BR112013033175A2

BR112013033175A2 - sequência de peptídeo, subsequência, composição, composição farmacêutica, molécula de ácido nucleico, vetor, célula transformada ou hospedeira, método de tratamento de um indivíduo, método para melhorar o metabolismo da glicose em um indivíduo e método para identificar uma sequência peptédica

Info

Publication number: BR112013033175A2
Application number: BR112013033175-5A
Authority: BR
Inventors: Lei Ling; Darrin A. Lindhout
Original assignee: Ngm Biopharmaceuticals, Inc.
Priority date: 2011-07-01
Filing date: 2012-06-29
Publication date: 2020-10-20
Also published as: WO2013006486A9; HK1198297A1; US20180355007A1; EP3597666A2; IL274469A; NZ617746A; US20220088140A1; MX349869B; US20160168215A1; RU2014103487A; HUE045629T2; ZA201308421B; JP6254524B2; CN113683705A; MY163674A; PE20141727A1; US20150284442A1; BR112013033175B1; CN103649127A; US9580483B2

Abstract

SEQUÊNCIA DE PEPTÍDEO, SUBSEQUÊNCIA, COMPOSIÇÃO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO, VETOR, CÉLULA TRANSFORMADA OU HOSPEDEIRA, MÉTODO DE TRATAMENTO DE UM INDIVÍDUO, MÉTODO PARA MELHORAR O METABOLISMO DA GLICOSE EM UM INDIVÍDUO E MÉTODO PARA IDENTIFICAR UMA SEQUÊNCIA PEPTÍDICA A invenção se refere a variantes e fusões do fator de crescimento de fibroblastos 19 (FGF19), variantes e fusões do fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF21), fusões do fator de crescimento de fibroblastos 19 (FGF19) e/ou fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF21), e variantes ou fusões do fator de crescimento de fibroblastos 19 (FGF19) e/ou fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF21) de proteínas e sequências peptídicas (peptidornirnéticos) com uma ou mais atividades, tais corno atividade de hipoglicerniante, e os métodos e utilização para o tratamento da hiperglicemia e outras desordens.

Description

SEQUÊNCIA DE PEPTÍDEO, SUBSEQUÊNCIA, COMPOSIÇÃO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO, VETOR, CÉLULA TRANSFORMADA OU HOSPEDEIRA, MÉTODO DE TRATAMENTO DE UM INDIVÍDUO, MÉTODO PARA MELHORAR O METABOLISMO DA GLICOSE EM UM

INDIVÍDUO E MÉTODO PARA IDENTIFICAR UMA SEQUÊNCIA PEPTÍDICA Pedidos Relacionados Este pedido reivindica o benefício de prioridade do pedido n° 61/504,128, depositado em 1 de julho de 2011 e pedido n° 61/515,126, depositado em 4 de agosto de 2011, ambos os 0 5 pedidos estão aqui expressamente incorporados por referência na sua totalidade.

Campo da Invenção A invenção refere-se a variantes de proteínas do fator de crescimento de fibroblastos 19 (FGF19) e sequências de 10 peptídeo (e peptidomirnéticos) e f'usões do fator de crescimento de fibroblastos 19 (FGF19) e/ou proteínas do fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF21) e sequências de peptídeo (e peptidomírriéticos), e variantes de fusões do fator e de crescimento de fibroblastos 19 (FGF19) e/ou proteínas do 15 fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF21) e sequências de peptídeo (e peptidomiméticos) que possuern atividade de redução de glicose e os métodos e usos no tratamento da hiperglícemia e outras desordens.

Introdução 20 A diabetes mellitus é uma doença metãbólica debilitante causada pela ausência de produção de insulina (tipo 1) ou resistência à insulina ou produção insuficíente de ínsulina (tipo 2) a partir de células-j3 pancreáticas. célu1as-j3 são

2/116 , / í células endócrinas especializadas que fabricam e estocam insulina para a liberação após uma refeição. A insulina é um hormônio que facilita a transferência de glicose do sangue para os tecidos onde é necessária. Pacientes com diabetes 5 devem monitorar frequentemente os níveis de glicose no sangue e muitos requerem diariamente múltiplas injeções de insulina para sobreviver. No entanto, estes doentes raramente atingem os níveis ideais de glicose por injeção de ínsulina (Turner, R.C. et al. JAMA 281:2005 (1999)). Além disso, a elevação 10 prolongada de níveis de insulina pode resultar em efeitos 0 secundários prejudiciais, tais como o choque hiperglicêmico e dessensibilização da resposta do organismo à insulina.

Consequentemente, os pacientes diabéticos ainda desenvolvem complicações de longo prazo, tais como doenças 15 cardiovasculares, doença renal, cegueira, danos nos nervos e desordens de cura de cicatrização (UK Prospective Diabetes Study (UKPDS) Group, Lancet 352:837 (1998)).

Cirurgia bariátrica tem sido proposta como um potencial tra'tamento para diabetes. Postulou-se que as alterações na 20 secreção do horrnônio do intestino após a cirurgia são responsáveis pela resolução de condições diabét-icas. O e mecanismo molecular subjacente tem ainda que ser elucidado, embora o peptídeo similar ao glucagon tipo 1 (GLP-l) tenha sido considerado como um possível candidato (Rubino, F. 25 Diabetes Care 32 Suppl 2:S368 (2009)). FGF19 é altamente expresso no intestino delgado distal e- sobre expressão transgênica de FGF19 melhora a homeostase da glicose (Tomlinson, E. Endocrinology 143(5):1741-7 (2002)). Os níveis séricos de FGF19 em seres humanos são elevados após a cirurgia 30 gástrica de bypass. Expressão e secreção aumentada de FGF19 poderiam explicar, pelo rnenos parcialmente, a remissão do 'r.

diabetes experimentado após a cirurgia.

3/116 - Conseqijentemente, existe uma necessidade de tratamentos alternativos de condições de hiperglicemia tais como a diabetes, pré-diabetes, resistência à insulina, hiperinsulinemia, intolerância à glicose ou síndrome 5 metabõlica e outras desordens e doenças associadas com níveis elevados de glicose eui seres humanos. A presente invenção satisfaz esta necessidade e proporciona também vantagens relacionadas.

Sumário da Invenção 010 a invenção é baseada, em parte, ern varíantes de sequências de peptídeos do fator de crescimento de fibroblastos 19 (FGFI9), fusões do fator de crescirnento de fibroblastos 19 (FGF19) e/ou sequências de peptídeos do fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF21) e as variantes de fusões (quimeras) do 15 fator de crescimento de fibroblastos 19 (FGF19) e/ou sequências de peptídeos do fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF21) tendo uma ou mais atividades, tais como atividade de redução de glicose. Essas variantes e fusões (quimeras) de sequências de peptídeos FGF19 e/ou FGF21 incluem 20 sequências que não aumentam ou induzem formação de carcinoma e hepatocelular (HCC) ou HCC , tumorigênese. Tais variantes e fusões (quimeras) de sequências de peptídeos de FGE'19 e/ou FGF21 tambérn incluem sequências que não induzem urna elevação substancial ou aumentam em perfil lipídico.

