAGTGGTGTCCTGCCT
CCGCCAGAAGCCTGCCAATGTCCTCAATGATGCCCAGACCAAGCTCCTGG
CCGTGAGTGGCCCTTTCCACTACTGGGGTCCTGTGATCGATGGCCACTTCC
TCCGTGAGCCTCCAGCCAGAGCACTGAAGAGGTCITTATGGGTAGAGGTC
GATCTGCTCATTGGGAGTTCTCAGGACGACGGGCTCATCAACAGAGCAAA
GGCTGTGAAGCAATTTGAGGAAAGTCGAGGCCGGACCAGTAGCAAAACA
GCCTnTACCAGGCACTGCAGAATTCTCTGGGTGGCGAGGACTCAGATGC
CCGCGTCGAGGCTGCTGCTACATGGTATTACTCTCTGGAGCACTCCACGGA
TGACTATGCCTCCTTCTCCCGGGCTCTGGAGAATGCCACCCGGGACTACTT
TATCATCTGCCCTÀTAATCGACATGGCCAGTGCCTGGGCAAAGAGGGCCC
GAGGAAACGTCTTCATGTACCATGCTCCTGAAAACTACGGCCATGGCAGC
CTGGAGCTGCTGGCGGATGTTCAGTTTGCCTTGGGGCTTCCCTTCTACCCA
GCCTACGAGGGGCAGTTTTCTCTGGAGGAGAAGAGCCTGTCGCTGAAAAT
CATGCAGTACTTTTCCCACTTCATCAGATCAGGAAATCCCAACTACCCXTA
TGAGTTCTCACGGAAAGTACCCACATTTGCAACCCCCTGGCCTGACTTTGT
ACCCCGTGCTGGTGGAGAGAACTACAAGGAGTTCAGTGAGCTGCTCCCCA
ATCGACAGGGCCTGAAGAAAGCCGACTGCTCCTTCTGGTCCAAGTACATC TCGTCTCTGAAGACATCTGCAGATGGAGCCAAGGGCGGGCAGTCAGCAGÁ GAGTGAAGAGGAGGAGTTGACGGCTGGATCTGGGCTAAGAGAAGATCTC
CTAAGCCTCCAGGAACCAGGCTCTAAGACCTACAGCAAGTGACCAGCCCT
TGAGCTCCCCAAAAACCTCACCCGAGGCTGCCCACTATGGTCATCTmTC
TCTAAAATAGTTACTTACCTTCAATAAAGTATCTACATGCGGTG SEQIDNO: 99 Fator de Crescimento de Transformação, Beta 1 >gi|10863872|ref|NM_000660.1| Fator de crescimento de transformação de Homo sapiens, beta 1 (doença Camurati-Engelman) (TGFB1), mRNA j qPCR combinação de iniciador_adiante [1651..1668] j qPCR combinação de iniciador_reverso [1539..1557] | qPCR combinação de sonda [1687..1713] , ACCTCCCTCCGCGGAGCAGCCAGACAGCGAGGGCCCCGGCCGGGG GCAGGGGGGACGCCCCGTCCGGGGCACCCCCCCCGGCTCTGAGCCGCCCG CGGGGCCGGCCTCGGCCCGGAGCGGAGGAAGGAGTCGCCGAGGAGCÀGC CTGAGGCCCCAGAGTCTGAGACGAGCCGCCGCCGCCCCCGCCACTGCGGG GAGGAGGGGGAGGAGGAGCGGGAGGAGGGACGAGCTGGTCGGGAGAAG AGGAAAAAAACTTTTGAGACTTTTCCGTTGCCGCTGGGAGCCGGAGGCGC GGGGACCTCTTGGCGCGACGCTGCCCCGCGAGGAGGCAGGACTTGGGGAC CCCAGACCGCCTCCCTTTGCCGCCGGGGACGCTTGCTCCCTCCCTGCCCCC TACACGGCGTCCCTCAGGCGCCCCCATTCCGGACCAGCCCTCGGGAGTCG CCGACCCGGCCTCCCGCAAAGACTTTTCCCCAGACCTCGGGCGCACCCCCT GCACGCCGCCTTCATCCCCGGCCTGTCTCCTGAGCCCCCGCGCATCCTAGA CCCTTTCTCCTCCAGGAGACGGATCTCTCTCCGACCTGCCACAGATCCCCT ATTCAAGACCACCCACCrrCTGGTACCAGATCGCGCCCATCTAGGTTATTT CCGTGGGATACTGAGACACCCCCGGTCCAAGCCTCCCCTCCACCACTGCG CCCnCTCCCTGAGGAGCCTCAGCTTTCCCTCGAGGCCCTCCTACCTTTTGC CGGGAGACCCCCAGCCCCTGCAGGGGCGGGGCCTCCCCACCACACCAGCC
CTGTTCGCGCTCTCGGCAGTGCCGGGGGGCGCCGCCTCCCCCATGCCGCCC
TCCGGGCTGCGGCTGCTGCCGCTGCTGCTACCGCTGCTGTGGCTACTGGTG
CTGACGCCTGGCCCGCCGGCCGCGGGACTATCCACCTGCAAGACTATCGA
CATGGAGCTGGTGAAGCGGAAGCGCATCGAGGCCATCCGCGGGCAGATCC
TGTCCAAGCTGCGGCTCGCCAGCCCCCCGAGCCAGGGGGAGGTGCCGCCC
GGCCCGCTGCCCGAGGCCGTGCTCGCCCTGTACAACAGCACCCGCGACCG
GGTGGCCGGGGAGAGTGCAGAACCGGAGCCCGAGCCTGAGGCCGACTAC
TACGCCAAGGAGGTCACCCGCGTGCTAATGGTGGAAACCCACAACGAAAT
CTATGACAAGTTCAAGCAGAGTACACACAGCATATATATGTTCTTCAACA
CATCAGAGCTCCGAGAAGCGGTACCTGAACCCGTGTTGCTCTCCCGGGCA
GAGCTGCGTCTGCTGAGGAGGCTCAAGTTAAAAGTGGAGCAGCACGTGGA
GCTGTACCAGAAATACAGCAACAATTCCTGGCGATACCTCAGCAACCGGC
TGCTGGCACCCAGCGACTCGCCAGAGTGGTTATCTTTTGATGTCACCGGAG
TTGTGCGGCAGTGGTTGAGCCGTGGAGGGGAAATTGAGGGCTTTCGCCTT
AGCGCCCACTGCTCCTGTGACAGCAGGGATAACACACTGGAAGTGGAGAT
CAACGGGTTCACTACCGGCCGCCGAGGTGACCTGGCCACCATTCATGGCA
TGAACCGGCCTTTCCTGCTTCTCATGGCCACCCCGCTGGAGAGGGCCCAGC
ATCTGCAAAGCTCCCGGCACCGCCGAGCCCTGGACACCAACTATTGCTTC
AGCTCCACGGAGAAGAACTGCTGCGTGCGGCAGCTGTACATTGACTTCCG
CAAGGACCTCGGCTGGAAGTGGATCCACGAGCCCAAGGGCTACCATGCCA
ACTTCTGCCTCGGGCCCTGCCCCTACÀXTTGGAGCCTGGACACGCAGTACA
GCAAGGTCCTGGCCCTGTACAACCAGCATAACCCGGGCGCCTCGGCGGCG
CCGTGCTGCGTGCCGCAGGCGCTGGAGCCGCTGCCCATCGTGTACTACGT
GGGCCGCAAGCCCAAGGTGGAGCAGCTGTCCAACATGATCGTGCGCTCCT
GCAAGTGCAGCTGAGGTCCCGCCCCGCCCCGCCCCGCCCCGGCAGGCCCG
GCCCCACCCCGCCCCGCCCCCGCTGCCTTGCCCATGGGGGCTGTATTTAAG
GACACCGTGCCCCAAGCCCACCTGGGGCCCCATTAAAGATGGAGAGAGG
ACTGCGGATCTCTGTGTCATTGGGCGCCTGCCTGGGGTCTCCATCCCTGAC
GTTCCCCCACTCCCACTCCCTCTCTCTCCCTCTCTGCCTCCTCCTGCCXGTC
XGCACXAXXCCXXXGCCCGGCAXCAAGGCACAGGGGACCAGXGGGGAACA
CXACXGXAGIXAGAXCXATTTAXTGAGCACCTXGGGCACXGXIGAAGXGCC
XXACAXXAAXGAACXCAXXCAGXCACCAXAGCAACACXCXGAGAXGGCAG
GGACXCXGATAACACCCATmAAAGGXTGAGGAAACAAGCCCAGAGAGG
TXAAGGGAGGAGTXCCXGCCCACCAGGAACCXGCXXXAGXGGGGGATAGX
GAAGAAGACAAXAAAAGAXAGXAGXXCAGGCCAGGCGGGGXGCXCACGC
CXGXAAXCCXAGCACXXXXGGGAGGCAGAGAXGGGAGGAXACXXGAAXCC
AGGCAXXXGAGACCAGCCXGGGTAACAXAGXGAGACCCXAXCXCTACAAA
ACACXXXXAAAAAAXGXACACCXGXGGXCCCAGCXACTCXGGAGGCXAAG
GXGGGAGGAXCACXXGATCCXGGGAGGXCAAGGCXGCAG SEQIDNO: 100 Inibidor de Proteinase de Serina, Clade H, Membro 1 >gi|32454740|ref|NM_001235.2j Inibidor de serina (ou cisteína) proteinase de Homo sapiens, clade H (proteína de choque de calor 47}, membro 1, (proteína de ligação de colágeno 1) (SERPINH1), mRNA | qPCR ensaio_em_combinação_de contexto_e m_q uestão [184..208] XCXXXGGCXTnTTXGGCGGAGCTGGGGCGCCCTCCGGAAGCGTXXC
CAACTTXCCAGAAGXTTCXCGGGACGGGCAGGAGGGGGXGGGGACTGCCA tatatagatcccgggagcággggagcgggctaagagxagaatcgtgtcgc GGCTCGAGAGCGAGAGTCACGTCCCGGCGCTAGCCCAGCCCGACCCAGGC
CCACCGTGGTGCACGCAAACCACTTCCTGGCCATGCGCTCCCTCCTGCTTC
TCAGCGCCTTCTGCCTCCTGGAGGCGGCCCTGGCCGCCGAGGTGAAGAAA
CCTGCAGCCGCAGCAGCTCCTGGCACTGCGGAGAAGTTGAGCCCCAAGGC
GGCCACGCTTGCCGAGCGCAGCGCCGGCCTGGCCTTCAGCTTGTACCAGG
CCATGGCCAAGGACCAGGCAGTGGAGAACArCCTGGTGTCACCCGTGGTG
GTGGGCTCGTCGCTAGGGCTCGTGTCGCTGGGCGGCAAGGCGACCACGGC
GTCGCAGGCCAAGGCAGTQCTGAGCGCCGAGCAGCTGCGCGACGAGGAG
GTGCACGCCGGCCTGGGCGAGCTGCTGCGCTCACTCAGCAACTCCACGGC
GCGCAACGTGACCTGGAAGCTGGGCAGCCGACTGTACGGACCCAGCTCAG
TGAGCTTCGCXGATGACTTCGTGCGCAGCAGCAAGCAGCACTACAACTGC
GAGCACTCCAAGATCAACTTCCGCGACAAGCGCAGCGCGCTGCAGTCCAT
CAACGAGTGGGCCGCGCAGACCACCGACGGCAAGCTGCCCGAGGTCACC
AAGGACGXGGAGCGCACGGÀCGGCGCCCTGCTAGTCAACGCCATGTTCTT
CAAGCCACACTGGGATGAGAAATTCCACCACAAGATGGTGGACAACCGTG
GCTXCATGGTGACXCGGTCCXATACCGTGGGXGXCATGATGATGCACCGGA
CAGGCCTCTACAACTACTACGACGACGAGAAGGAAAAGCXGCAAATCGTG
GAGATGCCCCTGGCCCACAAGCTCTCCAGCCTCATCATCCTCAXGCCCCAT
CACGTGGAGCCrCTCGAGCGCCTTGAAAAGCTGCXAACCAAAGAGCAGCT
GAAGATCTGGATGGGGAAGATGCAGAAGAAGGCTGTTGCCATCXCCXTGC
CCAAGGGTGTGGXGGAGGTGACCCATGACCXGCAGAAACACCXGGCXGGG
CXGGGCCTGACTGAGGCCAXTGACAAGAACAAGGCCGACXXGTCACGCAT
GTCAGGCAAGAAGGACCTGTACCTGGCCAGCGTGTTCCACGCCACCGCCX
TTGAGXTGGACACAGAXGGCAACCCCXTTGACCAGGACAXCTACGGGCGC
GAGGAGCTGCGCAGCCCCAAGCXGTTCTACGCCGACCACCCCTTCATCTTC
CTAGTGCGGGACACCCAAAGCGGCTCCCTGCTAXTCAXTGGGCGCCIGGX
CCGGCCTAAGGGTGACAAGATGCGAGACGAGTTATAGGGCCTCAGGGTGC
ACACAGGATGGCAGGAGGCATCCAAAGGCTCCXGAGACACATGGGTGCT
AXTGGGGTTGGGGGGGAGGTGAGGTACCAGCCTTGGATACTCCATGGGGT
GGGGGTGGAAAAACAGACCGGGGTTCCCGTGTGCCTGAGCGGACCTTCCC
AGCXAGAATTCACXCCACXXGGACAXGGGCCCCAGATACCATGATGCTGA
GCCCGGAAACTCCACAXCCTGTGGGACCTGGGCCATAGTCATTCTGCCTGC
CCTGAAAGTCCCAGAXCAAGCCTGCCTCAATCAGTATTCAXAXTTATAGCC
AGGTACCTTCTCACCTGTGAGACCAAATTGAGCTAGGGGGGTCAGCCAGC
CCXCTTCTGACACXAAAACACCXCAGCTGCCTCCCCAGCTCXATCCCAACC
