BRPI0407403B1 - Compostos de isoxazol e composição farmacêutica - Google Patents

Compostos de isoxazol e composição farmacêutica Download PDF

Info

Publication number
BRPI0407403B1
BRPI0407403B1 BRPI0407403-3A BRPI0407403A BRPI0407403B1 BR PI0407403 B1 BRPI0407403 B1 BR PI0407403B1 BR PI0407403 A BRPI0407403 A BR PI0407403A BR PI0407403 B1 BRPI0407403 B1 BR PI0407403B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
phenyl
isoxazole
carboxylic acid
dihydroxy
ylmethyl
Prior art date
Application number
BRPI0407403-3A
Other languages
English (en)
Inventor
Martin James Drysdale
Brian William Dymock
Harry Finch
Paul Webb
Edward McDonald
Karen Elizabeth James
Kwai Ming Cheung
Thomas Peter Mathews
Original Assignee
Cancer Research Technology Ltd
The Institute Of Cancer Research
Vernalis (R&D) Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB0303105A external-priority patent/GB0303105D0/en
Priority claimed from GBGB0306560.4A external-priority patent/GB0306560D0/en
Priority claimed from GB0313751A external-priority patent/GB0313751D0/en
Application filed by Cancer Research Technology Ltd, The Institute Of Cancer Research, Vernalis (R&D) Limited filed Critical Cancer Research Technology Ltd
Publication of BRPI0407403A publication Critical patent/BRPI0407403A/pt
Publication of BRPI0407403B1 publication Critical patent/BRPI0407403B1/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D261/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings
    • C07D261/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D261/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D261/08—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/541—Non-condensed thiazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/422—Oxazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D261/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings
    • C07D261/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D261/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D261/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)

Abstract

COMPOSTOS DE ISOXAZOL, BEM COMO SEU USO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E MÉTODO IN VITRO PARA A INIBIÇÃO DA ATIVIDADE DE HSP90. Isoxazóis da fórmula (A) ou (B) são inibidores da atividade de HSP90, e úteis para o tratamento, por exemplo, de cânceres: (A), (B) em que R1 é um grupo da fórmula (IA):-Ar¹-(Alk¹)p-(Z)r-(Alk²)s-Q1 em que em qualquer combinação compatível Ar¹ é um radical de arila ou heteroarila opcionalmente substituído, Alk¹ e Alk² são radicais de C1-C6 alquileno ou C2-C6 alquenileno divalentes opcionalmente substituídos,p,r e s são independentemente 0 ou 1, Z é -O-, -S-, -(C=O)-, (C=S)-, -SO2-,-C(=O)O-, -C(=O)NRA, -C(=S)NRA-, -SO2NRA-., -NR?C(=0)-, -NRASO2- ou-NRA. em que RA é hidrogênio ou C1-C6 alquila, e Q é hidrogênio ou um radical carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído; R2 é (i) um grupo da formula (IA) acima ou (ii) um radical de carboxamida; ou (iii) um anel carbocíclico ou heterocíclico não-aromático em que um carbono do anel 6 opcionalmente substituído, e/ou um nitrogênio do anel é opcionalmente substituído por um grupo da formula -(Alk¹)p-(Z)r-(Alk²)s-Q em que Q, Alk¹, Alk², Z, p, r e s são como definidos acima em relação ao grupo (IA); e R3 é hidrogênio, cicloalquila opcionalmente substituída, cicloalquenila, C1-C6 alquila, C1-C6 alquenila ou C;-C6 alquinila; ou um grupo carboxila, carboxamida ou éster de carboxila.