25 Em uma forma de realizaçáo, uma sequência de peptídeo quimérico inclui ou consiste eín: uma região N-terminal tendo pelo menos sete resíduos de aminoácidos, a região N-terminal possuindo uma primeira posição de aminoácido e uma última posição do aminoácido, em que a região N-terminal tem uma 30 sequência DSSPL ou DASPH, e uma região C-terminal que tern uma porção de FGF19, onde a região C-terminal tem uma primeira posição de aminoácído e uma última posição do arninoácido, em que a região C-terminal inciui os resíduos de arninoácido 16-29 de FGF19 (WGDPIRLRHLYTSG), e em que o resíduo W corresponde.à primeira posição de aminoácidos da região C-terminal. / 5 Em uma outra forma de realização, urna sequência de peptídeo quirríérico inclui ou consiste em: uma região N-terminal que tem uma porção de FGF21, onde a região N-teríninal tem uma priíneira posição de aminoácido e uma última posição do aminoácido, em que a região N-terminal tem uma sequência GQV e, em que o (!3 10 resíduo V corresponde à última posição de aminoácidos da região N-terminal, e uma região C-terminal incluindo uma porção de FGF19, a região C-terrninal tendo uma primeira posição de aminoácido e uma última posição do aminoácido, em que a região C-terminal inclui os resíduos de aminoácidos 21 a 15 29 de FGF19 (RLRHLYTSG), .e ern que o resíduo R corresporide à primeira posição da região C-terminal.

Em uma outra forma de realização, uma sequência de peptídeo químérico inclui ou consiste entre qualqaer: uma região N- terminal compreendendo uma porção de SEQ ID NO:lOO [FGF21], a 20 região N-terrninal que compreende uma primeira posição de e aminoácido e uma última posição de aminoácido, em que a região N-terrninal compreende, pelo menos, 5 (ou mais) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO:lOO [FGF21], incluindo os resíduos de aminoácidos GQV, e em que o resíduo V corresponde à última 25 posição de aminoácidos da região N-terminal, e uma região C- terminal que compreende uma porçào de SEQ ID NO:99 [FGF19], a região C-terminal que tem uma primeira posição de aminoácido e , uma última posição do aminoácido, ern que a região C-terminal , compreende resíduos de aminoácidos 21 a 29 de SEQ ID NO:99 30 [FGF19], RLRHLYTSG, e em que o resíduo R corresp-onde à primeira posição da região C-terrninal. Em determinaãs aspectos, a região N-terminal compreende pelo menos 6 amínoácido's eontíguo.s (.ou m-ais, por exemplo, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 1.5, 16, 17, 18, 19, 20, 20 a 25, 25 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 75, 75 a 100 aminoácidos contíguos) de SEQ ID NO:lOO [FGF21], incluindo os resíduos de aminoácidos GQV.

5 Em uma forma de realização adicional, uma sequência de peptídeo inclui ou consiste em qualquer entre: uma sequência variante do fator de crescimento de fibroblastos 19 (FGF19) possuindo uma ou mais súbstituições, inserções ou deleções de aininoácidos em comparação com uma referência ou tipo selvagem 10 de FGF19; uma sequência variante do fator de crescimento de èj fibroblastos 21 (FGF21) que tem uma ou mais substituições, inserções ou deleções de aminoácidos em comparação com urna referência ou tipo selvagem de FGF21; uma porção de uma sequência de FGF19 fundida com uma porção de urna sequência de 15 FGF21, ou uma porção de uma sequência de FGF19 fundida com uma porção de uma sequência de FGF21, em que a(s) porção(ões) de 3eq'uência FGF19 e/ou de FGF21 tem unia ou rnais substituições, inserções ou deleções de aminoácidos em comparação com uma referência ou de tipo selvagem de FGF19 e/ou FGF21.

20 Ainda em outras formas de realização, uma sequêncía de O peptídeo ou uma sequência de peptídeo quimérico inclui ou , consiste erri aminoácidos amino-terminaís de 1 a 16 da SEQ ID NO:IOO [FGF21] fundidos a aminoácidos carboxi-terminais 21 a 194 de SEQ ID NO:99 [FGF19], ou a sequência do peptídeo tem 25 aminoácidos amino-terminais 1 a 147 de SEQ ID NO:99 [FGF19] fundidos a aminoácidos carboxi-terrninais 147 a 181 de SEQ ID NO:lOO [FGF21] (M41), ou a sequência do peptídeo tem aminoácidos amino-terminais 1 a 20 de SEQ ID NO:99 [FGF19] fundido a aminoácidos carboxi-terminais 17 a 181 de SEQ ID 30 NO:lOO [FGF21] (M44), ou a sequência do peptídeo tem aminoácidos amino-terminais 1 a 146 de SRQ ID NO;1OO [FGF21] fundido a aminoácidos carboxi-terminais 148 a 194 da SEQ ID

NO:99 [FGF19] (M45), ou a sequência do peptídeo tem amin'oácidos ahiino-terminais 1 a 20 da SEQ ID NO:99 [FGF19] fundido a aminoácidos internos 17 a 146 da SEQ ID NO:lOO [FGF21] fundido a aminoácidos carboxi-terminais 148 a 194 da 5 SEQ ID NO:99 [FGF19] (M46).

Ainda em formas de realização adicionais, uma sequência de peptídeo ou uma sequência de peptídeo quimérico tem um padrão de sequência WGDPI correspondente à sequência de aminoácidos WGDPI 16 a 20 de SEQ ID NO:99 [FGF19], ou tem um padrão de e 10 sequência WGDPI substituido, mutado ou ausente correspondente à sequência de aminoácidos de FGF19 WGDPI 16 a 20 de FGF19, ou a padrão . de sequência WGDPI tem um ou mais, aminoácidos substituído, mutado ou ausente, ou é diferente de uma sequência variante de FGF 19 tendo qualquer um GQV, GDI, WGPI, 15 WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituído por sequêncía FGF19 WGDPI nos aminoácidos 16 a 20.

Ainda em outras formas de realização, uma sequência -de peptídeo ou uma sequência de peptídeo quimérico tem uma região 20 N-terminal que inclui ou consiste em resíduos de arninoácidos e VHYG, aminoácidos, onde a região DASPHVHYG, N-terminal ou em que compreende a região resíduos N-terminal de compreende os resíduos de aminoácidos DSSPLVHYG, ou em que a região N-terminal compreende resíduos de aminoácidos DSSPLLQ, 25 Qll ern que a região N-terminal compreende resíduos de amihoácidos DSSPLLQFGGQV. Em aspectos particulares, o G corresponde à última posíção da região N-terminal, ou o resíduo Q é a últíma posição de aminoácidos da região N- terminal, ou o resíduo V corresponde à última posição da 30 região N-terrninal.