TCTCCCAACTATAAAACTAGGTGCTGCAGCCCCTGGGACCAGGCACCCCC
AGAATGACCTGGCCGCAGTGAGGCGGATXGAGAAGGAGCXCCCAGGAGG
GGCTTCXGGGCAGACTCXGGXCAAGAAGCATCGTGTCTGGCGTXGTGGGG
ATGAACXTTTTGTTTTGXTXCTTCCXTXTTTAGTTCXTCAAAGATAGGGAGG
GAAGGGGGAACATGAGCCXXTGTTGCTATCAATCCAAGAACXTATXXGTA
CATXTTXTTTTTCAATAAAACITITCCAATGACAXTTTGTTGGAGCGTGGAA AAAA SEQ Π) NO: 101 Inibidor de Serina Proteinase, Clade B, Membro 5 >gi|4505788|ref|NM_002639.1| Inibidor de serina {ou cisteína) protease de Homo sapiens, clade B (ovalbumina), membro 5 (SERPINB5), mRNA | qP-CR combinação de iniciador_adiante [36.56] | qPCR combinação de inicia-dorjeverso [106..86] [ qPCR combinação de sonda [60..80] GGCACGAGTTGTGCTGCTCGCTTGCCTGTTCCTTTTCCACGCATTTT ccaggataactgtgactccaggcccgcaatggatgccctgcaactagcaa ATTCGGCTTTTGCCGTTGATCTGTTCAAACAACTATGTGAAAAGGAGCCAC
TGGGCAATGTCCTCTTCTCTCCAATCTGTCTCTCCACCTCTCTGTCACTTGC
TCAAGTGGGTGCTAAAGGTGACACTGCAAATGAAATTGGACAGGTTCTTC
ATTTTGAAAATGTCAAAGATATACCCTTTGGATTTCAAACAGTAACÀTCGG
ATGTAAACAAACTTAGTTCCTTTTACTCACTGAAACTAATCAAGCGGCTCT
ACGTAGACAAATCTCTGAATCTTTCTACAGAGTTCATCAGCTCTACGAAGA
GACCCTATGCAAAGGAATTGGAAACTGTTGACTTCAAAGATAAATTGGAA
GAAACGAAAGGTGAGATCAACAACTCAATTAAGGATCTCACAGATGGCCA
CTTTGAGAACATTTTAGCTGACAACAGTGTGAACGACCAGACCAAAATCC
TTGTGGTTAATGCTGCCTACTTTGTTGGCAAGTGGATGAAGAAATTTCCTG
AATCAGAAACAAAAGAATGTCCTTTCAGACTCAACAAGACAGACACCAA
ACCAGTGCAGATGATGAACATGGAGGCCACGTTCTGTATGGGAAACATTG
ACAGTATCAATTGTAAGATCATAGAGCTTCCTTTTCAAAATAAGCATCTCA
GCATGTTCATCCTACTACCCAAGGATGTGGAGGATGAGTCCACAGGCTTG
GAGAAGATTGAAAAACAACTCAACTCAGAGTCACTGTCACAGTGGACTAA
TCCCAGCACCATGGCCAATGCCAAGGTCAAACTCTCCATTCCAAAATTTA
AGGTGGAAAAGATGATTGATCCCAAGGCTTGTCTGGAAAATCTAGGGCTG
AAACATATCTTCAGTGAAGACACATCTGATTTCTCTGGAATGTCAGAGAC
CAAGGGAGTGGCCCTATCAAATGTTATCCACAAAGTGTGCTTAGAAATAA
CTGAAGATGGTGGGGATTCCATAGAGGTGCCAGGAGCACGGATCCTGCAG
CACAAGGATGAATTGAATGCTGACCATCCCTTTATTTACATCATCAGGCAC
AACAAAACTCGAAACATCATTTTCTTTGGCAAATTCTGTTCTCCTTAAGTG
GCATAGCCCATGTTAAGTCCTCCCTGACTTTTCTGTGGATGCCGATTTCTG
TAAACTCTGCATCCAGAGATTCATTTTCTAGATACAATAAATTGCTAATGT
TGCTGGATCAGGAAGCCGCCAGTACTTGTCATATGTAGCCTTCACACAGA
CAATGACATACGCmTAATGAAAAGGAATCACGTTAGAGGAAAAATATT
TATTCATTATTTGTCAAATTGTCCGGGGTÀGTTGGCAGAAATACAGTCTTC
CACAAAGAAAATTCCTATAAGGAAGATTTGGAAGCTCTTCTTCCCAGCAC
TATGCTTTCCTTCTTTGGGATAGAGAATGTTCCAGACATTCTCGCTTCCCTG
AAAGACTGAAGAAAGTGTAGTGCATGGGACCCACGAAACTGCCCTGGCTC
CAGTGAAACTTGGGCACATGCTCAGGCTACTATAGGTCCAGÁAGTCCTTA
TGTTAAGCCCTGGCAGGCAGGTGTTTATTAAAATTCTGAATTTTGGGGATT
TrCAAAAGATAATATTTTACATACACTGTATGTTATAGAACTTCATGGATC
AGATCTGGGGCAGCAACCTATAAATCAACACCTTAATATGCTGCAACAAA
ATGTAGAATATTCAGACAAAATGGATACATAAAGACTAAGTAGCCCATAA
GGGGTCAAAATTTGCTGCCAAATGCGTATGCCACCAACTTACAAAAACAC
TTCGTTCGCAGAGCTT1TCAGATTGTGGAATGTTGGATAAGGAATTATAGA
CCTCTAGTAGCTGAAATGCAAGACCCCAAGAGGAAGTTCAGATCTTAATA
TAAATTCACTTTCATTTTTGATAGCTGTCCCATCTGGTCATGTGGTTGGCAC
TAGACTGGTGGCAGGGGCTTCTAGCTGACTCGCACAGGGATTCTCACAAT
AGCCGATATCAGAATTTGTGTTGAAGGAACTTGTCTCXTCATCTAATATGA
TAGCGGGAAAAGGAGAGGAAACTACTGCCTTTAGAAAATATAAGTAAAG
TGATTAAAGTGCTCACGTTACCTTGACACATAGTTTTTCAGTCTÀTGGGTT
TAGTTACTTTÀGATGGCAAGCATGTAACTTATATTAATAGTAATTTGTAAA
GTTGGGTGGATAAGCTATCCCTGTTGCCGGTTCATGGATTACTTCTCTATA
AAAAATATATATTTACCAAAAAATTTTGTGACATTGCTTCTCCCATCTCTT
CCTTGACATGCATTGTAAATAGGTTCTTCTTGTTCTGAGATTCAATATrGA
ATTTCTCCTATGCTATTGACAATAAAATATTATTGAACTACC SEQIDNO: 102 Molécula de Adesão Celular 5 Relacionada a Antígeno Car-cinoembriônico >gi|11386170|ref|NM_004363.1| Molécula de adesão celular 5 relacionada a antígeno carcinoembrtônico (CEACAM5), mRNA | qPCR en- saio_em_combinação_de contexto em__questão [2128,.2152] CTCAGGGCAGAGGGAGGAAGGACAGCAGACCAGACAGTCACAGC
AGCCTTGACAAAACGTTCCTGGAACTCAAGCTCTTCTCCACAGAGGAGGA
CAGAGCAGACAGCAGAGACCATGGAGTCTCCCTCGGCCCCTCCCCACAGA
TGGTGCATCCCCTGGCAGAGGCTCCTGCTCACAGCCTCACTXCTAACCTTC
TGGAACCCGCCCACCACTGCCAAGCTCACTATTGAATCCACGCCGTTCAAT
GTCGCAGAGGGGAAGGAGGTGCTTCTACTTGTCCACAATCTGCCCCAGCA
TCTTTTTGGCTACAGCTGGTACAAAGGTGAAAGAGTGGATGGCAACCGTC
AAATTATAGGATATGTAATAGGAACTCAACAAGCTACCCCAGGGCCCGCA
TACAGTGGTCGAGAGATAATATACCCCAATGCATCCCTGCTGATCCAGAA
CATCATCCAGAATGACACAGGATTCTACACCCTACACGTCATAAAGTCAG
ATCTTGTGAATGAAGAAGCAACTGGCCAGTTCCGGGTATACCCGGAGCTG
CCCAAGCCCTCCATCTCCAGCAACAACTCCAAACCCGTGGAGGACAAGGA
TGCTGTGGCCTTCACCTGTGAACCTGAGACTCAGGACGCAACCTACCTGTG
GTGGGTAAACAATCAGAGCCTCCCGGTCAGTCCCAGGCTGCAGCTGTCCA
ATGGCAACAGGACCCTCACTCTATTCAATGTCACAAGAAATGACACAGCA
AGCTACAAATGTGAAACCCAGAACCCAGTGAGTGCCAGGCGCAGTGATTC
AGTCATCCTGAATGTCCTCTATGGCCCGGATGCCCCCACCATTTCCCCTCT
AAACACATCTTACAGATCAGGGGAAAATCTGAACCTCTCCTGCCACGCAG
CCTCTAACCCACCTGCACAGTACTCTTGGTTTGTCAATGGGACTTTCCAGC
AATCCACCCAAGAGCTCTTTATCCCCAACATCACTGTGAATAATAGTGGAT
CCXATACGTGCCAAGCCCATAACTCAGACACTGGCCTCAATAGGACCACA
GTCACGACGATCACAGTCTATGCAGAGCCACCCAAACCCTTCATCACCAG
CAACAACTCCAACCCCGTGGAGGATGAGGATGCTGTAGCCTTAACCTGTG
AACCTGAGATTCAGAACACAACCTACCTGTGGTGGGTAAATAATCAGAGC
CTCCCGGTCAGTCCCAGGCTGCAGCTGTCCAATGACAACAGGACCCTCAC
TCTACTCAGTGTCACAAGGAATGATGTAGGACCCTATGAGTGTGGAATCC
AGAACGAATTAAGTGTTGACCACAGCGACCCAGTCATCCTGAATGTCCTC
TATGGCCCAGACGACCCCACCATTTCCCCCTCATACACCTATTACCGTCCA
GGGGTGAACCTCAGCCTCTCCTGCCATGCAGCCTCTAACCCACCTGCACA
GTATTCTTGGCTGATTGATGGGAACATCCAGCAACACACACAAGAGCTCT
TTATCTCCAACATCACTGAGAAGAACAGCGGACTCTATACCTGCCAGGCC
AATAACTCAGCCAGTGGCCACAGCAGGACTACAGTCAAGACAATCACAGT
CTCTGCGGAGCTGCCCAAGCCCTCCÀTCTCCAGCAACAACTCCAAACCCG
TGGAGGACAAGGATGCTGTGGCCTTCACCTGTGAACCTGAGGCTCAGAAC
ACAACCTACCTGTGGTGGGTAAATGGTCAGAGCCTCCCAGTCAGTCCCAG
GCTGCAGCTGTCCAATGGCAACAGGACCCTCACTCTATTCAATGTCACAA
GAAATGACGCAAGAGCCTATGTATGTGGAATCCAGAACTCAGTGAGTGCA
AACCGCAGTGACCCAGTCACCCTGGATGTCCTCTATGGGCCGGACACCCC
CATCATTTCCCCCCCAGACTCGTCTTACCTTTCGGGAGCGAACCTCAACCT
CTCCTGCCACTCGGCCTCTAACCCATCCCCGCAGTATTCTTGGCGTATCAA
TGGGATACCGCAGCAACACACACAAGTTCTCTTTATCGCCAAAATCACGC
CAAATAATAACGGGACCTATGCCTGTTTTGTCTCTAACTTGGCTACTGGCC
GCAATAATTCCATAGTCAAGAGCATCACAGTCTCTGCATCTGGAACTTCTC
CTGGTCTCTCAGCTGGGGCCACTGTCGGCATCATGATTGGAGTGCTGGTTG
GGGTTGCTCTGATATAGCAGCCCTGGTGTAGTTTCTTCATTTCAGGAAGAC
TGACAGTTGTTTTGCTTCTTCCTTAAAGCATTTGCAACAGCTACAGTCTAA
AATTGCTTCTTTACCAAGGATATTTACAGAAAAGACTCTGACCAGAGATC
GAGACCATCCTAGCCAACATCGTGAAACCCCATCTCTACTAAAAATACAA
AAATGAGCTGGGCTTGGTGGCGCGCACCTGTAGTCCCAGTTACTCGGGAG
GCTGAGGCAGGAGAATCGCTTGAACCCGGGAGGTGGAGATTGCAGTGAG
CCCAGATCGCACCACTGCACTCCAGTCTGGCAACAGAGCAAGACTCCATC
TCAAAAAGAAAAGAAAAGAAGACTCTGACCTGTACTCTTGAATACAAGTT
TCTGATACCACTGCACTGTCTGAGAATTTCCAAAACTTTAATGAACrAACT
GACAGCTTCATGAAACTGTCCACCAAGATCAAGCAGAGAAAATAATTAAT
TTCATGGGACTAAATGAACTAATGAGGATTGCTGATTCTTTAAATGTCTTG
TTTCCCAGATTTCAGGAAACTTTTTTTCTTTTAAGCTATCCACTCTTACAGC
AATTTGATAAAATATACTTTTGTGAACAAAAATTGAGACATTTACATTTTC
TCCCTATGTGGTCGCTCCAGACTTGGGAAACTATTCATGAATATTTATATT