Description

[0001] A presente invenção refere-se aos isoxazóis substituídos tendo atividade inibidora de HSP90, ao uso de tais compostos na medicina, em relação às doenças que são responsivas à inibição da atividade de HSP90 como cânceres, e às composições farmacêuticas contendo tais compostos.
Antecedentes À Invenção
[0002] Chaperonas moleculares mantêm o dobramento apropriado e conformação das proteínas e são cruciais na regulação do equilíbrio entre a síntese e a degradação das proteínas. Elas têm mostrado ser importantes na regulação de muitas funções celulares importantes, como proliferação de células e apoptose (Jolly e Morimoto, 2000; Smith et al., 1998; Smith, 2001).
Proteínas de Choque Térmico (HSPs)
[0003] Exposição de células às várias tensões ambientais, incluindo choque térmico, álcoois, metais pesados e tensão oxidativa, resulta na acumulação celular de várias chaperonas, comumente conhecidas como proteínas de choque térmico (HSPs). Indução de HSPs protege a célula contra o insulto de tensão inicial, intensifica a recuperação e leva à manutenção de um estado tolerante à tensão. Tem também ficado claro, porém, que certas HSPs podem também representar um papel de chaperona molecular principal sob condições livres de tensão normais regulando o dobramento correto, degradação, localização e função de uma lista crescente de proteínas celulares importantes.
[0004] Várias famílias de multigene de HSPs existem, com produtos de genes individuais que variam em expressão celular, função e localização. Eles são classificados de acordo com o peso molecular, por exemplo, HSP70, HSP90 e HSP27.
[0005] Várias doenças em seres humanos podem ser adquiridas como resultado de desdobramento de proteína (revisado em Tytell et al., 2001; Smith et al., 1998). Conseqüentemente o desenvolvimento de terapias que rompem o mecanismo de chaperona molecular pode provar ser benéfico. Em algumas condições (por exemplo, doença de Alzheimer, doenças de príon e doença de Huntington), proteínas desdobradas podem causar agregação de proteínas que resulta em distúrbios neurodegenerativos. Também, proteínas desdobradas podem resultar em perda da função de proteína do tipo selvagem, levando às funções moleculares e fisiológicas desreguladas na célula.
[0006] HSPs têm também estado implicadas em câncer. Por exemplo, há evidência de expressão diferencial de HSPs que podem relacionar ao estágio de progressão de tumor (Martin et al., 2000; Conroy et al., 1996; Kawanishi et al., 1999; Jameel et al., 1992; Hoang et al., 2000; Lebeau et al., 1991). Como resultado do envolvimento de HSP90 em várias vias oncogênicas críticas e a descoberta que certos produtos naturais com atividade anticâncer estão alvejando esta chaperona molecular, o conceito novo fascinante foi desenvolvido que inibição da função de HSP pode ser útil no tratamento de câncer. O primeiro inibidor de chaperona molecular está correntemente sofrendo experimentações clínicas.
HSP90
[0007] HSP90 constitui cerca de 1-2% de proteína celular total, e está usualmente presente na célula como um dímero em associação com uma de várias outras proteínas (ver, por exemplo, Pratt, 1997). Ela essencial para a viabilidade da célula e exibe funções de chaperona duais (Young et al., 2001). Ela representa um papel fundamental na resposta de tensão celular interagindo com muitas proteínas após sua conformação nativa ter sido alterada por várias tensões ambientais, como choque térmico, assegurando dobragem de proteína adequada e impedindo agregação não-específica (Smith et al., 1998). Além disso, resultados recentes sugerem que HSP90 pode também representar um papel em tamponação contra os efeitos de mutação, presumivelmente corrigindo a dobragem imprópria das proteínas mutantes (Rutherford e Lindquist, 1998). Porém, HSP90 também tem um papel regulador importante. Sob condições fisiológicas normais, junto com seu homólogo de retículo endoplásmico GRP94, HSP90 representa um papel de manutenção na célula, mantendo a estabilidade conformacional e a maturação de várias proteínas clientes fundamentais. Estas podem ser subdivididas em três grupos: (A) receptores de hormônio esteróides, (b) Ser/Thr ou tirosina cinases (por exemplo, ERBB2, RAF-1, CDK4 e LCK), e (c) uma coletânea de proteínas aparentemente não-relacionadas, por exemplo, p53 mutante e a subunidade catalítica de telomerase hTERT. Todas estas proteínas representam papéis reguladores fundamentais em muitos processos fisiológicos e bioquímicos na célula. Novas proteínas clientes HSP90 estão sendo continuamente identificadas.
[0008] A família de HSP90 altamente conservada em seres humanos consiste em quatro genes, a saber isoformas citossólicas HSP90α e HSP90β (Hickey et al., 1989), GRP94 no retículo endoplásmico (Argon et al, 1999) e HSP75/TRAP1 na matriz mitocondrial (Felts et al., 2000). É pensado que todos os membros familiares têm um modo similar de ação, mas ligam às diferentes proteínas clientes dependendo de sua localização dentro da célula. Por exemplo, ERBB2 é conhecida ser uma proteína cliente específica de GRP94 (Argon et al., 1999) e receptor de fator de necrose tumoral do tipo 1 (TNFR1) e RB foram mostrados tanto ser os clientes de TRAP1 (Song et al., 1995; Chen et al., 1996).
[0009] HSP90 participa em uma série de interações complexas com uma faixa de proteínas clientes e reguladoras (Smith, 2001). Embora os detalhes moleculares precisos permaneçam a ser elucidados, estudos bioquímicos e cristalográficos de raio X (Prodromou et al., 1997; Stebbins et al., 1997) realizados durante os últimos anos forneceram compreensões cada vez mais detalhadas para a função de chaperona de HSP90.
[00010] Seguindo controvérsia mais recente neste assunto, está agora claro que HSP90 é uma chaperona molecular ATP-dependente (Prodromou et al., 1997), com dimerização dos domínios de ligação de nucleotídeo sendo essencial para a hidrólise de ATP que é por sua vez essencial para a função de chaperona (Prodromou et al., 2000a). Ligação de ATP resulta na formação de uma estrutura de dímero toroidal em que os domínios N-terminais são colocados em contato mais íntimo entre si resultando em uma troca conformacional conhecida como o ‘mecanismo de grampo’ (Prodromou e Pearl., 2000b).
Inibidores de HSP90 Conhecidos
[00011] A primeira classe de inibidores de HSP90 a ser descoberta foi a classe de ansamicina de benzoquinona, que inclui os compostos herbimicina A e geldanamicina. Eles são mostrados inverter o fenótipo maligno dos fibroblastos transformados pelo oncogene de v-Src (Uehara et al., 1985), e subseqüentemente exibir atividade antitumor potente em modelos animais tanto in vitro (Schulte et al., 1998) quanto in vivo (Supko et al., 1995).
[00012] Estudos de imunoprecipitação e matriz de afinidade mostraram que o mecanismo principal de ação de geldanamicina envolve ligação a HSP90 (Whitesell et al., 1994; Schulte e Neckers, 1998). Além disso, estudos cristalográficos de raio X mostraram que geldanamicina compete no sítio de ligação de ATP e inibe a atividade de ATPase intrínseca de HSP90 (Prodromou et al., 1997; Panaretou et al., 1998). Esta por sua vez impede a formação de complexos de HSP90 multiméricos maduras capazes de chaperonizar as proteínas clientes. Como resultado, as proteínas clientes são alvejadas para degradação por meio da via de proteassoma de ubiquitina. 17- Alilamino, 17-demetoxigeldanamicina (17AAG), retém a propriedade de inibição de HSP90 que resulta na depleção de proteína cliente e atividade antitumor em cultura de célula e modelos de xenoenxerto (Schulte et al, 1998; Kelland et al., 1999), mas tem hepatotoxicidade significativamente menor que geldanamicina (Page et al., 1997). 17AAG está sendo correntemente avaliada em experimentações clínicas de Fase I.
[00013] Radicicol é um antibiótico macrocíclico mostrado inverter o fenótipo maligno de fibroblastos transformados de v-Src e v-Ha-Ras (Kwon et al., 1992; Zhao et al., 1995). Ele foi mostrado degradar várias proteínas de sinalização como conseqüência da inibição de HSP90 (Schulte et al., 1998). Dados cristalográficos de raio X confirmaram que radicicol também liga ao domínio N-terminal de HSP90 e inibe a atividade de ATPase intrínseca (Roe et al., 1998). Radicicol carece de atividade antitumor in vivo devido à natureza química instável do composto.
[00014] Os antibióticos de cumarina são conhecidos ligar à DNA girase bacteriana em um sítio de ligação de ATP homólogo ao da HSP90. A cumarina, novobiocina, foi mostrada ligar ao término de carbóxi da HSP90, isto é, em um sítio diferente daquele ocupado pelas ansamicinas de benzoquinona e radicicol que ligam ao término N (Marcu et al., 2000b). Porém, isto ainda resultou em inibição da função de HSP90 e degradação de várias proteínas de sinalização chaperonadas de HSP90 (Marcu et al., 2000a). Geldanamcina não pode ligar HSP90 subseqüente à novobiocina; isto sugere que alguma interação entre os domínios terminais N e C tem que existir e é consistente com a visão que ambos os sítios são importantes para as propriedades de chaperona de HSP90.
[00015] Um inibidor de HSP90 baseado em purina, PU3, foi mostrado resultar na degradação das moléculas de sinalização, incluindo ERBB2, e causar impedimento do ciclo celular e diferenciação em células de câncer de mama (Chiosis et al., 2001).
HSP90 como um Alvo Terapêutico
[00016] Devido a seu envolvimento na regulação de várias vias de sinalização que são crucialmente importantes no direcionamento do fenótipo de um tumor, e a descoberta que certos produtos naturais bioativos exercem seus efeitos por meio da atividade de HSP90, a chaperona molecular HSP90 está correntemente sendo avaliada como um alvo novo para o desenvolvimento de droga anticâncer (Neckers et al., 1999).
[00017] O mecanismo predominante da ação de geldanamicina, 17AAG, e radicicol envolve ligação à HSP90 no sítio de ligação de ATP localizado no domínio N-terminal da proteína, levando à inibição da atividade de ATPase intrínseca de HSP90 (ver, por exemplo, Prodromou et al., 1997; Stebbins et al., 1997; Panaretou et al., 1998).
[00018] Inibição da atividade de ATPase de HSP90 impede o recrutamento de co-chaperonas e encoraja a formação de um tipo de heterocomplexo de HSP90 do qual estas proteínas clientes são alvejadas para degradação por meio da via de proteassoma de ubiquitina (ver, por exemplo, Neckers et al., 1999; Kelland et al., 1999).
[00019] Tratamento com inibidores de HSP90 leva à degradação seletiva de proteínas importantes envolvidas na proliferação celular, regulação do ciclo das células e apoptose, processos que são fundamentalmente importantes em câncer.
[00020] Inibição da função de HSP90 foi mostrada causar degradação seletiva das proteínas de sinalização importantes envolvidas na proliferação celular, regulação do ciclo das células e apoptose, processos que são fundamentalmente importantes e que são desregulados comumente em câncer (ver, por exemplo, Hostein et al., 2001). Uma razão atrativa para desenvolver drogas contra este alvo para o uso na clínica é que mediante depleção simultânea das proteínas associadas ao fenótipo transformado, pode-se obter um efeito antitumoral forte e alcançar uma vantagem terapêutica contra câncer versus células normais. Estes eventos a jusante da inibição de HSP90 são acreditados ser responsáveis pela atividade antitumoral dos inibidores de HSP90 em cultura de célula e modelos animais (ver, por exemplo, Schulte et al., 1998; Kelland et al., 1999).
Breve Descrição da Invenção
[00021] A presente invenção refere-se ao uso de uma classe de compostos de isoxazol substituídos como inibidores de HSP90, por exemplo, para inibição de proliferação de células de câncer. A invenção também inclui novos compostos de isoxazol per se, e composições farmacêuticas os contendo.
Descrição Detalhada da Invenção
[00022] De acordo com a presente invenção, é fornecido o uso de um composto da fórmula (A) ou (B) ou um sal, N-óxido, hidrato ou solvato deste, ou uma pró-droga deste, na preparação de uma composição para inibição de atividade de HSP90:
Figure img0001
em que R1 é um grupo da fórmula (IA): -Ar1-(Alk1)p-(Z)r-(Alk2)s-Q (IA) em que em qualquer combinação compatível Ar1 é um radical de arila ou heteroarila opcionalmente substituído, Alk1 e Alk2 são radicais de C1-C6 alquileno ou C2-C6 alquenileno divalentes opcionalmente substituídos, p, r e s são independentemente 0 ou 1, Z é -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -SO2-, -C(=O)O-, -C(=O)NRA- , -C(=S)NRA-, -SO2NRA-, -NRAC(=O)-, -NRASO2- ou -NRA - em que RA é hidrogênio ou C1-C6 alquila, e Q é hidrogênio ou um radical carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído; R2 é (i) um grupo da fórmula (IA) como definido em relação a R1; (ii) um radical de carboxamida; ou (iii) um anel carbocíclico ou heterocíclico não-aromático em que um carbono do anel é opcionalmente substituído, e/ou um nitrogênio do anel é opcionalmente substituído por um grupo da fórmula -(Alk1)p-(Z)r-(Alk2)s-Q em que Q, Alk1, Alk2, Z, p, r e s são como definidos acima em relação ao grupo (IA); e R3 é hidrogênio, cicloalquila opcionalmente substituída, cicloalquenila, C1-C6 alquila, C1-C6 alquenila ou C1-C6 alquinila; ou um grupo carboxila, carboxamida ou éster de carboxila.
[00023] Em geral, a classe de compostos definidos acima em relação à fórmula (I) é acreditada ser nova, e a invenção inclui todos os novos membros daquela classe e seus sais, hidratos e solvatos, e pró-drogas destes. Como aqui usado: o termo "grupo carboxila" refere-se a um grupo da fórmula -COOH; o termo "grupo éster de carboxila" refere-se a um grupo da fórmula -COOR, em que R é de fato um radical ou nocionalmente derivado do composto de hidroxila ROH; e o termo "grupo carboxamida" refere-se a um grupo da fórmula -CONRaRb, em que -NRaRb é um grupo amino primário ou secundário (incluindo cíclico) de fato ou nocionalmente derivado de amônia ou a amina HNRaRb.
[00024] Como aqui usado, o termo "(Ca-Cb)alquila" em que a e b são números inteiros refere-se a um radical de alquila de cadeia reta ou ramificada tendo de a a b átomos de carbono. Desse modo quando a for 1 e b for 6, por exemplo, o termo inclui metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, t-butila, n-pentila e n-hexila.
[00025] Como aqui usado, o termo "radical (Ca-Cb)alquileno divalente" em que a e b são números inteiros referem-se a uma cadeia de hidrocarboneto saturada tendo de a a b átomos de carbono e duas valências insatisfeitas.
[00026] Como aqui usado, o termo "(Ca-Cb)alquenila" em que a e b são números inteiros refere-se a um radical de alquenila de cadeia reta ou ramificada tendo de a a b átomos de carbono e contendo pelo menos uma ligação dupla de configuração E ou Z, incluindo por exemplo, etenila e alila.
[00027] Como aqui usado, o termo "radical de (Ca-Cb)alquenileno divalente" em que a e b são números inteiros refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto tendo de a a b átomos de carbono, pelo menos uma ligação dupla e duas valências insatisfeitas.
[00028] Como aqui usado, o termo "(Ca-Cb)alquinila" em que a e b são números inteiros refere-se a um radical de alquenila de cadeia reta ou ramificada tendo de a a b átomos de carbono e contendo pelo menos uma ligação tripla, incluindo por exemplo, etila e prop-2-inila.
[00029] Como aqui usado, o termo "radical de (Ca-Cb)alquinileno divalente" em que a e b são números inteiros refere-se a um radical de alquinila de cadeia reta ou ramificada tendo de a a b átomos de carbono e contendo pelo menos uma ligação tripla, e duas valências insatisfeitas.
[00030] Como aqui usado, o termo "cicloalquila" refere-se a um radical carbocíclico saturado tendo de 3-8 átomos de carbono e inclui, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, cicloeptila e ciclooctila.
[00031] Como aqui usado, o termo "cicloalquenila" refere-se a um radical carbocíclico tendo de 3-8 átomos de carbono contendo pelo menos uma ligação dupla, e inclui, por exemplo, ciclopentenila, cicloexenila, cicloeptenila e ciclooctenila.
[00032] Como aqui usado, o termo "arila" refere-se a um radical aromático carbocíclico mono-, bi- ou tricíclico. Ilustrativo de tais radicais é fenila, bifenila e naftila.
[00033] Como aqui usado, o termo "carbocíclico" refere-se a um radical cíclico cujos átomos do anel são todos carbono, e inclui radicais monocíclicos de arila, cicloalquila e cicloalquenila.
[00034] Como aqui usado, o termo "heteroarila" refere-se a um radical aromático mono-, bi- ou tricíclico contendo um ou mais heteroátomos selecionados de S, N e O. Ilustrativos de tais radicais são tienila, benztienila, furila, benzfurila, pirrolila, imidazolila, benzimidazolila, tiazolila, benztiazolila, isotiazolila, benzisotiazolila, pirazolila, oxazolila, benzoxazolila, isoxazolila, benzisoxazolila, isotiazolila, triazolila, benztriazolila, tiadiazolila, oxadiazolila, piridinila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, triazinila, indolila e indazolila.
[00035] Como aqui usado, o termo não-qualificado "heterociclila" ou "heterocíclico" inclui "heteroarila" como definida acima, e em particular significa um radical não-aromático mono-, bi- ou tricíclico contendo um ou mais heteroátomos selecionados de S, N e O, e aos grupos que consistem em um radical não-aromático monocíclico contendo um ou mais tais heteroátomos que são covalentemente ligados a outro tal radical ou a um radical carbocíclico monocíclico. Ilustrativos de tais radicais são grupos pirrolila, furanila, tienila, piperidinila, imidazolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, tiadiazolila, pirazolila, piridinila, pirrolidinila, pirimidinila, morfolinila, piperazinila, indolila, morfolinila, benzfuranila, piranila, isoxazolila, benzimidazolila, metilenodioxifenila, etilenodioxifenila, maleimido e succinimido.
[00036] A menos que do contrário especificado no contexto onde ocorrer, o termo "substituído" como aplicado em qualquer porção aqui significa substituído com até quatro substituintes compatíveis, cada um destes independentemente pode ser, por exemplo, (C1-C6)alquila, (C1- C6)alcóxi, hidróxi, hidróxi(C1-C6)alquila, mercapto, mercapto(C1- C6)alquila, (C1-C6)alquiltio, halo (incluindo flúor, bromo e cloro), trifluorometila, trifluorometóxi, nitro, nitrila (-CN), oxo, fenila, -COOH, - COORA, -CORA, -SO2RA, -CONH2, -SO2NH2, -CONHRA, -SO2NHRA, - CONRaRb, -SO2NRaRb, -NH2, -NHRA, -NRaRb, -OCONH2, -OCONHRA, - OCONRaRb, -NHCORA, -NHCOORA, -NRBCOORA, -NHSO2ORA, - NRBSO2OH, -NRBSO2ORA, -NHCONH2, -NRACONH2, -NHCONHRB, - NRACONHRB, -NHCONRaRb, ou -NRACONRaRb em que RA e RB são independentemente um grupo (C1-C6)alquila. Um "substituinte opcional" pode ser um dos grupos de substituintes anteriores. Dos substituintes acima, (C1-C6)alquila, halo, trifluorometila, trifluorometóxi, trifluorometilsulfonila e fenila são aqueles comumente considerados lipofílicos. Outros substituintes listados que contêm grupos alquila podem ser lipofílicos dependendo dos grupos alquila particulares presentes.
[00037] Como aqui usado, o termo "sal" inclui sais de adição de base, adição de ácido e quaternários. Os compostos da invenção que são acídicos podem formar sais, incluindo sais farmacêutica ou veterinariamente aceitáveis, com bases como hidróxidos de metal alcalino, por exemplo hidróxidos de sódio e potássio; hidróxidos de metal alcalino-terroso por exemplo hidróxidos de cálcio, bário e magnésio; com bases orgânicas por exemplo N-metil-D-glucamina, tris(hidroximetil)amino-metano de colina, L-arginina, L-lisina, N-etil piperidina, dibenzilamina e outras. Aqueles compostos (I) que são básicos podem formar sais, incluindo farmacêutica ou veterinariamente sais aceitáveis com ácidos inorgânicos, por exemplo com ácidos hidroálico como ácidos clorídricos ou bromídricos, ácido sulfúrico, ácido nítrico ou ácido fosfórico e outros, e com ácidos orgânicos por exemplo com ácido acético, tartárico, succínico, fumárico, maléico, málico, salicílico, cítrico, metanossulfônico, p-toluenossulfônico, benzóico, benzenossulfônico, glutâmico, láctico e mandélico e outros.
[00038] O termo "lipofílico" como aqui usado em relação a um substituinte significa que tem uma constante de hidrofobicidade de substituinte positivo (π). (Um valor positivo para π indica que o substituinte é mais lipofílico que hidrogênio, enquanto que um valor negativo indica que é menos lipofílico, isto é mais hidrófilo, que hidrogênio).
[00039] Alguns compostos da invenção contêm um ou mais centros quirais atuais ou potenciais por causa da presença dos átomos de carbono assimétricos. A presença de vários átomos de carbono assimétricos dá origem a vários diastereoisômeros com estereoquímica R ou S em cada centro de quiral. A invenção inclui todos tais diastereoisômeros e misturas destes.
[00040] Um aspecto da invenção inclui compostos da fórmula (A) ou (B) acima e uns sais, N-óxidos, hidratos ou solvatos destes e pró- drogas destes, exceto os três compostos (X), (Y) e (Z) a seguir que estão comercialmente disponíveis:
Figure img0002
[00041] Sujeita àquelas exclusões, a invenção particularmente inclui aqueles em que os substituintes R1, R2 e R3 são como debatidos e especificados nas seções intituladas a seguir "O radical R1", "O radical R2" e "O radical R3". Outro aspecto inclui o uso de tais compostos para o tratamento de doenças responsivas para inibição de atividade de HSP90.
O RADICAL Ri
[00042] Em geral, é correntemente preferido que o radical Ar1 presente no grupo Ri seja fenila opcionalmente substituída, preferivelmente com um dos substituintes opcionais que são um grupo hidróxi na posição 2 com relação ao ponto de ligação do anel de fenila ao anel de isoxazol. Em outras palavras, o grupo Ri preferivelmente tem a fórmula (IB)
Figure img0003
em que Alki, Alk2, p, r, s, Z e Q são como definidos acima em relação a Ri, e R representa um ou mais substituintes opcionais. Em tais estruturas, é também preferido que o átomo de carbono do anel adjacente ao grupo hidroxila seja não-substituído. No debate adicional de Ri que segue, esta preferência aplica-se além de qualquer outra possibilidade mencionada.
[00043] Nas estruturas mais simples com as quais a invenção está relacionada, cada um de p, r e s podem ser 0, e Q pode ser hidrogênio, de forma que R1 seja arila ou heteroarila opcionalmente substituída. Em tais casos, R1 pode ser, por exemplo, fenila opcionalmente substituída, preferivelmente 2-hidroxifenila que pode ser também substituída, por exemplo, por um ou mais de hidróxi, metila, etila, metóxi, etóxi, cloro, ou bromo. Correntemente preferidos são compostos em que R1 é 2,4-diidroxifenila, substituída na posição 5 por um substituinte lipofílico pequeno, por exemplo, tendo um volume molecular igual ou menor que o de terc-butila, como metila, etila, isopropila, isobutila, terc-butila, cloro, ou bromo, especialmente etila, isopropila ou cloro. Em tais compostos de 2,4-diidroxifenila 5- substituídos da invenção, os grupos hidroxila podem ser protegidos por grupos que são clivados no corpo para liberar os grupos hidroxila. Grupos do tipa pró-droga conhecidos deste tipo que são clivados para hidroxilas incluem grupos alquilcarbonilóxi como metilcarbonilóxi, e grupos alquilaminocarbonilóxi como dialquilamino- ou isopropilamino- carbonilóxi.
[00044] Em outras estruturas simples com as quais a invenção está relacionada, p, r e s podem cada um novamente ser 0, e Q pode ser um anel carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído, por exemplo, um anel de fenila ou piridila. Em tais casos, Q é um substituinte direto no anel de Ar1 opcionalmente substituído.
[00045] Em estruturas mais complexas com as quais a invenção está relacionada, um ou mais de p, r e s podem ser 1, e Q pode ser hidrogênio ou um anel carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído. Por exemplo, p e/ou s pode ser 1 e r pode ser 0, de forma que Q é ligado a Ar1 por um radical de alquileno ou alquenileno, por exemplo, um radical de C1-C3 alquileno que é opcionalmente substituído. Em outros casos cada um de p, r, e s pode ser 1 cujos casos, Q é ligado a Ar1 por um radical de alquileno ou alquenileno que é interrompido pelo radical Z contendo heteroátomo. Em ainda outros casos, p e s podem ser 0 e r pode ser 1 em cujo caso que Q é ligado a Ar1 por meio do radical Z contendo heteroátomo.
[00046] Exemplos específicos dos grupos R1 dos tipos acima estão presentes nos compostos dos Exemplos aqui.
O RADICAL R2
[00047] Quando R2 for do tipo (i), isto é um grupo da fórmula (IA), exemplos incluem fenila, 2-, 3-, ou 4-piridila, 2- ou 3-furanila, 2- ou 3- tienila e tiazolila em que os substituintes opcionais incluem quaisquer daqueles listados acima na definição de "substituído", por exemplo metóxi, etóxi, metilenodióxi, etilenodióxi, flúor, cloro, bromo e trifluorometila. Por exemplo, R2 pode ser fenila substituída na posição 4 por C1-C6 alcóxi como metóxi ou etóxi, ou por flúor, cloro, bromo, piperazinila, N-metilpiperazinila ou piperidinila.
[00048] Substituintes de R2 presentemente preferidos incluem aqueles tendo a estrutura parcial:
Figure img0004
em que o grupo amino substituído -NR10R11 é um grupo de solubilização. Muitos tais grupos de solubilização são conhecidos na química medicinal. Exemplos incluem morfolinila, piperidinila, piperazinila, pirrolidinila, etilamino, isopropilamino, dietilamino, cicloexilamino, ciclopentilamino, metoxietilamino, piperidin-4-ila, N- acetilpiperazinila, metilsulfonilamino, tiomorfolinila, tiomorfolinildióxido, 4-hidroxietilpiperidinila e 4-hidroxipiperidinila.
[00049] O pedido de patente internacional co-pendente n° PCT/GB2003/005275 descreve compostos de pirazol de inibição de HSP90 análogos aos isoxazóis aos quais esta invenção está relacionada, e que são acreditados ligar ao alvo de HSP90 de uma maneira análoga. Aqueles compostos de pirazol têm um grupo carboxamida na posição que corresponde a R2 dos isoxazóis presentes. Conseqüentemente, quando R2 nos isoxazóis presentes for um radical de carboxamida do tipo (ii) acima, exemplos incluem aqueles presentes nos compostos de pirazol de PCT/GB2003/005275, por exemplo carboxamidas da fórmula -CONRB(Alk)nRA em que Alk é um radical divalente alquileno, alquenileno ou alquinileno, por exemplo um radical -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, - CH2CH=CH- ou -CH2OCCH2-, e o radical de Alk pode ser opcionalmente substituído, n é 0 ou 1, RB é hidrogênio ou um grupo C1-C6 alquila ou C2-C6 alquenila, por exemplo metila, etila, n- ou isopropila ou alila, RA é hidróxi ou carbocíclico opcionalmente substituído, por exemplo hidróxi e/ou fenila cloro-substituída e 3,4-metilenodioxifenila; ou heterociclila, por exemplo piridila, furila, tienila, N-piperazinila ou N- morfolinila qualquer um destes anéis heterocíclicos pode ser substituído, ou RA e RB considerados juntos com o nitrogênio ao qual estão ligados formam um anel N-heterocíclico que pode opcionalmente conter um ou mais heteroátomos adicionais selecionados de O, S e N, e que podem opcionalmente ser substituídos em um ou mais átomos C ou de N do anel, exemplos de tais anéis N-heterocíclicos incluindo morfolino, piperidinila, piperazinila e N-fenilpiperazinila.
O RADICAL R3
[00050] R3 pode ser, por exemplo, hidrogênio, metila, etila, n- ou isopropila, trifluorometila, hidroxietila, metilsulfonaminometila, ou um grupo carboxamida -CONRB(Alk)nRA como debatido acima para R2. Um grupo carboxamida é presentemente preferido, especialmente etilaminocarbonila e isopropilaminocarbonila.
[00051] Um subconjunto particular dos compostos aos quais esta invenção está relacionada consiste naqueles da fórmula (ID), e os regioisômeros da fórmula B destes, e seus sais, solvatos e hidratos, e pró-drogas destes:
Figure img0005
em que cada R independentemente representa um substituinte opcional e R3 representa um grupo carboxamida.
[00052] Um subconjunto preferido dos compostos aos quais esta invenção está relacionada consiste naqueles da fórmula (IE), e os regioisômeros da fórmula (B) destes, e seus sais, solvatos e hidratos, e pró-drogas destes:
Figure img0006
em que R3 representa um grupo carboxamida (como etilaminocarbonila CH3CH2NHC(=O)-, ou isopropilaminocarbonila (CH3)2CHNHC(=O)-); R9 representa -CH2NR10R11 ou -NR10R11 em que o grupo amino substituído -NR10R11 é um grupo de solubilização, (como morfolinila, piperidinila, piperazinila, pirrolidinila, etilamino, isopropilamino, dietilamino, cicloexilamino, ciclopentilamino, metoxietilamino, piperidin-4-ila, N-acetilpiperazinila, N-metil- piperazinila, metilsulfonilamino, tiomorfolinila, tiomorfolinil-dióxido, 4- hidroxi- etilpiperidinila e 4-hidroxipiperidinila); e R8 representa um substituinte opcional, especialmente um grupo lipofílico pequeno (como etila, isopropila, bromo ou cloro).
[00053] Compostos específicos com os quais a invenção está relacionada incluem aqueles dos Exemplos, particularmente os seguintes, e seus sais, N-óxidos, hidratos e solvatos, e pró-drogas destes: etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isopropil-fenil)-4-(4- morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isopropil-fenil)-4-(4- piperidin-1-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(2,4-diidróxi- 5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isopropil-fenil)-4-[4-(4- metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isopropil-fenil)-4-(4- etilamino-metil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isopropil-fenil)-4-[4- (isopropilamino-metil)-fenil]-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 4-(4-cicloexilaminometil-fenil)-5-(2,4- diidróxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 4-[4-(terc-butilamino-metil)-fenil]-5-(2,4- diidró-xi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isopropil-fenil)-4-{4-[(2- metóxi-etilamino)-metil]-fenil}-isoxazol-3-carboxílico isopropilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isopropil-fenil)-4- (4-mor-folin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico isopropilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isopropil-fenil)-4- [4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(5-terc-butil-2,4-diidróxi-fenil)-4-[4-(4- metil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(5-terc-butil-2,4-diidróxi-fenil)-4-(4- piperidin-1-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isobutil-fenil)-4-(4- morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isobutil-fenil)-4-(4- piperidin-1-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(5-terc-butil-2,4-diidróxi-fenil)-4-(4- morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(5-terc-butil-2,4-diidróxi-fenil)-4-(4- dietilami-nometil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 3-(5-cloro-2,4-diidróxi-fenil)-4-(4-morfolin- 4-ilmetil-fenil)-isoxazol-5-carboxílico etilamida de ácido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(4,6-diidróxi- 2’-metil-bifenil-3-il)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(4’-flúor-4,6- diidróxi-bifenil-3-il)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(4,6-diidróxi- bife-nil-3-il)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(2’-flúor-4,6-diidróxi-bifenil-3-il)-4-(4- pirroli-din-1-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(4,6-diidróxi-bifenil-3-il)-4-(4-morfolin-4- ilme-til-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-fenotil-fenil)-4-(4- morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico isopropilamida de ácido 5-(5-cloro-2,4-diidróxi-fenil)-4-(4- piperi-din-1-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 4-(4-dietilaminometil-fenil)-5-(5-etil-2,4- diidró-xi-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(5-etil-2,4-diidróxi-fenil)-4-[4-(4-metil- pipera-zin-1-ilmetil) - fenil]-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(5-etil-2,4-diidróxi-fenil)-4-(4-morfolin-4- ilme-til-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(5-cloro-2,4-diidróxi-fenil)-4-(4- dietilamino-metil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(5-cloro-2,4-diidróxi-fenil)-4-[4-(4-metil- piperazin-1-ilmetil)-fenil]-isoxazol-3-carboxílico etilamida de ácido 5-(5-cloro-2,4-diidróxi-fenil)-4-(4-morfolin- 4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico.
[00054] Compostos com os quais a invenção está relacionada podem ser preparados através de métodos da literatura, como aqueles dos Exemplos preparativos aqui, e métodos análogos a estes.
[00055] Por exemplo, alguns compostos da fórmula (IA) podem ser preparados por reação de hidroxilamina e um composto da fórmula (III)
Figure img0007
em que anel A corresponde ao grupo R1 dos compostos (IA) e R2 e R3 são como definidos em relação à fórmula (I). Compostos desse modo preparados podem depois ser quimicamente modificados para introduzir substituintes desejados, para produzir outros compostos da fórmula (A) por exemplo onde R1 é um anel de fenila, opcionalmente já carregando substituintes, a introdução de um substituinte de bromo freqüentemente permitirá a introdução de outros substituintes no sítio de bromo através de acoplamento de sp2.
[00056] Em outra rota para alguns compostos da fórmula (A), o anel de isoxazol é formado pela reação de um composto (IV) com hidroxilamina
Figure img0008
em que R’1 e R’3 são os membros das classes de substituintes R1 e R3 definidos acima, para reduzir o isoxazol (V)
Figure img0009
seguido pela introdução do substituinte adicional R2 (por exemplo por brominação ou iodação do carbono do anel em (V) e acoplamento de sp2, e/ou modificação dos substituintes R11, R13 e R2 resultantes do isoxazol.
[00057] Além disso, alguns regioisômeros de isoxazol (B) podem ser preparados dos isoxazóis (A) por reação com trifluoreto de boro de trimetiloxônio, e novamente os compostos preparados desse modo podem depois ser quimicamente modificados para introduzir os substituintes desejados, para produzir outros compostos da fórmula (IA).
[00058] Será entendido que durante as sínteses acima, pode ser desejável proteger qualquer grupo reativo como hidroxilas, e desproteger depois. Outros detalhes sintéticos são descritos nos exemplos aqui.
[00059] Os compostos da invenção são inibidores de HSP90 e são desse modo úteis no tratamento de doenças que são responsivas à inibição da atividade de HSP90 como cânceres; doenças virais como Hepatite C (HCV) (Waxman, 2002), Imunossupressão como em transplantação (Bijlmakers, 2000 e Yorgin, 2000); Doenças Antiinflamatórias (Bucci, 2000) como Artrite Reumatóide, Asma, EM, Diabetes do Tipo I, Lúpus, Psoríase e Doença Inflamatória do Instestino; Fibrose Cística (Fuller, 2000); Doenças relacionadas à Angiogênese (Hur, 2002 e Kurebayashi, 2001): retinopatia diabética, hemangiomas, psoríase, endometriose e angiogênese tumoral. Também um inibidor de Hsp90 da invenção pode proteger células normais contra toxicidade induzida por quimioterapia e pode ser útil em doenças onde insuficiência para passar por apoptose é um fator subjacente. Um tal inibidor de Hsp90 pode também ser útil em doenças onde a indução de uma resposta de proteína à tensão das células ou choque térmico poderia ser benéfica, por exemplo, proteção de hipoxia-dano isquêmico devido à elevação de Hsp70 no coração (Hutter, 1996 e Trost, 1998) e cérebro (Plumier, 1997 e Rajder, 2000). Um inibidor de Hsp90 poderia também ser útil em doenças onde o desdobramento ou agregação de proteína é um fator causal principal, por exemplo, scrapie/CJD, Huntington e Alzheimer (Sittler, 2001; Trazelt, 1995 e Winklhofer, 2001).
[00060] Conseqüentemente, a invenção também fornece: (i) um método de tratamento de doenças ou condições responsivas à inibição da atividade de HSP90 em mamíferos, particularmente seres humanos, cujo método compreende administrar ao mamífero uma quantidade de um composto da fórmula (A) ou (B) como definido acima, ou um sal, hidrato ou solvato deste, eficaz para inibir a dita atividade de HSP90; e (ii) um composto da fórmula (A) ou (B) como definido acima, ou sal, hidrato ou solvato deste, para o uso em medicina humana ou veterinária, particularmente no tratamento de doenças ou condições responsivas à inibição da atividade de HSP90; (iii) uma composição farmacêutica compreendendo um composto da fórmula (A) ou (B) como definido e especificado acima, junto com um veículo farmaceuticamente aceitável. Em particular, a invenção inclui uma solução ou suspensão de tal composto em um veículo estéril fisiologicamente aceitável, por exemplo solução salina aquosa.
[00061] É para ser entendido que o nível de dose específico para qualquer paciente particular dependerá de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, rota de administração, taxa de excreção, combinação de droga e o mecanismo causativo e severidade da doença particular passando por terapia. Em geral, uma dose adequada para formulações oralmente administráveis usualmente estará na faixa de 0,1 a 3000 mg uma vez, duas vezes ou três vezes por dia, ou a quantidade diária equivalente administrada por infusão ou outras rotas. Porém, níveis de dose ótimos e freqüência de dosagem serão determinados através de experimentações clínicas como é convencional na técnica.