Ainda em formas de realização adicionais, uma sequência de peptídeo ou uma sequência de peptídeo quimérico tem uma região N-terminal que inclui ou consiste em RHPIP, onde R é a primeira posição de aminoácidos da região N-terminal, ou HPIP 5 (por exernplo, onde HPIP são os 4 priineiros resíduos de aminoácidos da região N-terminal), ern qué H é a primeira posição de arninoácidos da região N-terminal, ou RPLAF, onde R é a primeira posição de aminoácidos da região N-terminal, ou PLAF, onde P é a primeira posição de aminoácidos da região N- lO terminal, (jü R, em que R é a primeira posição de aminoácidos êj da região N-terminal, ou t-em ria região N-terminal qualquer uma das sequências seguintes: MDSSPL, MSDSSPL, SDSSPL, MSSPL ou SSPL.

Em outras formas de realização, uma sequência de peptídeo ou 15 uma sequência de peptídeo quimérico tem, na primeira posição da região N-terminal, um resíduo "M" , um resíduo "R"' , um resíduo "S", um resíduo "H", um resíduo "P", um resíduo "L" ou um resíduo " D" . Em formas de realização alternativas, uma sequência de peptídeo ou uma sequência de peptídeo quiínéríco 20 não tem um resíduo "M" ou um resíduo "R" na primeira posição do aminoácido da região N-terminal.

6 Ainda ern outras formas de realização, uma sequêncía de peptídeo ou uma sequência de peptídeo quimérico tem a primeíra e a segunda posições da região N-terminal de uma sequência MR, 25 ou na primeira e segunda posiçães da região N-'terminal de uma sequência RM, ou na primeira e segunda posições da região N- terminal de uma sequência RD, ou na primeira e segunda posições da região N-terminal de uma sequência DS, ou na primeira e segunda posições da região N-terminal de uma 30 sequência DM, ou na primeira e segunda posições da região N- terminal de uma sequência MS, ou na primeira e terceira posições da região N-terminal de uma sequência MDS, ou na primeira e terceira posições da região N-teríninal de uma sequência RDS, ou na primeira e terceira posições d'a região N- terminal de uma sequência de MSD, ou na primeira e terceira posições da região N-terminal de uína sequência de MSS, ou na 5 primeira e terceira posições da região N-terminal de um sequência de DSS, ou na primeira e quarta posições da região N-terminal de uma sequência de RDSS, ou na primeira e quarta posições da região N-terminal de u-ma sequência de MDSS, ou na primeíra e quinta posições região N-terminal uma sequência 10 MRDSS, ou na primeira e quinta posições da região N-terminal , êj de uma sequência de MSSPL, ou na prirneira e sexta posições da região N-terminal de uma sequência de MDSSPL, ou na primeira e sétima posições da região N-terminal uma sequêncià MSDSSPL.

Ainda em outras formas de realização, uma sequência de 15 peptideo ou uma sequência de peptídeo quimérico, uma adição de resíduos 30 a 194 de aminoácidos de SEQ ID NO:99 [FGF19] na extremidade C-terminal, resultando num polipeptídeo quimérico tendo na última posição da região C-terminal que corresponde aproximadamente ao resíduo 194 da SEQ ID NO:99 [FGF19]. Em 20 mais outras forrnas de realização, uma sequência de peptídeo ou sequência de peptídeo quimérico compreende a totalidade ou uma ei porção de uma sequência de FGF19 {por exemplo, SEQ ID NO:99), posicionado na extremidade C-terminal do peptídeo, ou em que o resíduo "R" amino terminal é excluído do peptídeo. ..) 25 Em formas de realização mais particulares, uma sequência de peptídeo ou sequência de peptídeo quimérico inclui ou consiste em qualquer das sequências de peptídeos variante Ml a M98, ou uma subsequência ou fragmento de qualquer uma das sequências de peptídeos variante Ml a M98.

30 Em formas de realização particulares adicionais, a sequência do peptídeo quimérico ou sequência do peptídeo tem uma região

N-terminal- ou C-terminal de cerca de 20 a cerca de 200 resíduos de aminoácidos de comprimento. Em formas de realização particulares, uma sequência do peptídeo quimérico ou sequência do peptídeo tem pelo menos uma deleção de 5 -aminoácido. Em ainda mais formas de realização particulares, uma sequência do peptídeo quimérico ou sequênci-a do peptídeo ou uma subsequência ou seu fragmento tem 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou mais deleções de aminoácidos no terminal amino, carboxi-terminal ou 10 internamente. Ern um aspecto particular não Iirnitativo, a EJ substituiçào ou deleção de aminoácidos é em qualquer das posíções dos aminoácidos 8 a 20 de FGF19 (AGPHVHYGWGDPI).

Em formas de realização mais particulares, uma sequência do peptídeo quimérico ou sequência do peptídeo inclui ou consiste 15 em uma sequência de arninoácidos de cerca de 5 a 10, 10 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 60 a 70, 70 a 80, 80 a 90, 90 a 100 ou mais aminoácidos. Em mais formas de reaiização particulares, uma sequência de peptídeo quimérico ou sequência de peptídeo inclui ou consiste em uma sequência de aminoácidos 20 de cerca de 5 a 10, 10 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 60, 60 a 70, 70 a 80, 80 a 90, 90 a 100 ou mais aminoácidos de C) FGF19 ou FGF21.

Em outras forrnas de realização particulares, as sequências de peptídeos quiméricos e sequências de peptídeos têm funções ou 25 atividades particulares. Erri um aspecto, uma sequência de peptídeo quimérico ou sequência de peptídeo mantém ou aumenta uma atividade de FGFR4 mediada. Em aspectos adicíonais, urna sequência de peptídeo quimérico ou sequência de peptídeo liga- se ao receptor 4 do fator de crescimento d.e fibroblastos 30 (ÊGFR4) ou ativa FGFR4, ou não se liga ao FGFR4 de forma detectável ao receptor 4 do fator de crescimento de fibroblastos (FGFR4) ou ativa FGFR4, ou se liga ao FGFR4 com uma afinidade inferior, comparável ou maior do que a afinidade de ligação do FGF19 ccun FGFR4, ou ativa FGFR4 a uma extensão ou quantidade menor, comparável' ou superior a' FGF19 ativa FGFR4. Em outros aspecto"', uma sequência de peptídeo quimérico 5 OLl sequência de "peptídeo reduziu formação de carcinoma hepatocelular (HCC) em comparação com FGF19, ou uma sequência variante FGF 19 tendo qualquer uma das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADE'I, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituído pela sequência WGDPI em 10 aminoácidos 16 a 20 de FGF19 e/ou tem maior atividade Ç\ hipoglicemiante em "comparação com FGF19, ou uma sequência .. variante FGF 19 tendo qualquer uma das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, - WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substitu-ído pela sequência WGDPI em 15 aminoácidos 16 a 20 de FGF19 e/ou tem menos aumento de atividade dos lipídios em comparação com" FGF19, ou uma sequêricia variante FGF 19 tendo qualquer uma das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDE'A, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituído pela 20 sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19, e/ou tem menor atividade de aumento de triglicerídeos, colesterol, não- HDL ou HDL em cornparação com FGF19, ou uma sequência variante ' ; de FGF 19 tendo qualquer uma das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, " WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, 25 WGDI, WGDP ' ou FGDPI substituído pela sequêncià WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19, e/ou tem menor atividade de redução de massa magra em comparação com FGF21. Tais funções e atividades podem ser determinadas in vitro ou in vivo, por exemplo, em ratos db/db.