GTATGGTAATATAGITArfGCACAAGTTCAATAAAAATCTGCTCTTTGTAT AACAGAAAAA SEQIDNO: 103 Metaloproteinase de Matriz 2 >gi|11342665|ref|NM_004530.1| Metaloproteinase de matriz 2 de Homo sa-piens (gelatinase A, gelatinase de 72 kDa colagenase do tipo IV de 72 kDa) (MMP2), mRNA | qPCR combinação de iniciador_adiante [1713..1732] | qP-CR combinação de iniciador_reverso [1793..1775] | qPCR combinação de sonda [1751.1773] TGTTTCCGCTGCATCCAGACTTCCTCAGGCGGTGGCTGGAGGCTGC
GCATGTGGGGCTTTAAACATACAAAGGGATTGCCAGGACCTGCGGCGGCG
GCGGCGGCGGCGGGGGCTGGGGCGCGGGGGCCGGACCATGAGCCGCTGA
GCCGGGCAAACCCCAGGCCACCGAGCCAGCGGACCCTCGGAGCGCAGCC
CTGCGCCGCGGACCÀGGCTCCAACCAGGCGGCGAGGCGGCCACACGCAC
CGAGCCAGCGACCCCCGGGCGACGCGCGGGGCCAGGGAGCGCTACGATG
GAGGCGCTAATGGCCCGGGGCGCGCTCACGGGTCCCCTGAGGGCGCTCTG
TCTCCTGGGCTGCCTGCTGAGCCACGCCGCCGCCGCGCCGTCGCCCATCAT
CAAGTTCCCCGGCGATGTCGCCCCCAÀAACGGACAAAGAGTTGGCAGTGC
AATACCTGAACACCTTCTATGGCTGCCCCAAGGAGAGCTGCAACCTGTTT
GTGCTGAAGGACACACTAAAGAAGATGCAGAAGTTCTTTGGACTGCCCCA
GACAGGTGATCTTGACCAGAATACCATCGAGACCATGCGGAAGCCACGCT
GCGGCAACCCAGATGTGGCCAACTACAACTTCTTCCCTCGCAAGCCCAAG
TGGGACAAGAACCAGATCACATACAGGATCATTGGCTACACACCTGATCT
GGACCCAGAGACAGTGGATGATGCCTTTGCTCGTGCCTTCCAAGTCTGGA
GCGATGTGACCCCACTGCGGTTTTCTCGAATCCATGATGGAGAGGCAGAC
ATCATGATCAACTTTGGCCGCTGGGAGCATGGCGATGGATACCCCTTTGA
CGGTAAGGACGGACTCCTGGCTCATGCCTTCGCCCCAGGCACTGGTGTTG
GGGGAGACTCCCATTFTGATGACGATGAGCTATGGACCTTGGGAGAAGGC
CAAGTGGTCCGTGTGAAGTATGGCAACGCCGATGGGGAGTACTGCAAGTT
CCCCTTCTTGTTCAATGGCAAGGAGTACAACAGCTGCACTGATACTGGCC
GCAGCGATGGCTTCCTCTGGTGCTCCACCACCTACAACTTTGAGAAGGAT
GGCAAGTACGGCTXCTGTCCCCATGAAGCCCTGTTCACCATGGGCGGCAA
CGCTGAAGGACAGCCCTGCAAGTTTCCATTCCGCTTCCAGGGCACATCCTA
TGACAGCTGCACCACTGAGGGCCGCACGGATGGCTACCGCTGGTGCGGCA
CCACTGAGGACTACGACCGCGACAAGAAGTATGGCTTCTGCCCTGAGACC
GCCATGTCCACTGTTGGTGGGAACTCAGAAGGTGCCCCCTGTGTCTTCCCC
TTCACTTTCCTGGGCAACAAATATGAGAGCTGCÀCCAGCGCCGGCCGCAG
TGACGGAAAGATGTGGTGTGCGACCACAGCCAACTACGATGACGACCGCA
AGTGGGGCTTCTGCCCTGACCAAGGGTACAGCCTGTTCCTCGTGGCAGCC
CACGAGTTTGGCCACGCCATGGGGCTGGAGCACTCCCAAGACCCTGGGGC
CCTGATGGCACCCATTTACACCTACACCAAGAACTTCCGTCTGTCCCAGGA
TGACATCAAGGGCATTCAGGAGCTCTATGGGGCCTCTCCTGACATTGACCT
TGGCACCGGCCCCACCCCCACACTGGGCCCTGTCACTCCTGAGATCTGCA
AACAGGÀCATTGTATTTGATGGCATCGCTCAGATOCGTGGTGAGATCTTCT
TCTTCAAGGACCGGTTCATTTGGCGGACTGTGACGCCACGTGACAAGCCC
ATGGGGCCCCTGCTGGTGGCCACATTCTGQCCTGAGCTCCCGGAAAAGAT
TGATGCGGTATACGAGGCCCCÀCAGGAGGAGAAGGCTGTGTTCTTTGCAG
GGAATGAATACTGGATCTACTCAGCCAGCACCCTGGAGCGAGGGTACCCC AAGCCACTGACCAGCCTGGGACTGCCCCCTGATGTCCAGCGAGTGGATGC.
CGCCTTTAACTGGAGCAAAAACAAGAAGACATACATCTTTGCTGGAGACA AATTCTGGAGATACAATGAGGTGAAGAAGAAAATGGATCCTGGCTTTCCC .
AAGCTCATCGCAGATGCCTGGAATGCCATCCCCGATAACCTGGATGCCGT
CGTGGACCTGCAGGGCGGCGGTCACAGCTACTTCTTCAAGGGTGCCTATI
ACCTGAAGCTGGAGAACCAAAGTCTGAAGAGCGTGAAGTTTGGAAGCATC
AAATCCGACTGGCTAGGCTGCTGAGCTGGCCCTGGCTCCCACAGGCCCTT
CCTCTCCACTGCCTTCGATACACCGGGCGTGGAGAACTAGAGAAGGACCC
GGAGGGGCCTGGCAGCCGTGCCTTCAGCTCTACAGCTAATCAGCATTCTC
ACTCCTACCTGGTAATITAAGATTCCAGAGAGTGGCTCCTCCCGGTGCCCA
AGAATAGATGCTGACTGTACTCCTCCCAGGCGCCCCnCCCCCTCCAATCC
GACCAACCCTCAGAGCCACCCCTAAAGAGATCCTTTGATATTTTCAACGCA
GCCCTGCTTTGGGCTGCCCTGGTGCTGCCACACTTCAGGCTCTTCTCCXTTC
ACAACCTTCTGTGGCTCACAGAACCCTTGGAGCCAATGGAGACTGTCTCA
AGAGGGCACTGGTGGCCCGACAGCCTGGCACAGGGCAGTGGGACAGGGC
ATGGCCAGGTGGCCAGTCCÀGACCCCTGGCTTTTCACTGCTGGCTGCCTTA
GMCCITrCTTACAlTAGCAGTnGCTTTGTATGCACXTTGTTTTTTTCTTT
GGGTCTTGTTTTTTTTTTCCACTTAGAAATTGCATTTCCTGACAGAAGGACT
CAGGTTGTCTGAAGTCACTGCACAGTGCATCTCAGCCCACATAGTGATGG
TTCCCCTGTTCACTCTACTTAGCATGTCCCTACCGAGTCTCTTCTCCACTGG
ATGGAGGAAAACCAAGCCGTGGCTTCCCGCTCAGCCCTCCCTGCCCCTCCT
TCAACCATTCCCCATGGGAAATGTCAACAAGTATGAATAAAGACACCTAC TGAGTGGC SEQIDNO: 104 Pró-proteína Subtilisina Convertase/Quexina do Tipo 5 >gi|20336245|ref|NM_006200.2| Pró-proteína subtilisina convertase/quexina do tipo 5 de Homo sapiens (PCSK5), mRNA | qPCR combinação de inicia-dor_adiante [2677..2697] ( qPCR combinação de iniciadorjeverso [2821..2801] | qPCR combinação de sonda [2737..2765] CGGAGGGAGCGCTGGGAGCGAGCAAGCGAGCGTTTGGAGCCCGGG
CCAGCAGAGGGGGCGCCCGGTCGCTGCCTGTACCGCTCCCQCTGGTCATC
TCCGCCGCGCTCGGGGGCCCCGGGAGGAGCGAGACCGAGTCGGAGAGTC
CGGGAGCCAAGCCGGGCGAAACCCAACTGCGGAGGACGCCCGCCCCACT
CAGCCTCCTCCTGCGTCCGAGCCGGGGAGCATCGCCGAGCGCCCCACGGG
CCGGAGAGCTGGGAGCACAGGTCCCGGCAGCCCCAGGGATGGTCTAGGA
GCCGGCGTAAGGCTCGCTGCTCTGCTCCCTGCCGGGGCTAGCCGCCTCCTG
CCGATCGCCCGGGGCTGCGAGCTGCGGCGGCCCGGGGCTGCTCGCCGGGC
GGCGCAGGCCGGAGAAGTTAGTTGTGCGCGCCCTTAGTGCGCGGAACCAG
CCAGCGAGCGAGGGAGCAGCGAGGCGCCGGGACCATGGGCTGGGGGAGC
CGCTGCTGCTGCCCGGGACGTTTGGACCTGCTGTGCGTGCTGGCGCTGCTC
GGGGGCTGCCTGCTCCCCGTGTGTCGGACGCGCGTCTACACCAACCACTG
GGCAGTCAAAATCGCCGGGGGCTTCCCGGAGGCCAACCGTATCGCCAGCA
AGTACGGATTCATCAACATAGGACAGATAGGGGCCCTGAAGGACTACTAC
CACTTCTACCATAGCAGGACGATTAAAAGGTCAGTTATCTCGAGCAGAGG
GÁCCCACAGTTTGATTTCAATGGAACCAAAGGTGGAATGGÀTCCAACAGC
AAGTGGTAAAAAAGCGGACAAAGAGGGATTATGACTTCAGTCGTGCCCA
GTCTACCTATTTCAATGATCCCAAGTGGCCCAGCATGTGGTATATGCACTG
CAGTGACAATACACATCCCTGCCAGTCTGACATGAATATCGAAGGAGCCT
GGAAGAGAGGCTACACGGGAAAGAACATTGTGGTCACTATCCTGGATGAC
GGAATTGAGAGAACCCATCCAGATCTGATGCAAAACTACGATGCTCTGGC
AAGTTGCGACGTGAATGGGAATGACTTGGACCCAATGCCTCGTTATGATG
CAAGCAACGÀGAACAAGCATGGGACTCGCTGTGCTGGAGAAGTGGCAGC
CGCTGCAAACAATTCGCACTGCACAGTCGGAATTGCTTTCAACGCCAAGA
TCGGAGGAGTGCGAATGCTGGACGGAGATGTCACGGACATGGTTGAAGC
AAAATCAGTTAGCTTCAACCCCCAGCACGTGCACATTTACAGCGCCAGCT
GGGGCCCGGATGATGATGGCAAGACTGTGGACGGACCAGCCCCCCTCACC
CGGCAAGCCTTTGAAAACGGCGTTAGAATGGGGCGGAGAGGCCTCGGCTC
TGTGTTTGTTTGGGCATCTGGAAATGGTGGAAGGAGCAAAGACCACTGCT
CCTGTGATGGCTACACCAACAGCATCTACACCATCTCCATCAGCAGCACT
GCAGAAAGCGGAAAGAAACCTTGGTACCTGGAAGAGTGTTCATCCACGCT
GGCCACAACCTACAGCAGCGGGGAGTCCTACGATAAGAAAATCATCACTA
CAGATCTGAGGCAGCGTTGCÁCGGACAACCAGACTGGGACGTCAGCCTCA
GCCCCCATGGCTGCAGGCATCATTGCGCTGGCCCTGGAAGCCAATCCGTTT
CTGACCTGGAGÀGACGTACAGCATGTTATTGTCAGGACTTCCCGTGCGGG ACATTTGAACGCTAATGACTGGAAAACCAATGCTGCTGGTTTTAAGGTGÀ GCCATCTTTATGGATTTGGACTGATGGACGCAGAAGCCATGGTGATGGAG
GCAGAGAAGTGGACCACCGTTCCCCGGCAGCACGTGTGTGTGGAGAGCAC
AGACCGACAAATCAAGACAATCCGCCCTAACAGTGCAGTGCGCTCCATCT
ACAAAGCTTCAGGCTGCTCGGATAACCCCAACCGCCATGTCAACTACCTG
GAGCACGTCGTTGTGCGCATCACCATCACCCACCCCAGGAGAGGAGACCT
GGCCATCTACCTGACCTCGCCCTCTGGAACTAGGTCTCAGCTTTTGGCCAA
CAGGCTATTTGATCACTCCATGGAAGGATTCAAAAACTGGGÀGTTCATGA
CCÁTTCATTGCTGGGGAGAAAGAGCTGCTGGTGACTGGGTCCTTGAAGTT TATGATACTCCCTCTCAGCTAAGGAACTTTAAGACTCCAGGTAAATTGAAl AGAATGGTCTTTGGTCCTCTACGGCACCTCCGTGCAGCCATATTCACCAAC
CAATGAATTTCCGAAAGTGGAACGGTTCCGCTATAGCCGAGTTGAAGACC
CCACAGACGACTATGGCACAGAGGATTATGCAGGTCCCTGCGACCCTGAG
TGCAGTGAGGTTGGCTGTGACGGGCCAGGACCAGACCACTGCAATGACTG
TTTGCACTACTACTACAAGCTGAAAAACAATACCAGGATCTGTGTCTCCA
GCTGCCCCCCTGGCCACTACCACGCCGACAAGAAGCGCTGCAGGAAGTGT
GCCCCCAACTGTGAGTCCTGCTTTGGGAGCCATGGTGACCAATGCATGTCC