[00062] Os compostos com os quais a invenção está relacionada podem ser preparados para administração por qualquer rota consistente com suas propriedades farmacocinéticas. As composições oralmente administráveis podem ser na forma de comprimidos, cápsulas, pós, grânulos, pastilhas, preparações líquidas ou em gel, como soluções ou suspensões parenterais orais, tópicas ou estéreis. Comprimidos e cápsulas para administração oral podem ser na forma de apresentação de dose de unidade, e podem conter excipientes convencionais como agentes de ligação, por exemplo xarope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto ou polivinilpirrolidona; enchedores por exemplo lactose, açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glicina; lubrificante de formação de comprimido, por exemplo estearato de magnésio, talco, polietileno glicol ou sílica; desintegrantes por exemplo amido de batata, ou agentes umectantes aceitáveis como lauril sulfato de sódio. Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem-conhecidos na prática farmacêutica normal. Preparações líquidas orais podem ser na forma de, por exemplo, suspensões aquosas ou oleosas, soluções, emulsões, xaropes ou elixires, ou podem ser apresentadas como um produto seco para reconstituição com água ou outro veículo adequado antes do uso. Tais preparações líquidas podem conter aditivos convencionais como agentes de suspensão, por exemplo sorbitol, xarope, metilcelulose, xarope de glicose, gorduras comestíveis hidrogenadas de gelatina; agentes emulsificantes, por exemplo lecitina, monooleato de sorbitano, ou acácia; veículos não-aquosos (que podem incluir óleos comestíveis), por exemplo óleo de amêndoa, óleo de coco fracionado, ésteres oleosos como glicerina, propileno glicol ou álcool etílico; conservantes, por exemplo p-hidroxibenzoato de metila ou propila ou ácido sórbico, e se desejado, agentes aromatizantes ou corantes convencionais.
[00063] Para aplicação tópica à pele, a droga pode ser composta em um creme, loção ou ungüento. Formulações de creme ou ungüento que podem ser usadas para a droga são formulações convencionais bem-conhecidas na técnica, por exemplo como descrito nos livros de ensino padrão de ciência farmacêutica como a Farmacopéia Britânica.
[00064] O ingrediente ativo pode também ser administrado parenteralmente em um meio estéril. Dependendo do veículo e concentração usados, a droga ou pode ser suspensa ou pode ser dissolvida no veículo. Vantajosamente, adjuvantes, como uma anestesia local, agentes conservantes e tamponantes, podem ser dissolvidos no veículo.
[00065] Os compostos da invenção são também úteis em ensaios in vitro dependentes da inibição da atividade de HSP90, por exemplo na triagem de classes alternativas de inibidores de HSP90 em que o composto de teste compete ou desloca um composto desta invenção. Conseqüentemente, em ainda outro aspecto, a invenção inclui um método de inibir atividade de HSP90, compreendendo colocar em contato, in vitro, uma enzima de HSP90 e um composto da fórmula (A) ou (B) como definido e especificado acima.
[00066] Os exemplos a seguir ilustram a preparação e atividades dos compostos específicos da invenção. Exemplos 1-4 Esquema 1: Preparação do intermediário de bromo e arilação subseqüente
Figure img0010
Exemplo 1 4-[4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-5-IL]-BENZENO-1,3- DIOL
Figure img0011
Etapa 1 1-(2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-2-(4-METÓXI-FENIL)-ETANONA
Figure img0012
[00067] Resorcinol (4,4 g, 40 mmoles) e ácido 4-metoxifenilacético (6,6 g, 40 mmoles) em trifluoreto de boro.eterato (25 ml, 0,2 mol) foram aquecidos, sob uma atmosfera de nitrogênio, a 90°C durante ~90 min para dar uma solução vermelho pálida. A solução foi deixada esfriar e vertida em acetato de sódio aquoso (200 ml, 10%) e a mistura agitada por dar um precipitado amarelo pálido. Os sólidos foram removidos através de filtração e lavados com água (200 ml). Sólidos foram absorvidos em acetato de etila (250 ml) e lavados com água (200 ml). Solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada em um amarelo semi-sólido. Trituração com éter dietílico (100 ml) deu a 1- (2,4-diidróxi-fenil)-2-(4-metóxi-fenil)-etanona como um sólido laranja pálido, seco a vácuo, (2,2 g)
[00068] Tempo de retenção de LC 2,39 minutos [M+H]+ 259,2 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (DMSO-d6) 7,95(d J 8,9Hz ArH) 7,2(d J 8,7Hz 2ArH) 6,9(d J 8,7Hz 2ArH) 6,4(d J 9,9 ArH) 6,25(s ArH) 4,2(s 2CH2) 3,75(s 3OCH3) Etapa 2
Figure img0013
[00069] O anidrido acético (3 ml, 30 mmoles) foi adicionado a uma suspensão de carbonato de potássio (4,0 g, 29 mmoles) e 1-(2,4- diidróxi-fenil)-2-(4-metóxi-fenil)-etanona (1,95 g, 7,5 mmoles) em DMF (10 ml), e a suspensão resultante aquecida para 115°C durante ~90 min. A mistura foi deixada esfriar e vertida em água (200 ml), para dar um precipitado esbranquiçado. Os sólidos foram removidos através de filtração e lavados com água (100 ml) e éter dietílico (2x40 ml), para dar 7-hidróxi-3-(4-metóxi-fenil)-2-metil-cromen-4-ona como um pó esbranquiçado, seco a vácuo, (1,65 g)
[00070] Tempo de retenção de LC 2,26 minutos [M+H]+ 283,2 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (DMSO-d6) 7,8(d J 8,7Hz ArH) 7,2(d J 8,8Hz 2ArH) 7,0(d J 8,8Hz 2ArH) 6,9(d J 8,7 ArH) 6,8(s ArH) 3,8(s 3OCH3) 2,2(s 3CH3) Etapa 3 4-[4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-5-IL]-BENZENO-1,3- DIOL
Figure img0014
[00071] Cloridrato de hidroxilamina (0,35 g, 5 mmoles) foi adicionado a uma suspensão de 7-hidróxi-3-(4-metóxi-fenil)-2-metil- cromen-4-ona (0,14 g, 0,5 mmol) em piridina (3 ml) e a mistura aquecida sob refluxo por ~4 h. A solução foi deixada esfriar e vertida em água (50 ml) e extraída com éter dietílico (50 ml). Os extratos foram lavados com água (3x 50 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (30 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada para dar uma goma marrom pálida.
[00072] Produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna, em sílica, eluindo com acetato de etila/hexano (1:2), para dar uma goma incolor. Trituração com hexano deu 4-[4-(4-metóxi-fenil)-3-metil- isoxazol-5-il]-benze-no-1,3-diol como um pó branco, seco a vácuo, (0,087 g)
[00073] Tempo de retenção de LC 2,20 minutos [M+H]+ 298,2 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (DMSO-d6) 7,1(d J 8,8Hz 2ArH) 6,85(d J 8,6Hz ArH) 6,8(d J 8,8Hz 2ArH) 6,25(s ArH) 6,15(d J 8,6Hz ArH) 3,65(s 3OCH3) 2,15(s 3CH3) Exemplo 2 4-BROMO-6-[4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-5-IL]- BENZENO-1, 3-DIOL
Figure img0015
[00074] Tribrometo de benziltrimetilamônio (3,95 g, 10 mmoles) foi adicionado em partes a uma suspensão esfriada para gelo de 4-[4-(4- metóxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benzeno-1,3-diol (Exemplo 1) (2,95 g, 10 mmoles) em diclorometano (50 ml) e a mistura agitada por ~60 min, em temperatura ambiente. Acetato de etila (300 ml) foi adicionado e a mistura lavada com água (3x200 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (50 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada para dar um sólido marrom pálido. Produto bruto foi purificado através de cromatografia de coluna, em sílica, eluindo com acetato de etila/hexano (1:2), para dar 4-bromo-6-[4-(4-metóxi- fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benzeno-1,3-diol como um sólido branco, seco a vácuo, (3,42 g)
[00075] Tempo de retenção de LC 2,38 minutos [M+H]+ 378,2 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Acetona-d6) 7,35(s ArH) 7,2(d J 8,8Hz 2ArH) 6,9(d J 8,8Hz 2ArH) 6,65(s ArH) 3,8(s 3OCH3) 2,25(s 3CH3) Exemplo 3 5-[4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-5-IL]-BIFENIL-2,4-DIOL
Figure img0016
Etapa 1 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-BROMO-FENIL)-4-(4-METÓXI-FENIL)-3- METIL-ISOXAZOL
Figure img0017
[00076] Brometo de benzila (0,36 ml, 3 mmoles) foi adicionado à suspensão de 4-bromo-6-[4-(4-metóxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]- benzeno-1,3-diol (Exemplo 2) (0,55 g, 1,5 mmol) e carbonato de césio (0,85 g, 2,6 mmoles) em DMF (5 ml) e a mistura agitada por ~18 h, em temperatura ambiente. Água (100 ml) foi adicionada e a mistura extraída com éter dietílico (2x30 ml). Os extratos combinados foram lavados com água (4x75 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (50 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada para dar uma goma marrom pálida. Trituração com hexano deu 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metóxi-fenil)-3- metil-isoxazol como um sólido esbranquiçado, seco a vácuo, (0,5 g).
[00077] Tempo de retenção de LC 3,08 minutos [M+H]+ 558,4 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Clorofórmio-d) 7,55(s ArH) 7,35-7,25(m 5ArH) 7,2(m 3ArH) 6,95(d J 8,8Hz 2ArH) 6,85(m 2ArH) 6,7(d J 8,8Hz 2ArH) 6,35(s ArH) 4,95(s 2CH2) 4,6(s 2CH2) 3,75(s 3OCH3) 2,25(s 3CH3) Etapa 2 5-(4,6-BIS-BENZILÓXI-BIFENIL-3-IL)-4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL- ISOXAZOL
Figure img0018
[00078] Fosfato de potássio (0,1 g, 0,5 mmol) foi adicionado a uma solução de 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metóxi-fenil)-3- metil-isoxazol (0,14 g, 0,25 mmol) e ácido fenil borônico (0,095 g, 0,75 mmol) em 1,4 dioxano (4 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio. Tetraquis(trifenilfosfino) paládio(0) (cat.) foi adicionado e a suspensão aquecida, 80°C durante ~18 horas. A suspensão foi deixada esfriar e acetato de etila (25 ml) adicionado. A mistura foi lavada com água (3x25 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (25 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada para dar uma goma marrom pálida. Trituração com hexano deu 5-(4,6-bis- benzilóxi-bifenil-3-il)-4-(4-metóxi-fenil)-3-metil-isoxazol como um sólido esbranquiçado, seco a vácuo.
[00079] Tempo de retenção de LC 3,08 minutos [M+H]+ 554,4 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Clorofórmio-d) 7,4(m 2ArH) 7,35(s ArH) 7,3-7,1(m 11ArH) 6,95(d J 8,8Hz 2ArH) 6,9(m 2ArH) 6,7(d J 8,8Hz 2ArH) 6,45(s ArH) 4,9(s 2CH2) 4,7(s 2CH2) 3,75(s 3OCH3) 2,25(s 3CH3) Etapa 3 7-HIDRÓXI-3-(4-METÓXI-FENIL)-2-METIL-6-FENIL-CROMEN-4-ONA
Figure img0019
[00080] Formiato de amônio (3,2 g, 50 mmoles) foi adicionado a uma solução de 5-(4,6-bis-benzilóxi-bifenil-3-il)-4-(4-metóxi-fenil)-3- metil-isoxazol (1,4 g, 2,5 mmoles) em metanol (20 ml)/acetato de etila (10 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio. Paládio em carbono (10%) (cat.) foi adicionado e a suspensão aquecida, a 60°C durante ~18 horas. A suspensão foi deixada esfriar e acetato de etila (150 ml) adicionada, e a suspensão filtrada. O filtrado foi lavado com água (3x100 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (50 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada para dar uma goma marrom pálida. Trituração com metanol deu 7-hidróxi-3- (4-metóxi-fenil)-2-metil-6-fenil-cromen-4-onas como um sólido esbranquiçado, seco a vácuo.
[00081] Tempo de retenção de LC 2,58 minutos [M+H]+ 359,2 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (DMSO-d6) 7,9(s ArH) 7,5- 7,3(m 5ArH) 7,25(d J 8,8Hz 2ArH) 7,1 (s ArH) 7,05(d J 8,8Hz 2ArH) 3,85(s 3OCH3) 2,2(s 3CH3) Etapa 4 5-[4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-5-IL]-BIFENIL-2,4-DIOL
Figure img0020
[00082] Cloridrato de hidroxilamina (75 mg, 1,08 mmol) foi adicionado a uma suspensão de 7-hidróxi-3-(4-metóxi-fenil)-2-metil-6- fenil-cromen-4-ona (105 mg, 0,29 mmol) em piridina (2 ml) e a mistura aquecida sob refluxo durante ~6 h, para dar uma solução amarelo pálida. A solução foi deixada esfriar e água (20 ml) adicionada. A mistura foi extraída com éter dietílico (2x10 ml). Os extratos combinados foram lavados com água (2x20 ml) e a solução de cloreto de sódio aquosa saturada (10 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada. Os produtos brutos foram purificados por cromatografia de coluna, sílica, eluindo com acetato de etila/hexano (1:1), para dar o composto do título como um pó esbranquiçado (80 mg)
[00083] Tempo de retenção de LC 2,56 minutos [M+H]+ 374,3 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Acetona-d6) 7,5-7,3(m 5ArH) 7,2(d J 8,8Hz 2ArH) 7,0(d J 8,8Hz 2ArH) 6,9(d J 8,6Hz ArH) 6,35(s ArH) 6,1(d J 8,7Hz ArH) 3,85(s 3OCH3) 2,25(s 3CH3) Exemplo 4 4-CLORO-6-[4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-5-IL]- BENZENO-1,3-DIOL
Figure img0021
[00084] Cloridrato de hidroxilamina (0,7 g, 10 mmoles) foi adicionado a uma suspensão de 6-cloro-7-hidróxi-3-(4-metóxi-fenil)-2- metil-cromen-4-ona [preparada analogamente ao Exemplo 1, Etapa 2] (0,32 g, 1,0 mmol) em piridina (4 ml) e a mistura aquecida sob refluxo durante ~6 horas, para dar uma solução amarelo pálida. A solução foi deixada esfriar e água (20 ml) adicionada. A mistura foi extraída com éter dietílico (2x10 ml). Os extratos combinados foram lavados com água (2x20 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (10 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada. Os produtos brutos foram purificados por cromatografia de coluna, sílica, eluindo com acetato de etila/hexano (1:1), para dar 4-cloro-6-[4-(4- metóxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benzeno-1,3-diol como um pó esbranquiçado (0,103 g)
[00085] Tempo de retenção de LC 2,37 minutos [M+H]+ 332,2 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Acetona-d6) 7,2(d J 8,8Hz 2ArH) 7,15(s ArH) 6,9(d J 8,8Hz 2ArH) 6,6(s ArH) 3,85(s 3OCH3) 2,25(s 3CH3)
[00086] Os compostos dos Exemplos 1-4 tinham um IC50 de HSP90 na faixa A quando testados no ensaio de ATPase de Malachite Green descrito. Nas tabelas a seguir, a coluna final dá o resultado na mesma base para o composto em questão, exceto no caso do Exemplo 12b, onde a atividade citada é como medida no ensaio de polarização de fluorescência descrito abaixo.
[00087] Exemplos 5-16 foram preparados usando a reação descrita para os Exemplos 1-4. Outros detalhes dos Exemplos de preparação 6 e 7 são análogos aos dos Exemplos 86 e 87.
Figure img0022
Figure img0023
* também comercialmente disponível de Interbioscreen § comercialmente disponível de Enamine ** preparado do intermediário de resorcinol de bromo protegido com cianeto de cobre (I) em dimetilformamida a 150°C *** Ensaio de Polarização de Fluorescência: ‘A’ =< 10 uM; ‘B’ => 10 uM Exemplo 14 4-[4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-5-IL]-6-FENETIL BENZENO-1,3-DIOL
Figure img0024
[00088] Foi preparado do acoplamento de ácido estiril borônico do composto de bromo isoxazol do Exemplo 2 Etapa 1, como descrito acima, seguido por redução e tratamento com hidroxilamina, analogamente ao Exemplo 3.
[00089] Tempo de retenção de LC 2,56 minutos [M+H]+ 402 (Tempo de operação 3,75 min) Exemplo 15 4-[4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-5-IL]-2,6-BIS-(4-METIL- PIPE- RAZIN-1-ILMETIL)-BENZENO-1,3-DIOL
Figure img0025
Esquema 2: REAÇÃO DE MANNICH
Figure img0026
[00090] N-metilpiperazina (0,125 ml, 1,1 mmol) foi adicionada a uma suspensão de 4-[4-(4-metóxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benzeno- 1,3-diol (0,15 g, 0,5 mmol) e paraformaldeído (0,040 g) em 1,4-dioxano (4 ml) e a mistura aquecida sob refluxo durante ~18 horas, para dar uma solução amarela marrom. A solução foi deixada esfriar e acetato de etila (25 ml) adicionado. A mistura foi lavada com água (3x25 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (25 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada em uma goma marrom pálida. Trituração com hexano deu 4-[4-(4-metóxi-fenil)-3- metil-isoxazol-5-il]-2,6-bis-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzeno-1,3-diol (0,121 g) como um pó marrom pálido.
[00091] Tempo de retenção de LC 1,61 minutos [M+H]+ 522,6 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Acetona-d6) 7,2(d J 8,8Hz 2ArH) 6,95(s ArH) 6,8(d J 8,8Hz 2ArH) 3,85(s 3OCH3) 3,75(s 2CH2) 3,65(s 2CH2) 2,9-2,0(br s 16 CH2) 2,3(s 3CH3) 2,25(s 3CH3) 2,2(s 3CH3) Exemplo 16 ÉSTER DE METILA DE ÁCIDO 2,4-DIIDRÓXI-5-[4-(4-METÓXI- FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-5-IL]-BENZÓICO
Figure img0027
Esquema 3: FORMAÇÃO DE ÉSTER
Figure img0028
Etapa 1
[00092] n-Butil lítio (100 μl) foi adicionado a uma solução de 5-(2,4- bis-benzilóxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metóxi-fenil)-3-metil-isoxazol (154 mg, 0,28 mmol) em tetraidrofurano (2,5 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio a -78°C. Solução agitado a -70°C durante 30 minutos para dar uma solução laranja. O íon foi extinto com cloroformiato de metila (100 μl, 3 eq) e deixado aquecer para temperatura ambiente durante 30 minutos. A solução foi extinta com cloreto de amônio aquoso saturado (5 ml). A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 5 ml). Os extratos combinados foram lavados com água (2x5 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (5 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada. Os produtos brutos foram purificados por cromatografia de coluna, sílica, eluindo com acetato de etila em hexano (gradiente 20% a 60% de acetato de etila) para dar éster de metila de ácido 2,4-bis-benzilóxi-5-[4-(4-metóxi-fenil)-3-metil- isoxazol-5-il]-benzóico (72 mg). Tempo de retenção de LC 4,95 minutos [M+H]+ 536,4 (Tempo de operação 7,5 min) R.M.N. (DMSO- d6) 7,8(s ArH) 7,55(d J 7,1Hz 2ArH) 7,4(t J 6,2Hz 2ArH) 7,35(d J 6,1Hz ArH) 7,3(m 3ArH) 7,1(m 4ArH) 7,0(s ArH) 6,9(d 8,8Hz 2ArH) 5,3(s 2CH2) 5,1(s 2CH2) 3,78(s OCH3) 3,76(s OCH3) 2,28(s CH3)
Etapa 2
[00093] Formiato de amônio (172 mg, 20 eq) foi adicionado a uma solução de éster de metila de ácido 2,4-bis-benzilóxi-5-[4-(4-metóxi- fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-benzóico (72 mg, 0,13 mmol) em metanol (2 ml)/acetato de etila (1 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio. 10% paládio em carbono (cat.) foram adicionados e a suspensão aquecida durante a noite a 60°C. A solução foi deixada esfriar. Acetato de etila (5 ml) adicionado, solução lavada com água (2x5 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (5 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada. Os produtos brutos foram purificados por cromatografia de coluna, sílica, eluindo com acetato de etila em hexano (gradiente 25% a 45% de acetato de etila) para dar éster de metila de ácido 2,4-diidróxi-5-[4-(4-metóxi-fenil)-3-metil- isoxazol-5-il]-benzóico (7,0mg). Tempo de retenção de LC 2,49 minutos [M+H]+ 356,3 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (CDCl3) δ = 10,85(s ArOH) 7,52(s ArOH) 7,12(d J8Hz 2ArH) 6,98(s ArH) 6,91(d J8Hz 2ArH) 6,45(s ArH) 3,78(s 3 OCH3) 3,71(s 3 OCH3) 2,21(s 3 CH3).
[00094] Os compostos dos Exemplos 14-16 tiveram um IC50 de HSP90 nas faixas ‘A’, ‘B’ e ‘B’, respectivamente quando testados no ensaio de ATPase de Malachite Green descrito abaixo.
[00095] Similarmente, os Exemplos 17-20 foram preparados extinguindo com N-formil piperidina, tioisocianato de fenila, isocianato de 2-metoxifenila e benzaldeído, respectivamente. A reação de desproteção final foi realizada com tricloreto de boro como descrito para o exemplo 23 (última reação no Esquema 5). Exemplo 21 era um subproduto da Etapa 1, Exemplo 16. Atividades citadas são aquelas obtidas no ensaio de Malachite Green descrito abaixo.
Figure img0029
Figure img0030
Exemplo 22 4-BENZIL-6-[4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-5-IL]- BENZENO-1,3-DIOL
Figure img0031
Esquema 4: SÍNTESE DE BENZILRESORCINOL
Figure img0032
ÉSTER DE ETILA DE ÉSTER DE 2-BENZOIL-5- ETOXICARBONILÓXI-FENILA DE ÁCIDO CARBÔNICO
Figure img0033
[00096] Trietil amina (10 ml, 72,2 mmoles) foi adicionada a uma solução de 2,4-diidroxibenzofenona (1) (5,4 g, 23,3 mmoles) em THF (50 ml) e a solução esfriada para 0°C. Cloroformiato de etila (6,9 ml, 72,2 mmoles) foi adicionado lentamente e a suspensão agitada por ~30 minutos a 0°C, e por ~3 horas em temperatura ambiente. Água (150 ml) foi adicionada e a mistura extraída com éter dietílico (150 ml). Os extratos foram lavados com água (2x 150 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (100 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada para dar 4-benzil-benzeno-1,3-diol como uma goma verde pálida, solidificada em repouso, (8,2 g).
[00097] Tempo de retenção de LC 2,73 minutos [M+H]+ 359,2 (Tempo de operação 3,75 min) δ (clorofórmio-d) 7,7(m 2ArH) 7,5(m 2ArH) 7,35(m 2ArH) 7,15(m 2ArH) 4,25(q J 7,1Hz 2CH2) 4,05(q J 7,1Hz 2 CH2) 1,35(t J 7,1Hz 3CH3) 1,15(t J 7,1Hz 3 CH3) 4-BENZIL-BENZENO-1,3-DIOL
Figure img0034
[00098] Uma solução de boroidreto de sódio (1,85 g, 49 mmoles) em água (30 ml) foi adicionada a uma solução esfriada em gelo de éster de etila de éster de 2-benzoil-5-etoxicarbonilóxi-fenila de ácido carbônico (3,6 g, 10 mmoles) em THF (30 ml). A mistura foi agitada durante ~60 minutos a 0°C, e por ~60 horas em temperatura ambiente, para dar uma suspensão vermelho pálida. Água (150 ml) foi adicionada e a mistura extraída com éter dietílico (150 ml). Os extratos foram lavados com água (2x 100 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (50 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada para dar uma goma amarelo pálida. A goma foi absorvida em hidróxido de sódio aquoso (20 ml, 10%), e a solução aquecida sob refluxo durante ~60 min. A solução foi deixada esfriar e acidificada com ácido clorídrico (5 ml, 37%). A mistura foi extraída com éter dietílico (50 ml). Os extratos foram lavados com água (3x 40 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (30 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada para dar 4-benzil- benzeno-1,3-diol como uma goma vermelho-escura, (2,1 g).
[00099] Tempo de retenção de LC 2,28 minutos [M+H]+ nenhum íon (Tempo de operação 3,75 min) δ (clorofórmio-d) 7,2(m 3ArH) 7,1(m 2ArH) 6,85(d J 8,1Hz ArH) 6,3(d J 8,1Hz ArH) 6,2(s ArH) 3,85(s 2CH2)
[000100] O 4-benzil-benzeno-1,3-diol foi usado como o material de partida em uma síntese do Esquema 1 para fornecer o Exemplo 23. Exemplo 23 ÁCIDO 3-{2,4-DIIDRÓXI-5-[4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL- 5-IL]-FENIL}-ACRÍLICO
Figure img0035
Esquema 5: REAÇÃO DE HECK E DESPROTEÇÃO DE TRICLORETO DE BORO
Figure img0036
Etapa 1 ÉSTER DE TERC-BUTILA DE ÁCIDO 3-{2,4-BIS-BENZILÓXI-5-[4-(4- METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-5-IL]-FENIL}-ACRÍLICO
Figure img0037
[000101] Diisopropiletil amina (1 ml, 5,7 mmoles) foi adicionada a uma suspensão de 5-(2,4-Bis-benzilóxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metóxi- fenil)-3-metil-isoxazol (0,56 g, 1,0 mmol) em acrilato de terc-butila (1 ml, 6,8 mmoles) e 1-butanol (8 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio. Diclorobis(tri-o-tolilfosfino)paládio (II) (cat.) foi adicionado e a suspensão aquecida, 140°C durante ~18 h, para dar uma solução amarela/verde. A solução foi deixada esfriar e concentrada em uma goma amarela/verde. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna, sílica, eluindo com acetato de etila/hexano (1:9), para dar éster de terc-butila de ácido 3-{2,4-bis-benzilóxi-5-[4-(4-metóxi-fenil)-3- metil-isoxazol-5-il]-fenil}-acrílico como uma goma amarela/verde (315 mg). Material de partida (170 mg) foi restabelecido.
[000102] Tempo de retenção de LC 3,23 minutos [M+H]+ 604,6 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Clorofórmio-d) 7,85(d J 16,1Hz CH) 7,6(s ArH) 7,4-7,25(m 8ArH) 7,05(d J 8,8Hz 2ArH) 6,9(m 2ArH) 6,8(d J 8,8Hz 2ArH) 6,5(s ArH) 6,35 (d J 16,1Hz CH) 5,05(s 2CH2) 4,75(s 2CH2) 3,75(s 3OCH3) 2,25(s 3CH3) 1,5(s 9CCH3) Etapa 2 ÁCIDO 3-{2,4-DIIDRÓXI-5-[4-(4-METÓXI-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL- 5-IL]-FENIL}-ACRÍLICO
Figure img0038
[000103] Solução de tricloreto de boro (2 ml, 1,0 M em diclorometano) foi adicionada lentamente a uma solução de éster de terc-butila de ácido 3-{2,4-bis-benzilóxi-5-[4-(4-metóxi-fenil)-3-metil- isoxazol-5-il]-fenil}-acrílico (50 mg, 0,09 mmol) em diclorometano (1 ml), a -78°C (gelo seco/acetona) sob uma atmosfera de nitrogênio. A solução resultante foi agitada por ~uma hora a -78°C, e por ~90 minutos em temperatura ambiente. A solução foi esfriada para -78°C e água (2 ml) adicionada e a mistura foi agitada por ~30 min em temperatura ambiente. Acetato de etila (30 ml) foi adicionado e a solução lavada com água (2x5 ml) e solução de cloreto de sódio saturada aquosa (10 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio anidro e concentrada em uma goma amarelo pálida. Trituração com hexano deu um sólido amarelo, sólidos foram removidos através de filtração e lavados com hexano, secos a vácuo para dar ácido 3-{2,4- diidróxi-5-[4-(4-metóxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-fenil}-acrílico (10 mg) como pó amarelo.
[000104] Tempo de retenção de LC 2,08 minutos [M+H]+ 368,3 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Acetona-d6) 7,85(d J 16,1Hz CH) 7,5(s ArH) 7,25(d J 8,8Hz 2ArH) 6,95(d J 8,8Hz 2ArH) 6,6(s ArH) 6,35 (d J 16,1Hz CH) 3,8(s 3OCH3) 2,25(s 3CH3)
[000105] Similarmente, 4-[4-(4-metóxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il]-6- estiril-benzeno-1,3-diol (Exemplo 24) foi preparado através de desproteção de tricloreto de boro de 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-estiril-fenil)- 4-(4-metóxi-fenil)-3-metil-isoxazol (preparado de acoplamento de ácido estiril borônico do intermediário de bromo isoxazol, Exemplo 3))
Figure img0039
[000106] Tempo de retenção de LC 2,08 minutos [M+H]+ 368,3 (Tempo de operação 3,75 min)
[000107] Os compostos dos Exemplos 22 - 24 tiveram um IC50 de HSP90 nas faixas ‘A’, ‘B’ e ‘C’ respectivamente quando testados no ensaio de ATPase de Malachite Green descrito abaixo. Esquema 6: SÍNTESE DE 5-CARBOXAMIDO ISOXAZÓIS
Figure img0040
Exemplo 25 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(5-CLORO-2,4-DIIDROXIFENIL)-4-(4- METÓXI-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0041
Etapa 1 1-(5-CLORO-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-ETANONA
Figure img0042
[000108] Ácido acético (17,5 mL) foi adicionado a gotas a uma suspensão de 4-clororresorcinol (42,5 g, 0,293 mmol) em eterato de trifluoreto de boro (200 mL) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi aquecida para 90°C durante 3,5 horas e depois deixada esfriar para temperatura ambiente. Um sólido tinha formado após por volta de uma hora de esfriamento. A mistura foi vertida em 700 mL de uma solução a 10% p/v de acetato de sódio aquoso. Esta mistura foi agitada vigorosamente durante 2,5 horas. Um sólido marrom-claro tinha se formado que foi filtrado, lavado com água e seco ao ar durante a noite para fornecer 1-(5-cloro-2,4-diidróxi-fenil)- etanona (31,6 g, 58%). LCMS: [M-H]+ 185. Etapa 2 1-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-ETANONA
Figure img0043
[000109] Brometo de benzila (30 mL) foi adicionado a uma mistura de 1-(5-cloro-2,4-diidróxi-fenil)-etanona (20 g, 0,107 mol) e carbonato de potássio (37 g, 2,5 equiv) em acetonitrila (350 mL). A mistura foi aquecida a refluxo durante 6 horas depois deixada esfriar e agitada durante a noite. A mistura foi filtrada e os sólidos foram lavados com diclorometano (3 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram evaporados a vácuo para deixar um sólido amarelo pálido que foi triturado com uma mistura de hexano (350 mL)/acetato de etila (15 mL) e filtrado para dar um sólido esbranquiçado, 1-(2,4-bis-benzilóxi-5- cloro-fenil)-etanona (35,4 g, 90%). 1H RMN (400MHz) consistente com a estrutura. Etapa 3 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 4-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5- CLOROFENIL)-2-HIDRÓXI-4-OXO-BUT-2-ENÓICO
Figure img0044
[000110] Metal de sódio (1,35 g, 0,058 mol) foi adicionado em pedaços pequenos em um período de 20 minutos em etanol anidro agitado sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi depois agitada durante um adicional de 10 minutos até que todo o sódio tivesse reagido para dar uma solução homogênea. 1-(2,4-bis- benzilóxi-5-cloro-fenil)-etanona (10,0 g, 0,027 mol) foi adicionada em porções por 2-3 minutos e a suspensão resultante foi agitada durante 5 minutos antes da adição de oxalato de dietila (6 ml, 0,043 mol) que forneceu um precipitado amarelo mais grosso. A mistura de reação foi aquecida em refluxo (dando solução marrom homogênea) durante 4 horas, depois deixada esfriar para temperatura ambiente e ácido acético (6 ml) foi adicionado. As formas sólidas resultantes foram trituradas, filtradas, lavadas com etanol e secas para dar um sólido amarelo (12,0 g, 95%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,2 (t, 3H), 4,19 (q, 2H), 5,05 (s, 2H), 5,10 (s, 2H), 6,50 (s, 1H), 7,22-7,41 (m, 10H), 7,97 (s, 1H). Etapa 4 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5- CLOROFENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0045
[000111] Cloridrato de hidroxilamina (0,89 g; 12,8 mmoles) foi adicionado a uma suspensão de éster de etila de ácido 4-(2,4-bis- benzilóxi-5-clorofenil)-2-hidróxi-4-oxo-but-2-enóico (5,00 g; 10,7 mmoles) em etanol absoluto (100 ml). A mistura de reação foi aquecida em refluxo durante quatro horas depois deixada esfriar para temperatura ambiente (durante este tempo a mistura permanece heterogênea mas fica amarelo mais claro na cor). A mistura foi filtrada e o sólido filtrado foi lavado com água (2 x 20 ml), etanol (2 x 20 ml) e seco a vácuo a 45°C. Isto rende éster de etila de ácido 5-(2,4-bis- benzilóxi-5-clorofenil)-isoxazol-3-carboxílico como um sólido amarelo macio, 4,49 g (91%) LCMS: [M+H]+ 466, 464 (37Cl; 35Cl). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,42 (t, 3H), 4,42 (q, 2H), 5,13 (s, 2H), 5,14 (s, 2H), 6,62 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 7,35-7,43 (m, 10H), 8,00 (s, 1H). Etapa 5 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLOROFENIL)- ISOXA- ZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0046
[000112] Uma solução de etilamina em solução de metanol (2,0 M; 40 ml; 80 mmoles) foi adicionada a uma suspensão agitada de éster de etila de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-clorofenil)-isoxazol-3-carboxílico (4,40 g; 9,51 mmoles) em etanol absoluto (50 ml). A mistura de reação foi aquecida para 80°C (temperatura do banho de óleo) durante cinco horas. A mistura de reação foi deixada esfriar para temperatura ambiente e deixada repousar durante a noite. Um produto sólido incolor formou e a mistura de reação foi também esfriada em um banho de gelo-água, filtrada e lavada com etanol frio (2 x 20 ml). O produto incolor foi seco a vácuo para render etilamida de ácido 5-(2,4- bis-benzilóxi-5-clorofenil)-isoxazol-3-carboxílico 3,42 g (78%) LCMS: [M+H]+ 465, 463 (37Cl; 35Cl). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,25 (t, 3H), 3,48 (m, 2H), 5,10 (s, 2H), 5,2 (s, 2H), 6,59 (s, 1H), 6,83 (brt, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,30-7,41 (m, 10H), 7,97 (s, 1H). Etapa 6 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLOROFENIL)-4- BROMO-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0047
[000113] Uma solução de bromo em ácido acético (0,6 M; 7,2 mL; 4,32 mmoles) foi adicionada a uma suspensão agitada de etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-clorofenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxílico (2,00 g; 4,32 mmoles) e acetato de sódio (0,708 g, 8,64 mmoles) em ácido acético (30 ml) em temperatura ambiente. A mistura foi aquecida para 80°C e fica homogêneo dentro de 5-10 minutos, para fornecer uma solução vermelho-escura. Após aquecer durante 2,5 horas a solução ficou amarela na cor. Análise de TLC mostrou material de partida e produto presentes. Um adicional de 2,0 ml (1,2 mmol) do bromo em solução de ácido acético foi adicionado durante as próximas duas horas. A mistura de reação foi deixada esfriar para temperatura ambiente e ácido acético foi removido a vácuo para fornecer um resíduo sólido que foi dividido entre éter (200 ml) e água (200 ml). As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com água (3 x 100 ml), solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (2 x100 ml) e solução de cloreto de sódio saturada (1 x 200 ml). A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio, filtrada e os solventes filtrados foram removidos a vácuo para fornecer um óleo amarelo que foi purificado através de cromatografia instantânea em sílica-gel, eluindo com 1-20% de acetato de etila em hexano. Isto fornece o produto como sólido incolor, 1,2 g (52%) LCMS: [M+H]+ 543, 541 (81Br; 79Br). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,26 (t, 1H), 3,50 (m, 2H), 5,01 (s, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,62 (s, 1H), 6,74 (br t, 1H), 2,28-7,41 (m, 10H), 7,53 (s, 1H). Etapa 7 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLOROFENIL)-4-(4- METÓXI-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0048
[000114] A uma mistura de ácido 4-metoxifenilborônico (0,178 g, 1,17 mmol) e etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-clorofenil)-4-bromo- isoxazol-3-carboxílico (0,507 g, 0,94 mmol) foi adicionado hidrogeno carbonato de sódio (237 mg, 2,82 mmoles) seguido por DMF (5 ml) e água (1,0 ml). A mistura foi desgaseificada através de evacuação e fluxando com nitrogênio (três vezes), seguido por borbulhamento de gás de nitrogênio através de mistura durante cinco minutos. Diclorobis(trifenilfosfina)paládio (II) (66 mg, 0,094 mmol) foi adicionado e mistura de reação foi aquecida sob uma atmosfera de nitrogênio a 90°C durante duas horas (mistura de reação fica marrom-escura na cor). Outros 10 mg de diclorobis(trifenilfosfina)paládio (II) foram adicionados e a mistura de reação foi aquecida para 90°C durante 15 horas depois deixada esfriar para temperatura ambiente. A maior parte dos solventes é removida a vácuo e o resíduo foi dividido entre acetato de etila (50 ml) e água (50 ml). Esta mistura foi filtrada através de um bloco de celite para remover os resíduos de paládio e depois as fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com água (2 x 30 mL), solução de cloreto de sódio aquosa saturada (50 ml) depois seca em sulfato de sódio. A mistura foi filtrada e os solventes do filtrado removidos a vácuo para fornecer um óleo amarelo (598 mg). O produto de reação bruto foi purificado por adsorção em sílica-gel depois cromatografia instantânea em sílica-gel (20 g IST) eluindo com um gradiente de solvente de 1 a 20% de acetato de etila em hexano. Isto rende etilamida de ácido 5- (2,4-bis-benzilóxi-5-clorofenil)-4-(4-metóxi-fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um sólido incolor (0,223 g, 40%). LCMS: [M+H]+ 571, 569 (37Cl; 35Cl). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,21 (t, 3H), 3,44 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 4,73 (s, 2H), 6,45 (s, 1H), 6,65 (t, 1H), 6,80 (d, 2H), 7,14 a 7,44 (m, 8H), 6,95 (m 2H). Etapa 8 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(5-CLORO-2,4-DIIDROXIFENIL)-4-(4- METÓXI-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0049
[000115] A uma solução esfriada em banho de gelo de etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-clorofenil)-4-(4-metóxi-fenil)-isoxazol-3- carboxílico (0,213 mg, 0,374 mmol) em diclorometano (5 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio uma solução a 1,0 M de tricloreto de boro foi adicionada em diclorometano (1,12 ml; 1,12 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 15 minutos depois em temperatura ambiente durante 35 minutos. A mistura de reação foi reesfriada para 0°C e extinguida pela adição de solução de hidrogeno carbonato de sódio aquosa saturada (5 ml). Após agitar durante 5 minutos o diclorometano foi removido a vácuo e o resíduo foi dividido entre acetato de etila (30 ml) e água (30 ml). As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com água (30 mL), solução de cloreto de sódio aquosa saturada (30 ml) depois seca em sulfato de sódio. A mistura foi filtrada e os solventes do filtrado removidos a vácuo para fornecer um sólido incolor parecido com espuma que foi purificado por adsorção em sílica-gel depois cromatografia instantânea em sílica-gel (10 g IST) eluindo com 50% de acetato de etila em hexano. Isto fornece etilamida de ácido 5-(5-cloro-2,4-diidroxifenil)-4-(4-metóxi- fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um sólido incolor (0,097 g; 67%). LCMS: [M+H]+ 391, 389 (37Cl; 35Cl). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ: 1,08 (t, 3H), 3,22 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 6,59 (s 1H), 6,87 (d, 1H), 7,13-7,17 (m, 3H), 8,88 (br t, 1H), 10,09 (s, 1H), 10,62 (s, 1H). Exemplo 25 tinha atividade ‘A’ no Ensaio de Polarização de Fluorescência, como descrito abaixo.
[000116] Similarmente, o Exemplo 26 foi preparado acoplando o éster de boronato de 4-piperazinofenila protegido por Boc como acima. Este éster de boronato foi feito de 1-(4-bromofenil)piperazina por proteção de boc seguido por formação de éster de boronato por acoplamento catalisado por Pd com bis(tetrametilpinacolato)diboro. Exemplo 27 foi feito similarmente. Exemplo 27a foi feito através de desproteção de etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-clorofenil)-4- bromo-isoxazol-3-carboxílico:
Figure img0050
* Ensaio de Polarização de Fluorescência Esquema 7: PREPARAÇÃO DO INTERMEDIÁRIO DE 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5- CLORO-FENIL)-4-IODO-3-METIL-ISOXAZOL
Figure img0051
Exemplo 28 4-CLORO-6-[3-METIL-4-(3-MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)- ISOXAZOL-5-IL]-BENZENO-1,3-DIOL
Figure img0052
Etapa 1 1-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-3-HIDRÓXI-BUT-2-EN-1- ONA:
[000117] A uma solução de cetona (15 g) em EtOAc (200 ml) foi adicionado metal de sódio (3,0 g) em pedaços pequenos. A suspensão foi agitada em temperatura ambiente durante 15 min, depois aquecida em refluxo durante a noite. A reação foi extinguida com ácido acético, e o precipitado amarelo filtrado. Este foi triturado em hexanos para dar cristais amarelo brilhantes. RMN indicou que este era o produto requerido - principalmente em forma de enol - traço pequeno de forma de ceto.