.

30 Ainda em formas de realização adicionais, as sequências de peptideos quiméricos e sequências de peptídeos isolados ou ' purificados, e/ou sequências de peptídeos quiméricos e sequências de peptídeos podem ser incluídas naS composições.

Em uma forma de realização, uma sequência de peptídeo quimérico ou peptídeo sequência está incluída "numa composição farmacêutica. Tais composições incluem combinações de ingredientes inativos ou outros ativos. Em uma forma cíe 5 realização, uma composição, como uma composição farmacêutica, inclui a sequência do peptídeo quimérico ou uma sequência de peptídeo e um agente redutor de glicose.

Ainda em outras formas de realização, as moléculas de ácido nucleico que codificam a sequência do peptídeo quimérico ou €3 10 sequência de peptídeo são fornecídas. Tais moléculas podem incluir ainda um elemento de controle da expressão em ligação operável que confere a expressão da molécula de ácido nucleico que codifica para o peptídeo in vitro, de uma célula ou in vivo, ou um vetor que compreende a molécula de ácido nucleico 15 (por exemplo, urrí vetor viral). Células transformadas e hospedeíras que expressam as sequências de peptídeos quiméricos e sequências de peptídeos tambérn são fornecidas.

Usos e métodos de tratamento que iricluem a administração ou liberação de qualquer sequência do peptídeo quimérico ou 20 sequência de peptídeo são também fornecidos. Em formas de e realização particulares, um uso ou método de tratamento de um paciente inclui a adninistração de um peptídeo quimérico inventado ou urna sequência de peptídeo a um paciente, tal como um paciente possuíndo, ou em risco de ter, uma doença ou urn 25 dis.túrbío tratável por uma sequência de peptídeo inventado em uma quantidade efícaz para tratar a doença ou desordem. Em uma outra forma de realização, um rnétodo inclui a administração de um peptídeo quiméríco inventado ou uma sequência de peptídeo a um paciente,. tal como um paciente que tem urna condição 30 hiperglicêmica (por exemplo, diabetes, tais como diabetes insulino-dependente (tipo I), diabetes tipo II ou diabetes gestacional), resistência à insulina, hiperinsulinemia,

intolerância à glicose ou síndrome metabólica ou é obeso ou tem uma massa corporal indesejável.

Em determinados aspectos dos métodos e usos, uma sequência de peptídeo quiméríco ou sequência de peptídeo é administrada a 5 um paciente numa quantidade eficaz para melhorar o metabolismo da glicose no paciente. Em aspectos rnais específicos, um paciente possui um nível de glicose no plasma em jejum superiores a 100 rng/dl ou tem urn nível de hemoglobina Alc (HbA1c) acima de 6%antes da administração.

010 Em outras formas de realização, o uso ou o método de * tratamento de um paciente se destina a ou resul-ta em níveis reduzidos de glicose, aumento da sensibilidade à insulina, diminuição da resistência à insulina, glucagon reduzida, uma melhoria na tolerância à glicose ou metabolismo da glicose ou 15 homeostase, melhoria função pancreátíca ou redução de triglicerídeos, coIesterol, IDL, LDL e VLDL ou uma dimínuição da pressão sanguínea, diminuição do espessamento da camada íntima do vaso sanguíneo ou diminuição da massa corporal ou ganho de peso.

e20 Os métodos de análise e/ou identificação de uma sequência de peptídeo quimérico ou sequência de peptídeo são tambérn fornecidos, tal como as sequências de peptídeos quirriéricos e sequências de peptídeos que têm atividade de redução de glicose sem substancial atividade de carcinoma hepatocelular 25 (HCC). Numa forma de realização, um método compreende: a) fornecimento de uma sequência de peptídeo quimérico candidato ou sequência de peptídeo; b) administração da sequência de peptídeo candidato a um animal de teste (por exemplo, um rato db/db); c) medição dos níveis de glicose do animal depois da 30 administração da sequência de peptídeo candidato para determinar se a sequência de peptídeo candidato reduz qs níveis de glicose. Em um aspecto particular, a sequência do peÊ)tídeo quimérico ou sequência de peptídeo também é analisada para a indução de HCC no animal (por exemplo, avaliação de uma amostra de tecido hepático do animal de teste) ou expressão de 5 um marcador correlacionador com atividade HCC, em que um peptídeo candi.dato tendo atividade redutora de glicose e não atívidade HCC substancial. Tais métodos identificam o candidato como tendo atividade de redução "de glicose, opcionalmente, também sem atividade substancial de carcinorna 10 hepatocelular (HCC).

e Descrição dos Desenhos A FIG. 1 rnostra sequências de proteína FGF19 e FGF21 e sequências variantes representativas, ou seja, sequências de peptídeo variante M5, variante Ml, variante M2, variante M69, 15 variante M3, variante M48, variante M49, variante M50, variante M51, variante M52, variante M53 e variante M70. 3 formas alélicas adicionais (polimórficas) de FGF21, ou seja, M71, M72 e M73 também são mostradas.

A FIG. 2 mostra as trocas representativas de domínio entre :0 sequências de proteínas FGF21 (sem sombreamento) e FGF19 (sombreamento cinza) e as sequências (quiméricas) fundidas resultantes. As regiões de aminoácidos de cada um dos FGF21 e FGF19 presente na fusào (quimera) são indicadas por números. Redução de glicose e elevação de lipídeos é mostrada para cada 25 uma das sequências quiméricas.

A FIG. 3À-3I mostra dadQs de redução da glicemia e peso corporal. Sequências de peptídeos A) variante M5; B) variante Ml; C) variante M2 e variante M69; D) varia-nte M3; E) variante M48 e variante M49; F) variante M51 e variante M50; G) variante 30 peptídeo variante M52; H) peptídeo variante M53 e I)

M70 todos tendo redução da glicemia (isto é, atividade antidiabética) em ratos db/db. Os ratos foram injetados corn vetor AAV expressando FGF19, FGE'21, as variantes selecionadas " e solução salina e gep são controles negativos.

5 A FIG. 4A-4I rnostra perfil lipídico sérico (triglicerídeos, colesterol total, HDL e não-HDL) de ratos db/db injetados com vetor AAV expressando FGF19, FGF21 ou sequências de peptídeos A) variante M5; B) variante Ml; C) variante M2 e variante M69; D) variante M3; E) variante M48 e variante M49; F) variante @ 10 M51 e variante M50; G) peptídeo variante M52; H) peptídeo variante M53, e I) variante M70. Sequência do peptídeo variante M5 não aumentou ou elevou os lipídeos em contraste com o FGF19, Ml, M2 e M69, que aumentam e elevam os Iipídeos.

Os níveis séricos de todas as variantes eram comparáveis. 15 Saline e GFP são controles negativos.