TGCAAATATGGATACTTTCTGAATGAAGAAACCAACAGCTGTGTTACTCA
CTGCCCTGAXGGGTCATATCAGGATACCAAGAAAAATCTTTGCCGGAAAT
GCAGTGAAAACTGCAAGACATGTACTGAATTCCATAACTGTACAGAATGT
AGGGATGGGTTAAGCCTGCAGGGATCCCGGTGCTCTGTCTCCTGTGAAGA
TGGACGGTATTTCAACGGCCAGGACTGCCAGCCCTGCCACCGCTTCTGCG
CCACTTGTGCTGGGGCAGGAGCTGATGGGTGCATTAACTGCACAGAGGGC
TACTTCATGGAGGATGGGAGATGCGTGCAGAGCTGTAGTATCAGCTATTA
CTTTGACCACTCTTCAGAGAATGGATACAAATCCTGCAAAAAATGTGATA
TCAGTTGTTTGACGTGCAATGGCCCAGGATTCAAGAACTGTACAAGCTGC
CCTAGTGGGTATCTCTTAGACTTAGGAATGTGTCAAATGGGAGCCATTTGC
AAGGATGCAACGGAAGAGTCCTGGGCGGAAGGAGGCTTCTGTATGCTTGT
GAAAAAGAACAATCTGTGCCAACGGAAGGTTCTTCAACAACTTTGCTGCA
AAACATGTACATTTCAAGGCTGAGCAGCCATCTTAGATTTCTTTGTTCCTG
TAGACTTATAGATTATTCCATATTATTAAAAAGAAAAAAAAAAGCCAAAA AG SEQIDNO: 105 Carboxipeptiase N, polipeptídeo 2,83 kD
>gi|18554966|ref[XM 087358.11 Carboxipeptidase N, polipeptídeo 2, 83 kD de Homo sapiens, mRNA | ATGGGTTGTGACTGCTTCGTCCAGGAGGTGTTCTGCTCAGATGAGG
AGCTTGCCACCGTCCCGCTGGACATCCCGCCATATACGAAAAACATCATC
TTTGTGGAGACCTCGTTCACCACATTGGAAACCAGAGCTTTTGGCAGTAAC
CCCAACTTGACCAAGGTGGTCTTCCTCAACACTCAGCTCTGCCAGTTTAGG
CCGGATGCCTTTGGGGGGCTGCCCAGGCTGGAGGACCTGGAGGTCACAGG
CAGTAGCTTCTTGAACCTCAGCACCAACATCTTCTCCAACCTGACCTCGCT
GGGCAAGCTCACCCTCAACTTCAACATGCTGGAGGCTCTGCCCGAGGGTC
TTTTCCAGCACCTGGCTGCCCTGGAGTCCCTCCACCTGCAGGGGAACCAGC
TCCAGGCCCTGCCCAGGAGGCTCTTCCAGCCTCTGACCCATCTGAAGACA
CTCAACCTGGCCCAGAACCTCCTGGCCCAGCTCCCGGAGGAGCTGTTCCA
CCCACTCACCAGCCTGCAGACCCTGAAGCTGAGCAACAACGCGCTCTCTG
GTCTCCCCCAGGGTGTGTTTGGCAAACTGGGCAGCCTGCAGGAGCTCTTCC
TGGACAGCAACAACATGTCGGAGCTGCCCCCTCAGGTGTTCTCCCAGCTCT
TCTGCCTAGAGAGGCTGTGGCTGCAACGCAACGCCATCACGCACCTGCCG
CTCTCCATCTTTGCCTCCCTGGGTAATCTGACCTTTCTGAGCTTGCAGTGG
AACATGCTTCGGGTCCTGCCTGCCGGCCTCTTTGCCCACACCCCATGCCTG
GTTGGCCTGTCTCTGACCCATAACCAGCTGGAGACTGTCGCTGAGGGCAC
CTTTGCCCACCTGTCCAACCTGCGTTCCCTCATGCTCTCATACAATGCCATT
ACCCACCTCCCAGCTGGCATCTTCAGAGACCTGGAGGAGTTGGTCAAACT
CTACCTGGGCAGCAACAACCTTACGGCGCTGCACCCAGCCCTCTTCCAGA
ACCTGTCCAAGCTGGAGCTGCTCAGCCTCTCCAAGAACCAGCTGACCACA
CTTCCGGAGGGCÀTCTTCGACACCAACTACAACCTGTTCAACCTGGCCCTG
CACGGTAACCCCTGGCAGTGCGACTGCCACCTGGCCTACCTCTTCAACTGG
CTGCAGCAGTACACCGATCGGCTCCTGAACATCCAGACCTACTGCGCTGG
CCCTGCCTACCTCAAAGGCCAGGTGGTGCCCGCCTTGAATGAGAAGCAGC
XGGTGTGTCCCGTCACCCGGGACCACTTGGGCTTCCAGGTCACGTGGCCG
GACGAAAGCAAGGCAGGGGGCAGCTGGGATCTGGCTGTGCAGGAAAGGG
CAGCCCGGAGCCAGTGCACCTACAGCAACCCCGAGGGCACCGTGGTGCTC
GCCTGTGACCAGGCCCAGTGTCGCTGGCTGAACGTCCAGCTCTCTCCTTGG
CAGGGCTCCCTGGGACTGCAGTACAATGCTAGTCAGGAGTGGGACCTGAG
GTCGAGCTGCGGTTCTCTGCGGCTCACCGTGTCTATCGAGGCTCGGGCAGC
AGGGCCCTAGTAGCAGCGCATACAGGAGCTGGGGAAGGGGGCTTTGGGG
CCTGCCCACGCGACAGGTAGGGGCGGAGGGGAGCTGAGTCTCCGAAGCTT GGCTTT SEQID NO: 106 Proteína 4 de Ligação de Hialuronano e Proteoglicano >gi|30794471|ref|NM_023002.1| Proteína 4 de ligação de hialuronano e pro- teogiicano de Homo sapiens, (HAPLN4), mRNA
CGGGGGCCGCGCGGGCAAGATGGTGTGCGCTCGGGCGGCCCTCGG
TCCCGGCGCGCTCTGGGCCGCGGCCTGGGGCGTCCTGCTGCTCACAGCCC
CTGCGGGGGCGCAGCGTGGCCGGAAGAAGGTCGTGCACGTGCTGGAGGG
TGAGTCGGGCTCGGTAGTGGTACAGACAGCGCCTGGGCAGGTGGTAAGCC
ACCGTGGTGGCACCATCGTCTTGCCCTGCCGCTACCACTATGAGGCAGCC
GCCCACGGTCACGACGGCGTCCGGCTCAAGTGGACAAAGGTGGTGGACCC
GCTGGCCTTCACCGACGTCTTCGTGGCACTAGGCCCCCAGCACCGGGCÀTT
CGGCAGCTACCGTGGGCGGGCTGAGCTGCAGGGCGACGGGCCTGGGGAT
GCCTCCCTGGTCCTCCGCAACGTCACGCTGCAAGACTACGGGCGCTATGA
GTGCGAAGTCACCAATGAGCTGGAAGATGACGCTGGCATGGTCAAGCTGG
ACCTGGAAGGCGTGGTCTTTCCCTÀCCACCCCCGTGGAGGCCGATACAAG
CTGACCTTCGCGGAGGCGCAGCGCGCGTGCGCCGAGCAGGÀCGGCATCCT
GGCATCTGCAGAACAGCTGCACGCGGCCTGGCGCGACGGCCTGGACTGGT
GCAACGCGGGCTGGTTGCGCGACGGCTCAGTGCAATACCCCGTGAACCGG
CCCCGGGAGCCCTGCGGCGGCCTGGGGGGGACCGGGAGTGCAGGGGGCG
GCGGTGATGCCAACGGGGGCCTGCGCAACTACGGGTATCGCCATAACGCC
GAGGAACGCTACGACGCCÍTCTGCTTCACGTCCAACCTGCCGGGGCGCGT
GTTCTTCCTGAAGCCGCTGCGACCTGTACCCTTCTCCGGAGCTGCGCGCGC
GTGTGCTGCGCGTGGCGCGGCCGTGGCCAAGGTGGGGCAGCTGTTCGCCG ΟΟΤΟΟΑΑΟϋΤθΟΑΟαΤΟΟΤΑβΑίΧΟσΓΟΟΑίΧΟΟΟΟΟπΟΟΟΤΟΟαΉΑΤ GGCAGTGCGCGCTACCCCATCGTGAACCCGCGAGCGCGCTGCGGAGGCCG
CAGGCCTGGTGTGCGCAGCCTCGGCTTCCCGGACGCCACCCGACGGCTCT
TCGGCGTCTACTGCTACCGCGCTCCAGGAGCACCGGACCCGGCACCTGGC
GGCTGGGGCTGGGGCTGGGCGGGCGGCGGCGGCTGGGCAGGGGGCGCGC
GCGATCCTGCTGCCTGGACCCCTCTGCACGTCTAGGCTGGGAGTAGGCGG
ACAGCCAGGGCGCTTGACCACTGGTCTAGAGCCCTGTGGTCCCCTGGAGC
CTGGCCACGCCCTTGAAGCCCTGGACACTGGCCACATTCCCTGTGGTCCCT
TACAAACTAACTGTGCCCCTGGGGTCCCTGAAGACTGGCTAGTCCTGGCA
GAACAGTACTTTGGAGTTCCCTGGAGCCTGGCCAGCCCTCACCTCTTCTGG
ATAGAGGATTCCCCCAACTCCCCAACTTTCTCCATGAGGGTCACGCCCCCT
GAGGACCTCAGGAGGCCAGCAGAACCCGCAGGCTCCTGAAGACTGGCCA
CGCCTCCTGAGACCACnGGAAACAGACCAACTGCCCCCGTGGTCGCCTG
GTGGCTGGACCCCCGGGATTGACTAGAGACCGGCCGTACACCTTGTGCAT
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TATGGTGACCTGAGXCCTGGAGACTCCCATTCTCCCCCTCTCCCTGAGAGT
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GGGGGCCACGTCCCACCCCTCAGATATTTCTTTGAAGGGAGAGCAAACCC
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CCAGGCCTGGGGACCGGTAAGATCCATGTCACTAGTTATGCAGAGCAGTT
GCCrrGGGTCCCACTGTCACCAAGGCAACCAGTCCTGCTGCTACCTGTCAC
CTAGAGTCACACACCCCTTCCCTCATCAGGCACACCCATGAAGACAGTGC
CTCCCTCCTCCAGCTGTAACCÀTGGATACCACACATTTCTCATCTCATTGG
CCCCCACCCCAGAGACCTCCACCTCAACTTCTGGCTGTCCCTACCCTGACT
CACCGCCATGGAGATCACCCTCCCCGAAGCTGTCGCCAGGGTGACCCAAC
ATCCAGTTCTCCGGCTCTCACCATGGAAACAAACTGTCCCTGTCCCCAGGC
CCACTCCAGTTCCAGACCACCCTCCATGCTCCACCCCCAGGCGGTTTGGAC
CCCACCACTGTTGCCATGGTGACCAAACTCTGGAGTCCGAGGTAACAGAA
CACCTGTCCCCCTAGGCmTCCTTGTGGACAACGGGGCCCTGTTCACCAA
GCTGTTGCCATAGAGACTGTCAACGTTGTCCTCATGACAACCAGACTTCCA
GTTCTCAGGAACTTCTCATTGTGGGCCAGAAGTCCTGGGTGCCTCCTACTA
GGGCTACCCTACTGCACCCCATCAGGGGCCTGATGGCTGCCCCTTCCCCAG
ACAGGGCTGGACTTCTGGAGCTGCTAAGCCACCCTCCGTTTGCACGTTAAC
TCTATGCCGGATAGCAGCTGTGCACGAGACAATCTTGCAACACCCGGGCA
TGTTTGTCGTCGTCCTACAAATGAGGAAACCGAGCCTATGGCGTGCCCTG
GTCTGTTGAGATATGCAAGCACTGAGCTCCTCTTTTGTCCTCTGAGACCCC ATCTCCATTCTCACCCAGTTCCTCTCTCCTTCCCTGACCCCCACCCACATrr CCCTCCTTAGAGATCCAGGAGGGATCGAATGTTCTTTAAAArrCAACACC
CACCAGGCTCTAAGCGGCGATCTGTGCTAAGAGGTCAGGACCCAGCCGAA
GTCCTCGGCGTTGACAGGCAGCTGGGGGGACATGATCCATGGACAAGGCC
ATCCCGGCCGTGGGAGACCCCAGTCCCGAAGTC1TGCCTGCAGGAGTACT
GGGGTCCCCCTGGGGCCCTCTTTACTGTCACGTCATCTCTAGGAAACCTAT
CTCTGAGTTTTGGGACCAGGTCGGTTTGGGTTTGAATTCTGCCTCTTCTTGC
TCACTGTGTGACCAAGTGACAAACTCCTTCTGAACCTGTGTTCTCCCÀCTG