Etapa 2 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL:
[000118] A dicetona (4,0 g) foi suspensa em 80% de EtOH aq. Cloridrato de hidroxilamina (3,4 g) e acetato de sódio (4,0 g) foram adicionados e o pH ajustado a 8/9 com 2M NaOH. A solução foi refluxada por 24 h (difícil de monitorar por TLC devido aos valores de Rf bem parecidos). Após este tempo a solução foi acidificada para pH5 com 1M HCl e vertida em água. O precipitado branco foi filtrado, lavado com água e triturado com hexano para dar um sólido branco. Notas; Composto pode também ser lavado com éter se necessário para remover as impurezas de traço mas não usualmente requerido. RMN indicou que este era o produto requerido.
Etapa 3 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4-IODO-3-METIL- ISOXAZOL:
[000119] Isoxazol (2 g) foi colocado em uma mistura de ácido acético (24 ml) e água (30 ml). Iodomonocloreto (2 g excesso) foi adicionado e a solução aquecida a 80°C durante 2-3 h. Após esfriar para temperatura ambiente 10% de Na2SO3 (sulfeto de sódio) em água foi adicionado (50 ml). Um sólido/óleo laranja viscoso foi separado da mistura e lavado com água. Ele foi depois dissolvido em acetona e filtrado. Remoção da acetona sob vácuo deu um óleo laranja viscoso que se solidificou durante a noite em um sólido laranja. RMN e LCMS indicaram que este era o produto requerido. Etapa 4 3-[5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-4- IL]-BENZALDEÍDO
Figure img0053
[000120] 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4-iodo-3-metil-isoxazol (200 mg, 0,38 mmol) e ácido 3-formilbenzeno borônico (85 mg, 1,5 equiv.) foram dissolvidos em DMF (12 ml) antes da solução a 1 M de hidrogeno carbonato de sódio (1,1 ml, 3,0 equiv) e Pd(Ph3P)2Cl2 (21 mg, 0,08 equiv.) ter sido adicionada com agitação. A mistura de reação foi transferida para três tubos de microonda que foram vedados e as misturas dentro desgaseificadas antes de serem irradiadas por uma potência inicial de 200 W a uma temperatura de 150°C durante 15 minutos em um aparelho de microonda CEM. Ao esfriar, as misturas de reação foram combinadas e divididas entre acetato de etila (10 ml) e água (10 ml). A camada aquosa foi separada e extraída novamente com acetato de etila (10 ml). Os orgânicos foram depois combinados, lavados com água (2 x 20 ml), salmoura (20 ml), secos em Na2SO4 antes de serem condensados a vácuo e purificados através de cromatografia instantânea em sílica-gel, eluindo com 25% de acetato de etila em hexano. LCMS tR = 9,06, EM m/z 510,4 [M+H]+ Etapa 5 4-{3-[5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-3-METIL-ISOXAZOL-4- IL]-BENZIL}-MORFOLINA
Figure img0054
[000121] 3-[5-(2,4-Bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol-4-il]- benzal- deído (25 mg, 0,05 mmol) e morfolina (0,3 ml) foram misturados com DCE (0,5 ml) em um tubo de microonda. Triacetoxiboroidreto de sódio (15 mg, 1,4 equiv) foi adicionado, o tubo vedado, e a atmosfera de nitrogênio introduzida. Após uma hora, mais triacetoxiboroidreto de sódio (15 mg) foi adicionado e a reação deixada agitar durante a noite. Análise de TLC mostrou que a reação não tinha sido completada assim uma gota de ácido acético foi adicionada e a reação novamente deixada agitar durante a noite após o qual a reação foi extinguida com solução a 1 M de NaHCO3 (7 ml) e extraída em EtOAc (5 ml). Esta foi seca em MgSO4 e o solvente removido a vácuo para fornecer 13 mg do produto bruto como um pó esbranquiçado que foi pego para a etapa de desproteção. Etapa 6 4-CLORO-6-[3-METIL-4-(3-MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)- ISOXAZOL-5-IL]-BENZENO-1,3-DIOL
Figure img0055
[000122] 4-{3-[5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol-4-il]- benzil}-morfolina foi previamente desprotegida como mostrado e o bruto purificado por TLC preparativa eluindo com 10% de Etanol em diclorometano para fornecer 0,6 mg (7% de rendimento) do produto como um pó branco. LCMS tR = 5,46, EM m/z 399,3 [M-H]-
[000123] Exemplo 28 teve atividade ‘A’ no Ensaio de Polarização de Fluorescência, como descrito abaixo. Exemplo 29 AMIDA DE ÁCIDO 1-{3-[5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-3- METIL-ISOXAZOL-4-IL]-BENZIL}-PIPERIDIN-4-CARBOXÍLICO
Figure img0056
[000124] Preparada usando um procedimento similar ao de 4-cloro- 6-[3-metil-4-(3-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-5-il]-benzeno-1,3-diol exceto que isonipecotamida substituiu a morfolina e o triacetoxiboroidreto de sódio (3 equiv.) e ácido acético (uma gota) foi adicionado inicialmente. A reação foi concluída após as 18 horas e o bruto obtido após processamento ter sido assumido para a etapa de desproteção. AMIDA DE ÁCIDO 1-{3-[5-(5-CLORO-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-3-METIL- ISO-XAZOL-4-IL]-BENZIL}-PIPERIDIN-4-CARBOXÍLICO
Figure img0057
[000125] Amida de ácido metil-isoxazol-4-il]-benzil}-piperidina-4-carboxílico foi previamente desprotegida como mostrado e o bruto purificado por TLC preparativa eluindo com 10% de Etanol em diclorometano para fornecer 0,7 mg (3% de rendimento) do produto como um pó branco. LCMS tR = 5,36, EM m/z 442,3 [M+H]+
[000126] Exemplo 29 teve atividade ‘A’ no Ensaio de Polarização de Fluorescência, como descrito abaixo.
[000127] De um modo similar, o exemplo 30 foi preparado:
Figure img0058
* Ensaio de Polarização de Fluorescência Exemplo 31 Esquema 8:
Figure img0059
Etapa 1 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4- IODO-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0060
[000128] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)- isoxazol-3-carboxílico (0,90 g, 1,94 mmol), N-iodossuccinimida (0,44 g, 1 equiv.) e nitrato de cério (IV) amônio (0,53 g, 0,5 equiv) foi suspenso em Acetonitrila (55 ml) antes de aquecer em refluxo (banho de óleo 100°C) onde a mistura ficou homogênea. Após 18 horas, a solução foi esfriada e o solvente removido a vácuo para dar um óleo laranja espesso. Este foi dividido entre DCM (25 ml) e água (10 ml), a camada orgânica foi mantida e lavada com salmoura (2 x 25 ml) antes de secar em Na2SO4. O DCM foi removido a vácuo para fornecer 0,88 g (77% de rendimento) do produto como um pó de cor laranja/castanho. LCMS tR = 8,75, EM m/z 589,1 [M+H]+ Etapa 2 1-(3-BROMO-FENIL)-4-METIL-PIPERAZINA
Figure img0061
[000129] 1,3-dibromobenzeno (0,90 ml, 7,49 mmoles), N- metilpiperazina (0,28 ml, 2,50 mmoles) e tolueno anidro (7 ml) foram adicionados através de seringa a um frasco enchido de argônio seco. A solução foi completamente misturada antes de BINAP (47 mg) e Pd2dba3 (23 mg) terem sido liberados e o frasco reenchido com Argônio e DBU (0,93 g, 2,5 equiv.) adicionado por meio de seringa. A mistura de reação foi aquecida para 60°C antes de terc-butóxido de sódio recentemente moído ter sido adicionado em uma porção para iniciar a reação. A reação foi deixada agitando durante a noite a 60°C e a análise de TLC parecia mostrar que alguma piperazina ainda estava presente assim a reação foi aquecida para 100°C e agitada por mais 24 h após as quais foi dividido entre EtOAc (20 ml) e água (20 ml). A camada aquosa foi novamente com EtOAc e os orgânicos combinados foram lavados com 1,6 M solução de HCl (2 x 10 ml). A solução acídica contendo o produto foi depois basificada primeiro com um volume similar de solução a 1M de NaOH para solução de ácido e depois cuidadosamente bicarbonato de sódio sólido foi adicionado para fazer o pH = 8,5 antes da extração de volta em EtOAc (2 x 15 ml), que foi lavado com salmoura, seco em MgSO4 e evaporado à secura para fornecer 0,50 g (78 % de rendimento) do produto puro como um óleo amarelo. LCMS tR = 4,55, EM m/z 255,4/257,3 [M+H]+ Etapa 3 1-METIL-4-[3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-[1,3,2]DIOXABOROLAN-2-IL)- FENIL]-PIPERAZINA
Figure img0062
[000130] A uma solução de PdCl2 (dppf).DCM (10 mg, 0,012 mmol) em tolueno anidro (4 ml) em um tubo de microonda vedado enchido de argônio foi adicionado a 1-(3-Bromo-fenil)-4-metil-piperazina (100 mg, 0,39 mmol), Et3N (0,11 ml, 2 equiv.) e o 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolano (0,09 ml, 1,5 equiv). O tubo de microonda foi evacuado e reenchido com Argônio antes de ser irradiado em um reator de microonda CEM a 100°C durante uma hora usando uma potência inicial de 200 W. A mistura de reação foi dividida entre mais tolueno (6 ml) e água (10 ml), a camada orgânica separada, lavada com água (1 x 10 ml), seca em MgSO4 e depois evaporada a vácuo para deixar um resíduo púrpura/marrom que foi usado para acoplamento de suzuki sem outra purificação. LCMS tR = 0,97, EM m/z 303,5 [M+H]+ Etapa 4 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4-[3- (4-METIL-PIPERAZIN-1-IL)-FENIL]-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0063
[000131] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4- bromo-isoxazol-3-carboxílico (38 mg, 0,07 mmol) e 1-metil-4-[3- (4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-piperazina (31 mg, 2 equiv.) foram acoplados juntos usando o método de suzuki previamente descrito para fornecer 37 mg (83% de rendimento) do bruto como um óleo marrom que foi pego para a etapa de desproteção. Etapa 5 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(5-CLORO-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-4-[3-(4- METIL-PIPERAZIN-1-IL)-FENIL]-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0064
[000132] Etilamida de ácido 5-(2,4-Bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4-[3-(4- metil-piperazin-1-il)-fenil]-isoxazol-3-carboxílico foi previamente desprotegida como mostrado. O precipitado formado durante a reação foi separado, dividido entre EtOAc e água. A camada aquosa foi mantida, basificada usando hidrogeno carbonato de sódio sólido e o produto extraído usando EtOAc (2 x 10 ml). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 ml), secos em MgSO4 e evaporados a vácuo para fornecer 5,2 mg (20% de rendimento) do produto como um pó cor castanha. LCMS tR = 5,58, EM m/z 457,3 [M+H]+ δH (d4-MeOH), 7,17 (1H, m, Ar-H), 7,09 (1H, s, Ar-H), 6,94 (1H, m, Ar-H), 6,80 (1H, m, Ar-H), 6,49 (1H, s, Ar-H), 3,13 (4H, t, NCH2CH2N-CH3), 2,69 (2H, q, CONHCH2CH3), 2,61 (4H, t, NCH2CH2N-CH3), 2,37 (3H, s, NCH2CH2N-CH3), 1,19 (3H, t, CONHCH2CH3).
[000133] Exemplo 31 teve atividade ‘A’ no Ensaio de Polarização de Fluorescência, como descrito abaixo.
[000134] ExemploS 32 - 38 na Tabela abaixo foram similarmente preparados, mas com as variações a seguir: 1. Para o exemplo 36, o intermediário de dioxaborolano foi preparado como segue: Esquema
Figure img0065
Etapa 1 1-(4-BROMO-FENIL)-4-METIL-PIPERAZINA
Figure img0066
[000135] 1-(4-Bromo-fenil)-piperazina (1 g, 4,1 mmoles) e carbonato de potássio (1,8 g, 3 eq) em DMF (15 ml) tratados com iodeto de metila (250 μl, 1,1 equivalente), solução agitada durante a noite em temperatura ambiente. Reação extinguida com água desionizada (10 ml), extraída com acetato de etila. Fase orgânica lavada com hidrogeno carbonato de sódio para remover qualquer impureza dimetilada, seca e o solvente removido para dar 1-(4-Bromo-fenil)-4- metil-piperazina em 73% de rendimento.
[000136] Tempo de retenção de LC 2,21 minutos [M+H]+ 256 (Tempo de operação 3,75 min). Etapa 2 1-METIL-4-[4-(4,4,5,5-TETRAMETIL-[1,3,2]DIOXABOROLAN-2-IL)- FENIL]-PIPERAZINA
Figure img0067
[000137] 1-(4-Bromo-fenil)-4-metil-piperazina (750 mg, 3 mmoles) em DMSO (15 ml) com bis(pinacolato)diborano (1,1 g, 1,5 equivalente) e acetato de potássio (900 mg, 3 equivalentes). Suspensão desgaseificada antes do tratamento com PdCl2(dppf) (cat.), agitada a 80°C. Bis(pinacolato)diborano adicional (1 eq) adicionado após as 3 horas, agitado por um adicional de duas horas. Suspensão dividida entre acetato de etila e água. Purificação através de cromatografia de coluna 0-8% gradiente de metanol em diclorometano para dar 1-metil- 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-piperazina em 62% de rendimento.
[000138] Tempo de retenção de LC 1,83 minuto [M+H]+ 303 (Tempo de operação 3,75 min). 2.Para os exemplos 37 e 38, um intermediário de ácido borônico foi usado em vez de um dioxaborolano, o último sendo preparado como segue: ÁCIDO 4-[(2-METILSULFONIL)-ETILAMINOMETIL]-FENIL BORÔNICO (INTERMEDIÁRIO PARA O EXEMPLO 37)
Figure img0068
[000139] Cloridrato de ácido 4-aminometil fenil borônico (560 mg, 3 mmoles) em etanol (5 ml) foi tratado com metil vinil sulfona (260 μl, 1 equivalente) e trietil amina (1,2 ml, 3 equivalentes). A solução foi agitada a 100°C durante duas horas. Etanol removido sob vácuo, dividido em água e butanol para dar ácido 4-[(2-metilsulfonil)- etilaminometil]-fenil borônico em 94% de rendimento. Tempo de retenção de LC 0,39 minuto [M+H]+ 258 (Tempo de operação 3,75 minutos). ÁCIDO 4-[N-METIL-S,S-DIOXO-TIOMORFOLINO]-FENIL BORÔNICO (INTERMEDIÁRIO PARA O EXEMPLO 38)
Figure img0069
Cloridrato de ácido 4-aminometil fenil borônico (456 mg, 2,4 mmoles) em etanol (8 ml) tratado com sulfona vinila (244 μl, 1 equivalente) e trietilamina (2 equivalentes), solução agitada a 1000 por 3 h. Etanol removido sob vácuo, dividido em água e butanol para dar o produto em 88% de rendimento.
[000140] Tempo de retenção de LC 1,65 minuto [M+H]+ 270 (Tempo de operação 8 minutos).
Figure img0070
Figure img0071
Exemplo 39 Esquema 9:
Figure img0072
Etapa 1 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4-(3- CLORO-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0073
[000141] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4- bromo-isoxazol-3-carboxílico (60 mg, 0,11 mmol) e ácido 3- clorobenzeno borônico (23 mg, 1,3 equiv.) foram acoplados juntos usando o método de suzuki previamente descrito para fornecer 35 mg (55% de rendimento) do bruto como um pó marrom que foi pego para a próxima etapa. Etapa 2 [5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4-(3-CLORO-FENIL)- ISOXAZOL-3-ILMETIL]-ETIL-AMINA
Figure img0074
[000142] A uma solução de etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5- cloro-fenil)-4-(3-cloro-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (36 mg, 0,06 mmol) em THF anidro sob argônio foi adicionado complexo de 1 M Borano- THF (1 ml) e a solução refluxada durante a noite. Após esfriar, a solução foi vertida em uma coluna de 5 g de SCX-2 Isolute®SPE Instantânea que foi eluída rapidamente com metanol (2 x 20 ml). O produto desejado foi depois restabelecido eluindo com uma mistura de 10% de amônia em metanol (2 x 10 ml) que foi evaporado a vácuo para fornecer 23 mg (65% de rendimento) de um pó amarelo-claro. LCMS (LCT) tR = 8,18, EM m/z 558,8 [M+H]+ Exemplo 39 teve atividade ‘A’ no Ensaio de Polarização de Fluorescência, como descrito abaixo. Exemplo 40 foi similarmente preparado:
Figure img0075
* Ensaio de Polarização de Fluorescência Exemplo 41 Esquema 10:
Figure img0076
Etapa 1 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4-(4- FORMIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0077
[000143] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4-iodo- isoxa-zol-3-carboxílico (preparado como por exemplo 31) (2 g, 3,4 mmoles), ácido 4-formilborônico (0,612 g, 4,08 mmoles), NaHCO3 (10,2 ml, 1M solução aq., 10,2 mmoles), PdCl2(PPh3)2 (119 mg, 0,17 mmol) e DMF (50 ml) foram combinados. A mistura foi depois desgaseificada por N2 borbulhando através dela durante 5 minutos antes de ser aquecida para 80°C durante uma hora. A mistura foi depois evaporada a vácuo e dividida entre EtOAc (3 x 50 ml) e água (50 ml). Os orgânicos foram combinados, secos (Na2SO4) evaporados a vácuo para dar um óleo bruto. Este foi dissolvido em EtOAc e passado por um tampão de SiO2, lavando com EtOAc. O filtrado foi evaporado a vácuo e o óleo resultante triturado com Et2O para render etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4-(4-formil-fenil)- isoxazol-3-carboxílico (1,577 g, 82%) como um sólido colorido pálido, LC/EM: RT = 2,908 min 567,3 (MH+). Etapa 2 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4-(4- MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0078
[000144] Ácido acético (0,37 ml, 6,44 mmoles) foi adicionado a gotas a uma mistura de etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)- 4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (730 mg, 1,29 mmol), morfolina (0,225 ml, 2,58 mmoles), peneiras moleculares em pó 3A (730 mg) e MeOH (21 ml). Esta foi deixada agitar durante a noite sob N2. A mistura foi depois evaporada a vácuo e o bruto resultante dividido entre CH2Cl2 (3 x 40 ml) e solução de NaHCO3 sat. (40 ml). Os orgânicos foram combinados, secos (Na2SO4) evaporados a vácuo para dar etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4-(4- morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico bruta (810 mg) como um sólido amarelo, LC/EM: RT = 2,365 min 638,4 (MH+). Etapa 3 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(5-CLORO-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-4-(4- MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0079
BCl3 (sol. a 1 M. em CH2Cl2, 3,87 ml, 3,87 mmoles) foi adicionado a gotas a uma solução do etilamida de ácido 5-(2,4-bis- benzilóxi-5-cloro-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3- carboxílico bruta (810 mg, ~1,29 mmol) em CH2Cl2 (30 ml) a 0°C. A reação foi depois deixada alcançar TA. NaHCO3 aquoso saturado (40 ml) foi depois adicionado lentamente e a mistura resultante concentrada a vácuo. Esta foi depois dividida entre EtOAc (3 x 50 ml) e água (50 ml). Os orgânicos foram combinados, secos (Na2SO4) evaporados a vácuo. Cromatografia instantânea eluindo com CH2Cl2 - 10% MeOH/1 % NH3/CH2Cl2 forneceu etilamida de ácido 5-(5-cloro- 2,4-diidróxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (380 mg, 64 % em 2 etapas) como uma espuma amarela, LC/EM: RT = 1,751 min 458,2 (MH+). Exemplo 41 teve atividade ‘A’ no Ensaio de Polarização de Fluorescência, como descrito abaixo.
[000145] Na Tabela a seguir, os Exemplos 42-64 foram preparados por métodos análogos ao Exemplo 41, usando o aldeído ou cetona apropriada.
Figure img0080
Figure img0081
Figure img0082
Figure img0083
Figure img0084
Figure img0085
1 Ensaio de Polarização de Fluorescência 2 * preparado do material de partida de etil resorcinol
[000146] Compostos adicionais 41a-s foram preparados através dos métodos análogos ao Exemplo 41:
Figure img0086
Figure img0087
Figure img0088
1 Ensaio de Polarização de Fluorescência 2 * preparado do material de partida de etil resorcinol *** preparado por redução do intermediário de aldeído **** preparado por alquilação do fenol intermediário ***** preparado do naftil aldeído Exemplo 65 Esquema de Reação:
Figure img0089
rt = ta Etapa 1 1-(2,4-BIS-BENZILÓXI-FENIL)-ETANONA
Figure img0090
[000147] 35 g de 2,4-diidroxiacetofenona (0,230 mol, 1 eq) foram dissolvidos em 500 ml de acetonitrila. 79,5 g de carbonato de potássio (0,575 mol, 2,5eq) e 86,6 g de brometo de benzila (0,506 mol, 2,2 eq) foram adicionados. A mistura foi refluxada durante 64 horas, esfriada e acetonitrila removida sob pressão reduzida. O resíduo foi separado entre água e acetato de etila. O resíduo foi principalmente resorcinol monobenzilado.
[000148] O produto bruto (43 g) foi depois dissolvido em 250 ml de DMF. Carbonato de potássio (29 g, 0,210 mol, 1,2 eq) e 25 ml de brometo de benzila (0,210 mol, 1,2 eq) foram adicionados e a mistura foi agitada durante noite. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi separado entre acetato de etila e água. Após remoção do solvente, o resíduo foi triturado com hexano para remover brometo de benzila em excesso. LC-EM [M+H]+ = 333 Rendimento: 51,2 g (67 %) Etapa 2 1-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-BROMO-FENIL)-ETANONA
Figure img0091
[000149] 51,2 g de 1-(2,4-bis-benzilóxi-fenil)-etanona (0,154 mol, 1 eq) foram dissolvidos em 250 ml de DMF. 27,42 g de N-bromossuccinimida (0,154 mol, 1 eq) em 100 ml de DMF foram adicionados a gotas. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi decantada em 700 ml de água e o filtrado precipitado. A torta do filtro foi enxaguada com água e o sólido incolor foi recristalizado de 370 ml de acetonitrila. LC-EM [M+H]+ = 411 & 413 Rendimento: 58,15 g (92%) Etapa 3 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 4-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-BROMO- FENIL)-2,4-DIOXO-BUTÍRICO
Figure img0092
[000150] 9,75 g de sódio (0,424 mol, 3 eq) foram dissolvidos em 500 ml de etanol absoluto (1,5 hora). 58 g de 1-(2,4-bis-benzilóxi-5-bromo- fenil)-etanona (0,141 mol, 1 eq) e 30,98 g de oxalato de dietila (0,212 mol, 1,5 eq) foram adicionados e a mistura foi refluxada durante duas horas. Após esfriar, a mistura foi vertida em 220 ml de 2N HCl aquoso e o produto foi extraído em 700 ml de diclorometano. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo amarelo foi triturado com 150 ml de éter dietílico. Rendimento: 69,24 g (96 %) 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,27 (t, 3H), 4,27 (q, 2H), 5,13 (d, 2H), 6,54 (s, 1H), 7,37 (m, 10H), 8,17 (s, 1H). Etapa 4 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-BROMO- FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0093
[000151] Éster de etila de ácido 69,3 g de 4-(2,4-bis-benzilóxi-5- bromo-fenil)-2,4-dioxo-butírico (0,135 mol, 1 eq) foi dissolvido em 750 ml de etanol. 14,11 g de cloridrato de hidroxilamina (0,203 mol, 1,5 eq) foram adicionados. A mistura foi refluxada durante 2,5 horas e esfriada. Ela foi depois vertida em 1000 ml de água, o precipitado foi separado por filtração. A torta do filtro foi lavada com 500 ml de água seguido por 75 ml de éter dietílico e seco. Rendimento: 67,62 g (99%) 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,39 (t, 3H), 4,41 (q, 2H), 5,11 (d, 2H), 5,15 (d, 2H), 6,58 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,35 (m, 10H), 8,16 (s, 1H). Etapa 5 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-BROMO-FENIL)- ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0094
[000152] Éster de etila de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-bromo-fenil)- isoxa-zol-3-carboxílico foi suspenso em etanol e etilamina (2M em metanol, 3 eq), a suspensão amarela resultante foi aquecida em refluxo (80°C) sob nitrogênio em cujo ponto os reagentes entraram na solução. Esta foi aquecida durante 14 horas, depois deixada esfriar para temperatura ambiente. Um precipitado branco formou que foi filtrado e lavado com mais etanol antes de ser seco a vácuo. Tempo de retenção de LC-EM 2,868 minutos [M+H]+ = 507 & 509 (tempo de operação 3,75 minutos) Etapa 6 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ESTIRILFENIL)- ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0095
[000153] A uma mistura de ácido trans-2-fenilvinilborônico (0,472 g, 3,2 mmoles) e etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-bromofenil)- isoxazol-3-carboxílico (1,079 g, 2,13 mmoles) foi adicionado hidrogeno carbonato de sódio (536 mg, 6,39 mmoles) seguido por DMF (25 ml) e água (5 ml). A mistura foi desgaseificada através de evacuação e fluxada com nitrogênio (três vezes), seguido por borbulhamento com gás de nitrogênio pela mistura durante cinco minutos. Diclorobis(trifenilfosfina)paládio (II) (149 mg, 0,21 mmol) foi adicionado e mistura de reação foi aquecida sob uma atmosfera de nitrogênio a 80°C durante sete horas (mistura de reação fica marrom-escura na cor após 10 minutos). A mistura de reação foi deixada esfriar para temperatura ambiente e a maior parte dos solventes foi removida a vácuo. O resíduo resultante foi dividido entre acetato de etila (100 ml) e água (100 ml) e esta mistura foi filtrada através de um bloco de celite para remover os resíduos de Paládio. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com água (2 x 50 mL), solução de cloreto de sódio aquosa saturada (100 ml) depois seca em sulfato de sódio. A mistura foi filtrada e os solventes do filtrado foram removidos a vácuo para fornecer um sólido marrom (800 mg). A torta de filtro de celite foi lavada com diclorometano depois seca em sulfato de sódio. A mistura foi filtrada e os solventes do filtrado foram removidos a vácuo para fornecer um sólido marrom (541 mg). As bateladas de produto combinadas foram purificadas através de trituração com mistura de acetato de etila-hexano. Isto rende etilamida de ácido 5-(2,4-bis- benzilóxi-5-estirilfenil)-isoxazol-3-carboxílico como um sólido de marrom-claro (808 mg, 71%). LCMS: [M+H]+ 531, 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,12 (t, 3H), 3,37 (m, 2H), 4,95 (s, 2H), 5,07 (s, 2H), 6,46 (s, 1H), 6,70 (brt, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,23 (d, 1H), 7,32-7,44 (m, 15H), 8,09 (s, 1H). Etapa 7 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-FENETILFENIL)- ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0096
[000154] Paládio em catalisador de carvão (10%; 50 mg) foi adicionado a uma solução desgaseificada de etilamida de ácido 5-(2,4- bis-benzilóxi-5-estirilafenil)-isoxazol-3-carboxílico (690 mg, 1,30 mmol) em 1,4-dioxano (50 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi hidrogenada durante um total de 4,75 h com mais Pd em catalisador de carvão (50 mg) adicionado a 0,75 e 2,5 h. A mistura de reação foi filtrada através de um bloco de celite que foi lavado com 1,4-dioxano (20 ml) e diclorometano (20 ml). Os solventes do filtrado combinados foram removidos a vácuo para fornecer um sólido cor de creme que foi purificado através de cromatografia instantânea em sílica-gel (20 g, IST) eluindo com 10 a 50% de acetato de etila em hexano. Isto rende etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5- fenotilfenil)-isoxazol-3-carboxílico como um sólido amarelo pálido (609 mg, 88%). LCMS: [M+H]+ 533, 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,26 (t, 3H), 2,86-2,96 (m, 4H), 3,49 (m, 2H), 5,03 (s, 2H), 5,18 (s, 2H), 6,56 (s, 1H), 6,81 (t, 1H), 7,07 (s, 1H), 7,15-7,20 (m, 3H), 7,23-7,28 (m, 2H), 7,31-7,42 (m, 10H), 7,73 (s,1 H). Etapa 8 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-FENETIL FENIL)-4- BROMO-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0097
[000155] N-bromossuccinimida (207 mg, 1,16 mmol) foi adicionada a uma suspensão de etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5- fenotilfenil)-isoxazol-3-carboxílico (564 mg, 1,06 mmol) em acetonitrila (20 ml). Nitrato de amônio cérico (290 mg, 0,53 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida em refluxo (fornecendo solução laranja homogênea) e agitada durante 30 minutos. A mistura de reação foi deixada esfriar para temperatura ambiente e acetonitrila foi removido a vácuo. O resíduo foi dividido entre acetato de etila (50 ml) e água (50 ml) e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com solução de cloreto de sódio aquosa saturada (50 ml) e seca em sulfato de sódio. A mistura foi filtrada e os solventes do filtrado foram removidos a vácuo para fornecer um óleo amarelo que foi purificado através de cromatografia instantânea em sílica-gel (20 g, IST) eluindo com 10-30% de acetato de etila em hexano. Este rende etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-fenotilfenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxílico como óleo amarelo (326 mg, 53%). LCMS: [M+H]+ 613, 611. Etapa 9 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-FENETIL-FENIL)-4- (4-MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0098
[000156] A uma mistura de borano de pinacol de 4-morfolin-4-ilmetil- fenila (0,215 g, 0,71 mmol) e etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5- fenotilfenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxílico (0,347 g, 0,57 mmol) foi adicionado hidrogeno carbonato de sódio (142 mg, 1,69 mmol) seguido por DMF (10 ml) e água (2,0 ml). A mistura foi desgaseificada através de evacuação e fluxação com nitrogênio (três vezes), seguido por borbulhação com gás de nitrogênio através de mistura durante cinco minutos. Diclorobis(trifenilfosfina)paládio (II) (40 mg, 0,057 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida sob uma atmosfera de nitrogênio a 80°C durante 5 horas (mistura de reação fica marrom- escura na cor). Mais 20 mg (0,029 mmol) de diclorobis(trifenilfosfina)- paládio (II) foram adicionados e mistura de reação foi aquecida a 80°C durante 15 horas depois deixada esfriar para temperatura ambiente. A maior parte dos solventes é removida a vácuo e o resíduo foi dividido entre acetato de etila (50 ml) e água (50 ml). Esta mistura foi filtrada através de um bloco de celite para remover os resíduos de Paládio e depois as fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com água (2 x 50 mL), a solução de cloreto de sódio aquosa saturada (50 ml) depois seca em sulfato de sódio. A mistura foi filtrada e os solventes do filtrado foram removidos a vácuo para fornecer um óleo marrom. O produto de reação bruto foi purificado através de cromatografia instantânea em sílica-gel (20 g, IST) eluindo com um gradiente de solvente de 30 a 70% de acetato de etila em hexano. Isto rende etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-fenotil-fenil)-4-(4- morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxa-zol-3-carboxílico como óleo amarelo (0,110 g, 27%). LCMS: [M+H]+ 708. Etapa 10 CLORIDRATO DE ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-DIIDRÓXI-5- FENETIL-FENIL)-4-(4-MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3- CARBOXÍLICO
Figure img0099
[000157] A uma solução esfriada em banho de gelo de etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-fenotil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)- isoxazol-3-car-boxílico (0,109 g, 0,15 mmol) em diclorometano (4 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio uma solução a 1,0 M de tricloreto de Boro foi adicionada em diclorometano (0,45 ml; 0,45 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 20 minutos depois em temperatura ambiente durante 3,5 horas. A mistura de reação foi reesfriada para 0°C e extinguida pela adição de solução de hidrogeno carbonato de sódio aquosa saturada (5 ml). Após agitar durante 5 minutos o diclorometano foi removido a vácuo e o resíduo foi dividido entre acetato de etila (20 ml) e água (20 ml). As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com água (20 mL), solução de cloreto de sódio aquosa saturada (20 ml) depois seca em sulfato de sódio. A mistura foi filtrado e os solventes do filtrado foram removidos a vácuo para fornecer um óleo marrom-claro que foi purificado por adsorção em sílica-gel depois cromatografia instantânea em sílica-gel (10 g IST) eluindo com 0 a 5% metanol em acetato de etila. Isto fornece um óleo incolor que foi triturado com 1,0 M HCl em solução de éter dietílico (5 ml) para fornecer cloridrato de etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5- fenotil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (0,019 g; 24%). LCMS: [M+H]+ 528, 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ: 1,08 (t, 3H), 2,60 (m, 4H), 2,90-3,30 (m, 6H), 3,67 (m, 2H), 3,87 (m, 2H), 4,30 (s, 2H), 6,46 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 7,05-7,49 (m, 5H), 7,40-7,68 (m, 4H), 8,90 (brs, 1H), 9,67 (s, 1H), 9,89 (s, 1H), 10,75 (brs, 1H). Exemplo 65 teve atividade ‘A’ no Ensaio de Polarização de Fluorescência, como descrito abaixo.
[000158] Os exemplos na Tabela a seguir foram preparados através de métodos análogos ao Exemplo 64, e teve as atividades mostradas no Ensaio de Polarização de Fluorescência, como descrito abaixo.
Figure img0100
Figure img0101
Figure img0102
[000159] Os exemplos 75a-v adicionais na tabela a seguir foram também preparados através dos métodos análogos ao exemplo 65.
Figure img0103
Figure img0104
Figure img0105
Figure img0106
Figure img0107
Exemplo 76 Esquema de Reação
Figure img0108
Etapa 1 3-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-BROMO-FENIL)-4-(4-METÓXI-FENIL)-5- METIL-ISOXAZOL
Figure img0109
[000160] Trifluoreto de boro de trimetiloxônio (Aldrich; 70 mg, 0,47 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de 5-(2,4-bis-benzilóxi-5- bromo-fenil)-4-(4-metóxi-fenil)-3-metil-isoxazol (Exemplo 3, Etapa 1) (120 mg, 0,22 mmol) em diclorometano (3 ml) e agitação foi continuada por 3 horas. A mistura resultante foi concentrada a vácuo para deixar um semi-sólido branco que foi misturado com cloridrato de hidroxilamina (70 mg, 1,0 mmol), carbonato de potássio (120 mg, 0,87 mmol) e metanol (2 ml), e aquecido a refluxo por 18 horas. A mistura de reação foi dividida entre água (20 ml) e acetato de etila (2x10 ml) e as fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de magnésio anidro e evaporadas a vácuo para deixar um óleo incolor. O produto bruto foi purificado através de cromatografia de coluna, sílica (10 g), eluindo com hexano, seguido por éter de dietila/hexano (1:1), para dar 3-(2,4-bis-benzilóxi-5-bromo-fenil)-4-(4-metóxi-fenil)-5-metil-isoxazol como um sólido branco (44 mg, 37%)
[000161] Tempo de retenção de LC 5,55 minutos [M+H]+ 556,0 e 558,0 (Tempo de operação 8,00 min) R.M.N. (Clorofórmio-d) 7,64 (s ArH) 7,356,76 (m 14 ArH) 6,34 (sArH) 4,90 (s 2CH2) 4,60 (s 2CH2) 3,79 (s 3CH3) 2,46 (s 3CH3) Etapa 2 4-BROMO-6-[4-(4-METÓXI-FENIL)-5-METIL-ISOXAZOL-3-IL]- BENZENO-1,3-DIOL
Figure img0110
[000162] Solução de tricloreto de boro (1M em diclorometano, 1 ml, 1 mmol) foi adicionado a uma solução de 3-(2,4-bis-benzilóxi-5-bromo- fenil)-4-(4-metóxi-fenil)-5-metil-isoxazol (38 mg, 0,068 mmol) em diclorometano (1 ml), e agitação foi continuada por uma hora. A mistura de reação foi dividida entre água (20 ml) e diclorometano (2x20 ml) e as fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de magnésio anidro e concentradas a vácuo para deixar um óleo marrom. O produto bruto foi purificado através de cromatografia de coluna, sílica (10 g), eluindo com hexano, seguido por hexano/éter de dietila (3:1 depois 1:1), para dar 4-Bromo-6-[4-(4-metóxi-fenil)-5-metil- isoxazol-3-il]-benzeno-1,3-diol como um óleo incolor (11 mg, 43%).
[000163] Tempo de retenção de LC 2,52 minutos [M+H]+ 376,1 e 378,1 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (DMSO-d6) 10,40 (s OH) 9,69 (s OH) 7,22 (ArH) 7,10-6,89 (m 4ArH) 6,5 (s ArH) 3,7 (s OCH3) 2,46 (s CH3)
[000164] Este composto teve atividade ‘A’ no ensaio de polarização de fluorescência de Hsp90.
Exemplo 76A
[000165] O composto a seguir está comercialmente disponível (Interbioscreen) e teve atividade ‘B’ no ensaio de polarização de fluorescência:
Figure img0111
[000166] Os compostos a seguir foram feitos de acordo com o Exemplo 76:
Figure img0112
Exemplo 77
[000167] Preparação de etilamida de ácido 5-(5-terc-butil-2,4-diidróxi- fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico
Figure img0113
Esquema de Reação:
Figure img0114
Etapa 1 1-(5-TERC-BUTIL-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-ETANONA
Figure img0115
[000168] Ácido sulfúrico (4 ml, 75 mmoles) foi adicionado a uma suspensão de 2,4-diidroxiacetofenona (22,8 g, 150 mmoles) em uma mistura de 2-metil-2-propanol (35 g, 470 mmoles) e ácido trifluoroacético (80 ml), sob uma atmosfera de nitrogênio. A suspensão resultante foi aquecida, temperatura do banho de óleo 75°C, por ~3 horas para dar uma solução vermelho pálida. A solução resultante foi deixada esfriar e vertida em gelo/água (350 ml), para dar um precipitado rosa pálido. Os sólidos foram removidos através de filtração e lavados com água (600 ml) e hexano (200 ml) para dar um pó rosa pálido. Seco a vácuo (40°C), para dar 1-(5-terc-butil-2,4- diidróxi-fenil)-etanona como um pó laranja pálido (28,8 g, 92%). Tempo de retenção de LC 2,74 minutos [M+H]+ 209,1 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Clorofórmio-d) 7,35(s ArH) 6,05(s ArH) 7,35(m 2ArH) 2,35(s 3CH3) 1,15(s 9 CH3) Etapa 2 1-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-TERC-BUTIL-FENIL)-ETANONA
Figure img0116
[000169] Brometo de benzila (10 ml, 84 mmoles) foi adicionado a uma solução do acetofenona (13,5 g, 65 mmoles) em DMF (50 ml), carbonato de potássio (20 g, 145 mmoles) foi adicionado e a suspensão agitada, em temperatura ambiente, por ~4 horas. A suspensão resultante foi vertida em água (200 ml) para dar um precipitado laranja pálido. Os sólidos foram removidos através de filtração e lavados com água. Os sólidos foram absorvidos em diclorometano (150 ml) e a solução foi lavada com água (2x100 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (100 ml). A solução foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada em um óleo vermelho pálido.
[000170] O óleo foi absorvido em 2-metil-2-propanol (100 ml) e terc- butóxido de potássio (7,5 g, 67 mmoles) adicionado, para dar um precipitado amarelo pálido, brometo de benzila (8 ml, 67 mmoles) foi adicionado e a mistura aquecida sob refluxo durante ~uma hora. A suspensão resultante foi deixada esfriar e vertida em água (250 ml), para dar um precipitado laranja pálido. Os sólidos foram removidos através de filtração e lavados com água. Os sólidos foram absorvidos em acetato de etila (150 ml) e lavados com água (2x200 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (100 ml). A solução foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada para um laranja semi-sólido, trituração com metanol deu um sólido rosa pálido. Sólidos foram removidos através de filtração e secos a vácuo (40°C), para dar 1-(2,4- bis-benzilóxi-5-terc-butil-fenil)-etanona como um pó rosa pálido (9,1 g, 36%).
[000171] Tempo de retenção de LC 3,03 minutos [M+H]+ 389,3 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Clorofórmio-d) 7,65 (s ArH) 7,25-7,15 (m 10ArH) 6,35 (s ArH) 4,95 (s 2CH2) 4,9 (s 2 CH2) 2,4 (s 3CH3) 1,2 (s 9 CH3) Etapa 3 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 4-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-TERC-BUTIL- FENIL)-2-HIDRÓXI-4-OXO-BUT-2-ENÓICO