A FIG. 5A-5I mostra dados relacionados a carcinoma hepatocelular (HCC) para sequências de peptídeos A) variante M5: B) variante Ml; C) variante M2 e variante M69; D) variante M3; E) variante M48 e variante M49; F) variante M51 e variante 20 M50: G) variante M52; H) peptídeo variante M53, e I) variante @ M70. Todas as varíantes não aumentaram signi.ficativamente ou induziram a forrnação de carcinoma hepatocelular (HCC) ou HCC tumorigênese em contraste com o FGF19. Pontuação de HCC é registada como o número de nódulos de HCC na superfície de 25 todo o fígado de ratos com variantes injetadas dívidido pelo número de nódulos de HCC de ratos injetados com FGF19 de tipo selvagem.

massa gorda = A FIG. 6A-6I mostra dados de massa magra ou de para sequências de peptídeos A) variante M5; B) variante Ml; var.iante M48 30 C) variante M2 e variante M69; D) variante M3; E) e variante M49; F) variante M51 e variante M50; G) variante

M52; H) peptídeo variante M53 e I) variante M70. Exceto para M2, M5 e M69, as sequências de peptídeos variantes reduzem a massa magra ou massa gorda em contraste com o FGF21.

A FIG. 7A-7B mostra dados gráficos que demonstram que a 5 injeção do polipeptideos recombinantes A) variante M5 e B) variante M69 reduzem a glicose no sangue em ratos ob/ob.

A FIG. 8 mostra dados que indicam que a expressão hepática de família 1 aldo-ceto redutase, membros C18 (Akr1C18) e família 1 carreadora soluto, membros 2 (slc1a2) parece correlacionar- @IO se corri a atividade HCC.

Descrição Detalhada A presente invenção proporciona sequências quiméricas e de peptídeos que são capazes de diminuir ou reduzir os níveis de glícose. Em uma forma de realização, uma sequência de peptídeo 15 quiinérico inclui ou consiste em uma região N-terminal tendo pelo merios sete resíduos de aminoácidos e a região N-terminal que tem uma primeira posição de aminoácido e uma última posição do aminoácido, em que a região N-terminal possui uma e sequência DSSPL ou DASPH e uma região C-terminal que tem uma 20 porção de FGF19 e a região C-terminal que tem uma primeira posição de aininoácido e uma última posição do aminoácido, em que a região C-terminal inclui os resíduos de aminoácidos 16 a 29 de FGF19 (WGDPIRLRHLYTSG) e o resíduo W corresponde à primeira posição de arrtinoácidos da região C-terminal.

25 Em uma outra forma de realização, uma sequência de peptídeo químérico inclui ou consiste em uma região N-terminal que tem uma porção de FGF21 e região N -terminal que tem uma primeira posição de aminoácido e uma última posição do aminoácido, em que a região N-terminal tem uma sequência GQV e o resíduo V corresponde à última posição de aminoácidos da região N- terminal, e uma região C-terminal que tem uma porção de FGF19 e a região C-terrninal que tem uma orimeira posição de aminoácido e última posição de aminoácido em que a região C- 5 terminal inclui os resíduos de aminoácidos 21 a 29 de FGF19 (RLRHLYTSG) e o resíduo de R cor.responde à primeira posição da região C-terminal.

Em outras formas de realização, uma sequência de peptídeo inclui ou consiste em uma sequência variante do fator de @iO crescimento de fibroblastos 19 (FGF19) que tem uma ou mais substituições de aminoácídos, inserções ou deleções em comparação corn uma referência ou tipo FGF19 selvagem. Em formas de realização adicionais, uma sequência de peptídeo inclui ou consiste em uma sequência variante do fator de 15 crescimento de fibroblastos 21 (FGF21) que tem uma ou mais substituições, inserções ou deleções de aminoácidos em cornparação com uma referência ou tipo FGF21 selvagem. Ainda em formas de realização adícionais, uma sequência de peptideo inclui ou consiste em uma porção de uma sequência de FGF19 " 20 fundida com uma porção de uma sequência de FGF21. Ainda em formas de realização adiciona:U, uma sequência de peptídeo e inclui ou consiste em uma porção de uma sequência de FGF19 fundida com uma porção de uma sequêncía de FGF21, onde a porção de sequência (S) EGF19 e/ou FGF21 tem uma ou mais 25 substituicões, Y inserções ou deleções de aminoácidos em comparação com uma referência ou FGF19 tipo selvagem e/ou FGF21.

A invenção também proporciona métodos e usos no tratamento de um paciente com ou em risco de ter um distúrbio metabólico 30 tratável usando variantes e fusões de sequências de peptídeos de fator de crescimento de fibroblastos 19 (FGF19) e/ou fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF21). Numa forma de realização, um método inclui o contato ou a administração a um paciente de um ou mais ácidos nucleicos que codifica sequência de peptídeos variantes ou fusão do fator de crescimento de fibroblastos 19 (FGF19) e/ou fator de crescirnento de 5 fibroblastos 21 (FGF21) em uma quantidade eficaz para tratar o distúrbio. Numa outra forma de realização, um método ínclui contato ou administração a urn paciente uma ou mais moléculas de ácido nucleico que codificam para uma sequêncía de peptídeo variante ou fusão de fator de crescimento de fibroblastos 19 10 (FGF19) e/ou fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF21) ® (por exemplo, um elemento de controle da expressão em ligação operativa com o ácido nucleico que cQdifica a sequência do peptídeo, incluindo, opcionalmente, um vetor) em uma quantidade eficaz para tratar o distúrbio.

15 Embora a cornpreensão do rriecanismo subjacente de ação dos peptídeos da invenção não é necessária para a prática da invenção, sem estar ligado a qualquer teoria ou hipótese particular, crê-se que os peptídeos da invenção imitam, pelo menos em parte, o efeito que a cirurgia bariátrica tem sobre, 20 por exemplo, a homeostase da glicose e perda de peso. As alteracões3 na secreção de hormônios gastrointestinais (por e exemplo, o peptídeo similar. ao glucagon tipo 1 (GLP-l)) após cirurgia bariátrica se crê responsável pela resolução de, por exemplo, condições diabéticas. FGF19 é altamente expresso no 25 intestino delgado distal ê sobre-expressão transgênica de FGF19 melhora a homeostase da glicose. Como os níveis de FGF19 em humanos também são elevados após a cirurgia de bypass gástrico, o FGF19 elevado pode estar envolvido com a remissão de diabetes observada após a cirurgia bariátrica.

30 Uma sequência referência representativa ou FGF19 tipo selvagem é apresentada como: RPLAFSDAGPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGE'HGLSSCFLRI RADgVVDCARgqSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSE,EDCAFE,E

EIRpDgyNVyRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESD MFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (SEQ ID NO:99).

Uma sequência referência representativa ou tipo selvagem FGF21 é apresentada como: HpIpDSSpLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGT 5 VggAADqSpESLLqLKAT,KPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLED gyNVyqSEAHgLpLHLpgNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSD E'LSMVGPSQGRSPSYAS (SEQ ID NO:lOO). Variantes alélicas FGF21 estão ilustradas na Figura 1 (por exemplo, M70, M71 e M72).