TACCAGGGCTGTTCTGTGGTCCCCGTGAGTGCCAAGCATACAGTAGGGGC TCAATAAATCCTTGT SEQ ID NO: 107 Anti-soro Seções congeladas de 8 uM foram cortadas de blocos de tecido e montadas em lâminas APES. O tecido foi então fixado em acetona por 10 minutos antes de ser seco ao ar. As lâminas foram então embebidas em pe-róxido de hidrogênio a 0,3% em metanol por 10 minutos e lavadas em solução saiina tamponada com fosfato (PBS). Locais de ligação não-específicos foram bloqueados através de incubação das lâminas em soro a 20% do animal apropriado e lavagem novamente em PBS. O anticorpo primário diluído em PBS contendo soro a 1% foi então adicionado às lâminas. Após incubação por 1 hora, as lâminas foram novamente lavadas em PBS antes da incubação com anticorpo secundário por mais 1 hora. Após a lavagem final em PBS, o anticorpo secundário foi detectado com tetracloridrato de diamino-benzidina dissolvido em solução salina Tris tamponada (TBS), antes de ser lavada com em TBS e água. As lâminas foram então contra-ingidas em he-matoxilina e vistas sob um microscópio de luz.
Em certas modalidades, tumores gástricos podem ser localizados in situ usando manchas à base de marcadores de câncer da presente invenção. Pelo menos um marcador pode formar estruturas de amilóide que podem ser visualizadas usando um vermelho Congo ou equivalente, manchas de amilóide não-específicos.
Testes para Marcadores de Câncer Gástrico em Fluidos do Corpo Em várias modalidades, ensaios para GTM podem ser deseja-velmente realizados em amostras obtidas de sangue, plasma, soro, fluido peritoneal obtido, por exemplo, usando lavagens peritoneais, ou outros fluidos do corpo, tal como urina, linfo, fluido cerebroespinhal, fluido gástrico ou amostras de fezes.
Em geral, métodos para ensaio quanto a oligonucleotídeos, proteínas e peptídeos nesses fluidos são conhecidos na técnica. A detecção de oligonucleotídeos pode ser realizada usando métodos de hibridização, tal como Northern blots, Southern blots ou métodos de microdisposição ou qP-CR. Métodos para detecção de proteínas incluem, tais como ensaios imuno-absorventes ligados à enzima (ELISA), lascas de proteína tendo anticorpos, radioimunoensaio de contas em suspensão (RIA), Western blotting e ligação de lectina. No entanto, para propósitos de ilustração, os níveis no fluido de um GTM podem ser quantificados usando um ensaio imunoabsorvente ligado à enzima do tipo sanduíche (ELISA). Para ensaios de plasma, uma alíquota de 5 uL de uma amostra apropriadamente diluída ou GTM padrão serialmente diluído e 75 uL de anticorpo GTM anti-humano conjugado com pe-roxidase são adicionados às cavidades de uma placa de microtitulação. A-pós um período de incubação de 30 minutos a 30° C, as cavidades são lavadas com Tween 20 a 0,05% em solução salina tamponada com fosfato (PBS) para remover anticorpo não-ligado. Complexos ligados de GTM e an- ticorpo anti-GTM são então incubados com o-fenilenodiamina contendo H2O2 por 15 minutos a 30° C. A reação é parada através da adição de H2SO41M e a absorbância a 492 nm é medida com uma leitora de placa de microtitula-ção.
Pode ser compreendido que anticorpos antic-GTM podem ser anticorpos monoclonais ou anti-soro policlonal. Pode ser também compreendido que qualquer outro fluido do corpo pode ser adequadamente estudado.
Certos marcadores são sabidos estar presentes em plasma ou soro. Esses incluem osteopontina (Hotte e outros, Câncer, 95(3):507-510 (2002)), antígeno específico de próstata (Martin e outros, Prostate Câncer Prostatic Dis. (9 de março, 2004) (Pub. Med. No: PMID: 15007379), tiroglo-bulina (Hall e outros, Laryngoscope 113(1):77-81 (2003); Mazzaferri e outros, J. Clin. Endocrinol. Metab. 88(4):1433-1421 (2003); metaloproteinase de matriz-2 e -9 (Kuo e outros, Clin. Chem. Acta. 294(1-2):157-168 (2000), CEA e TIMP1 (Pellegrini e outros, Câncer Immunol. Immunother. 49(7):388-394 (2000). Desse modo, devido ao fato de alguns dos marcadores acima serem também marcadores úteis para GTM, plasma, soro ou outros ensaios de fluido já estão também disponíveis para sua detecção e quantificação. Devido ao fato de que muitas proteínas são ou (1) secretadas pelas células, (2) descartadas de membranas celulares ou (3) são perdidas das células quando da morte celular, outros GTM também estão presentes em fluidos do corpo, tal como plasma, soro e similar. Desse modo, em modalidades da presente invenção, a detecção de GTM em amostras convenientemente obtidas será útil e desejável e pode ser uma base para diagnóstico de câncer gástrico.
Análise Western As proteínas foram extraídas de tecido gástrico usando um método de extração de TriReagente e HCI de guanidina. A fase não-aquosa da extração de TriReagente de RNA foi misturada com 1,5 volume de etanol e centrifugada para remover DNA e meio OCT. 0,5 ml de sobrenadante foi misturado com 0,75 ml de isopropanol, incubado em temperatura ambiente por 10 minutos e então centrifugado. O pélete foi lavada três vezes em 1 ml de HCI 0,3M de guanidina em 95% de etanol e uma vez em etanol sozinho, então ressuspensa em 50 ul de SDS a 1 %.
As proteínas foram quantificadas e eletroforadas em géis de po-liacrilamida SDS usando métodos padrão. Em resumo, as proteínas separadas foram transferidas para membrana de PVDF usando a célula de transferência eletroforética trans-blot BioRad usando metodologia padrão. As membranas foram então bloqueadas com uma solução contendo leite em pó sem gordura por 30 minutos antes de serem incubadas com anticorpo primário por 2 horas em temperatura ambiente. Após lavagem, a membrana foi incubada com anticorpo secundário por 1 hora em temperatura ambiente. Após lavagens finais, anticorpo secundário foi visualizado usando o sistema de detecção ECL (Amersham Biosciences).
Detecção de marcadores no soro pode ser realizada ao prover uma amostra de soro usando métodos conhecidos e então submissão da amostra de soro à análise, ou usando sondas de oligonucleotídeo ou anticorpos direcionados contra a proteína de interesse. Imunoblotting, incluindo análise Western blotting, pode ser especialmente útil para determinar se proteínas alternativamente expressas estão presentes no soro. Adicionalmente, outros fluidos do corpo podem conter marcadores e incluem fluido peritoneal, fluido cerebroespinhal e similar. Não é necessário que um marcador seja secretado, em um sentido fisiológico, para ser útil. Pelo contrário, qualquer mecanismo através do qual uma proteína ou gene marcador entra no soro pode ser eficaz na produção de um nível detectável, quantificável, do marcador. Desse modo, secreção normal de proteínas solúveis de células, partes soltas de proteínas de membranas de plasma, secreção de formas alternativamente unidas de mRNA ou proteínas expressas a partir dele, morte celular (ou apoptótica) podem produzir níveis suficientes do marcador para serem úteis. Há um apoio grande para o uso de marcadores de soro como ferramentas para diagnóstico e/ou avaliação da eficácia da terapia para uma variedade de tipos de câncer.