Figure img0117
[000172] Etóxido de sódio (2,8 g, 41 mmoles) foi adicionado a uma suspensão da 1-(2,4-bis-benzilóxi-5-terc-butil-fenil)-etanona (7,8 g, 20 mmoles) em etanol (40 ml). Oxalato de dietila (4 ml, 29,5 mmoles) foi adicionado e a suspensão resultante aquecida sob refluxo durante ~duas horas para dar uma solução vermelho pálida. A solução foi deixada esfriar e vertida em água (200 ml), a mistura foi acidificada com ácido clorídrico (50 ml, 1M) e extraída com diclorometano (150 ml). Os extratos foram lavados com água (2x200 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (100 ml). A solução foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada em uma goma amarela. Trituração com hexano deu um sólido amarelo. Sólidos foram removidos através de filtração e lavados com hexano e secos a vácuo (40°C), para dar éster de etila de ácido 4-(2,4-bis-benzilóxi-5-terc-butil- fenil)-2-hidróxi-4-oxo-but-2-enóico como um pó amarelo (9,1 g, 93%). R.M.N. (Clorofórmio-d) 8,0 (s ArH) 7,5-7,35 (m 11ArH) 6,6 (s ArH) 5,2 (s 2CH2) 5,15 (s 2 CH2) 4,3 (q J 7,1Hz 2 CH2) 1,4 (s 9 CH3) 1,25 (t J 7,1Hz 3CH3) Etapa 4 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-TERC-BUTIL- FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0118
[000173] Cloridrato de hidroxilamina (3,6 g, 52 mmoles) foi adicionado a uma solução de éster de etila de ácido 4-(2,4-bis- benzilóxi-5-terc-butil-fenil)-2-hidróxi-4-oxo-but-2-enóico (9,0 g, 18,5 mmoles) em etanol (75 ml) e a suspensão aquecida sob refluxo durante ~4 horas. A solução resultante foi deixada esfriar e vertida em água (200 ml) para dar um precipitado esbranquiçado. Os sólidos foram removidos através de filtração e absorvidos em diclorometano (150 ml). A solução foi lavada com água (150 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (50 ml). A solução foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada em um sólido esbranquiçado. Os sólidos foram lavados com hexano e secos a vácuo (40°C), para dar éster de etila de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-terc-butil-fenil)-isoxazol-3- carboxílico como um pó marrom pálido (8,0 g, 89%).
[000174] Tempo de retenção de LC 3,13 minutos [M+H]+ 486,5 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Clorofórmio-d) 7,85 (s ArH) 7,4-7,25 (m 10ArH) 6,9 (s ArH) 6,5 (s ArH) 5,1 (s 2CH2) 5,0 (s 2 CH2) 4,35 (q J 7,1Hz 2 CH2) 1,4(s 9 CH3) 1,35 (t J 7,1Hz 3CH3) Etapa 5 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-TERC-BUTIL- FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0119
[000175] Éster de etila de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-terc-butil-fenil)- isoxazol-3-carboxílico (10,0 g, 20,6 mmoles) foi adicionado a uma solução de etilamina em metanol (60 ml, 2,0 M) e a suspensão aquecida, temperatura do banho de óleo 75°C, durante ~duas horas. A solução resultante foi deixada esfriar e concentrada em um óleo marrom pálido, diclorometano (150 ml) foi adicionado e a solução lavada com água (100 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (75 ml). A solução foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada em um óleo marrom, solidificada em repouso (9,9 g, ~quant).
[000176] Tempo de retenção de LC 3,02 minutos [M+H]+ 485,3 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Clorofórmio-d) 7,8(s ArH) 7,4- 7,2(m 10ArH) 7,0 (s ArH) 6,75 (br t J 5,4Hz NH) 6,5 (s ArH) 5,1 (s 2CH2) 5,0 (s 2 CH2) 3,4 (dq J 5,4 Hz, 7,1Hz 2 CH2) 1,35(s 9 CH3) 1,15(t J 7,1Hz 3CH3) Etapa 6 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-TERC-BUTIL- FENIL)-4-IODO-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0120
[000177] N-iodossuccinimida (9,0 g, 40 mmoles) foi adicionado a uma suspensão de etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-terc-butil- fenil)-isoxazol-3-carboxílico (9,9 g, 20,4 mmoles) em acetonitrila (60 ml). Nitrato de cério de amônio (0,25 g, 0,46 mmol) foi adicionado e a suspensão agitada durante ~18 h. A suspensão resultante foi concentrada e o resíduo absorvido em diclorometano (125 ml). A solução resultante foi lavada com solução de metabissulfeto de sódio aquosa (2x100 ml, 5%), água (100 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (100 ml). A solução foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada em uma goma vermelho pálida. Trituração com etanol (25 ml) deu um sólido esbranquiçado, os sólidos foram removidos através de filtração e lavados com etanol. Secos a vácuo (40°C), para dar etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-terc-butil- fenil)-4-iodo-isoxazol-3-carboxílico como um pó esbranquiçado (7,75 g, 62%). Tempo de retenção de LC 3,07 minutos [M+H]+ 611,2 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Clorofórmio-d) 7,45-7,25 (m 11ArH) 6,8 (br t J 5,4Hz NH) 6,6 (s ArH) 5,05 (s 4CH2) 3,5 (dq J 5,4Hz, 7,1Hz 2 CH2) 1,35 (s 9 CH3) 1,2 (t J 7,1Hz 3CH3) Etapa 7 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-TERC-BUTIL- FENIL)-4-(4-FORMIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0121
[000178] Solução de fosfato de potássio aquoso (25 ml, 1,2M) foi adicionada a uma solução de etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5- terc-butil-fenil)-4-iodo-isoxazol-3-carboxílico (6,1 g, 10 mmoles) e ácido 4-formilfenil borônico (2,35 g, 15,7 mmoles) em 1,4-dioxano (75 ml), sob uma atmosfera de nitrogênio. Dicloro-bis(tri-o-tolil fosfina)paládio(II) (cat.) foi adicionado e a mistura aquecida, temperatura do banho de óleo 100°C durante ~uma hora. A mistura foi deixada esfriar, e a camada aquosa separada e extraída com acetato de etila (100 ml). Os orgânicos combinados foram concentrados para dar uma goma marrom pálida.
[000179] O produto bruto foi purificado através de cromatografia de coluna, sílica (600 ml), eluindo com acetato de etila/hexano (1:3), para dar etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-terc-butil-fenil)-4-(4-formil- fenil)-isoxazol-3-carboxílico como uma espuma amarelo pálida (5,18 g, 88%).
[000180] Tempo de retenção de LC 3,01 minutos [M+H]+ 589,4 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Clorofórmio-d) 9,75(s CHO) 7,5(d J 6,9Hz 2 ArH) 7,2(d J 6,9Hz 2 ArH) 7,15-7,0(m 8ArH) 6,8(m 2 ArH) 6,65 (br t J 5,4Hz NH) 6,2(s ArH) 4,8(s 2CH2) 4,5(s 2 CH2) 3,2(dq J 5,4Hz, 7,1Hz 2 CH2) 1,1(s 9 CH3) 1,05(t J 7,Hz 3CH3) Etapa 8 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-TERC-BUTIL- FENIL)-4-(4-MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3- CARBOXÍLICO
Figure img0122
[000181] Cianoboroidreto de sódio (65 mg, 1,03 mmol) foi adicionado a uma solução de etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-terc-butil- fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (125 mg, 0,21 mmol), morfolina (50 μl, 0,57 mmol) e ácido acético (cat.) em metanol (4 ml) e a solução agitada durante ~72 h. Diclorometano (50 ml) foi adicionado e a solução lavada com água (2x50 ml) e solução de cloreto de sódio aquosa saturada (50 ml). A solução foi seca em sulfato de sódio anidro e concentrada em uma goma incolor.
[000182] O produto bruto foi purificado através de cromatografia de coluna de sílica (20 g), eluindo com acetato de etila/hexano (1:1), para dar etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-terc-butil-fenil)-4-(4- morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um óleo incolor (35 mg, 25%).
[000183] Tempo de retenção de LC 2,56 minutos [M+H]+ 660,8 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (Clorofórmio-d) 7,35-7,05 (m 15ArH) 6,7 (br t J 5,4 Hz NH) 6,4 (s ArH) 4,9 (s 2CH2) 4,75 (s 2 CH2) 3,6 (t J 4,5Hz 4 CH2) 3, ( s 2 CH2) 3,35 (dq J 5,4Hz, 7,1Hz 2 CH2) 2,35 (br s 4 CH2) 1,15 (t J 7,1Hz 3CH3) 1,1 (s 9 CH3) Etapa 9 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(5-TERC-BUTIL-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-4-(4- MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0123
[000184] Solução de tricloreto de boro (1 ml, 1,0 M em diclorometano) foi adicionada a uma solução de etilamida de ácido 5- (2,4-bis-benzilóxi-5-terc-butil-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)- isoxazol-3-carboxílico (35 mg, 0,05 mmol) em diclorometano (1 ml) a - 20°C (gelo/metanol), sob uma atmosfera de nitrogênio. A solução resultante foi agitada a 0°C (gelo/água) durante ~90 min. Metanol (2 ml) foi adicionado e a solução concentrada em uma goma marrom.
[000185] O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa, para dar etilamida de ácido 5-(5-terc-butil-2,4-diidróxi-fenil)-4-(4-morfolin-4- ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um pó branco (sal de formiato) (21 mg, 75%). Tempo de retenção de LC 1,97 minuto [M+H]+ 480,5 (Tempo de operação 3,75 min) R.M.N. (DMSO-d6) 8,8 (t J 5,6Hz NH) 7,25 (d J 7,2Hz 2ArH) 7,15 (d J 7,2Hz 2ArH) 6,7 (s ArH) 6,45 (s ArH) 3,45 (br s 4 CH2) 3,2 (dq J 5,6Hz, 7,2Hz 2 CH2) 2,3 (br s 4 CH2) 1,1 (s 9 CH3) 1,05 (t J 7,2Hz 3CH3)
[000186] Este composto teve atividade ‘A’ no ensaio de polarização de fluorescência de Hsp90.
[000187] De uma maneira similar à da preparação do composto do exemplo 77, exemplos 77a-f foram preparados.
Figure img0124
Figure img0125
Exemplo 78
[000188] Preparação de etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isobutil- fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico
Figure img0126
Esquema de Reação
Figure img0127
Etapa 1 1-(2,4-BIS-BENZILÓXI-FENIL)-ETANONA
Figure img0128
[000189] Carbonato de potássio (2,5eq) foi adicionado a uma solução de 2’,4’-diidroxiacetofenona (1 eq) em acetonitrila (400 mL), e a suspensão agitada em temperatura ambiente. Brometo de benzila (2,5 eq) foi adicionado por 10 minutos a gotas e a mistura aquecida a refluxo durante 18 horas. A mistura foi esfriada e evaporada a vácuo para dar pasta fluida. A pasta fluida foi dividida entre água e acetato de etila, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi também extraída com diclorometano e os extratos orgânicos foram combinados, secos (MgSO4) e evaporados a vácuo. O produto foi triturado com hexano, filtrado e lavado com hexano frio e seco a vácuo a 45°C para dar 1-(2,4-bis-benzilóxi-fenil)-etanona como um pó branco.
[000190] Tempo de retenção de LC 2,704 min [M+H]+ 333,3 Etapa 2 2,4-BIS-BENZILÓXI-1-ISOPROPENIL-BENZENO
Figure img0129
[000191] Brometo de metiltrifenilfosfônio (1,1eq) foi suspenso em uma THF e esfriada para 0°C sob nitrogênio. 1,6M nButil lítio em hexanos (1,1eq) foi adicionado a gotas, e agitado durante 30 minutos. 1-(2,4-bis-benzilóxi-fenil)-etanona (1 eq) foi dissolvida em uma THF e adicionado a gotas à suspensão. Quando adição foi completada, o banho de gelo foi removido e a mistura de reação foi agitada durante a noite em temperatura ambiente sob nitrogênio.
[000192] Metanol foi adicionado à mistura de reação e a solução resultante foi evaporada a vácuo. Hexano foi adicionado ao óleo resultante e aquecido para refluxar durante 30 minutos, depois filtrado através de Celite. O líquido foi evaporado a vácuo para dar um óleo que foi purificado através de cromatografia de coluna, eluindo com 30% EtOAc em hexano, para dar 2,4-bis-benzilóxi-1-isopropenil-benzeno. Tempo de retenção Rf 0,722, 3:1 Hexano: EtOAc. Etapa 3 4-ISOPROPIL-BENZENO-1,3-DIOL
Figure img0130
[000193] 2,4-bis-benzilóxi-1-isopropenil-benzeno foi absorvido em solução em etanol e adicionado a 10% de paládio em carbono que tinha sido pré-intumescido com água. Hidrogênio foi introduzido ao frasco e a mistura foi deixada agitar durante 16 horas. O catalisador foi filtrado da mistura de reação, por um método adequado, e o licor foi concentrado a vácuo, para dar 4-isopropil-benzeno-1,3-diol como um sólido cristalino branco. Tempo de retenção de LC 2,088 min [M+H]+ 153,1
Etapa 4 1-(2,4-DIIDRÓXI-5-ISOPROPIL-FENIL)-ETANONA
[000194] 4-Isopropil-benzeno-1,3-diol (1 eq) foi absorvido em BF3.OEt2 (6 eq) e ácido acético foi adicionado (2 eq). A solução foi aquecida durante 16 horas a 90°C depois deixada esfriar para temperatura ambiente. A solução foi adicionada a gotas a 10% de NaOAc (aq) e deixada repousar por 4 horas, antes de ser extraída em EtOAc. As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com NaHCO3 sat. (aq), depois secas em MgSO4, filtradas e concentradas a vácuo. O óleo residual foi purificado através de cromatografia de coluna, eluindo com diclorometano, para dar 1-(2,4-diidróxi-5-isopropil-fenil)-etanona, como um sólido branco.
[000195] Tempo de retenção de LC 2,633 min [M+H]+ 195,1 Etapa 5 1-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOPROPIL-FENIL)-ETANONA
Figure img0131
[000196] 1-(2,4-diidróxi-5-isopropil-fenil)-etanona (1 eq) foi dissolvido em DMF e carbonato de potássio (2,2 eq) depois brometo de benzila (2,2eq) foi adicionado. A suspensão foi aquecida, com agitação a 150°C, sob nitrogênio, por 16 horas. A solução foi esfriada para temperatura ambiente e a mistura foi vertida em 1 MHCl (aq) depois extraída em acetato de etila. As fases orgânicas foram combinadas e lavadas novamente com 1 MHCl (aq) depois cinco vezes com solução de salmoura. A fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada a vácuo, para dar um sólido que foi purificado através de trituração de éter dietílico: hexano (1:1) para dar 1-(2,4-bis-benzilóxi-5- isopropil-fenil)-etanona. Tempo de retenção de LC 3,575 min [M+H]+ 375,2 Etapa 6 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 4-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOPROPIL- FENIL)-2-HIDRÓXI-4-OXO-BUT-2-ENÓICO
Figure img0132
[000197] Sódio (2,8 eq) foi adicionado a etanol sob nitrogênio em temperatura ambiente e agitado durante 25 minutos para gerar etóxido de sódio. 1-(2,4-bis-benzilóxi-5-isopropil-fenil)-etanona (1 eq) foi dissolvido em outro etanol e adicionado à solução de etóxido de sódio. Oxalato de dietila (1,64 eq) foi adicionado e a mistura de reação aquecida em refluxo durante 4 horas. A mistura foi deixada esfriar para temperatura ambiente e mais 1 MHCl (aq) foi adicionado para acidificar a mistura de reação que foi depois concentrada a vácuo. A goma resultante foi dividida entre diclorometano e salmoura, e a fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e evaporada a vácuo para dar éster de etila de ácido 4-(2,4-bis-benzilóxi-5-isopropil-fenil)-2-hidróxi-4- oxo-but-2-enóico como uma goma amarela.
[000198] Tempo de retenção de LC 3,057 min [M+H]+ 475 Etapa 7 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOPROPIL- FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0133
[000199] Éster de etila de ácido 4-(2,4-bis-benzilóxi-5-isopropil-fenil)- 2-hidróxi-4-oxo-but-2-enóico (1 eq) foi dissolvido em etanol com agitação. Cloridrato de hidroxilamina (1,2 eq) foi adicionado e a solução foi aquecida em refluxo durante 4 horas sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi esfriada para temperatura ambiente e concentrada a vácuo. O resíduo foi dividido entre salmoura e diclorometano. A fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada a vácuo para dar éster de etila de ácido 5-(2,4-bis- benzilóxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um sólido.
[000200] Tempo de retenção de LC 3,059 min [M+H]+ 472 Etapa 8 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOPROPIL-FENIL)- ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0134
[000201] Éster de etila de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isopropil-fenil)- isoxazol-3-carboxílico foi dissolvido em 2 M etilamina de excesso em metanol e aquecido na microonda Smith Synthesiser a 120°C durante 600 segundos. A solução foi concentrada a vácuo para dar um sólido que foi purificado através de trituração de hexano, para dar etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isopropil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico.
[000202] Tempo de retenção de LC 2,979 min [M+H]+ 471,3 Etapa 9 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOPROPIL-FENIL)- 4-IODO-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0135
[000203] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isopropil-fenil)- isoxazol-3-carboxílico (1 eq) foi dissolvido em acetonitrila an. e N- iodossuccinimida (2,0 eq), seguido por nitrato de amônio cérico (0,05 eq) foram adicionados, e a solução foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada a vácuo e a goma resultante foi dividida entre acetato de etila e salmoura. A fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna, eluindo com 9:1 hexano: acetato de etila, para dar etilamida de ácido 5-(2,4-bis- benzilóxi-5-isopropil-fenil)-4-iodo-isoxazol-3-carboxílico como um óleo. Tempo de retenção de LC 2,975 min [M+H]+ 597,2 Etapa 10 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOPROPIL-FENIL)- 4-IODO-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0136
[000204] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isopropil-fenil)-4- iodo-isoxazol-3-carboxílico (1 eq) foi dissolvido em DMF an.. 1 MNa2CO3 (aq) foi adicionado, seguido por ácido 4-formilfenilborônico (2 eq) e depois PdCl2 catalítico (PPh3)2. Nitrogênio foi borbulhado através da solução durante dez minutos em temperatura ambiente após cujo tempo, a temperatura foi elevada para 80°C sob uma atmosfera de nitrogênio, durante 15 minutos. A mistura de reação foi deixada esfriar para temperatura ambiente e a mistura de reação foi diluída com acetato de etila. Esta solução foi lavada com salmoura, depois seca em MgSO4, filtrada e concentrada a vácuo para dar um óleo. Purificado através de cromatografia de coluna, eluindo com 10% EtOAc em hexano, para dar etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5- isopropil-fenil)-4-iodo-isoxazol-3-carboxílico como um sólido branco.
[000205] Tempo de retenção de LC 2,981 min [M+H]+ 575,3 Etapa 11 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOPROPIL-FENIL)- 4-(4-MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0137
[000206] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isopropil-fenil)-4- iodo-isoxazol-3-carboxílico (1 eq) foi dissolvido em metanol e peneiras 3A em pó foram adicionadas. Morfolina (2 eq) foi adicionada, seguido por cianoboroidreto de sódio (2 eq). Ácido acético (5 eq) foi adicionado a gotas e a suspensão foi agitada sob nitrogênio em temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com NaHCO3 sat. (aq). A fase orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada a vácuo. A goma resultante foi purificada através de cromatografia instantânea, eluindo com 1% MeOH em DCM para dar etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isopropil-fenil)-4-(4-morfolin-4- ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um óleo incolor.
[000207] Tempo de retenção de LC 4,42 min [M+H]+ 646,2 método B Etapa 12 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-DIIDRÓXI-5-ISOPROPIL-FENIL)-4-(4- MOR-FOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0138
[000208] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isopropil-fenil)-4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (1 eq) foi dissolvido em uma DCM e sob uma atmosfera de nitrogênio, foi esfriado para 0°C. 1 M BCl3 em DCM foi adicionado a gotas e a solução foi agitada sob estas condições durante 30 minutos. Metanol (2 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi concentrada a vácuo. Purificação da amostra por LC/EM preparativa deu etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isopropil- fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um sólido branco.
[000209] Tempo de retenção de LC 1,991 min [M+H]+ 466,3
[000210] Este composto teve atividade ‘A’ no ensaio de polarização de fluorescência de Hsp90.
[000211] De uma maneira similar à da preparação do composto do exemplo 78, exemplos 78a-u foram preparados.
Figure img0139
Figure img0140
Figure img0141
Figure img0142
Figure img0143
Figure img0144
Figure img0145
Exemplo 78v ÉSTER DE DIETILA DE ÉSTER DE 4-CLORO-5-(DIETÓXI- FOSFORILÓXI)-2-[3-ETILCARBAMOIL-4-(4-METÓXI-FENIL)- ISOXAZOL-5-IL]-FENILA DE ÁCIDO FOSFÓRICO
Figure img0146
[000212] A uma mistura sólida de etilamida de ácido 5-(5-cloro-2,4- diidróxi-fenil)-4-(4-metóxi-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (11 mg, 2,1 x 10-2 mmoles) e MgO (25 mg) em um frasco pequeno, foram adicionadas 10 gotas de clorofosfato de dietila. A mistura resultante foi aquecida e agitada a 70°C durante uma hora, o progresso da reação foi monitorado por TLC. Quando esfriada, MeOH (1 ml) e DCM (1 ml) foram adicionados. Após filtração, os solventes foram evaporados e óleo amarelo foi obtido. O éster de difosforila foi separado por TLC preparativa, rendendo 4 mg. Rf = 0,35; 1H RMN δ = 7,95 (1 H, s, amplo); 7,74 (1H, s); 7,55 (1 H, s); 7,32 (2H, d, J = 9,0 Hz); 6,90 (2H, d, J = 9,0 Hz); 4,30 (8H, q); 3,80 (3H, s); 3,40 (2H, q); 1,35 (12H, t) e 1,25 (3H, t). LCMS: (M+1)+ = 661,1 (TA = 7,60 min) Exemplo 79 Preparação de etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isobutil-fenil)-4-(4- morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico
Figure img0147
Esquema de Reação
Figure img0148
Etapa 1 1-(2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-2-METIL-PROPAN-1-ONA
Figure img0149
[000213] Resorcinol (1 eq) foi absorvido em BF3.OEt2 (6 eq) e ácido isobutírico (1 eq) adicionado. A solução foi aquecida durante 1,5 hora a 90°C depois deixada esfriar para temperatura ambiente. A solução foi adicionada a gotas a 10% NaOAc (aq) e deixada repousar 4 horas, antes de ser extraída em EtOAc. As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com NaHCO3 sat. (aq), depois seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada a vácuo para dar 1-(2,4-diidróxi- fenil)-2-metil-propan-1-ona como um óleo vermelho que foi usado sem outra purificação.
[000214] Tempo de retenção de LC 2,279 min [M+H]+ 181,1 Etapa 2 4-ISOBUTIL-BENZENO-1,3-DIOL
Figure img0150
[000215] Cloroformiato de etila (3 eq) foi adicionado lentamente a uma solução esfriada (0°C) de 1-(2,4-diidróxi-fenil)-2-metil-propan-1- ona (1 eq) e trietilamina (3 eq) em THF. A mistura foi aquecida para temperatura ambiente e agitada durante três horas antes de ser filtrada e os sólidos lavados com THF frio. Os filtrados combinados foram esfriados para 0°C e boroidreto de sódio (4 eq) em um volume de água igual aos filtrados de THF adicionados lentamente. A mistura foi aquecida para temperatura ambiente, agitada durante três horas e diluída com água. A mistura foi extraída duas vezes com éter dietílico, os extratos combinados concentrados à secura e ressuspensos em 10% de solução de hidróxido de sódio aquosa (4 eq). Após refluxar durante 90 minutos, a mistura foi esfriada, acidificada com 5M aq HCl e extraída duas vezes com éter dietílico. Os extratos orgânicos foram secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados à secura para dar 4-isobutil-benzeno-1,3-diol como um óleo turvo que foi usado sem outra purificação. RMN consistente com a estrutura. Exemplo 3: 1-(2,4-DIIDRÓXI-5-ISOBUTIL-FENIL)-ETANONA
Figure img0151
[000216] 4-Isobutil-benzeno-1,3-diol (1 eq) foi absorvido em BF3.OEt2 (6 eq) e ácido acético (2 eq) foi adicionado. A solução foi aquecida durante 16 horas a 90°C depois deixada esfriar para temperatura ambiente. A solução foi adicionada a gotas a 10% NaOAc (aq) e deixada repousar 4 horas, antes de ser extraída duas vezes com éter dietílico. As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com NaHCO3 sat. (aq), depois seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada a vácuo para dar 1-(2,4-diidróxi-5-isobutil-fenil)-etanona que foi usada sem outra purificação. RMN consistente com a estrutura. Etapa 4 1-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOBUTIL-FENIL)-ETANONA
Figure img0152
[000217] 1-(2,4-diidróxi-5-isobutil-fenil)-etanona (1 eq) foi dissolvido em DMF e carbonato de potássio (4,4 eq) depois brometo de benzila (4,4 eq) foi adicionado. A suspensão foi aquecida, com agitação a 150°C, sob nitrogênio, por 16 horas. A solução foi esfriada para temperatura ambiente, filtrada e concentrada à secura. Este sólido foi purificado por cromatografia de coluna (sílica, hexanos:acetato de etila 4:1) depois recristalizado de acetato de etila:hexanos para dar 1-(2,4- bis-benzilóxi-5-isobutil-fenil)-etanona como cristais incolores.
[000218] Tempo de retenção de LC 3,030 min [M+H]+ 389,3 Etapa 5 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 4-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOBUTIL- FENIL)-2,4-DIOXO-BUTÍRICO
Figure img0153
[000219] Sódio (3 eq) foi adicionado ao etanol sob nitrogênio em temperatura ambiente e agitado até ter ocorrido dissolução completa. 1-(2,4-bis-benzilóxi-5-isobutil-fenil)-etanona (1 eq) foi adicionado, seguido por oxalato de dietila (1,5 eq) e a mistura de reação aquecida em refluxo durante 4 horas. A mistura foi deixada esfriar para temperatura ambiente e acidificada com 2M HCl (aq) para dar um precipitado amarelo de éster de etila de ácido 4-(2,4-bis-benzilóxi-5- isobutil-fenil)-2,4-dioxo-butírico que foi obtido através de filtração.
[000220] Tempo de retenção de LC 3,254 min [M+H]+ 489,3 Etapa 6 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOBUTIL- FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0154
[000221] Éster de etila de ácido 4-(2,4-bis-benzilóxi-5-isobutil-fenil)- 2,4-dioxo-butírico (1 eq) foi dissolvido em etanol com agitação. Cloridrato de hidroxilamina (1,2 eq) foi adicionado e a solução foi aquecida em refluxo durante duas horas. A mistura de reação foi esfriada para temperatura ambiente, para dar um precipitado. Este precipitado foi obtido através de filtração para dar éster de etila de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isobutil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um sólido branco.
[000222] Tempo de retenção de LC 3,261 min [M+H]+ 486,3 Etapa 7 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOBUTIL-FENIL)- ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0155
[000223] Éster de etila de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isobutil-fenil)- isoxazol-3-carboxílico foi dissolvido em 2M etilamina em metanol (10 eq) e aquecido na microonda Smith Synthesiser a 120°C durante 600 segundos. A solução foi concentrada a vácuo para dar etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isobutil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um sólido branco que foi usado sem outra purificação.
[000224] Tempo de retenção de LC 3,112 min [M+H]+ 485,3 Etapa 8 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOBUTIL-FENIL)-4- IODO-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0156
[000225] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isobutil-fenil)- isoxazol-3-carboxílico (1 eq) e N-iodossuccinimida (2,0 eq), foram dissolvidos em acetonitrila, nitrato de amônio cérico (0,1 eq) adicionados e a solução foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada a vácuo e a goma resultante foi dividida entre acetato de etila e salmoura. A fase orgânica foi seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna, eluindo com 4:1 hexano: acetato de etila, para dar etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isobutil-fenil)-4-iodo-isoxazol-3-carboxílico como um óleo.
[000226] Tempo de retenção de LC 3,089 min [M+H]+ 611,2 Etapa 9 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-ISOBUTIL-FENIL)-4- (4-FORMIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0157
[000227] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isobutil-fenil)-4- iodo-isoxazol-3-carboxílico (1 eq) foi dissolvido em DMF e 1M Na2CO3 (aq) (3 eq) foi adicionado, seguido por ácido 4-formilfenil borônico (2 eq) e PdCl2(PPh3)2 catalítico. Nitrogênio foi borbulhado através da solução durante dez minutos em temperatura ambiente após cujo tempo, a temperatura foi elevada para 80°C sob uma atmosfera de nitrogênio, durante duas horas. A mistura de reação foi deixada esfriar para temperatura ambiente e a mistura de reação foi diluída com acetato de etila. Esta solução foi lavada com salmoura, depois seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada a vácuo para dar um óleo que foi purificado através de cromatografia de coluna, eluindo com 10% EtOAc em hexano, para dar etilamida de ácido 5-(2,4-bis- benzilóxi-5-isobutil-fenil)-4-(4-formil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um sólido branco.
[000228] Tempo de retenção de LC 5,57 min [M+H]+ 589,1 método B Etapa 10 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-bis-BENZILÓXI-5-ISOBUTIL-FENIL)-4- (4-MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0158
[000229] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isobutil-fenil)-4-(4- formil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (1 eq) foi dissolvido em metanol e peneiras 3A em pó foram adicionadas. Morfolina (2 eq) foi adicionada, seguido por ácido acético (5 eq). Após agitar durante 30 minutos, cianoboroidreto de sódio (2 eq) foi adicionado em partes e a suspensão foi agitada sob nitrogênio em temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura de reação foi filtrada através de celite e concentrada à secura. Cromatografia de coluna, eluindo com 5% MeOH em DCM deu etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isobutil- fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um óleo incolor.
[000230] Tempo de retenção de LC 4,53 min [M+H]+ 660,2 método B Etapa 11 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-DIIDRÓXI-5-ISOBUTIL-FENIL)-4-(4- MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0159
[000231] Etilamida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-isobutil-fenil)-4-(4- morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (1 eq) foi dissolvida em uma DCM e sob uma atmosfera de nitrogênio, foi esfriada para 0°C. 1 M BCl3 em DCM (9 eq) foi adicionado a gotas e a solução foi agitada durante 30 minutos. Metanol (2 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi concentrada a vácuo. Purificação da amostra por LC/EM preparativa deu etilamida de ácido 5-(2,4-diidróxi-5-isobutil-fenil)-4-(4- morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico como um sólido branco.
[000232] Tempo de retenção de LC 1,902 min [M+H]+ 480,3
[000233] Este composto teve atividade ‘A’ no ensaio de polarização de fluorescência de Hsp90.
[000234] De uma maneira similar ao da preparação do composto do exemplo 79, exemplo 80 foi preparado. Purificação da amostra por LC/EM preparativa deu o composto como um sólido branco
Figure img0160
Exemplo 81 N-[5-(5-CLORO-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-4-(4-FLÚOR-FENIL)- ISOXAZOL-3-ILMETIL]-METANOSSULFONAMIDA
Figure img0161
Exemplo 82 N-[5-(5-CLORO-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-4-(4-FLÚOR-FENIL)- ISOXAZOL-3-ILMETIL]-ACETAMIDA AMIDA DE ÁCIDO 5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4-(4- FLÚOR-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0162
[000235] Amida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4-iodo- isoxazol-3-carboxílico (0,45 g, 0,80 mmol) foi acoplada cruzada ao ácido 4-fluorofenil borônico (0,17 g, 1,5 equiv.) usando as condições padrão descritas acima. O produto bruto, um sólido laranja (0,40 g), foi assumido para a próxima etapa sem outra purificação. LCMS (LCQ) tR = 8,70, EM m/z 529,1 [M+H]+ C-[5-(2,4-BIS-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4-(4-FLÚOR-FENIL)- ISOXAZOL-3-IL]-METILAMINA
Figure img0163
[000236] A uma solução de amida de ácido 5-(2,4-bis-benzilóxi-5- cloro-fenil)-4-(4-flúor-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (0,40 g, 0,76 mmol) em THF anidro (20 ml) sob argônio 1M foi adicionado complexo de Borano-THF (1 ml) e a solução refluxada durante a noite. Após esfriar a reação foi extinguida com metanol (10 ml) e o produto purificado usando uns 5 g de Isolute® SPE Instantânea SCX-2 para fornecer 0,30 g (77% de rendimento) como um pó. LCMS (LCQ) tR = 7,54, EM m/z 515,2 [M+H]+
Figure img0164
N-[5-(5-CLORO-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-4-(4-FLÚOR-FENIL)- ISOXAZOL-3-ILMETIL]-METANOSSULFONAMIDA
[000237] C-[5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4-(4-flúor-fenil)- isoxazol-3-il]-metilamina (100 mg, 0,19 mmol) foi dissolvida em DCM (3 ml) antes da adição de cloreto de metano sulfonila (17 μl, 1,1 equiv.) e trietilamina (30 μl, 1,1 equiv.). A solução foi agitada durante a noite em temperatura ambiente antes de ser evaporada à secura a vácuo deixando o produto protegido de benzila bruto como um resíduo de cor azul (90 mg). Este foi desprotegido usando o procedimento padrão com tricloreto de boro descrito acima e purificado por TLC preparativa (10% etanol em DCM) e extração por soxhlet de sílica através de éter deu o composto puro como um sólido quase incolor (8 mg, 10% de rendimento). LCMS (LCQ) tR = 6,65, EM m/z 411,2 [M-H] δH (d4-MeOH), 7,19 (2H, m, Ar-H), 7,04 (1H, s, Ar-H), 7,03 (2H, m, Ar-H), 6,34 (1 H, s, Ar-H), 4,27 (2H, s, CH2NH), 2,81 (3H, s, SO2CH3).
Figure img0165
N-[5-(5-CLORO-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-4-(4-FLÚOR-FENIL)- ISOXAZOL-3-ILMETIL]-ACETAMIDA
[000238] A uma solução de C-[5-(2,4-bis-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4-(4- flúor-fenil)-isoxazol-3-il]-metilamina (100 mg, 0,19 mmol) em DCM foi adicionado anidrido acético (130 μl, 7,0 equiv.) e trietilamina (81 μl, 3,0 equiv.). A solução foi agitada em temperatura ambiente até que a amina fosse consumida. O solvente foi removido a vácuo para deixar o produto protegido de benzila bruto oleoso tingido de amarelo. Este foi desprotegido usando o procedimento padrão com tricloreto de boro descrito acima e purificado por TLC preparativa e extração de soxhlet da sílica através de éter deu o composto puro como um sólido incolor (10 mg, 14% de rendimento). LCMS (LCQ) tR =6,57, EM m/z 377,1 [M+H]+ δ H (d4-MeOH), 7,17 (2H, m, Ar-H), 7,01 (1H, s, Ar-H), 6,98 (2H, m, Ar-H), 6,32 (1 H, s, Ar-H), 4,37 (2H, s, CH2NH), 1,77 (3H, s, COCH3). ExemploS 83, 84 e 85 ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(5-ETIL-4-HIDRÓXI-2-METÓXI-FENIL)-4-(4- MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO (83); ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(5-ETIL-2-HIDRÓXI-4-METÓXI-FENIL)-4-(4- MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO (84); ETILAMIDA DE ÁCIDO 5-(5-ETIL-2,4-DIMETÓXI-FENIL)-4-(4- MORFOLIN-4-ILMETIL-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO (85)
Figure img0166
[000239] A um frasco carregado com argônio contendo etilamida de ácido 5-(5-etil-2,4-diidróxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3- carboxílico (25 mg, 0,055 mmol) e N,N- (Diisopropil)aminometilpoliestireno [PS-DIEA] (35 mg, 3,83 mmol/g, 2,4 equiv.) foram adicionados DCM anidro (2,3 ml) e metanol anidro (0,25 ml). Durante agitação suave, 2 M (Trimetilsilil)diazome-tano em hexanos (28 μl, 1,0 equiv.) foram adicionados e a solução agitada durante a noite em temperatura ambiente. Argônio foi borbulhado através da solução por 10 min, a resina separada por filtração e os voláteis removidos a vácuo. O resíduo bruto foi purificado por HPLC semipreparativa para render etilamida de ácido 5-(5-etil-4-hidróxi-2- metóxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (83) (5,52 mg, 21%), etilamida de ácido 5-(5-etil-2-hidróxi-4-metóxi-fenil)-4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (84) (1,14 mg, 4%), etilamida de ácido 5-(5-etil-2,4-dimetóxi-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil- fenil)-isoxazol-3-carboxílico (1,46 mg, 5%) e o material de partida não- metilado. 83: LCMS (LCT) tR = 4,95, EM m/z 466,4 [M+H]+ 84: LCMS (LCT) tR = 5,14, EM mlz 466,4 [M+H]+ (85): LCMS (LCT) tR = 5,45, EM m/z 480,4 [M+H]+ Dados de RMN confirmaram as tarefas. Exemplo 86 ETIL 5-(5-CLORO-2-HIDRÓXI-FENIL)-4-(4-MORFOLIN-4-ILMETIL- FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXAMIDA
Figure img0167
Etapa 1 2-BENZOILÓXI-5-CLORO-BENZOATO DE METILA
Figure img0168
[000240] Uma mistura de 5-cloro-2-hidróxi-benzoato de metila (2,5 g, 13,4 mmoles), K2CO3 (3,7 g, 26,8 mmoles) e brometo de benzila (2,98 g, 17,4 mmoles) em acetona (30 ml) foi refluxada durante 12 horas. Após esfriar, acetona foi evaporada. EtOAc (100 ml) foi adicionado e filtrado. A camada orgânica foi depois lavada com 1M HCl (1 x 80 ml), salmoura (2 x 80 ml) e seca com Na2SO4. Após filtração e evaporação do solvente, semi-sólidos amarelos foram obtidos (3,2 g). 1H RMN (d6- acetona) δ = 7,73 (1H, d); 7,60 - 7,30 (1H + 5H, m); 7,28 (1H, d); 5,30 (2H, s) e 3,90 (3H, s). Etapa 2 1-(2-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-2-(TRIFENIL-À5- FOSFANILIDENO)-ETANONA
Figure img0169
[000241] A uma suspensão agitada de brometo de trifenilfosfônio (2,14 g, 6,0 mmoles) em THF seco (30 ml) em temperatura ambiente 1,6M n-buLi foi adicionado em hexano (5,25 ml, 8,39 mmoles). A suspensão laranja foi agitada durante 3 horas. Em seguida, uma solução de 2-benzoilóxi-5-cloro-benzoato de metila (0,83 g, 3,0 mmoles) em THF (8 ml) foi lentamente adicionada. A mistura resultante foi agitada a 60°C durante duas horas e filtrada após esfriada. DCM (100 ml) foi adicionado ao filtrado e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 80 ml). Após filtração e evaporação do solvente, óleo amarelo foi obtido (2,0 g). Eles foram depois purificados através de cromatografia, eluídos com EtOAc: hexano/1: 1, rendeu 0,97 g de sólidos. Rf = 0,43, 1H RMN (d6- acetona) δ = 7,80 - 7,52 (20H, m); 7,40 - 7,20 (1H + 1H + 1H, m); 5,25 (2H, s); 4,72 (1H, s, trans-H) e 4,62 (1H, s, cis-H). LCMS: (M+1)+ = 521,2 (TA = 5,94 min) Etapa 3 4-(2-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-2,4-DIOXO-3-(TRIFENIL-À5 FOSFANILIDENO)-BUTIRATO DE ETILA
Figure img0170