Os termos sequêncías de "peptídeos", "proteína" e @10 "poIipeptídeo" são aqui utilizados indiferentemente para se referir a dois ou mais aminoácidos ou "resíduos", incluindo modificações químicas e derivados de aminoácidos, ligados de forma covalente por uma ligação de amida ou equivalente. Os aminoácidos que formam a totalidade ou uma parte de um 15 peptídeo podem ser, de entre os conhecidos 21 aminoácidos que ocorrem naturalmente, os qtiiais são referidos tar'.to por sua abreviatura de uma só letra ou abreviatura comum de três Ietras. Nas sequências de peptídeos da invenção, os resíduos de aminoácidos convencionais têm o seu significado 20 convencional. Assim, "Leu" é a leucina, "Ile" é isoleucina, e "Nle" é norleucina, e assim por diante.

Aqui exemplificados estão sequências de peptídeos, polipeptídeos distintos da referência FGF19 e FGF21 aqui estabelecidos, que reduzem ou baixam glicose, in vivo (quadros 25 1 a 8 e Figura 1). Não limitativos são exerr.plos particulares de um peptídeo de sequência com os aminoácidos amino-terminal 1 a 16 de FGF21 fundidos à aminoácidos carboxi-terminais 21 a 194 de FGF19; uma sequência de peptídeo com aminoácidos do amino-terminal 1 a 147 de FGF19 fundido com carboxi-terrninal 30 de aminoácidos 147 a 181 de FGF21; uma sequência de peptídeo com aíninoácidos amino-terminal 1 a 20 de FGF19 fundido com carboxi-terminal de aminoácidos 17 a 181 de FGF21; uma sequência de peptídeo com aminoácidos amino-terminal 1 a 146 de FGE21 fundido com carboxi-terrninal de aminoácidos 148 a 194 de FGFI9, e uma sequência de peptídeo com os aminoácidos 5 amino-terminal 1 a 20 de FGF19 fundído com os aminoácidos internos 17 a 146 de FGF21 fundidos em carboxi-terminal de aminoácidos 148 a 194 FGF19.

Sequências particulares de peptídeos adicionais tem um padrão de sequência WGDPI correspondente à sequência de aminoácidos 10 WGDPI 16 a 20 de FGF19, ausência de um padrão de sequência "3 WGDPI correspondente à sequência de aminoácidos WGDPI 16 a 20 ~ de FGF19 ou ter um padrão da sequência substituído (isto é, mutante) WGDPI correspondente à sequência de FGF19 sequência WGDPI de aminoácidos 16 a 20 de FGF19.

15 Sequências de peptídeos específicos da invenção também incluem sequências distintas de FGF19 e FGF21 (por exemplo, corno aqui estabelecidas), e sequências variantes FGF19 tendo qualquer urna das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou 'FGDE'I 20 substituído por sequência FGF19 WGDPI em aminoácidos 16 a 20. e "or conseguinte, o tipo selvagem FGF19 e FGF21 (por exemplo, corno aqui estabelecido como SEQ ID NOS:99 e 100, respectivamente) podem ser sequências excluídas e FGF19 com qualquer das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, 25 WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituído pela sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19 também podem "er excluídas. Esta exclusão, no entanto, não se aplica onde uma sequência tenha, por exemplo, três resíduos de FGF21 fundido com FGF19 tendo, por exernplo, 30 quaisquer dos GQV, GQV, GDI ou GPI, ou dois resíduos de FGF21 fundidos com qualquer dos WGPI, WGDI, GDPI, WDPI, WGDI ou WGDP.

Exernplos não Iimitativos particulares de sequências de peptídeos incluem oü consistem em toda ou uma parte de uma variante da sequência especificada aqui como Ml a M98 (SEQ ID

NOS:l a 98). Exemplos mais particulares não limitantes de

5 sequências de peptídeos incluem ou consistem em toda ou uína parte de uma sequência apresentada como: HPIPDSSPLLQFGGQVRLRH LyTSgpFIgLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVFISVRYLCMGADGK MqgLLqySEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLP

MVpEEpEDLRgHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (Sequências de

10 FGF21 também podem incluir um resíduo "R" no ainino-terminal),

€9 ou DSSpLLqFggqVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAV ALRTVAIKgVHSVRyLCMgADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSS AKqRqLyKNRgFLpLSHFLpMLpMVpEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAV

RSPSFEK ou uína subsequência ou seu fragmento, ou RPLAFSDASP 15 HVHygWgDpIRLRHLyTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKG VHSVRyLCMgADgKMqgLLqySEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKN RgFLpLSHFLpMLpMVpEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK ou uma subsequência ou seu fragmento, ou RPLAFSDSSPLVHYGWGDPI RLRHLyTSgpHgLSSCFLRIRADGVVDCARGQSARSLLEIKAVALRTVAIKGVµ.SVRYLCMG

20 ADgKMqgLLqySEEDCAF'EEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFL pMLpMVpEEpEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK ou uma subsequência ou seu fragmento, ou DSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSG e pHgLsscFLRIwDgwDcARgQs-AHsLLEImvATjRTvAIKgvHsvRYLcMgADgKMQgLL qySEEDCAFEEEIRpDGYNVYRSEKHRLE'VSLSSAKQRQLYKNRGFLE'LSHFLPMLPMVPEE

25 pEDLRgHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK ou uma subsequência ou seu fragmento, ou RDSSpLVHygWgDpIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRAD gVVDCARgqSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIR pDgyNVyRSEKIIRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFS

SPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M69), ou uma subsequência ou seu

30 fragmento, ou RDSSpLLqWgDpIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQS AHSLLEIKAVALRTVAIKGV"HSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSE KHRLpVSLSSAKqRqLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPFEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDP FGLVTGLEAVRSPSFEK (M52), ou uma subsequência ou seu fragmento,

ou FIpIpDSSpLLqFGgQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGWDCARGQSAHSLLEIKA

VALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLS SAKqRqLyKNRgFLpLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEA VRSPSFEK (M5), ou uma subsequência ou seu fragmento, ou 5 HpIpDSSpLLqFggqVRQRYLYTDDAQQTEAH"LEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGV IqILgVKTSRFLCqRpDgALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHSLPLHLPGNKSP HRDpApRgpARFLpLpgI.pPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS (M71), ou uma subsequência ou seu fragmento, ou HPIPDSSPLL qFggqVRqRyLyTDDAqqTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSR 10 FLCqRpDgALygSLHFDpE_ACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPA @ RFLpLpgLppAppEppgILAPQE'PDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS (M72), ou uma subsequência ou seu fragmento, ou HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYT DDAqqTW-HLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGS LHFDpEACSFRELLLEDgyNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALP 15 EppgILApqppDVgSSDpLSMVVQDELQGVGGEGCHMHPENCKTLLTDIDRTHTEKPVWDGI TGE (M73), ou uma subsequência ou seu fragmento, ou RpLAFSDASpHVHygWGDPIRI.RHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKA

VALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLS SAKqRqLyKNRgFLpLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEA 20 VRSPSFEK (Ml), ou uma subsequência ou seu fragmento, ou RpLAFSDSSpLVHygWGDPIP.LRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQS-AHSLLEIKA

VALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLS @ SAKQRQTjYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPF,DLRGHLESDMESSPLETDSMDPFGLVTGLEA VRSPSFEK (M2), ou uma subsequência ou seu fragmento, ou 25 RE'LAFSDAgpHVHygWgDpIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGWDCARGQSAHSLLEIKA VALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAF"EEILEDGYNVYRSEKHRLPVSLS SAKqRqLyKNRgFLpLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEA VRSPSFE"K (M3), ou uma subsequência ou seu fragmento, ou RDSSpLLqFggqVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVA 30 IKgVHSVRyLCMgADgKMqgLLqySEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQL yKNRgFLpLSHFLpMLpMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFE K (M48), ou uma subsequência ou seu fragmento, ou RpLAFSDSSpLLqFggQVRLRHLYTSGPHGT,SSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVA

LRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSA KqRqLyKNRgFLpLSHFLpMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDFFGLVTGLEAVR SPSFEK (M49), ou uma subsequência ou seu fragmento, ou RHpIpDSSpLLqFgDqVRLRHLYTSGPHGL.SSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVAL 5 RTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEILEDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAK qRqLyKNRgFLpLSHFLPMLPMVPREPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRS PSFEK (M50), ou uina subsequência ou seu fragmento, ou RHpIpDsspLLQFggNvRLRHLYTsgpHgLsscFLRIRADgvvDcARgQsAHsLLEImvAL

RTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAK 10 qRqLyKNRgFLpLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRS e PSFEK (M51), ou uma subsequência ou seu fragmento, ou MDSSpLLqWgDpIRLRHLyTSGPHGLSSCFLRIRADGVV"DCARGQSAHSLLEIKAVALRTVA IKgVHSVRyLCMgADgKMqgLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNvYRSEKHRLPVSLSSAKQRQL yKNRgFLpLSHFLpMLpMVpEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFE 15 K (M53), o'u urna subsequência ou seu fragmento, e MRDSSpLVHygWgDpIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALR TVAIKgVHSVRyLCMgADgKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGvNVYRSEKHRLPVSLSSAKQ RqLyKNRgFLpLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSP SFEK (M70) ou urna subsequência ou seu fragmento, ou por 20 qualquer uma das sequências de peptídeo que precede o resíduo r terminal pode ser suprimido.

e Exernplos mais particulares não limitantes de sequências de peptídeos incluem ou consistem ern: HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTS gpHgLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVFISVRYLCMGADGWQGL 25 LqySEEDCAFEEEIRpDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYWRGFLPLSHFLPMLPMVPE EpEDLRgHLf,SDMFSSpLETDSMDPFGLVTGLRAVRSPSFEK, ou uma subsequência ou seu fragmento, ou DSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHG LSSCFLRIRADgVVDCARgqSAIISLLEIKAVALRTVAIKGvHSVRYLCMGAdGKMQGLLQYS EEDCAFEEEIRpDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPED 30 LRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLFAVRSPSFEK, ou uma subsequência ou seu fragmento, ou RPLAFSDASPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSS CFLRIRADgvvDCargqsAHslLEIKAValrtvAiKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEd CAFEEEIRpDgyNVyRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRG

Z3/116 HLES.DMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK, ou uma subsequêncía ou s'eu fragmento, ou RPLAFSDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFL RIRADgvvDcARgQsAHsLLEImvALRTvAIKgvHsvRYLcMgADgKMQgLLQYsEEDcAF

EEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLE 5 SDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK, ou uma subsequência ou seu ' fragniento, ou DSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQ SAHSLLEI.KAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRS

EKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMD PFGLVTGLEAVRSPSFEK, ou uma subsequência ou seu fragmento.

@iO Exernplos específicos adicionais não limitativos de sequências de peptídeos, tendo na extremidade N termínal, uma sequência de peptídeo incluindo ou consístindo da totalidade ou de uma parte de qualquer um dos: HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M5); DSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M6): RPLAFSDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M7); 15 HPIPDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSG (M8); HPIPDSSPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG (M9); HPIPDSSPHVHYGWGDPIRLRHLYTSG (MlO); RPLAFSDAGPLL QWGDPIRLRHLYTSG (Mll); RPLAFSDAGPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG (M12); RPLAFSDAGPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M13); HPIPDSSPHVHYGGQVRLRHLYTSG (M14); RPLAFSDAGPHVHWGDPIRLRHLYTSG (M15); RPLAFSDAGPHVHWGDPI 20 RLRHLYTSG (M16): RPLAFSDAGPHVGWGDPI RLRHLYTSG (Mlj); RPLAFSDAGPHYGWGDPIRLRHLYTSG (M18""): RPLAFSDAGPVYGWGDPIRLRHLYTSG @ (M19): RPLAFSDAGPVHGWGDPIRLRHLYTSG (M20); RPLAFSDAGPVH YWGDPIRLRHLYTSG (M21); RPLAFSDAGPHVHGWGDPIRLRHLYTSG (M22); RPLAFSDAGPHHGWGDPIRLRHLYTSG (M23); RPLAFSDAGPHHYWGDPIRLRHLYTSG 25 (M24); RPLAFSDAGPHVYWGDPIRLRHLYTSG (M25); RPLAFSDSSPL VHWGDPIRLRHLYTSG (M26); RPLAFSDSSPHVHWGDPIRLRHLYTSG (M22); RPLAFSDAGPHVWGDPIRLRHLYTSG (M28); RPLAFSDAGPHVHYWGDPI RLRHLYTSG (M29); RPLAFSDAGPHVHYAWGDPIRLRHLYTSG (M30); RHPIPDSSPLLQFGAQVRLRHLYTSG (M31); RHPIPDSSPLLQFGDQVRLRHLYTSG 30 (M32); RHPIPDSSPLLQFGPQVRLRHLYTSG (M33); RHPIPDSSPLL QFGGAVRLRHLYTSG (M34); RHPIPDSSPLLQFGGEVRLRHLYTSG (M35); RHPIPDSSPLLQFGGNVRLRHLYTSG (M36); RHPIPDSSPLT,QFGGQARLRHLYTSG (M37); RHPIPDSSPLLQFGGQIRLRHLYTSG (M38); RHPIPDSSPLLQ

FGGQTRLRHLYTSG (M39); RHPIPDSSPLLQFGWGQPVRLRHLYTSG (M40); DAGPHVHYGWGDPIRLRHLYTSG (M74); VHYGWGDPIRLRHLYTSG" (M75): RLRHLYTSG (M7J); RHPIDDSSPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSG; RPLAFSDAGPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG; 5 RHPIPDSSPHVHYGWGDPIRLRHLYTSG; RPLAFSDAGPLLQFGGQVRLRHLYTSG: RHPIPDSSPHVHYGGQVRT.RHLYTSG; RPLAFSDAGPHVHYGGDIRLRHLYTSG; RDSS PLLQEGGQVRLRHLYTSG; RPLAFSDSSPLLQFGGQVRLRH.LYTSG; RHPIPDSSPLLQF GAQVRLRHLYTSG: RHPIPDSSPLLQFGDQVRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFG PQVRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGGAVRLRHLYTSG: RHPIPDSSPLLQFGGEVR 10 LRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGGNVRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGGQARL e RHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGGQIRLRHLYTSG: RHPIPDSSPLLQFGGQTRL RHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGWGQPVRLRHLYTSG, e para qualquer urria das sequências de peptídeos que precede o resíduo R amino-terminal podem ser excluídas.