Yoshikawa e outros (Câncer Letters, 151:81-86 (2000) descrevem inibidor de tecido de metaloproteinase de matriz-1 em plasma de paci- entes com câncer gástrico.
Rudland e outros (Câncer Research 62:3417-3427 (2002) descrevem osteopontina como uma proteína associada à metástase em câncer de mama humano.
Buckhaults e outros (Câncer Research 61:6996-7001 (2002) descreve certos genes secretados e genes de superfície de célula expressos em tumores colorretais.
Kim e outros (JAMA 287(13):1671-1679 (2002) descreve osteopontina como um biomarcador de diagnóstico potencial para câncer ovaria-no.
Hotte e outros {A.J. American Câncer Society 95(3):507-512 (2002) descreve osteopontina de plasma como uma proteína detectável em fluidos do corpo humano e está associada com certos males.
Martin e outros (Prostate Câncer Prostatic Dis., 9 de março, 2004 (PMID: 15007379) (Resumo) descreveram o uso de calicreína 2, antí-geno específico de próstata (PSA) e PSA livre como marcadores para detecção de câncer de próstata.
Hall e outros (Laryngoscope 113(1):77-81 (2003) (PMID: 12679418) (Resumo) descreveram valor previsivo de tiroglobulina no soro em câncer de tireóide.
Mazzaferi e outros {J. Clin. Endocrinol. Metab., 88(4):1433-1441 (2003) (Resumo) descrevem tiroglobulina como um método de monitoramento potencial para pacientes com carcinoma da tireóide.
Whitley e outros {Clin. Lab. Med. 24(1 ):29-47 (2004) (Resumo) descrevem tiroglobulina como um marcador de soro para carcinoma da tireóide.
Kuo e outros {Clin. Chim. Acta. 294(1-2):157-168 (2000) (Resumo) descrevem metaloproteinase de matriz-2 e -9 de soro em pacientes infectados com HCF e HBV.
Koopman e outros (Câncer Epidemíol. Biomarkers Prev. 13(3):487-491 (2004) (Resumo) descrevem osteopontina como um biomarcador para adenocarcinoma pancreático.
Pellegrini e outros (Câncer Immunol. immunother. 49(7):388-394 (2000) (Resumo) descrevem medição de antígeno carcinoembriônico solúvel e TIMP1 como marcadores para câncer colorretal pré-invasivo.
Desse modo, foram identificados vários genes e/ou proteínas que são úteis para desenvolvimento de reagentes, dispositivos e kits para detecção e avaliação de câncer gástrico. Um ou mais marcadores de câncer gástrico podem ser usados sozinhos ou em combinação para prover um teste molecular confiável para câncer gástrico.
EXEMPLOS
Os exemplos descritos aqui são pra propósitos de ilustração das modalidades da invenção. Outras modalidades, métodos e tipos de análises estão dentro do escopo de pessoas versadas na técnica de diagnóstico molecular e não precisam ser descritas em mais detalhes aqui. Outras modalidades dentro do escopo da técnica são consideradas ser parte da presente invenção.
Exemplo 1: Identificação de Marcadores para Mal Gástrico A Figura 2 ilustra uma tabela que mostra os resultados de estudos usando 38 marcadores para mal gástrico selecionados usando os critérios acima. A Figura 2 inclui o símbolo para o gene ("símbolo"), o oligo número MWG, o número de seqüência de referência de mRNA de NCBI, o número da seqüência de referência da proteína, a mudança de vezes entre expressão de gene de tumor e não-tumor, a classificação de mudança de vez relativo a outros genes na análise de microdisposição, os resultados de um Teste t de estudante original, não-ajustado, os resultados do valor p ajustado Bonferroni e os resultados do teste Wilcoxon de 2 amostras. A mudança de vez média (tumor: tecido não-maligno) para esses 34 genes variou de 1,6 a 7 e a mudança média na classificação de mudança de vez variou de -16,995 a -25,783. A mudança máxima possível na classificação de mudança de vez era -29,718. Para cada um dos marcadores mostrados, a significância estatística de sua especificidade como marcadores de câncer foi verificada ser extremamente alta. Os valores p ajustados Bonferroni eram, em geral, todos abaixo de 10'6 ou menos, indicando que diagnóstico usando esses marcadores está muito altamente associado com câncer gástrico.
As três cistatinas (CST1, CST2 e CST4) são altamente homólogas e representadas pelo mesmo oligonucleotídeo na microdisposição e a menos que de outro modo declarado, são referidas coletivamente como "CST1,2,4".
Todas as proteínas ilustradas na Figura 2 foram previstas ter peptídeos de sinal usando o pacote SMART (European Molecular Biology Laboratory). Os peptídeos de sinal são sabidos direcionar proteínas sintetizadas para o compartimento extracelular e podem então ser secretados no fluido intersticial, a partir do qual eles podem ter acesso ao sangue. Na verdade, algumas proteínas da presente invenção foram detectadas no soro.
Cada um dos genes ilustrados na Figura 2 exibiu uma mudança na classificação de intensidade maior do que os dois oligonucleotídeos na disposição correspondente a CEA, o marcador mais freqüente usado na prática clínica para monitorar a progressão de câncer gástrico.
Exemplo 2: Análise de qPCR A quantificação mais sensível e precisa de expressão de gene foi obtida para um subconjunto dos genes mostrados na Figura 3 usando qPCR. RNA de 46 amostras de tumor e 49 não-malignas foi analisado para 23 genes identificados pela análise de microdisposição (Figura 2) e os resultados são mostrados na Figura 3. A Figura 3 inclui o símbolo de gene, mudança de vez média entre tecido de câncer e normal e a % de amostras de tumor com níveis de expressão maiores do que a 95a porcentagem de níveis de expressão em amostras não-malignas. 12 amostras de tumor e 9 amostras normais foram excluídas da análise por causa de contaminação de célula normal alta (>75%), um alto grau de necrose (>40%) ou sinal de hibridiza-ção pobre nas microdisposições. A mudança de vez média (tecidos de tumor comparados com a expressão de tecido não-maligno média) para esses 23 genes variou de 3 a 525 vezes (Figura 3). O nível de expressão de genes ASPN, CST1,2,4, LOXL2, TIMP1, SPP1, SFRP4, INHBA, THBS2 e SPARC era maior em tumores do que a 95a porcentagem da faixa não-maligna para > 90% de casos (Figura 3). Para o restante dos genes, a expressão em tumores era maior do que a 95a porcentagem em >50% de amostras. Cada tumor superexpressou pelo menos sete genes mais do que a 95a porcentagem indicando que combinações de marcadores vão levar à cobertura compreensiva de todos os tumores gástricos.
Exemplo 3: Validação de Dados de Disposição Usando qPCR
Os dados de disposição foram validados usando PCR de tempo real, quantitativa, (qPCR) nas amostras de tumor e não-malignas com sondas de 24 genes. De todos os 24 genes estudados, 20 mostraram uma correlação forte entre as duas técnicas. Quatro dessas análises são mostradas nas Figuras 4a-4d, que ilustram gráficos da expressão relativa para os 4 marcadores de câncer selecionados detectados usando métodos de disposição e qPCR. Para cada gráfico na Figura 4, o eixo horizontal representa a mudança de vez log2 de disposição na expressão do gene e o eixo vertical representa a mudança de vez log2 de qPCR na expressão de gene. Foi verificado que havia uma correlação forte entre os dois métodos, conforme indicado pela relação de co-variância entre os métodos. A correlação forte indica que ambas análises de mudança de vez de microdisposição e qPCR são métodos adequados para detecção de mudanças na expressão de genes marcadores de câncer gástrico e então podem ser usadas como um método de avaliação preciso, sensível. Pode ser também compreendido a partir das Figuras 4a-4d que qPCR pode ser mais sensível em detectar mudanças na expressão do que os métodos de disposição. Desse modo, em situações onde detecção precoce é especialmente desejada, qPCR pode ser especialmente útil.
As Figuras 5a-5w mostram histogramas comparando a freqüên-cia de observação de expressão de cada um de uma série de 23 genes (eixo vertical) e a mudança de vez log2 na expressão para esse gene (eixo horizontal), para ambos tecido normal (barras abertas) e tecidos de tumor (barras pretas). Foi surpreendentemente verificado que para cada um desses 23 genes havia uma separação substancial na distribuição de frequência entre tecido normal e de tumor, conforme refletido pelo baixo grau de sobreposição entre as curvas de distribuição de freqüência. Por exemplo, a Figura 5b mostra os resultados para CST1,2, 4 para a qual havia apenas uma amostra norma! observada ter um nível de expressão na faixa de tumor. Em outros casos (por exemplo, Figura 5n; para PSR11) cada curva de distribuição de freqüência era relativamente estreita e havia um grau de sobreposição. No entanto, mesmo para este marcador, a mudança de vez log2 média mostrou uma separação substancial da quantidade de expressão de gene. Em outros casos, (por exemplo, Figura 5a; ASPN), embora houvesse alguma sobreposição, havia uma separação clara da expressão de vez log2 média entre amostras normais e de tumor. A Figura 6 mostra um histograma do número de genes exibindo uma expressão significantemente aumentada ("superexpressão") em amostras de tumor comparado com amostras normais (eixo vertical) e as amostras individuais testadas. Em cada caso, a amostra de tumor exibia genes múltiplos com níveis de expressão elevados. O menor número de genes tendo expressão aumentada era 7, encontrado na amostra E123. Esta constatação indica que, em situações onde genes múltiplos são superexpressos com relação ao tecido normal, a confiabilidade de detecção de câncer pode ser muito alta, tornando diagnóstico de câncer mais certo. No entanto, em alguns casos, a elevação da expressão de um único gene marcador é suficiente para levar ao diagnóstico de câncer. A comparação anterior da requerente com o marcador de soro mais freqüentemente usado atualmente para detecção de câncer gástrico, CEA, foi baseada na diferença na classificação de intensidade de dados de disposição entre amostras de tumor e normais. Esta comparação foi verificada usando dados de qPCR para os marcadores e CEA.
As Figuras 7a-7c mostram gráficos da expressão log2 relativa (comparado com uma preparação de RNA de referência) de marcadores em amostras de tumor individuais e amostras não-malignas comparado com a expressão do gene para o marcador de tumor, CEA. CEA é o marcador do soro atualmente mais usado para monitorar a progressão de câncer gástrico. 0 ponto zero é definido ser a expressão normal média para cada marcador. Pode ser visto que há sobreposição extensiva entre a expressão de gene de CEA (CEACAM5) em amostras de tumor e normais. Esta sobreposição é acentuadamente menos nos marcadores de câncer gástrico ASPN, CSPG2, CST1,2,4, IGFB7, INHBA, LOXL2, LUM, SFRP4, SPARC, SPP1, THBS2, TIMP1, adlican, LEPRE1 e EFEMP2. Para os outros marcadores nas Figuras 7b-7c, ASAH1, SFRP2, GGH, MMP12, KLK10, TG, PRSS11 e TGFBI, a sobreposição entre a faixa de expressão de tumor e a faixa de expressão de tecido não-maligno é maior do que a sobreposição para os marcadores acima, mas ainda menos do que aquela de CEA, indicando que todos dos novos marcadores descritos aqui são quantitativamente melhores do que CEA, e então podem prover diagnóstico mais confiável.
Para minimizar os efeitos de manuseamento de tecido variável, mudanças de vez de tumor:normal (não-maligno) foram calculadas usando dados de qPCR das amostras de tecido de tumor e não-malignas derivadas do mesmo paciente. Tal análise em par corrige diferenças em níveis de base de expressão de gene em indivíduos diferentes e minimiza os efeitos de manuseamento de tecido sobre a qualidade do RNA. Por exemplo, se o estômago operado ficar em temperatura ambiente por uma hora, os transcritos das amostras normal e de tumor serão degradados para o mesmo grau. A Figura 8 resume os níveis de expressão de T:N determinados através de qPCR para os marcadores, mas usados dados em par (isto é, amostras de tumor e não-malignas) do mesmo indivíduo. A Figura 8 também inclui dados de expressão para seis genes que não estavam incluídos na Figura 3. Os genes adicionalmente estudados são MMP2, CGR11, TGFB1, PCSK5, SERPINB5 e SERPINH1. Informação de identificação e sondas são mostradas nas Figuras 1 e 2. A Figura 8 mostra a mudança de vez T:N média e a mudança de vez T:N máxima para 29 marcadores de câncer gástrico nesses 40 pacientes com amostras "em par". 27 dos 29 marcadores têm uma diferença T:N média maior do que ou igual ao marcador da técnica anterior, CEA. 29/29 dos marcadores têm uma porcentagem maior das amostras em par onde a expressão na amostra de tumor excede a expressão na amostra normat.