[000242] A uma solução de 1-(2-Benzilóxi-5-cloro-fenil)-2-(trifenil-25- fosfanilideno)-etanona (0,49 g, 0,94 mmol), NEt3 (96 mg, 0,94 mmol) e DMAP (12 mg, 0,09 mmol) em tolueno seco (20 ml) em temperatura ambiente, clorooxoacetato de etila (0,38 g, 2,78 mmoles) em tolueno (5 ml) foi adicionado. A mistura foi agitada durante duas horas e vertida em água (50 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aq. foi extraída com EtOAc (2 x 40 ml). As camadas orgânicas combinadas depois lavada com solução sat. de NaHCO3 (2 x 40 ml), ácido cítrico sat. (1 x 40 ml), salmoura (1 x 40 ml) e seca. Óleo bruto (0,36 g) foi purificado por cromatografia, eluído com EtOAc. Rf = 0,88, 1H RMN (d6-acetona) δ = 7,75 - 7,40 (15H, m); 7,30 (1H, dd); 7,15 (1H, d); 7,05 (1H, d); 5,10 (2H, s); 3,60 (2H, q) e 1,10 (3H, s). LCMS: (M+1)+ = 621,2 (TA = 6,49 min) Etapa 4 3-(2-BENZOILÓXI-5-CLORO-BENZOIL)-3-BROMO-3H-AZIRIN-2 CARBOXILATO DE ETILA
Figure img0171
[000243] A uma solução de 4-(2-benzilóxi-5-cloro-fenil)-2,4-dioxo-3- (trifenil-À5-fosfanilideno)-butirato de etila (0,143 g, 0,23 mmol) em DCM (8 ml) em temperatura ambiente, uma mistura de TMSN3 (40 mg, 0,35 mmol) e NBS (62 mg, 0,35 mmol) em DCM (6 ml) foi adicionado. A solução resultante foi agitada durante duas horas. Após evaporação do solvente, o produto bruto foi purificado por TLC preparativa. Sólidos amarelos (38 mg) foram obtidos. Rf = 0,73 (EtOAc:hexano 1:2). 1H RMN (d6-acetona) δ = 7,80 (1H, d); 7,60 (1H, dd); 7,40 (5H, m); 7,30 (1H, d); 5,20 (2H, s); 4,10 (2H, q) e 1,00 (3H, t). LCMS: (M+1)+ = 438,0 (TA = 7,32 min) Etapa 5 5-(2-BENZOILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4-BROMO-ISOXAZOL-3- CARBOXILA-TO DE ETILA
Figure img0172
[000244] 3-(2-Benzoilóxi-5-cloro-benzoil)-3-bromo-3H-azirin-2- carboxilato de etila (55 mg, 0,12 mmol) foi aquecido a refluxo em tolueno seco durante duas horas. Após evaporação do solvente, sólidos brutos (34 mg) foram obtidos e purificados por TLC preparativa (EtOAc: hexano/1: 2). Rf = 0,73 (fluorescente). 1H RMN (d6-acetona) δ = 7,60 (1H, d); 7,50 (1H, dd); 7,40 (1H, d); 7,30 (5H, m); 5,25 (2H, s); 4,42 (2H, q) e 1,40 (3H, t). LCMS: (M+1)+ = 438,0 (TA = 7,09 min) Etapa 6 5-(2-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4-BROMO-ISOXAZOL-3- CARBOXA-MIDA DE ETILA
Figure img0173
[000245] A uma solução isoxazol-3-carboxilato de etila (30 mg, 6,8 x 10-2 mmol) em EtOH (1 ml), etilamina (70% em água, 1 ml) foi adicionada. A solução foi aquecida para 100°C em um reator de microonda CEM® (200 W) durante uma hora. Após isso, o solvente foi evaporado e o composto purificado por TLC preparativa para render sólidos (20 mg). Rf = 0,39 (EtOAc: hexano/1: 4). 1H RMN (d6-acetona) δ = 8,10 (1H, s, amplo); 7,50 (1H, d); 7,45-7,35 (1H + 1H, m); 7,25 (5H, m); 5,20 (2H, s); 3,40 (2H, q) e 1,20 (3H, t). LCMS: (M+1)+ = 437,1 (TA = 6,57 min) Etapa 7 5-(2-BENZILÓXI-5-CLORO-FENIL)-4-(4-MORFOLIN-4-ILMETIL- FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXAMIDA DE ETILA
Figure img0174
[000246] Uma mistura de 5-(2-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4-bromo- isoxazol-3-carboxamida de etila (30 mg, 5,6 x 10-2 mmol), Pd(Ph3P)4 (4 mg, 3,5 x 10-2 mmol), 4[4-(4,4,5,5-Tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)- benzil]morfolina (63 mg, 0,2 mmol) e 1 M solução de NaHCO3 (0,2 ml) em DME (1 ml) foi agitada a 80°C sob gás de Argônio por 16 horas. Após esfriar, a solução foi diluída com água (8 ml) e extraída com EtOAc (2 x 20 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 20 ml) e secas. Após filtração e evaporação dos solventes, o produto bruto foi purificado por TLC preparativa, rendeu 30 mg de sólidos. Rf = 0,44 (EtOAc). 1H RMN (d6-acetona) δ = 8,25 (1H, s, amplo); 7,60 (1H, d); 7,55 (1H, dd); 7,45 (1H, d); 7,30 - 6,90 (9H, m); 5,00 (2H, s); 3,55 (4H, m); 3,45 (2H + 2H, s + q); 2,30 (4H, m) e 1,20 (3H, t). LCMS: (M+1)+ = 532,2 (TA = 4,39 min) Etapa 8 ETIL 5-(5-CLORO-2-HIDRÓXI-FENIL)-4-(4-MORFOLIN-4-ILMETIL- FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXAMIDA
Figure img0175
[000247] A uma solução de etil 5-(2-benzilóxi-5-cloro-fenil)-4-(4- morfolin-4-ilmetil-fenil)-isoxazol-3-carboxamida (25 mg, 4,7 x 10-2 mmoles) em DCM (5 ml) a 0°C, 1M BCl3 em DCM (0,15 ml) foi adicionado. A solução amarela turva resultante foi depois agitada a 0°C durante 15 minutos e temperatura ambiente 3 a 4 horas até ficar clara. Após isso, a solução foi extinguida por MeOH (1 ml). NaHCO3 sat. (1 ml) foi depois adicionado e extraído com EtOAc (2 x 2 ml) e seco. Após o solvente ter sido filtrado e evaporado, o óleo bruto foi purificado por TLC preparativa (EtOAc: MeOH/50: 1), rendeu 12 mg de sólidos. 1H RMN (d4-MeOD) δ = 7,60 (2H, d); 7,50 - 7,30 (1H + 1H + 1H, m); 7,00 (2H, d); 3,70 (4H, m); 3,60 (2H, s); 3,50 (2H, q); 2,60 (4H, m) e 1,25 (3H, t). LCMS: (M+1)+ = 442,2 (TA = 3,54 min)
[000248] O 4-hidróxi-isômero foi preparado de um modo similar como sua contraparte de 2-hidróxi como segue: Exemplo 87 ETIL 5-(3-CLORO-4-HIDRÓXI-FENIL)-4-(4-MORFOLIN-4-ILMETIL- FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXAMIDA
Figure img0176
Etapa 1 4-BENZOILÓXI-3-CLORO-BENZOATO DE METILA
Figure img0177
[000249] 3-cloro-4-hidróxi-benzoato de metila (1,0 g, 5,36 mmoles) deu um sólido bruto (1,57 g). 1H RMN (d6-acetona) δ = 8,00 (1 H, d); 7,95 (1 H, dd); 7,60 - 7,40 (5H, m); 7,35 (1H, d); 5,40 (2H, s) e 3,90 (3H, s). Etapa 2 1-(4-BENZILÓXI-3-CLORO-FENIL)-2-(TRIFENIL-À5- FOSFANILIDENO)-ETANONA
Figure img0178
[000250] 4-benzoilóxi-3-cloro-benzoato de metila (1,5 g, 5,40 mmoles) deu um sólido bruto (2,5 g). Rf = 0,31 (EtOAc: hexano/1: 1). 1H RMN (d6-acetona) δ = 8,05 (1H, d); 7,90 (1 H, dd); 7,85 - 7,35 (20H, m); 7,20 (1 H, d); 5,30 (2H, s); 4,60 (1 H, s, trans-H) e 4,50 (1 H, s, cis- H). LCMS: (M+1)+ = 521,2 (TA = 5,29 min) Etapa 3 4-(4-BENZILÓXI-3-CLORO-FENIL)-2,4-DIOXO-3-(TRIFENIL-X5- FOSFANILIDENO)-BUTIRATO DE ETILA
Figure img0179
[000251] 1-(4-Benzilóxi-3-cloro-fenil)-2-(trifenil-X5-fosfanilideno)- etanona (1,84 g, 3,53 mmoles) deu um sólido bruto (1,43 g). 1H RMN (d6-acetona) δ = 8,00 - 7,35 (22H, m); 7,20 (1H, d); 5,35 (2H, s); 3,55 (2H, q) e 1,14 (3H, s). LCMS: (M+1)+ = 621,2 (TA = 7,29 min) Etapa 4 3-(4-BENZOILÓXI-3-CLORO-BENZOIL)-3-BROMO-3H-AZIRIN-2- CARBOXI-LATO DE ETILA
Figure img0180
[000252] 4-(4-benzilóxi-3-cloro-fenil)-2,4-dioxo-3-(trifenil-X5- fosfanilideno)-butirato de etila (0,74 g, 1,19 mmol) deu um sólido (0,168 g) após purificação de coluna e de TLC preparativa Rf = 0,24 (EtOAc: hexano/1: 6). 1H RMN (d6-acetona) δ = 8,00 (1H, d); 7,90 (1H, dd); 7,50 (1H, d); 7,40 (5H, m); 5,40 (2H, s); 4,05 (2H, q) e 0,95 (3H, t). LCMS: (M+1)+ = 438,1 (TA = 7,27 min) Etapa 5 5-(4-BENZOILÓXI-3-CLORO-FENIL)-4-BROMO-ISOXAZOL-3- CARBOXILATO DE ETILA
Figure img0181
[000253] 3-(4-benzoilóxi-3-cloro-benzoil)-3-bromo-3H-azirin-2- carboxilato de etila (68 mg, 0,16 mmol) deu um sólido (20 mg) após TLC preparativa e cristalização (EtOH). Rf = 0,26 (fluorescente) (EtOAc: hexano/1: 4). 1H RMN (d6-acetona) δ = 8,00 (1H, d); 7,90 (1H, dd); 7,50 (1H, d); 7,40 (5H, m); 5,35 (2H, s); 4,45 (2H, q) e 1,40 (3H, t). LCMS: (M+1)+ = 438,0 (TA = 7,39 min) Etapa 6 5-(4-BENZILÓXI-3-CLORO-FENIL)-4-BROMO-ISOXAZOL-3- CARBOXAMIDA DE ETILA
Figure img0182
[000254] 5-(4-benzoilóxi-3-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3-carboxilato de etila (10 mg, 2,3 x 10-2 mmol) deu um sólido bruto (8 mg). Rf = 0,53 (EtOAc: hexano/1: 2). 1H RMN (d6-acetona) δ = 8,15 (1H, s, amplo); 8,00 (1H, d); 7,90 (1H, dd); 7,50 (1H, d); 7,40 (5H, m); 5,32 (2H, s); 3,42 (2H, q) e 1,20 (3H, t). Etapa 7 ETIL 5-(4-BENZILÓXI-3-CLORO-FENIL)-4-(4-MORFOLIN-4-ILMETIL- FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXAMIDA
Figure img0183
[000255] 5-(4-benzilóxi-3-cloro-fenil)-4-bromo-isoxazol-3- carboxamida de etila (10 mg, 2,3 x 10-2 mmol) deu um sólido bruto (10 mg) que foi depois usado na próxima etapa sem qualquer outra purificação. Etapa 8 ETIL 5-(3-CLORO-4-HIDRÓXI-FENIL)-4-(4-MORFOLIN-4-ILMETIL- FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXAMIDA
Figure img0184
[000256] 5-(4-benzilóxi-3-cloro-fenil)-4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil)- isoxazol-3-carboxamida de etila (8 mg, 1,5 x 10-2 mmol) deu um sólido bruto (2 mg) após purificado duas vezes por TLC preparativa (EtOAc: MeOH/50: 1). 1H RMN (d4-MeOD) δ = 7,70 (2H, d); 7,60 (1H, d); 7,45 (1H + 1H, m); 7,00 (2H, d); 3,80 (4H, m); 3,75 (2H, s); 3,50 (2H, q); 2,82 (4H, m) e 1,25 (3H, t). LCMS: (M+1)+ = 442,2 (TA = 4,47 min) Exemplo 88 3-[4-(4-BROMO-FENIL)-ISOXAZOL-5-IL]-5-CLORO-2,6-DIIDRÓXI- BENZALDEÍDO
Figure img0185
Etapa 1 3-(4-BROMO-FENIL)-6-CLORO-7-HIDRÓXI-4-OXO-4H-CROMENO-8- CARBALDEÍDO
Figure img0186
[000257] 3-(4-Bromo-fenil)-6-cloro-7-hidróxi-cromen-4-ona (0,35 g, 1 mmol) e hexametileno tetramina (0,14 g, 1 mmol) foram dissolvidos em ácido acético glacial (20 ml) e aquecidos durante a noite a 100°C. 6M HCl quant. (10 ml) foram adicionados e a mistura aquecida durante uma hora a mais antes de ser vertido em água. O precipitado formado foi filtrado, lavado e seco para fornecer o produto puro desejado como um sólido marrom pálido. LCMS (LCQ) tR = 8,27, EM m/z 377,3/379,2 [M-H]- Etapa 2 3-[4-(4-BROMO-FENIL)-ISOXAZOL-5-IL]-5-CLORO-2,6-DIIDRÓXI- BENZALDEÍDO
Figure img0187
[000258] A uma solução de 3-(4-bromo-fenil)-6-cloro-7-hidróxi-4-oxo- 4H-cromeno-8-carbaldeído 53,5 mg, 0,14 mmol) em EtOH (6 ml), cloridrato de hidroxilamina (100 mg, 1,4 mmol) foi adicionado. A mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 16 horas. EtOH foi evaporado e EtOAc (20 ml) foi adicionado. A camada orgânica foi lavada com NaHCO3sat. e seca. Sólidos (33 mg) foram obtidos quando o óleo resultante foi triturado com éter. 1H RMN (d6-DMSO) δ = 9,83 (1H, s); 8,70 (1H, s); 8,21 (1H, s); 7,78 (2H, d) e 7,68 (2H, s). LCMS: (M+1)+ = 394,1 (TA = 8,60 min) Exemplo 89 HIDROXIAMIDA DE ÁCIDO 5-(5-ETIL-2-HIDRÓXI-4-METÓXI-FENIL)- 4-(4-FLÚOR-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0188
Etapa 1 1-(5-ETIL-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-2-(4-FLÚOR-FENIL)-ETANONA
Figure img0189
[000259] Etil resorcinol (5,37 g, 39 mmoles) e ácido 4- fluorofenilacético (6,00 g, 39 mmoles) foi dissolvido em eterato BF3 (40 ml). A solução foi aquecida a 80°C durante 4 horas. Quando esfriada, água (100 ml) foi adicionada cuidadosamente e a solução foi extraída com EtOAc (2 x 80 ml). As camadas orgânicas foram depois lavadas com NaHCO3 sat. (precaução) (2 x 100 ml) e salmoura (2 x 100 ml) e secas com Na2SO4, Após purificação com carvão de descoloração, um xarope verde-escuro (10,5 g) foi obtido. Rf = 0,4 (EtOAc:n-hexano/1:3). O composto foi usado na próxima etapa sem outra purificação. 1H RMN (d6-acetona) δ = 7,80 (1H, s); 7,35 (2H, m); 7,00 (1H, m); 6,35 (1H, s); 4,35 (2H, s); 2,55 (2H, q) e 1,10 (3H, t). Etapa 2 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 4-(5-ETIL-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-3-(4- FLÚOR-FENIL)-2,4-DIOXO-BUTÍRICO
Figure img0190
[000260] A uma solução de 1-(5-etil-2,4-diidróxi-fenil)-2-(4-flúor-fenil)- etanona (10,3 g, 37,6 mmoles) em piridina seca (100 ml) a 0°C, clorooxoacetato de etila (15,4 g, 112,8 mmoles) foi adicionado. A solução foi agitada a 0°C durante 4 horas e em temperatura ambiente durante 16 horas. A camada aq. foi neutralizada com 1M HCl e extraída com DCM (2 x 100 ml). As camadas de DCM combinadas foram depois lavadas com 2M HCl (2 x 80 ml), NaHCO3 sat. (1 x 100 ml), salmoura (1 x 100 ml) e secas com Na2SO4. Após filtração e evaporação do solvente, óleo marrom-escuro foi obtido (11,4 g). Rf = 0,22 (EtOAc:n-hexano/1:2). LCMS mostra que é uma mistura desejada do produto [(M-1)- = 373,1, RT = 7,27) e o carboxilato de cromeno ciclizado [(M-1)- = 355,4, RT = 7,83) em uma razão de cerca de 6:1. Uma quantidade pequena de amostra foi purificada através de TLC prep. para análise espectroscópica. 1H RMN (d6- acetona) δ = 7,75 (1H, s); 7,30 (2H, m); 7,00 (1H, m); 6,45 (1H, s); 4,65 (1H, s); 4,25 (2H, q); 2,55 (2H, q) e 1,10 (6H, t) Etapa 3 ÉSTER DE ETIL DE ÁCIDO 6-ETIL-3-(4-FLÚOR-FENIL)-7-HIDRÓXI- 4-OXO-4H-CROMENO-2-CARBOXÍLICO
Figure img0191
[000261] Éster de etila de ácido 4-(5-etil-2,4-diidróxi-fenil)-3-(4-flúor- fenil)-2,4-dioxo-butírico (3,22 g, 8,6 mmoles) foi refluxado em uma mistura de 0,8M HCl e MeOH (20 ml /20 ml) durante 3 horas a 100°C. Após isso, MeOH foi evaporado e a camada aq. foi extraída com EtOAc (2 x 60 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCO3 sat. (1 x 80 ml), salmoura (2 x 80 ml), água (1 x 80 ml) e secas com Na2SO4. Após purificação com carvão de descoloração e evaporação do solvente, sólidos viscosos marrons foram obtidos. Eles foram depois extraídos com éter quente, sólidos amarelo-escuros foram obtidos (0,26 g). Rf = 0,43 (EtOAc:n-hexano/1:2). LCMS: (M + 1)+ = 357,3 (TA = 7,83). 1H RMN (d6-acetona) δ = 9,75 (1H, s); 7,80 (1H, s); 7,25 (2H, m); 7,10 (1H, m); 6,90 (1H, s); 4,05 (2H, q); 2,70 (2H, q); 1,20 (3H, t) e 0,95 (3H, t). Etapa 4 ÉSTER DE ETILA DE ÁCIDO 6-ETIL-3-(4-FLÚOR-FENIL)-7-METÓXI- 4-OXO-4H-CROMENO-2-CARBOXÍLICO
Figure img0192
[000262] Iodometano (0,10 ml, 12 equiv.) foi adicionado a uma solução de éster de etila de ácido 6-etil-3-(4-flúor-fenil)-7-hidróxi-4-oxo- 4H-cromeno-2-carboxílico (50 mg, 0,14 mmol) e carbonato de potássio (58 mg, 3,0 equiv.) em acetona e a mistura refluxada durante a noite. Os voláteis foram depois evaporados a vácuo e o resíduo dividido entre água (15 ml) e EtOAc (15 ml). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em MgSO4 e evaporada a vácuo à secura para dar um produto cristalino branco (45 mg, 87% de rendimento) δH (CDCl3), 7,96 (1H, s, Ar-H), 7,27 (2H, m, Ar-H), 7,12 (2H, m, Ar-H), 6,92 (1H, s, Ar-H), 4,16 (2H, q, CO2CH2CH3), 3,95 (3H, s, OCH3), 2,71 (3H, q, CH2CH3), 1,24 (3H, t, CO2CH2CH3), 1,04 (3H, t, CH2CH3) Etapa 5 HIDROXIAMIDA DE ÁCIDO 5-(5-ETIL-2-HIDRÓXI-4-METÓXI-FENIL)- 4-(4-FLÚOR-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0193
[000263] Ao éster de etila de ácido 6-etil-3-(4-flúor-fenil)-7-metóxi-4- oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (25 mg, 0,068 mmol) em etanol (2,5 ml) foi adicionada hidroxilamina (50% em água, 1 ml) e a solução agitada por 48 horas. Os voláteis foram evaporados a vácuo e o resíduo purificado por TLC preparativa (10% MeOH em DCM) para dar o produto desejado como um sólido marrom-claro (3 mg, 12% de rendimento). LCMS (LCT) tR = 6,54, EM m/z 373,17 [M+H]+ δH (d6-acetona), 10,73 (1H, s amplo), 8,59 (1H, s amplo), 7,39 (2H, m, Ar-H), 7,07 (2H, m, Ar-H), 7,00 (1H, s, Ar-H), 6,55 (1H, s, Ar-H), 3,82 (3H, s, OCH3), 2,48 (2H, q, CH2CH3), 1,30 (1 H, s amplo), 1,01 (3H, t, CH2CH3). Exemplo 90 HIDROXIAMIDA DE ÁCIDO 5-(5-ETIL-2,4-DIIDRÓXI-FENIL)-4-(4- FLÚOR-FENIL)-ISOXAZOL-3-CARBOXÍLICO
Figure img0194
[000264] Ao éster de etila de ácido 6-etil-3-(4-flúor-fenil)-7-hidróxi-4- oxo-4H-cromeno-2-carboxílico (25 mg, 0,070 mmol) em etanol (2,5 ml) foi adicionada hidroxilamina (50% em água, 1 ml) e a solução agitada por 48 horas. Os voláteis foram evaporados a vácuo e o resíduo purificados por TLC preparativa (15% MeOH em DCM) para dar o produto desejado como um sólido marrom (2 mg, 8% de rendimento). LCMS (LCT) tR = 5,63, EM m/z 359,13 [M+H]+ δ H (dβ- acetona), 10,72 (1H, s amplo, CONH), 8,69 (1H, s amplo, Ar-OH), 8,59 (1H, s amplo, Ar-OH), 7,39 (2H, m, Ar-H), 7,06 (2H, m, Ar-H), 6,99 (1H, s, Ar-H), 6,52 (1H, s, Ar-H), 2,49 (2H, q, CH2CH3), 1,31 (1H, s amplo), 1,08 (3H, t, CH2CH3).
Resultados Biológicos
[000265] A atividade de ATPase intrínseca de HSP90 pode ser medida usando HSP90 de levedura como um sistema modelo. O ensaio, com base no uso de malachita verde para a medição de fosfato inorgânico, foi usado para testar a atividade inibidora de HSP90 de alguns dos compostos dos Exemplos aqui.
ENSAIO DE ATPase DE MALACHITE GREEN Materiais
[000266] As químicas são da pureza mais alta comercialmente disponíveis e todas as soluções aquosas são compostas de água de AR. Por causa da necessidade de minimizar a contaminação com fosfato inorgânico, devem ser tomadas precauções com soluções e aparelho usados nos ensaios. Artigos de vidro e medidores de pH são enxaguados com água destilado ou desionizada em dobro antes do uso e, onde quer que possível, utensílio de plástico devem ser usados. Luvas são usadas para todos os procedimentos. (1) Placas de multi-cavidades de poliestireno de fundo redondo de 384 cavidades de Greiner (Greiner 781101) ou de 384 cavidades de Costar (VWR). (2) Tampão de ensaio de (a) 100mM Tris-HCl, pH 7,4, (b) 150mM KCl, (c) 6mM MgCl2. Armazenado em temperatura ambiente. (3) 0,0812% (p/v) verde de malaquita (M 9636, Sigma Aldrich Ltd., Poole, UK). Armazenado em temperatura ambiente. (4) 2,32% (p/v) álcool polivinílico USP (P 1097, Sigma Aldrich Ltd, Poole, UK) em água fervente (ver Comentário 1), deixado esfriar, e armazenado em temperatura ambiente. (5) 5,72% (p/v) molibdato de amônio em 6 M ácido clorídrico. Armazenado em temperatura ambiente. (6) 34% (p/v) citrato de sódio. Armazenado em temperatura ambiente. (7) 100mM ATP, sal de dissódio, qualidade especial (47699, Sigma Aldrich). Armazenado a -20°C. (8) proteína de HSP90 de levedura expressa de E. coli, purificada >95% (ver, por exemplo, Panaretou et al., 1998) e armazenada em 50 uL alíquotas a -80°C. Método 1. Diluir os compostos de teste a 500 μM em água de AR (concentração de DMSO será 2,5%). Transferir 2,5 μl destes compostos diretamente da placa filha para a placa de ensaio, dando uma concentração de ensaio final de 100 μM. Obter valores de IC50 de 12 pontos, executar diluições seriais 1:2 para produzir uma faixa de concentrações de ensaio de 100 μM a 97,6 nM (2,5% DMSO), e transferir 2,5 μl de cada concentração na placa de ensaio. Coluna 1 na placa de ensaio não contém nenhum composto, como um controle negativo. Uma fileira adicional sem composto é também usada como uma base. 2. Preparar ATP diluindo 100 mM de substância a 925 μM com tampão de ensaio, e alíquota de 5 μl de ATP diluída para cada cavidade incluindo controles (concentração de ensaio final 370 μM). 3. Adicionar 5 μl de tampão à fileira de base. 4. Diluir a preparação de enzima a 1,05 μM com tampão de ensaio, e alíquota 5 μl em cada cavidade do composto e na coluna de controle negativa. 5. Colher os reagentes no fundo do cavidade, tampar a placa com vedador de placa e incubar durante a noite a 37°C. 6. Primeiro coisa pela manhã preparar o Reagente de Malachite Green. Adicionar duas partes de Solução de Malachite Green, uma parte de Solução de Álcool Polivinílico, uma parte de Solução de Molibdato de Amônio e duas partes de água de AR. 7. Inverter para misturar, e deixar durante aproximadamente uma hora até que a cor fique marrom a amarelo dourado. 8. Adicionar 40 μl de Reagente de Malachite Green a cada cavidade, deixar 5 min para cor desenvolver. 9. Adicionar 5 μl de Reagente de Citrato de Sódio a cada cavidade (ver comentário 2) 10. Retampar com vedador de placa e agitar em agitador de placa por pelo menos 15 min 11. Medir a Absorbância a 620 nM usando uma leitora de placa adequada (por exemplo Victor, Perkin Elmer Life Science, Milton Keynes, UK). Sob estas condições, a absorbância de controle é 0,9 a 1,4, e a base é 0,2-0,35 fazendo uma razão de sinal para ruído de ~12. O fator Z’ calculado dos dados obtidos usando estas condições é entre 0,6 e 0,9. Comentários (1) O álcool polivinílico dissolve em água fervente com dificuldade e agitação por 2-3 h é requerida. (2) O intervalo de tempo entre a adição do reagente verde de malaquita e o citrato de sódio deve ser mantido tão curto quanto possível para reduzir a hidrólise não-enzimática de ATP. Uma vez o citrato de sódio é adicionado, a cor é estável por até 4 h em temperatura ambiente. (3) Os compostos podem ser adicionados às placas de ensaio usando um Biomek FX Robot (Beckman Coulter). Um dispensador Multidrop 384 (Thermo Labsystems, Basingstoke, UK) pode ser convenientemente usado para adicionar os reagentes à placa. (4) As condições de ensaio foram otimizadas com respeito ao tempo, proteína e concentração de substrato para alcançar concentração de proteína mínima ainda retendo o diferencial de sinal para ruído. (5) Sinal para ruído (S/N) é calculado usando a equação a seguir: (S-B) /V(SD de S)2 + (SD de B)2 (6) Determinar a atividade específica de HSP90, uma faixa de concentrações de fosfato inorgânico (0-10 nM) é preparada e a absorbância a 620 nm medida como descrito. Atividade específica é calculada da curva de calibração resultante.
[000267] Os compostos testados no ensaio acima foram atribuídos uma das duas faixas de atividades, a saber A = < 50 μM; B = >50 μM, e aqueles atribuições são relatadas acima.
[000268] Um ensaio de inibição de crescimento foi também empregado para a avaliação dos inibidores de HSP90 candidatos: AVALIAÇÃO DE CITOTOXICIDADE POR ENSAIO DE SULFORODAMINA B (SRB): CÁLCULO DE CONCENTRAÇÃO DE INIBIDOR DE 50% (IC50). Dia 1 1) Determine o número de célula através de hemocitômetro. 2) Usar um multipipetador 8 canais, adicionar 160 μl da suspensão de célula (3600 células/cavidade ou 2 x 104 células/ml) a cada cavidade de uma placa de microtitulação de 96 cavidades. 3) Incubar durante a noite a 37°C em uma incubadora de CO2. Dia 2 4) Soluções de substância das drogas são preparadas, e diluições seriais de cada droga são executadas em meio para dar concentrações finais nas cavidades. 5) Usando um multipipetador, 40 μl de droga (em 5x concentração final) são adicionados às cavidades em quadrupleto. 6) Cavidades de controle estão a qualquer lateral das placas de 96 cavidades onde 40 μl de meio são adicionados. 7) Incubar as placas em incubadora de CO2 durante 4 dias (48 horas). Dia 6 8) Virar o meio em um coletor e imergir a placa lentamente em 10% de ácido tricloroacético esfriado em gelo (TCA). Deixar durante cerca de 30 min no gelo. 9) Lavar as placas três vezes em água de torneira imergindo as placas em banhos de água de torneira e jogando fora. 10) Secar em incubadora. 11) Adicionar 100 μl de 0,4% SRB em 1% ácido acético a cada cavidade (exceto a última fileira (à direita) da placa de 96 cavidades, esta é o controle 0%, isto é nenhuma droga, nenhuma mancha. A primeira fileira será o controle 100% sem droga, mas com mancha). Deixar por 15 min. 12) Lavar mancha de SRB não-ligado com quatro lavagens de 1% de ácido acético. 13) Secar as placas em incubadora. 14) Solubilizar SRB usando 100 μl de 10 mM base de Tris e colocar as placas em agitador de placa por 5 min 15) Determinar a absorbância a 540 nm usando uma leitora de placa. Calcular a absorbância média para as cavidades em quadrupleto e expressar como uma porcentagem de valor para controle, cavidades não-tratadas. 16) Representar em gráfico a % de valores de absorbância versus concentração de droga de log e determina o IC50.
[000269] Por via de ilustração, o composto do Exemplo 2 deu um IC na faixa ‘A’ (< 50 uM) para o ensaio de impedimento de crescimento de SRB.
[000270] Um ensaio de Polarização de Fluorescência foi empregado para a avaliação de alguns dos compostos dos Exemplos:
Ensaio de Polarização de Fluorescência
[000271] Polarização de fluorescência {também conhecida como anisotropia de fluorescência} mede a rotação de umas espécies fluorescendo na solução onde quanto maior a molécula, mais polarizada a emissão de fluorescência.
[000272] Quando o fluoróforo for excitado com luz polarizada, a luz emitida é também polarizada. O tamanho molecular é proporcional à polarização da emissão de fluorescência.
[000273] A sonda marcada com fluorosceína - RBT0045864-FAM
Figure img0195
liga a HSP90 { HSP90 humana de corpo inteiro, de levedura de corpo inteiro ou de domínio N-terminal} e a anisotropia {rotação do complexo de sonda:proteína} é medida.
[000274] Composto de teste é adicionado à placa de ensaio, deixada equilibrar e a anisotropia medida novamente. Qualquer alteração na anisotropia é devido à ligação competitiva do composto a HSP90, assim liberando a sonda.
MATERIAIS
[000275] As químicas são da pureza mais alta comercialmente disponíveis e todas as soluções aquosas são compostas em água de AR. 1) Placa de ensaio preta de 96 cavidades Costar #3915 2) Tampão de ensaio de (a) 100mM Tris pH 7,4; (b) 20mM KCl; (c) 6mM MgCl2. Armazenado em temperatura ambiente. 3) 10 mg/ml de BSA (albumina de soro bovino) (New England Biolabs #B9001S) 4) 20 mM de sonda em 100% de concentração substância de DMSO. Armazenados na escuridão em TA. Concentração operacional é 200 nM diluída em água de AR e armazenada a 4°C. Concentração final no ensaio 80 nM. 5) Proteína de HSP90 de corpo inteiro humana expressa de E. coli, purificada >95% (ver, por exemplo, Panaretou et al., 1998) e armazenada em alíquotas de 50 μL a -80°C. PROTOCOLO 1) Adicionar 100 μl de 1x de tampão às cavidades 11A e 12A (= FP BLNK) 2) Preparar a mistura de ensaio - todos os reagentes são mantidos em gelo com uma tampa no balde uma vez que a sonda é sensível à luz.
Figure img0196
3) Separar em alíquotas de 100 μl mistura de alíquota em todas as outras cavidades 4) Vedar a placa e deixar no escuro em temperatura ambiente por 20 para equilibrar Placa de Diluição do Composto - 1 x 3 série de diluição 1) Em uma placa clara de fundo em v de 96 cavidades {#VWR 007/008/257} adicionar 10 μl de 100% de DMSO às cavidades B1 a H11 2) Às cavidades A1 a A11 adicionar 17,5 μl de 100% de DMSO 3) Adicionar 2,5 μl de composto a A1. Isto dá 2,5 mM {50x} composto de substância - assumindo compostos 20 mM. 4) Repetir para as cavidades A2 a A10. Controle nas colunas 11 e 12. 5) Transferir 5 μl da fileira A à fileira B - coluna 12 não. Misturar bem. 6) Transferir 5 μl da fileira B para a fileira C. Misturar bem. 7) Repetir para a fileira G. 8) Não adicionar qualquer composto à fileira H - esta é a fileira 0. 9) Isto produz uma série de diluição 1x3 de 50 μM a 0,07 μM. 10) Na cavidade B12 preparar 20 μl de 100 μM de composto padrão. 11) Após a primeira incubação a placa de ensaio é lida em uma leitora de placa Fusion® a-FP (Packard BioScience, Pangbourne, Berkshire, UK). 12) Após a primeira leitura, 2 μl de composto diluído são adicionados a cada cavidade para as colunas 1 a 10. Na coluna 11 {fornece curva padrão} apenas adicionar o composto B11 - H11. Adicionar 2 μl de 100 mM composto padrão às cavidades B12 - H12 {é controle positivo} 13) O fator Z’ é calculado de zero controle e cavidades positivas. Isto tipicamente dá um valor de 0,7 - 0,9.
[000276] Os compostos testados no ensaio acima foram atribuídos a uma das duas faixas de atividade, a saber A = <10 μM; B => 10 μM, e aqueles atribuição são relatadas acima. Por via de ilustração, o composto do Exemplo 2 deu um IC50 na faixa ‘A’.
Referências
[000277] Várias publicações são citadas acima para descrever mais completamente e revelar a invenção e o estado da técnica ao qual a invenção pertence. Citações completas são fornecidas para estas referências abaixo. Cada uma destas referências são aqui incorporadas por referência em sua totalidade na presente revelação. Argon Y e Simen BB. 1999 "Grp94, an ER chaperone with protein and peptide binding properties", Semin. Cell Dev. Biol., Vol. 10, págs. 495-505. Bijlmakers M-JJE, Marsh M. 2000 "Hsp90 is essential for the synthesis and subsequent membrane association, but not the maintenance, of the Src-kinase p56lck", Molecular Biology of the Cell, Vol. 11(5), págs. 1585-1595. Bucci M; Roviezzo F; Cicala C; Sessa WC, Cirino G. 2000 "Geldanamycin, an inhibitor of heat shock protein 90 (Hsp90) mediated signal transduction has anti-inflammatory effects and interacts with glucocorticoid receptor in vivo", Brit. J. Pharmacol., Vol 131(1), págs. 13-16. Chen C-F, Chen Y, Dai KD, Chen P-L, Riley DJ e Lee W-H. 1996 "A new member of the hsp90 family of molecular chaperones interacts with the retinoblastoma protein during mitosis and after heat shock", Mol. Cell. Biol., Vol. 16, págs. 4691-4699. Chiosis G, Timaul MN, Lucas B, Munster PN, Zheng FF, Sepp-Lozenzino L e Rosen N. 2001 "A small molecule designed to bind to the adenine nucleotide pocket of HSP90 causes Her2 degradation and the growth arrest and differentiation of breast cancer cells", Chem. Biol., Vol. 8, págs. 289-299. Conroy SE e Latchman DS. 1996 "Do heat shock proteins have a role in breast cancer?", Brit. J. Cancer, Vol. 74, págs. 717-721. Felts SJ, Owen BAL, Nguyen P, Trepel J, Donner DB e Toff DO. 2000 "The HSP90-related protein TRAP1 is a mitochondrial protein with distinct functional properties", J. Biol. Chem., Vol. 5, págs. 3305-3312. Fuller W, Cuthbert AW. 2000 "Post-translational disruption of the delta F508 cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-molecular Chaperone complex with geldanamycin stabilizes delta F508 CFTR in the rabbit reticulocyte lysate", J. Biol. Chem.;Vol 275(48), págs. 37462-37468. Hickey E, Brandon SE, Smale G, Lloyd D e Weber LA. 1999 "Sequence and regulation of a gene encoding a human 89-kilodalton heat shock protein", Mol. Cell. Biol., Vol. 9, págs. 2615-2626. Hoang AT, Huang J, Rudra-Gonguly N, Zheng J, Powell WC, Rabindron SK, Wu C e Roy-Burman P. 2000 "A novel association between the human heat shock transcription factor I (HSF1) and prostate adenocarcinoma, Am. J. Pathol., Vol. 156, págs. 857-864. Hostein I, Robertson D, Di Stefano F, Workman P e Clarke PA. 2001 "Inhibition of signal transduction by the HSP90 inhibitor 17- allylamino-17-demethoxygeldanamycin results in cytostasis and apoptosis", Cancer Res., Vol. 61, págs. 4003-4009. Hur E, Kim H-H, Choi SM, Kim JH, Yim S, Kwon HJ, Choi Y, Kim DK, Lee M-O, Park H. 2002 "Reduction of hypoxia-induced transcription through the repression of hypoxia-inducible factor-1α/aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator DNA binding by the 90-kDa heat-shock protein inhibitor radicicol", Mol. Pharmacol., Vol 62(5), págs. 975-982. Hutter et al, 1996, Circulation, Vol.94, págs. 1408. Jameel A, Skilton RA, Campbell TA, Chander SK, Coombes RC e Luqmani YA. 1992 "Clinical and biological significance of HSP89a in human breast cancer", Int. J. Cancer, Vol. 50, págs. 409415. Jolly C e Morimoto RI. 2000 "Role of the heat shock response and molecular chaperones in oncogenesis and cell death", J. Natl. Cancer Inst., Vol. 92, págs. 1564-1572. Kawanishi K, Shiozaki H, Doki Y, Sakita I, Inoue M, Yano M, Tsujinata T, Shamma A e Monden M. 1999 "Prognostic significance of heat shock proteins 27 and 70 in patients with squamous cell carcinoma of the esophagus", Cancer, Vol. 85, págs. 1649-1657. Kelland LR, Abel G, McKeage MJ, Jones M, Goddard PM, Valenti M, Murrer BA e Harrap KR. 1993 "Preclinical antitumour evaluation of bis-acetalo-amino-dichloro-cyclohexylamine platinum (IV): an orally active platinum drug", Cancer Research, Vol. 53, págs. 2581-2586. Kelland LR, Sharp SY, Rogers PM, Myers TG e Workman P. 1999 "DT-diaphorase expression and tumor cell sensitivity to 17- allylamino, 17-demethoxygeldanamycin, an inhibitor of heat shock protein 90", J. Natl. Cancer Inst., Vol. 91, págs. 1940-1949. Kurebayashi J, Otsuki T, Kurosumi M, Soga S, Akinaga S, Sonoo, H. 2001 "A radicicol derivative, KF58333, inhibits expression of hypoxia-inducible factor-1 α and vascular endothelial growth factor, angiogenesis and growth of human breast cancer xenografts", Jap. J. Cancer Res., Vol 92(12), 1342-1351. Kwon HJ, Yoshida M, Abe K, Horinouchi S e Bepple T. 1992 "Radicicol, an agent inducing the reversal of transformed phentoype of src-transformed fibroblasts, Biosci., Biotechnol., Biochem., Vol. 56, págs. 538-539. Lebeau J, Le Cholony C, Prosperi MT e Goubin G. 1991 "Constitutive overexpression of 89 kDa heat shock protein gene in the HBL100 mammary cell line converted to a tumorigenic phenotype by the EJ/T24 Harvey-ras oncogene", Oncogene, Vol. 6, págs. 11251132. Marcu MG, Chadli A, Bouhouche I, Catelli M e Neckers L. 2000a "The heat shock protein 90 antagonist novobiocin interacts with a previously unrecognized ATP-binding domain in the carboxyl terminus of the chaperone", J. Biol. Chem., Vol. 275, págs. 3718137186. Marcu MG, Schulte TW e Neckers L. 2000b "Novobiocin and related coumarins and depletion of heat shock protein 90- dependent signaling proteins", J. Natl. Cancer Inst., Vol. 92, págs. 242248. Martin KJ, Kritzman BM, Price LM, Koh B, Kwan CP, Zhang X, MacKay A, O’Hare MJ, Kaelin CM, Mutter GL, Pardee AB e Sager R. 2000 "Linking gene expression patterns to therapeutic groups in breast cancer", Cancer Res., Vol. 60, págs. 2232-2238. Neckers L, Schulte TW e Momnaaugh E. 1999 "Geldanamycin as a potential anti-cancer agent: its molecular target and biochemical activity", Invest. New Drugs, Vol. 17, págs. 361-373. Page J, Heath J, Fulton R, Yalkowsky E, Tabibi E, Tomaszewski J, Smith A e Rodman L. 1997 "Comparison of geldanamycin (NSC-122750) and 17-allylaminogeldanamycin (NSC- 330507D) toxicity in rats", Proc. Am. Assoc. Cancer Res., Vol. 38, págs. 308. Panaretou B, Prodromou C, Roe SM, O’Brien R, Ladbury JE, Piper PW e Pearl LH. 1998 "ATP binding and hydrolysis are essential to the function of the HSP90 molecular chaperone in vivo", EMBO J., Vol. 17, págs. 4829-4836. Plumier et al, 1997, Cell. Stress Chap., Vol.2, págs. 162 Pratt WB. 1997 "The role of the HSP90-based chaperone system in signal transduction by nuclear receptors and receptors signalling via MAP kinase", Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., Vol. 37, págs. 297-326. Prodromou C e Pearl LH. 2000a "Structure and in vivo function of HSP90", Curr. Opin. Struct. Biol., Vol. 10, págs. 46-51. Prodromou C, Roe SM, O’Brien R, Ladbury JE, Piper PW e Pearl LH. 1997 "Identification and structural characterization of the ATP/ADP-binding site in the HSP90 molecular chaperone", Cell, Vol. 90, págs. 65-75. Prodromou C, Panaretou B, Chohan S, Siligardi G, O’Brien R, Ladbury JE, Roe SM, Piper PW e Pearl LH. 2000b "The ATPase cycle of HSP90 drives a molecular ‘clamp’ via transient dimerization of the N-terminal domains", EMBO J., Vol. 19, págs. 4383-4392. Rajder et al, 2000, Ann. Neurol., Vol.47, págs. 782. Roe SM, Prodromou C, O’Brien R, Ladbury JE, Piper PW e Pearl LH. 1999 "Structural basis for inhibition of the HSP90 molecular chaperone by the antitumour antibiotics radicicol and geldanamycin", J. Med. Chem., Vol. 42, págs. 260-266. Rutherford SL e Lindquist S. 1998 "HSP90 as a capacitor for morphological evolution. Nature, Vol. 396, págs. 336-342. Schulte TW, Akinaga S, Murakata T, Agatsuma T, Sugimoto S, Nakano H, Lee YS, Simen BB, Argon Y, Felts S, Toft DO, Neckers LM e Sharma SV. 1999 "Interaction of radicicol with members of the heat shock protein 90 family of molecular chaperones", Mol. Endocrinology, Vol. 13, págs. 1435-1448. Schulte TW, Akinaga S, Soga S, Sullivan W, Sensgard B, Toft D e Neckers LM. 1998 "Antibiotic radicicol binds to the N-terminal domain of HSP90 and shares important biologic activities with geldanamcyin", Cell Stress e Chaperones, Vol. 3, págs. 100-108. Schulte TW e Neckers LM. 1998 "The benzoquinone ansamycin 17-allylamino-17-demethoxygeldanamcyin binds to HSP90 and shares important biologic activities with geldanamycin", Cancer Chemother. Pharmacol., Vol. 42, págs. 273-279. Sittler et al, 2001, Hum. Mol. Genet., Vol.10, págs. 1307. Smith DF. 2001 "Chaperones in signal transduction", em: Molecular chaperones in the cell (P Lund, ed.; Oxford University Press, Oxford e NY), págs. 165-178. Smith DF, Whitesell L e Katsanis E. 1998 "Molecular chaperones: Biology and prospects for pharmacological intervention", Pharmacological Reviews, Vol. 50, págs. 493-513. Song HY, Dunbar JD, Zhang YX, Guo D e Donner DB. 1995 "Identification of a protein with homology to hsp90 that binds the type 1 tumour necrosis factor receptor", J. Biol. Chem., Vol. 270, págs. 3574-3581. Stebbins CE, Russo A, Schneider C, Rosen N, Hartl FU e Pavletich NP. 1997 "Crystal structure of an HSP90-geldanamcyin complex: targeting of a protein chaperone by an antitumor agent", Cell, Vol. 89, págs. 239-250. Supko JG, Hickman RL, Grever MR e Malspeis L. 1995 "Preclinical pharmacologic evaluation of geldanamycin as an antitumour agent", Cancer Chemother. Pharmacol., Vol. 36, págs. 305315. Tratzelt et al, 1995, Proc. Nat. Acad. Sci., Vol. 92, págs. 2944. Trost et al, 1998, J. Clin. Invest., Vol.101, págs. 855. Tytell M e Hooper PL. 2001 "Heat shock proteins: new keys to the development of cytoprotective therapies", Emerging Therapeutic Targets, Vol. 5, págs. 267-287. Uehara U, Hori M, Takeuchi T e Umezawa H. 1986 "Phenotypic change from transformed to normal induced by benzoquinoid ansamycins accompanies inactivation of p60src in rat kidney cells infected with Rous sarcoma virus", Mol. Cell. Biol., Vol. 6, págs. 2198-2206. Waxman, Lloyd H. Inhibiting hepatitis C virus processing and replication. (Merck & Co., Inc., USA). Pedido de Pat. Int. do PCT. (2002), WO 0207761. Winklhofer et al, 2001, J. Biol. Chem., Vol. 276, 45160. Whitesell L, Mimnaugh EG, De Costa B, Myers CE e Neckers LM. 1994 "Inhibition of heat shock protein HSP90-pp60v-src heteroprotein complex formation by benzoquinone ansamycins: essential role for stress proteins in oncogenic transformation", Proc. Natl. Acad. Sci. U S A., Vol. 91, págs. 8324-8328. Yorgin et al. 2000 "Effects of geldanamycin, a heat-shock protein 90-binding agent, on T cell function and T cell nonreceptor protein tyrosine kinases", J. Immunol., Vol 164(6), págs. 2915-2923. Young JC, Moarefi I e Hartl FU. 2001 "HSP90: a specialized but essential protein-folding tool", J. Cell. Biol., Vol. 154, págs. 267273. Zhao JF, Nakano H e Sharma S. 1995 "Suppression of RAS and MOS transformation by radicicol", Oncogene, Vol. 11, págs. 161173.