As Figuras 9a-9d ilustram gráficos de dispersão de ponto de dados de tecido de tumor e normal dos mesmos indivíduos. Cada ponto representa a mudança de vez, no paciente, em expressão dos marcadores em tecido de tumor relativo à expressão em tecido não-maligno. Todos os marcadores estudados têm melhor discriminação de tumor de tecido de não-tumor do que CEA. Três marcadores, CST1,2,4, ASPN e SFRP4 mostraram 100% de discriminação entre o tumor em par e as amostras normais. Isto é, para esses marcadores, todo tecido de tumor tinha expressão maior do que o tecido de não-tumor correspondente do mesmo indivíduo. Em muitos outros marcadores, por exemplo, Adlican, CSPG2, EFEMP2, IGFBP7, INHBA, LOXL2, LUM, SERPINH1, SPARC, SPP1, TGFbl, THBS2 e TIMP1, cada uma tinha apenas 2 ou 3 pontos individuais para os quais expressão de tecido de tumor era menos do que aquela do tecido de não-tumor. Desse modo, para esses marcadores, a probabilidade de que qualquer um par de tecido de tumor e não-tumor produzisse um falso negativo é relatívamente baixa (por exemplo, 3 de 40 ou 7,5%; 2 de 40 ou 5%, 1 de 40 ou 2,5%). Desse modo, mesmo se os outros marcadores listados imediatamente acima fossem usados, uso de amostras múltiplas de um paciente individual produziría informação de diagnóstico confiável.
As seqüências de gene desses marcadores, e a localização do iniciador e sondas usadas para detectá-los são mostradas abaixo.
Para determinar se a superexprsesão dos genes marcadores é independente do estágio dos tumores gástricos, as mudanças de vez log2 T:N em par foram postas em gráfico contra o estágio de tumor (Figuras 10a-10ad). Nenhuma dependência de estágio da expressão em estágio de tumor foi observada para os 26 dos marcadores listados na Figura 8. Esses marcadores eram similarmente superexpressos em tumores em estágio precoce bem como em estágio terminal. No entanto, KLK10 mostrou superexpressão mais consistente em tumores no estágio 1 e estágio 2, e PCSK5 e SER-PINB5 mostraram superexpressão mais consistente em tumores do no estágio 4. KLK10, PCSK5 e SERPINB5 então podem ser usados na determina- ção do estágio de tumores gástricos.
Em uma análise similar, mudanças de vez log2 T:N foram postas em gráfico contra a classificação Lauren do tumor (ou tipo difuso ou tipo intestinal). As Figuras 11a -11ad mostram que cada um dos 29 GTMs discriminaram entre tecido de tumor e não-tumor, não importando se o tipo de tumor era intestinal (I) ou difuso (D).
Exemplo 4. Uso de Marcadores Múltiplos Conforme acima descrito, certos marcadores exibem uma habilidade em discriminar tecido de tumor e não-tumor em 100% das amostras. Outros marcadores, também descritos acima, podem ser usados em combinação para atingir graus muito altos de discriminação de tecido de tumor de tecido de não-tumor. A Figura 12 mostra um gráfico 3-dimensional da expressão de 3 marcadores, SERPINH1, CST1,2,4 e INHBA, expressos como mudanças de vez T:N log2 para uma série de amostras de tumor gástrico e amostras gástricas não-malignas. Há uma separação completa entre os dois grupos de amostra. A confiabilidade de discriminação bem-sucedida de amostras de tumor e não-tumor usando combinações de marcador é ainda ilustrada através de uma análise estatística sumarízada na Figura 13. Esta análise comparou as distribuições normais dos dados gerados usando a expressão de gene de qCPR de amostras de tumor e não-malignas em par, mostra o efeito do aumento dos números de marcadores usados para discriminar entre a-mostras de tumor e não-malignas em sensibilidade de teste (com uma especificidade fixada de 95%). Embora alguns dos 29 marcadores (conforme mostrado na Figura 8) Tenham uma sensibilidade maior do que 90, 95 ou 99% quando usados sozinhos nesta análise, a combinação de dois ou três marcadores permitiu que alta sensibilidade fosse atingida com números maiores de combinações. Por exemplo, 50 combinações de três marcadores discriminariam entre amostras de tumor e não-malignas com uma sensibilidade £ 99% e especificidade > 95%.
Exemplo 5: Detecção de Proteínas Marcadores de Tumor Gástrico Ainda em modalidades adicionais, proteínas de GTM podem ser detectadas como uma base para diagnóstico. Em certas situações, a concentração de mRNA em uma amostra particular, tal como uma amostra não contendo nenhuma céiula, pode ser difícil usar ou métodos de microdisposi-ção ou qPCR para detectar elevações na expressão de gene. Desse modo, em certas modalidades, a detecção de proteínas de GTM pode ser realizada usando anticorpos direcionados contra ou a proteína completa, um fragmento da proteína (peptídeo) ou o núcleo da proteína. Métodos para detecção e quantificação da expressão de proteínas e peptídeos são conhecidos na técnica e podem incluir métodos que se apoiam em anticorpos específicos criados contra a proteína ou peptídeo. Os anticorpos monoclonais e anti-soro policlonal podem ser feitos usando métodos que são bem conhecidos na técnica e não precisam ser descritos mais aqui.
Para demonstrar que as proteínas de GTM podem ser usadas para discriminar tecido de tumor de não-tumor, anticorpos comerciais foram obtidos contra SPARC (R&D Systems; No. cat. AF941), THBS2 (Santa Cruz Biotechnology Inc.; No, Cat. Sc-7655), CSPG2 (Caibiochem, No. Cat. 428060) e IGFBP7 (R&D Systems, No. Cat. AF1334). Um anticorpo policlonal adicional foi criado em coelhos (Alpha Diagnostic International Inc.; San Antonio) contra a sequência de peptídeo de cistatina SN 50-66 (C) FAI-SEYNKATKDDYYRR. SEQ ID NO:108.
Esses anticorpos foram usados ou em anti-soro ou análise Western de tumor e tecido gástrico não-maligno. Cada um desses marcadores mostrou diferenças tumor:normal fortes no nível de proteína. Isso confirmou que a superexpressão observada no nível de RNA para esses genes também aconteceu no nível de proteína. A Figura 14 mostra uma análise Western blot de proteína total extraída de dois pares de tumor e tecidos não-malignos usando anticorpos contra as proteínas codificadas por SPARC, CST1 (cistatina SN), IGFBP7 e THBS2. Para cada marcador, o sinal é significantemente maior nas amostras de tumor do que nas amostras não-malignas. O anticorpo criado contra cistatina SN detectou três faixas principais, correspondendo a pesos moleculares de aproximadamente 34, 45 e 65 kDa, respectivamente. A faixa de peso molecular mais baixa é mostrada na Figura 14. As espécies de proteína eram maiores do que a proteína de cistatina SN de controle, sugerindo que a proteína produzida pelos tumores tinha sofrido modificações pós-traducionais ou multimerização. Não importando o mecanismo responsável pelas diferenças nos pesos moleculares de proteínas de CST, a Figura 14 demonstra que a expressão de CST era baixa no tecido de não-tumor, mas era facilmente observada em pontos de proteínas derivadas de tumor. A Figura 14 também mostrou que a proteína de SPARC é expressa substancialmente para um grau maior em tecido de tumor do que em tecido de não-tumor. A proteína de SPARC tinha uma mobilidade em gel menor do que a forma desta proteína que foi detectada no soro (Figura 15), também indicando a ocorrência de modificações pós-traducionais diferentes em proteínas produzidas por células gástricas malignas. Não importando o(s) mecanismo(s) responsável(eis) por tal modificação, a constatação de que SPARC é superexpresso em tecido de tumor com relação a tecido não-malígno indica que SPARC é um marcador de proteína útil. Similarmente, IGFBP7 e THBS2 mostram superexpressão em tecido de tumor com relação a tecido não-maligno.
Análise anti-soro de tecido de tumor e não-maligno foi realizada usando anticorpos contra as proteínas codificadas por CSPG2 (versican) e CST1 (cistatina SN). Análise anti-soro de tecido com anticorpos contra versican identificou tingimento forte na matriz extracelular de tecido de tumor, mas não tecido não-maligno. Com os anticorpos anticistatina SN, tingimento forte foi observado na área em torno do exterior das células de tumor. Em células não-malignas, o tingimento com este anticorpo foi mais fraco e observado apenas na superfície mucosal do tecido e no revestimento das bolsas gástricas. Isso demonstrou que em células não-malignas, a proteína cistatina SN é direcionada para fora da célula na superfície mucosal e não para os espaços extracelulares. Desse modo, não apenas esta proteína cistatina SN sendo produzida em quantidades maiores em tecido de tumor do que em tecido não-maligno, mas, diferente da proteína produzida pelo tecido não- maligno, a cistatina SN do tumor está em contato direto com a vasculatura do tecido. Para estender essas observações, a cistatina SN foi imunoprecipi-tada do sobrenadante do tipo de célula de câncer gástrico, AGS com um anticorpo monoclonal (R&D Systems; No. Cat. MAB1285) (Figura 16). Quantidades grandes de cistatina SN foram detectadas no sobrenadante, confirmando que esta proteína é produzida por, e secretada das, células epiteliais gástricas.
Exemplo 6: Análise de Marcadores de Tumor no Soro Para um marcador ser útil para avaliação rápida, é desejável que o marcador esteja presente no soro em níveis suficientes para detecção. Certas proteínas descritas na Figura 8 podem ser secretadas no sangue em níveis detectáveis a partir de cânceres gástricos. Um marcador sabido ser secretado a partir de tumores gástricos no sangue em níveis detectáveis é TIMP1. No entanto, se uma proteína for secretada ou vazar de qualquer superfície de uma célula outra que não uma superfície mucosal, ela terá contato com o fluido intersticial. A partir daí, ele pode passar ou diretamente para o fornecimento de sangue através de um capilar ou via sistema linfático. Desse modo, qualquer GTM que vazar estará presente no sangue. A osteo-pontina, tiroglobulina e os membros das famílias MMP e calicreía foram anteriormente descritos serem elevados no soro para pacientes com uma faixa de cânceres epiteliais, mas não câncer gástrico. TIMP1 foi, no entanto, anteriormente observado estar elevado no soro de pacientes com câncer gástrico. Essas constatações sugerem que os critérios de seleção para marcadores neste estudo, a saber, superexpressão de proteínas secretadas em tecido de tumor, mas não tecido não-maligno, podem ser eficazmente usados para detectar marcadores no soro, e então podem ser de uso clinicamente substancial, sem a necessidade de biópsias de tecido ou órgão. A partir da Figura 15, é aparente que SPARC no soro tem um peso molecular diferente (ilustrado aqui no Western blot), com o SPARC de tumor tendo um peso molecular menor do que o SPARC produzido pelas células sanguíneas. Desse modo, mesmo que SPARC seja produzido por células sanguíneas de tumor e não-tumor, a presença de SPARC de tumor pode ser determinada usando tamanho molecular, tal conforme determinado usando análise Western, ou com um anticorpo específico para a proteína de glicosilação produzida pelas células de tumor.
Em um outro estudo, foi detectada cistatina SN em um sobrena-dante de um tipo de célula de tumor gástrico, AGS. A Figura 16 mostra uma análise Western de meio sozinho ou um sobrenadante de células de AGS em cultura. A faixa da direita da Figura 16 mostra uma faixa densa correspondendo à proteína cistatina SN.
Desse modo, conclui-se a partir da Figura 10 que GTMs da presente invenção são adequados para diagnóstico de cânceres gástricos em estágios inicial, médio e terminal de progressão da doença.
Embora certas proteínas de marcador possam ser glicosiladas, variações no padrão de glicosilação podem, em certas circunstâncias, levar à detecção errônea de formas de GTMs que não têm os padrões de glicosilação usuais. Desse modo, em certas modalidades da presente invenção, imunógenos de GTS podem incluir GTM desglicosilado ou fragmentos de GTM desglicosilado. A desglicosilação pode ser realizada usando uma ou mais glicosidases conhecidas na técnica. Altemativamente, cDNA de GTM pode ser expresso em tipos de célula deficientes em glicosilação, tal como tipos de células procarióticas, incluindo E. coli, desse modo produzindo proteínas ou peptídeos não-glicosilados. Pode ser também compreendido que o nível e a qualidade de glicosilação pode ser sensível à presença de precursores essenciais para cadeias laterais de açúcar. Desse modo, na ausência de um açúcar essencial, glicosilação "normal’1 pode não ocorrer, mas do contrário, açúcares de cadeia lateral menor ou faltante podem ser encontrados. Tais "variantes de glicosilação" podem ser usadas como imunógenos para produzir anticorpos específicos para tipos diferentes de genes de marcador.
Adicionalmente, certos GTMs podem formar homo- ou heterodí-meros ou outros tipos de formas multiméricas. Por exemplo, inibina beta A é uma proteína de 47 kDa que pode formar homodímeros de peso molecular de 97 kDa (actívina A) e heterodímeros de 92 kDa com a proteína inibina beta B de 45 kDa (os heterodímeros são conhecidos como actívina AB).
Desse modo, pode ser compreendido que análise Western ou outro tipo de ensaio que proveja peso molecular não precisa ser limitado a apenas detecção de uma forma monomérica de um GTM. Pelo contrário, uma pessoa pode compreender imediatamente que qualquer forma de um GTM pode ser detectada, não importando o peso molecular. Desse modo, a detecção de uma forma multimérica de um GTM pode ser prontamente usada para diagnosticar a presença de câncer gástrico. Ainda, para aqueles GTMs que são seletivos para estágio (1-4) ou tipo de tumor gástrico (difuso ou intestinal), a detecção de uma forma multimérica pode prover alvo adequado para avaliação de estágio ou tipo de câncer gástrico.
Uma vez produzido um anticorpo ou anti-soro contra um GTM, tais preparações de anticorpo podem ser usadas de uma variedade de maneiras. Primeiro, métodos de ensaio imunoabsorvente ligado à enzima (ELISA) ou radioimunoensaío (RIA) podem ser usados para quantificar as proteínas ou peptídeos de GTM. A imunodetecção pode ser realizada em amostras de tecido usando anti-soro. Esses métodos são todos conhecidos na técnica e não precisam ser descritos mais aqui.
Exemplo 7: Vetores Contendo Oligonucleotídeos de GTM
Outras modalidades da presente invenção incluem vetores úteis para expressão in vitro de genes de marcador ou suas porções ("peptídeos de marcador") ou fragmentos de produtos de gene de marcador. Por exemplo, vetores podem ser feitos tendo oligonucleotídeos para codificação dos GTMs neles. Muitos tais vetores podem ser baseados em vetores padrão conhecidos na técnica. A presente invenção também inclui vetores que podem ser usados para transferir uma variedade de tipos de célula para preparar tipos de célula produtoras de GTM, que podem ser usadas para produzir quantidades desejadas de GTMs para desenvolvimento de anticorpos específicos ou outros reagentes para detecção de GTMs ou para padronização de ensaios desenvolvidos para GTMs.
Deve ser compreendido que para fabricar tais vetores, um olígo-nucleotídeo contendo a estrutura de leitura aberta inteira ou uma porção de tal estrutura de leitura aberta codificando uma porção da proteína a ser ex- pressa pode ser inserido em um vetor contendo uma região de promotor, uma ou mais regiões aumentadoras operavelmente ligadas à sequência de oligonucleotídeo, com um códon de iniciação, uma estrutura de leitura aberta e um códon de parada. Métodos para produção de vetores de expressão são conhecidos na técnica e não precisam ser repetidos aqui.
Pode ser também compreendido que um ou mais marcadores selecionáveis podem ser inseridos em um vetor de expressão para permitir a expansão de tipos de célula selecionados para conter o vetor de expressão de interesse. Além disso, uma pessoa pode também inserir sequências líder conhecidas na técnica, em estrutura, para direcionar a secreção, armazenamento interno ou inserção de membrana da proteína ou fragmento de proteína na célula de expressão.
Exemplo 8: Células Transfectadas com Vetores Contendo GTM
Ainda em modalidades adicionais, células são providas, as quais podem expressar GTMs, fragmentos de GTM ou marcadores de peptídeo. Ambas células procarióticas e eucarióticas podem ser então usadas. Por exemplo, £ coli (uma célula procariótica) pode ser usada para produzir quantidades grandes de GTMs faltantes em glicosilação madura (se o GTM particular for normalmente glicosilado). Células COS, células 293 e uma variedade de outras células eucarióticas podem ser usadas para produzir GTMs que são glicosilados, ou têm dobra apropriada e então, estrutura tridimensional da forma nativa da proteína de GTM. Métodos para transfecção de tais células são conhecidos na técnica e não precisam ser descritos mais aqui.
Exemplo 9: Kits Com base nas verificações da presente invenção, vários tipos de kits de teste podem ser produzidos. Primeiro, os kits podem ser feitos, os quais têm um dispositivo de detecção pré-carregado com uma molécula de detecção (ou "reagente de captura"). Em modalidades para detecção de mRNA de GTM, tais dispositivos podem compreender um substrato (por e-xemplo, vidro, silicone, quartzo, metal, etc) onde os oligonucleotídeos como reagentes de captura que hibridizam com o mRNA a ser detectado. Em al- gumas modalidades, a deleção direta de mRNA pode ser realizada através de hibridização de mRNA (marcado com cy3, cy5, radiomarcador ou outro marcador) para os oligonucleotídeos no substrato. Em outras modalidades, a detecção de mRNA pode ser realizada primeiro fazendo DNA complementar (cDNA) para o mRNA desejado. Então, cDNA marcado pode ser hibridizado para os oligonucleotídeos no substrato e detectado. Não importando o método de detecção empregado, comparação de expressão de GTM de teste com uma medição de expressão padrão é desejável. Por exemplo, expressão de RNA pode ser padronizada para DNA celular total, para expressão de RNAs constitutivamente expressos (por e-xemplo, RNA ribossômico) ou outros marcadores relativamente constantes.
Anticorpos podem ser também usados em kits como reagentes de captura. Em algumas modalidades, um substrato (por exemplo, uma placa multicavidade) pode ter um reagente de captura de GTM específico ligado a ele. Em algumas modalidades, um kit pode ter um reagente de bloqueio incluído. Reagentes de bloqueio podem ser usados para reduzir ligação não-específica. Por exemplo, ligação de oligonucleotídeo não-específico pode ser reduzida usando DNA em excesso de qualquer fonte conveniente que não contenha oligonucleotídeos de GTM, tal como DNA de esperma de salmão. Ligação de anticorpo não-específica pode ser reduzida usando um excesso de uma proteína de bloqueio tal como albumina de soro. Pode ser compreendido que vários métodos para detecção de oligonucleotídeos e proteínas são conhecidos na técnica, e qualquer estratégia que possa especificamente detectar moléculas associadas a GTM pode ser usada e ser considerada dentro do escopo da presente invenção.
Em modalidades que se apoiam na detecção de anticorpo, proteínas ou peptídeos de GTM podem ser expressos em uma base por célula, ou na base de proteína celular, de tecido ou fluido total, volume do fluido, massa do tecido (peso). Ainda, GTM no soro pode ser expresso com base em uma proteína de soro de abundância relativamente alta, tal como albumina.
Em adição a um substrato, um kit de teste pode compreender reagentes de captura (tal como sondas), soluções de lavagem (por exemplo, SSC, outros sais, tampões, detergentes e similar), bem como porções de detecção (por exemplo, cy3, cy5, radiomarcadores e similar). Os kits podem também incluir instruções para uso e uma embalagem.
Embora a presente invenção seja descrita com referências às suas modalidades específicas, pode ser compreendido que outras modalidades envolvendo o uso dos marcadores descritos podem ser usadas sem se afastar do escopo da presente invenção.
APLICABILIDADE INDUSTRIAL Métodos para detecção de membros da família GTM incluem detecção de ácidos nuctéicos usando métodos de PCR de microdisposição e/ou tempo real e detecção de proteínas e peptídeos. As composições e métodos da presente invenção são úteis na fabricação de dispositivos e kits de diagnóstico, diagnóstico de doença, avaliação da eficácia de terapia e para a produção de reagentes adequados para medição da expressão de membros da família GTM em amostras biológicas.
REIVINDICAÇÕES

Claims (11)

1. Método para detecção de câncer gástrico compreendendo detecção de superexpressão de níveis de proteínas de um membro da família dos marcadores de tumor gástrico (GTM) em uma amostra biológica selecionada de sangue, soro e plasma, caracterizado pelo fato de que o membro da família dos GTM é uma cistatina SN 50-66 (SEQ ID NO: 108).
2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que uma etapa adicional de comparar a quantidade de GTM presente na dita amostra de teste com um valor obtido de uma amostra de controle obtida de um sujeito que não apresenta câncer gástrico.
3. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que compreende detectar uma superexpressão de pelo menos um membro adicional da família GTM selecionado do grupo que consiste em carboxipeptidase N, polipeptídeo 2, cadeia de 83 kDa (CPN2), metaloprotei-nase de matriz 12 (MMP12), inibina ("INHBA"), fator de crescimento do tipo insulina 7 ("IGFBP7"), gama-glutamil hidrolase ("GGH"), proteoglicano enriquecido com leucina prolina ("LEPRE1"), cistatina S ("CST4"), proteína relacionada com frisamento secretada 4 ("SFRP4"), asporina ("ASPN"), regulador de crescimento celular com domínio de mão de mão EF 1 ("CGREF1"), calicreína 10 (KLK10), inibidor de tecido de metaloproteinase 1 ("TIMP1"), proteína rica em cisteína de ácido secretada ("SPARC"), fator de crescimento de transformação, β-induzido ("TGFBI"), proteína de matriz extracelular do tipo fibulina contendo EGF 2 ("EFEMP2"), lumican ("LUM"), estanina ("SNN"), fosfoproteína secretada 1 ("SPP1"), proteoglicano de sulfato de condroitina 2 ("CSPG2"), N-acilesfingosina amidoidrolase ("ASAH1"), serina protease 11 ("PRSS11"), proteína relacionada com frisamento secretada 2 ("SFRP2"), fosfolipase A2, grupo XIIB ("PLA2G12B"), espondina 2, proteína de matriz extracelular ("SPON2"), olfactomedina 1 ("OLFM1"), trombospon-dina contendo repetição 1 ("TSRC1"), trombospondina 2 ("THBS2"), adlica-no, cistatina SA ("CST2"), enzima 2 do tipo lisil oxidase ("LOXL2"), tiroglobu-lina ("TG"), fator de crescimento de transformação betai ("TGFB1"), inibidor de serina ou cisteína proteinase da "clade H" ("SERPINH1"), inibidor de seri- na ou cisteína protease da "clade B" ("SERPINB5"), metaloproteinase de matriz 2 ("MMP2"), subtilisina/quexina de Pró-proteína convertase tipo 5 ("PCSK5") e proteína 4 de ligação de glicoproteína hialuronano ("HAPLN4").
4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um membro de GTM adicional é selecionado a partir de enzima 2 do tipo lisil oxidase ("LOXL2"), proteína relacionada com frisamento secretada 2 ("SFRP2"), inibidor de serina ou cisteína proteinase da "clade H" ("SERPINH1") e inibidor de serina ou cisteína protease da "clade B" ("SERPINB5").
5. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a etapa (b) compreende detectar a superex-pressão de cistatina SN (“CST1”), enzima 2 do tipo lisil oxidase ("LOXL2"), proteína relacionada com frisamento secretada 2 ("SFRP2"), inibidor de serina ou cisteína proteinase da "clade H" ("SERPINH1") e inibidor de serina ou cisteína protease da "clade B" ("SERPINB5").
6. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que na etapa (b) compreende detectar a superex-pressão de pelo menos um membro da família GTM adicional selecionado de SPARC, IGFBP7 e THBS2.
7. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a etapa de detecção é realizada utilizando um anticorpo direcionado contra o dito GTM.
8. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a etapa de detecção é realizada utilizando um método de imunoensaio do tipo sanduíche.
9. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo é um anticorpo monoclonal.
10. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo é um anti-soro policlonal.
11. Método como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a dita etapa de medição usa um ensaio ELISA.
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