Claims (15)

1. Composto de fórmula (A) ou (B) ou um seu sal farmaceuticamente ou veterinariamente aceitável, cararcterizado por:
Figure img0197
em que R1 é um grupo de fórmula (IB)
Figure img0198
em que em qualquer combinação compatível R representa até quatro substituintes compatíveis, cada um dos quais sendo independentemente selecionados a partir de -OH, -Br, -Cl, -Me, -Et, iPr, iBu, tBu, -CN,
Figure img0199
, e
Figure img0200
; o grupo Q-(Alk2)s-(Z)r-(Alk1)p é selecionado do grupo consistindo em -H,
Figure img0201
, -Ph,
Figure img0202
Figure img0203
R2 é selecionado do grupo consistindo em -Br,
Figure img0204
Figure img0205
Figure img0206
R3 é selecionado do grupo consistindo em -H, -Me, -CF3, pentyl,
Figure img0207
Figure img0208
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é de fórmula (A).
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o grupo Q-(Alk²)s-(Z)r-(Alk¹)p é H.
4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que R1 é 2,4-di- hidroxifenilo, substituído na posição 5 por metila, etila, isopropila, isobutilo, terc-butilo, cloro, ou bromo.
5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R2 é selecionado do grupo consistindo em
Figure img0209
Figure img0210
Figure img0211
6. Composto de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que R2 é selecionado do grupo consistindo em
Figure img0212
Figure img0213
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que R2 é selecionado do grupo consistindo em
Figure img0214
e
Figure img0215
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R3 é selecionado do grupo consistindo em
Figure img0216
9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de ser selecionado a partir de: Etilamida do ácido 5- (2,4-di-hidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4- morfolin-4- ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (2,4-di-hidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4- piperidin-1-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5- (2,4-di- hidroxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (2,4-di-hidroxi-5-isopropil-fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-1-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (2,4-di-hidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4- etilaminometil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (2,4-di-hidroxi-5-isopropil-fenil) -4- [4- (isopropilamino-metil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 4- (4-ciclo-hexilaminometil-fenil) -5- (2,4- di-hidroxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 4- [4- (terc-butilamino-metil) -fenil] -5- (2,4-di-hidroxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (2,4-di-hidroxi-5-isopropil-fenil) -4- {4 - [(2-metoxi-etilamino) -metil] -fenil} -isoxazol-3-carboxílico Isopropilamida do ácido 5- (2,4-di-hidroxi-5-isopropil-fenil) - 4- (4-morfolin-4- ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Isopropilamida do ácido 5- (2,4-di-hidroxi-5-isopropil-fenil) - 4- [4- (4-metil-piperazin-1-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (5-terc-butil-2,4-di-hidroxi-fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-1-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (5-terc-butil-2,4-di-hidroxi-fenil) -4- (4- piperidin-1-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (2,4-di-hidroxi-5-isobutil-fenil) -4- (4- piperidin-1-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (5-terc-butil-2,4-di-hidroxi-fenil) -4- (4- morfolin-4- ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (5-terc-butil-2,4-di-hidroxi-fenil) -4- (4- dietilaminometil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 3- (5-cloro-2,4-di-hidroxi-fenil) -4- (4- morfolin-4- ilmetil-fenil) -isoxazol-5-carboxílico Etilamida do ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5- (4,6-di- hidroxi-2'-metil-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5- (4'-fluoro- 4,6-di-hidroxi-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5- (4,6-di- hidroxi-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (2'-fluoro-4,6-di-hidroxi-bifenil-3-il) -4(4- pirrolidin-1-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (4,6-di-hidroxi-bifenil-3-il) -4- (4- morfolin-4- ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (2,4-di-hidroxi-5-fenetil-fenil) -4- (4- morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Isopropilamida do ácido 5- (5-cloro-2,4-di-hidroxi-fenil) -4- (4-piperidin-1-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5- (5-etil-2,4- di-hidroxi-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (5-etil-2,4-di-hidroxi-fenil) -4- [4- (4- metil-piperazin-1-ilmetil) -fenil] isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (5-etil-2,4-di-hidroxi-fenil) -4- (4- morfolin-4- ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (5-cloro-2,4-di-hidroxi-fenil) -4- (4- dietilaminornetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (5-cloro-2,4-di-hidroxi-fenil) -4- [4- (4- metil-piperazin-1-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico Etilamida do ácido 5- (5-cloro-2,4-di-hidroxi-fenil) -4- (4- morfolin-4- ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico ou seus sais farmaceuticamente ou veterinariamente aceitaveis.
10. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é etilamida do ácido 5- (2,4-di-hidroxi-5- isopropilfenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico, ou um seu sal farmaceuticamente ou veterinariamente aceitavel.
11. Composto conforme reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de ser para uso em medicina humana ou veterinária.
12. Composição farmacêutica caracterizado pelo fato de compreender um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, junto com um veículo farmaceuticamente aceitável.
13. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de estar na forma de uma solução ou suspensão do composto num veículo estéril, fisiologicamente aceitável.
14. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de estar na forma de uma solução ou suspensão do composto em solução salina aquosa estéril.
15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento de câncer.
BRPI0407403-3A 2003-02-11 2004-02-09 Compostos de isoxazol e composição farmacêutica BRPI0407403B1 (pt)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB0303105.1 2003-02-11
GB0303105A GB0303105D0 (en) 2003-02-11 2003-02-11 Isoxazole compounds
GBGB0306560.4A GB0306560D0 (en) 2003-03-21 2003-03-21 Isoxazole compounds
GB0306560.4 2003-03-21
GB0313751.0 2003-06-13
GB0313751A GB0313751D0 (en) 2003-06-13 2003-06-13 Isoxazole compounds
PCT/GB2004/000506 WO2004072051A1 (en) 2003-02-11 2004-02-09 Isoxazole compounds as inhibitors of heat shock proteins

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BRPI0407403A BRPI0407403A (pt) 2006-10-03
BRPI0407403B1 true BRPI0407403B1 (pt) 2022-07-19

Family

ID=32872455

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0407403-3A BRPI0407403B1 (pt) 2003-02-11 2004-02-09 Compostos de isoxazol e composição farmacêutica

Country Status (19)

Country Link
US (6) US7705027B2 (pt)
EP (1) EP1611112B1 (pt)
JP (1) JP4921162B2 (pt)
KR (1) KR101166749B1 (pt)
CN (1) CN1771235B (pt)
AU (1) AU2004210779B2 (pt)
BR (1) BRPI0407403B1 (pt)
CA (1) CA2515726C (pt)
CY (1) CY1113761T1 (pt)
DK (1) DK1611112T3 (pt)
EA (1) EA009919B1 (pt)
ES (1) ES2393483T3 (pt)
HK (1) HK1091831A1 (pt)
MX (1) MXPA05008335A (pt)
NO (1) NO335001B1 (pt)
NZ (1) NZ541479A (pt)
PT (1) PT1611112E (pt)
SI (1) SI1611112T1 (pt)
WO (1) WO2004072051A1 (pt)

Families Citing this family (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI252847B (en) 2001-07-10 2006-04-11 Synta Pharmaceuticals Corp Synthesis of taxol enhancers
TWI297335B (en) 2001-07-10 2008-06-01 Synta Pharmaceuticals Corp Taxol enhancer compounds
TWI332943B (en) 2001-07-10 2010-11-11 Synta Pharmaceuticals Corp Taxol enhancer compounds
TWI330079B (en) 2003-01-15 2010-09-11 Synta Pharmaceuticals Corp Treatment for cancers
JP4921162B2 (ja) * 2003-02-11 2012-04-25 ヴァーナリス（ケンブリッジ）リミテッド 熱ショックタンパク質の阻害剤としてのイソオキサゾール化合物類
GB0315111D0 (en) * 2003-06-27 2003-07-30 Cancer Rec Tech Ltd Substituted 5-membered ring compounds and their use
EP1704856A4 (en) 2003-12-26 2009-08-19 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd PROTEIN INHIBITOR OF THE HSP90 FAMILY
MXPA06013705A (es) 2004-05-28 2007-02-13 Unigen Pharmaceuticals Inc Diarilalcanos como potentes inhibidores de enzimas binucleares.
GB0412769D0 (en) 2004-06-08 2004-07-07 Novartis Ag Organic compounds
KR101313027B1 (ko) 2004-06-23 2013-10-02 신타 파마슈티칼스 코프. 암 치료용 비스(티오-히드라지드 아미드) 염
PT1792927E (pt) 2004-09-22 2013-05-15 Nippon Kayaku Kk Novo copolímero em bloco, preparação de micelas e agente anticancerígeno contendo o mesmo como ingrediente activo
JPWO2006051808A1 (ja) * 2004-11-09 2008-05-29 協和醗酵工業株式会社 Ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤
RS52642B (en) 2004-11-18 2013-06-28 Synta Pharmaceuticals Corp. TRIAZOLE COMPOUNDS MODULATING HSP90 ACTIVITY
JP5123671B2 (ja) * 2005-02-17 2013-01-23 シンタ ファーマシューティカルズ コーポレーション 増殖性疾患の治療のための化合物
DE102005007304A1 (de) * 2005-02-17 2006-08-24 Merck Patent Gmbh Triazolderivate
FR2882361A1 (fr) * 2005-02-22 2006-08-25 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de 3-aryl-1,2-benzisoxazole, compositions les contenant et leur utilisation
JP4956737B2 (ja) * 2005-02-23 2012-06-20 国立大学法人名古屋大学 抗ポリグルタミン病剤
US8399464B2 (en) 2005-03-09 2013-03-19 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha HSP90 inhibitor
CN1834095B (zh) * 2005-03-18 2011-04-20 中国科学院上海药物研究所 一类非核苷类抗病毒抑制剂及其制备方法和用途
JP2008137894A (ja) * 2005-03-22 2008-06-19 Nippon Kayaku Co Ltd 新規なアセチレン誘導体
FR2884252B1 (fr) 2005-04-08 2007-05-18 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives d'isoindoles, compositions les contenant, leur preparation et leurs utilisations pharmaceutiques notamment en tant qu'inhibiteurs d'activites de la proteine chaperone hsp90
DK1877379T3 (da) * 2005-04-13 2013-04-08 Astex Therapeutics Ltd Hydroxybenzamidderivater og anvendelse heraf som inhibitorer af hsp90
JP2008536875A (ja) 2005-04-15 2008-09-11 シンタ ファーマシューティカルズ コーポレーション ビス（チオヒドラジド）アミド化合物による併用癌療法
FR2885904B1 (fr) 2005-05-19 2007-07-06 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives du fluorene, compositions les contenant et utilisation
WO2006126751A1 (en) * 2005-05-25 2006-11-30 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology New diaryl-isoxazole derivatives, and pharmaceutical compositions containing the same for the prevention and the treatment of cancers
CA2618628C (en) 2005-08-18 2014-11-18 Synta Pharmaceuticals Corp. Triazole compounds that modulate hsp90 activity
GB0603880D0 (en) * 2006-02-27 2006-04-05 Novartis Ag Organic compounds
US7754725B2 (en) 2006-03-01 2010-07-13 Astex Therapeutics Ltd. Dihydroxyphenyl isoindolymethanones
JP5249016B2 (ja) 2006-03-28 2013-07-31 日本化薬株式会社 タキサン類の高分子結合体
US20070259820A1 (en) * 2006-05-03 2007-11-08 The Regents Of The University Of Michigan Methods and reagents for activating heat shock protein 70
EP2019122A4 (en) 2006-05-18 2009-07-01 Nippon Kayaku Kk POLYMER CONJUGATE OF PODOPHYL LOTOXIN
TW201422598A (zh) 2006-08-21 2014-06-16 Synta Pharmaceuticals Corp 用於治療增生性疾病的化合物
AU2007290490B2 (en) 2006-08-31 2011-09-08 Synta Pharmaceuticals Corp. Combination with bis(thiohydrazide amides) for treating cancer
CA2662554A1 (en) * 2006-09-14 2008-03-20 Synta Pharmaceuticals Corp. Compounds for the treatment of angiogenesis
US20090239782A1 (en) * 2006-10-03 2009-09-24 Masaharu Nakamura High-molecular weight conjugate of resorcinol derivatives
GB0620259D0 (en) 2006-10-12 2006-11-22 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
WO2008044029A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
JP5410285B2 (ja) 2006-10-12 2014-02-05 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
JP5528806B2 (ja) 2006-10-12 2014-06-25 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 複合薬剤
JP5528807B2 (ja) 2006-10-12 2014-06-25 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 複合薬剤
JP5518478B2 (ja) 2006-10-12 2014-06-11 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
EP2080779B1 (en) 2006-11-06 2016-05-18 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymeric derivative of nucleic acid metabolic antagonist
WO2008056654A1 (en) 2006-11-08 2008-05-15 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymeric derivative of nucleic acid metabolic antagonist
US7799954B2 (en) 2006-11-17 2010-09-21 Abraxis Bioscience, Llc Dicarbonyl derivatives and methods of use
UA101950C2 (ru) * 2007-03-01 2013-05-27 Новартис Аг Соль присоединения с кислотами, гидрат и полиморфная форма этиламида 5-(2,4-дигидрокси-5-изопропилфенил)-4-(4-морфолин-4-илметилфенил)-изоксазол-3-карбоновой кислоты и композиция, которая содержит эти формы (варианты)
BRPI0814532A2 (pt) 2007-07-25 2015-01-27 Hoffmann La Roche Compostos, processo para a sua manufatura, composições farmacêuticas que os compreendem, método para o tratamento e/ou prevenção de enfermidades que estão associadas com a modulação dos receptores de h3, e uso desses compostos para a preparação de medicamentos.
ES2748599T3 (es) 2007-08-27 2020-03-17 Dart Neuroscience Cayman Ltd Compuestos terapéuticos de isoxazol
WO2009026658A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 The University Of Sydney Ppar agonists
WO2009041570A1 (ja) 2007-09-28 2009-04-02 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha ステロイド類の高分子結合体
CA2700893A1 (en) 2007-10-12 2009-04-16 Arqule, Inc. Substituted tetrazole compounds and uses thereof
TW200922595A (en) * 2007-10-12 2009-06-01 Novartis Ag Organic compounds
CN101918389A (zh) * 2007-11-02 2010-12-15 梅特希尔基因公司 组蛋白脱乙酰酶抑制剂
GB0722680D0 (en) * 2007-11-19 2007-12-27 Topotarget As Therapeutic compounds and their use
JP5687899B2 (ja) 2008-03-18 2015-03-25 日本化薬株式会社 生理活性物質の高分子結合体
GB0806527D0 (en) 2008-04-11 2008-05-14 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
LT5623B (lt) * 2008-04-30 2010-01-25 Biotechnologijos Institutas, , 5-aril-4-(5-pakeistieji 2,4-dihidroksifenil)-1,2,3-tiadiazolai kaip hsp90 šaperono slopikliai ir tarpiniai junginiai jiems gauti
EP2284209B1 (en) 2008-05-08 2016-08-31 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer conjugate of folic acid or folic acid derivative
CN102098918A (zh) * 2008-05-13 2011-06-15 帕纳德制药公司 用于治疗癌症和神经退行性疾病的生物活性化合物
TWI450898B (zh) * 2008-07-04 2014-09-01 Sigma Tau Res Switzerland Sa 具有抗腫瘤活性之芳基異唑化合物
KR101988329B1 (ko) 2008-07-21 2019-06-12 유니젠, 인크. 일련의 피부-화이트닝(라이트닝) 화합물
WO2010060939A2 (en) * 2008-11-28 2010-06-03 Novartis Ag Combination of hsp90 and herceptin inhibitors
EP2370076B1 (en) * 2008-11-28 2017-01-04 Novartis AG Pharmaceutical combination comprising a Hsp 90 inhibitor and a mTOR inhibitor
US8993556B2 (en) 2009-04-21 2015-03-31 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Resorcinol derivatives as HSP90 inhibitors
WO2010131675A1 (ja) 2009-05-15 2010-11-18 日本化薬株式会社 水酸基を有する生理活性物質の高分子結合体
EP2471918A4 (en) 2009-09-29 2013-06-05 Takeda Pharmaceutical SCREENING PROCESS
PL2488873T3 (pl) 2009-10-16 2016-01-29 Novartis Ag Biomarkery odpowiedzi farmakodynamicznej wobec guza
KR101392086B1 (ko) * 2010-02-17 2014-05-07 일동제약주식회사 신규 5각 헤테로 고리 유도체 및 그 제조방법
WO2011133520A1 (en) 2010-04-19 2011-10-27 Synta Pharmaceuticals Corp. Cancer therapy using a combination of a hsp90 inhibitory compounds and a egfr inhibitor
CA2816997A1 (en) 2010-11-17 2012-05-24 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Novel polymer derivative of cytidine metabolic antagonist
KR101976642B1 (ko) 2011-03-24 2019-05-09 유니젠, 인크. 디아릴프로판의 제조를 위한 화합물 및 방법
WO2013015661A2 (en) * 2011-07-28 2013-01-31 Ildong Pharm Co.,Ltd. Novel prodrugs of 5-(2,4-dihydroxy-5-isopropylphenyl)-n-ethyl-4-(5-methyl1-1,2,4-oxadiazol-3-yl)isoxazole-3-carboxamide
CN102351655A (zh) * 2011-08-18 2012-02-15 杭州澳赛诺化工有限公司 一种4-异丙基间苯二酚的合成方法
PT2754682T (pt) 2011-09-11 2017-08-29 Nippon Kayaku Kk Método para o fabrico de copolímero de bloco
AU2012322976B2 (en) 2011-10-14 2016-05-12 Novartis Ag 2 - carboxamide cycloamino urea derivatives in combination with Hsp90 inhibitors for the treatment of proliferative diseases
CN103086994A (zh) * 2011-10-31 2013-05-08 上海壹志医药科技有限公司 异噁唑衍生物的盐
WO2013067162A1 (en) 2011-11-02 2013-05-10 Synta Pharmaceuticals Corp. Cancer therapy using a combination of hsp90 inhibitors with topoisomerase i inhibitors
CA2853806C (en) 2011-11-02 2020-07-14 Synta Pharmaceuticals Corp. Combination therapy of hsp90 inhibitors with platinum-containing agents
CA2854188A1 (en) 2011-11-14 2013-05-23 Synta Pharmaceuticals Corp. Combination therapy of hsp90 inhibitors with braf inhibitors
MX2015005798A (es) 2012-11-07 2015-09-23 Novartis Ag Terapia de combinacion.
WO2014074778A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Jacobus Pharmaceutical Company, Inc. Aryl derivatives and uses thereof
WO2014074775A1 (en) * 2012-11-09 2014-05-15 Jacobus Pharmaceutical Company, Inc. Heteroaryl derivatives and uses thereof
BR112015021846A2 (pt) * 2013-03-15 2017-07-18 Novartis Ag biomarcador
MX2015017532A (es) * 2013-06-26 2016-10-26 Proteostasis Therapeutics Inc Métodos para modular la actividad del regulador de transmembrana de fibrosis quística.
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
MX2016011993A (es) 2014-03-14 2016-12-09 Novartis Ag Moleculas de anticuerpo que se unen a lag-3 y usos de las mismas.
WO2015196071A1 (en) * 2014-06-19 2015-12-23 Proteostasis Therapeutics, Inc. Compounds, compositions and methods of increasing cftr activity
BR112017006425B8 (pt) 2014-10-01 2023-05-16 Daiichi Sankyo Co Ltd Compostos derivados de isoxazol, seus usos, inibidores de isocitrato desidrogenase 1 mutante e da produção de d-2 hidroxiglutamato, agente antitumoral e composição farmacêutica compreendendo os mesmos
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
EP3206711B1 (en) 2014-10-14 2023-05-31 Novartis AG Antibody molecules to pd-l1 and uses thereof
EP3233918A1 (en) 2014-12-19 2017-10-25 Novartis AG Combination therapies
CN104725329B (zh) * 2015-01-13 2017-01-18 陕西科技大学 一种具有抗肿瘤活性的异恶唑羧酸类化合物及其合成方法
RU2697703C2 (ru) * 2015-01-22 2019-08-19 Чиа Тай Тяньцин Фармасьютикал Груп Ко., Лтд. Производное резорцина в качестве ингибитора hsp90
KR20170129802A (ko) 2015-03-10 2017-11-27 아두로 바이오테크, 인코포레이티드 ＂인터페론 유전자의 자극인자＂-의존적 신호전달을 활성화하는 조성물 및 방법
CN106349180B (zh) * 2015-07-14 2020-05-19 上海翰森生物医药科技有限公司 4,5-二苯基异噁唑衍生物及其制备方法和应用
EP3316902A1 (en) 2015-07-29 2018-05-09 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
EP4378957A3 (en) 2015-07-29 2024-08-07 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to pd-1
DK3317301T3 (da) 2015-07-29 2021-06-28 Immutep Sas Kombinationsterapier omfattende antistofmolekyler mod lag-3
AU2016348388B2 (en) 2015-11-03 2023-11-30 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding PD-1 and their uses
MX2018007423A (es) 2015-12-17 2018-11-09 Novartis Ag Moleculas de anticuerpo que se unen a pd-1 y usos de las mismas.
CN107540624B (zh) * 2016-06-29 2020-06-16 广州市恒诺康医药科技有限公司 热休克蛋白抑制剂及其制备方法和应用
CN106146466A (zh) * 2016-06-30 2016-11-23 珠海赛隆药业股份有限公司（长沙）医药研发中心 富马酸沃诺拉赞中间体、其制备方法和制备富马酸沃诺拉赞的方法
WO2018009466A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Aduro Biotech, Inc. Locked nucleic acid cyclic dinucleotide compounds and uses thereof
CN109641858B (zh) * 2016-07-21 2021-06-25 正大天晴药业集团股份有限公司 间苯二酚类衍生物的结晶、盐及其制备方法
UY37695A (es) 2017-04-28 2018-11-30 Novartis Ag Compuesto dinucleótido cíclico bis 2’-5’-rr-(3’f-a)(3’f-a) y usos del mismo
CN111217762B (zh) * 2018-11-23 2021-08-20 华中师范大学 多卤代5-(2-羟基苯基)异噁唑类化合物及其制备方法和应用
US20220362276A1 (en) * 2019-05-13 2022-11-17 The Trustees Of Princeton University Small Molecule Inhibitors of Viral Replication
CN110283080A (zh) * 2019-07-05 2019-09-27 山西大学 一种含氟的二苯甲酮衍生物及其制备方法和应用
WO2021152113A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Bayer Aktiengesellschaft Substituted 2,3-benzodiazepines derivatives
WO2022075780A1 (ko) * 2020-10-07 2022-04-14 광주과학기술원 과민성 방광의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
CN115160250B (zh) * 2021-04-02 2024-06-04 沈阳药科大学 4,6-联苯二酚类衍生物及其用途
US11324737B1 (en) * 2021-05-25 2022-05-10 Louis Habash Modulating expression level of a gene encoding a heat shock protein by treating a human subject with a nitroxide
US11729925B2 (en) 2021-06-15 2023-08-15 Erico International Corporation Mounting bracket with angled mounting openings for electrical boxes
CN114751870B (zh) * 2022-02-28 2023-10-20 贵州医科大学 一种2-(异噁唑-5-基)苯基-3,4-二羟基苯甲酸酯及其衍生物及合成方法和应用

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0418667B1 (de) * 1989-09-22 1995-08-16 BASF Aktiengesellschaft Carbonsäureamide
EP0633254A1 (en) * 1991-05-01 1995-01-11 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Novel isoxazole derivative and salt thereof
WO1994024095A1 (en) * 1993-04-16 1994-10-27 Abbott Laboratories Immunosuppressive agents
NZ506515A (en) * 1996-10-15 2002-05-31 G COX-2 inhibitor (4-[5-(4-chlorophenyl)-3(difluoromethyl)-1H-pyrazol-1-yl]benzenesulfonamide) for treating neoplasia
US6187797B1 (en) * 1996-12-23 2001-02-13 Dupont Pharmaceuticals Company Phenyl-isoxazoles as factor XA Inhibitors
AU6645998A (en) * 1996-12-23 1998-07-17 Du Pont Pharmaceuticals Company Oxygen or sulfur containing heteroaromatics as factor xa inhibitors
ATE315033T1 (de) * 1998-08-07 2006-02-15 Chiron Corp Subtituierte isoxazole derivate als estrogen rezeptor modulatore
JP2002524463A (ja) * 1998-09-09 2002-08-06 メタバシス・セラピューティクス・インコーポレイテッド フルクトース−１，６−ビスホスファターゼの新規な芳香族インヒビター
CN1714866A (zh) * 1998-12-24 2006-01-04 症变治疗公司 治疗糖尿病的fbp酶抑制剂与胰岛素致敏剂的组合
WO2001012621A1 (en) * 1999-08-13 2001-02-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF c-JUN N-TERMINAL KINASES (JNK) AND OTHER PROTEIN KINASES
SK8892002A3 (en) * 1999-12-22 2003-04-01 Metabasis Therapeutics Inc Novel bisamidate phosphonate prodrugs, process for their preparation and use thereof
US6673818B2 (en) * 2001-04-20 2004-01-06 Pharmacia Corporation Fluoro-substituted benzenesulfonyl compounds for the treatment of inflammation
JP2002363079A (ja) * 2001-05-31 2002-12-18 National Cancer Center-Japan モフェゾラクを有効成分とする、消化管ポリープおよび／または消化管がんの予防または治療のための薬剤
JP4399265B2 (ja) * 2001-12-21 2010-01-13 ヴァーナリス（ケンブリッジ）リミテッド ３，４−ジアリールピラゾール、および癌の治療におけるそれらの使用
JP4921162B2 (ja) * 2003-02-11 2012-04-25 ヴァーナリス（ケンブリッジ）リミテッド 熱ショックタンパク質の阻害剤としてのイソオキサゾール化合物類
US20110201587A1 (en) * 2010-02-16 2011-08-18 Bio Holding, Inc. Hsp90 inhibitors and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
EP1611112B1 (en) 2012-08-22
NO20054195L (no) 2005-11-09
US20190358241A1 (en) 2019-11-28
ES2393483T3 (es) 2012-12-21
US8450310B2 (en) 2013-05-28
AU2004210779A1 (en) 2004-08-26
NZ541479A (en) 2008-11-28
CA2515726C (en) 2012-07-10
JP4921162B2 (ja) 2012-04-25
SI1611112T1 (sl) 2012-12-31
US11234987B2 (en) 2022-02-01
US9718793B2 (en) 2017-08-01
HK1091831A1 (en) 2007-01-26
JP2006517572A (ja) 2006-07-27
DK1611112T3 (da) 2012-11-19
EA009919B1 (ru) 2008-04-28
US7705027B2 (en) 2010-04-27
US20170326152A1 (en) 2017-11-16
BRPI0407403A (pt) 2006-10-03
MXPA05008335A (es) 2006-05-04
US20100179138A1 (en) 2010-07-15
US20060241106A1 (en) 2006-10-26
KR20050103925A (ko) 2005-11-01
US10413550B2 (en) 2019-09-17
WO2004072051A1 (en) 2004-08-26
US20130289026A1 (en) 2013-10-31
EA200501272A1 (ru) 2006-02-24
EP1611112A1 (en) 2006-01-04
CN1771235A (zh) 2006-05-10
NO20054195D0 (no) 2005-09-09
PT1611112E (pt) 2012-11-02
NO335001B1 (no) 2014-08-18
CN1771235B (zh) 2010-04-28
US8507480B2 (en) 2013-08-13
KR101166749B1 (ko) 2012-07-27
CA2515726A1 (en) 2004-08-26
AU2004210779B2 (en) 2010-06-10
CY1113761T1 (el) 2016-07-27
US20120252797A1 (en) 2012-10-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11234987B2 (en) Isoxazole compounds as inhibitors of heat shock proteins
US7612201B2 (en) Pyrazole compounds
EP1567151B1 (en) 3-(2-hydroxy-phenyl)-1h-pyrazole-4-carboxylic acid amide derivatives as hsp90 inhibitors for the treatment of cancer
ES2281186T3 (es) Pirazoles como moduladores de receptores de estrogenos.
JP4891904B2 (ja) ピリミドチオフェン化合物
BRPI0708779A2 (pt) derivados de pirrolopirimidina utilizados como inibidores de hsp90
WO2006090094A1 (en) Pyrimidothiophene compounds for use as hsp90 inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B25G Requested change of headquarter approved

Owner name: CANCER RESEARCH TECHNOLOGY LTD (GB) , THE INSTITUT

B25A Requested transfer of rights approved

Owner name: CANCER RESEARCH TECHNOLOGY LTD (GB) , THE INSTITUT

B07D Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette]
B07E Notification of approval relating to section 229 industrial property law [chapter 7.5 patent gazette]
B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B09B Patent application refused [chapter 9.2 patent gazette]
B12B Appeal against refusal [chapter 12.2 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 09/02/2004, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. PATENTE CONCEDIDA CONFORME ADI 5.529/DF, QUE DETERMINA A ALTERACAO DO PRAZO DE CONCESSAO.