15 As sequências de peptídeos da invenção incluem adicionalmente aquelas corn indução ou formação de carcinoma hepatocelular (HCC) em comparação com FGF19 ou uma sequência variante de FGF 19 com qualquer urna' das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, 20 WGDP ou FGDPI substituído pela a sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19. As sequências de peptídeos da èj invenção incluern também aqueles com rnaior atividade hipoglicemiante em cornparação com FGF19 ou uma sequência variante de FGF 19 tendo qualquer das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, 25 WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituídc para a sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19. As sequências de peptídeos da invenção incluem, além disso, aqueles com menor crescimento de atividade de lipídeos (g)or exemplo, triglicerídeos, 30 colesterol, não-HDL ou HDL) em comparação com FGF19 ou uma sequência variante de FGF 19 tendo qualquer das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, .'S

WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituído para a sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19.

7 r Tipicamente, o número de, aminoácidos ou resíduos de uma sequência de peptídeo da invenção terá um total de menos de 5 cerca de 250 (por exemplo, aminoácidos ou miméticos de destes). Em várias formas de realização particulares, o número de resíduos compreende dé cerca, de 20 até cerca de 200 resíduos (por exemplo, aminoácidos ou miméticos destes). Em formas de realização adicionais, o número de resíduos @iO compreende de cerca de 50 até cerca de 200 residuos (por exemplo, aminoácidos ou miméticos destes). Em outras formas de realização o número de resíduos compreende desde cerca de 100 até cerca de 195 resíduos (por exemplo, aminoácidos ou miméticos destes) em comprimento.

15 Os aminoácidos ou resíduos podem ser ligados por amida ou através de ligações químicas não-naturais e nào-amida, incluindo, por exemplo, os formados corn glutaraldeido, ésteres de N-hidroxissuccinimida, maleimídas bifuncionais ou N,N'- t diciclohexilcarbodiimida (DCC). Ligações não-amida incluem, 20 por exemplo, cetometileno, aminometileno, olefina, éter, @ tioéter e semelhantes (ver, por exemplo, Spatpla in Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides and Proteins, vol.

7, pp 267-357 (1983), "Peptide and Backbone Modifications'", Marcel Decker, NY). Assim, quando um peptídeo da presente 25 ínvenção ínclui uma porção de uma sequência de FGF19 e uma porção de urna sequêncía de FG21, as duas porções não precisam ser unidas uma à outra por uma ligação amidav yas podem ser unidas por qualquer outra porção química ou conjugadas em conjunto através de uma porção ligante.

30 A invenção também inclui a subsequências, variantes e formas modificadas de sequênçias de peptídeos exemplificadas

(incluindo as variantes FGF19 e FGF21 e subsequências listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1 e as fusões FGF19/FGF21 e quimeras listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1), enquanto o anterior mantém, pelo menos, uma atividade ou função 5 detectável ou mensurável. Por exemplo, certos peptídeos variantes exemplificados têrn sequência C-terminal FGF19, pHgLsscFLRIRADgvvDcARgQsAHsLLEImvALRTvAIKgvHsvRYT.cMgADgKMQgLL qySEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEE pRDLRgHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK na porção C- lO termínal, por exemplo, seguindo os resíduos de aminoácidos e "ETG" da variante.

Além di-sso, certos peptídeos variantes exemplificados, por exemplo, aqueles que têm toda ou uma porção da sequência de FGF21 no amino-terminal, tem um resíduo "R" posicionado no N- 15 terrnínal, o qual pode ser omitido. Da mesma forma, certos peptídeos variantes exemplificados, incluem um resíduo de "M" posicionado no N-terminal, que pode ser adicionado a ou ainda substituído por um resíduo omitido, tal como um resíduo de "R". Mais particularmente, em várias forrnas de realizaçãc', 20 sequências de peptídeos no N-terminal incluem qualquer de: RDSS, DSS, MDSS ou MRDSS. Al-ém disso, em células em que um e res'duo "M" é adjacente a um resíduo "S", o resíduo "M" pode ser cIivado de tal forrna que o resíduo "'M" é apagado da sequência de peptídeos, ao passo que quando o resíduo "M" é 25 adjacente a um resíduo "D", o resíduo "M" ríão pode ser . clivado. Assim, a título de exemplo, em várias formas de realização, sequências de peptídeos incluem aqueles com os seguíntes resíduos no N-terminal: MDSSPL, MSDSSPL (clivada para SDSSPL) e MSSPL (clivada para SSPL).

30 Deste modo, sequências de "peptídeo", "polipeptídeo" e "proteína" da invenção incluem subsequências, variantes e formas modificadas das variantes e subsequências FGF19 e FGF21 lístadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1, . e fusões e quimeras de FGF19/FGF21 listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1, contanto que a subsequência, variante ou forma modificada (por exemplo, fusão ou quimera) retenha pelo menos uma atividade ou função 5 detectável.

Tal como aqui utilizado, o termo "modificar" e variações gramaticais destes, significa que a composição se desvia em relação a uma composição de referência, tal como uma sequência de peptideo. Estas sequências de peptídeos modificadas, ácidos e10 nucleicos e outras composições podem ter uma maior ou menor atividade ou função ou ter uma função ou atividade distinta em comparação com uma sequência de peptídeo referência não modificada, ácido nucleico ou outra composição ou pode ter uma propriedade desejável de uma proteína formulada para terapia 15 (por exemplo, meia-vida do soro), para induzir anticorpos para o uso num ensaio de detecçào e/ou para a purificação de proteínas. Por exemplo, uma sequêncía de peptídeo da invenção pode ser modifícada para aumentar a meia-vida do soro, para aumentar estabilidade da proteina in vitro e/ou in vivo, etc.

20 Os exemplos particulares de tais subsequênci-as, variantes e e formas modificadas das sequências de peptídeos aqui exemplificadas (por exemplo, uma sequência de peptídeo listada nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1) inclui substituições, deleções e/ou inserções/adições de um ou mais aminoácidos, para ou a 25 partir do amino-terminal, carboxi-termínal ou internamente. Um exemplo é a substituição de um resíduo de aminoácido por outro resíduo de aminoácido dentro da sequência de peptideo. Outro é uma deleção de um ou mais resíduos de aminoácídos a partir da sequência de peptídeo ou uma inserção ou adição de um ou mais 30 resíduos de aminoácidos na sequência de peptídeo.

O número de resíduos substituídos, eliminados ou inserídos/adicionados são um ou mais aminoácidos (por exemplo, 1 a 3, 3 a 5, 5 a 10, 10 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 60, 60 a 70, 70 a 80, 80 a 90, 90 a 100, 100 a 110, 110 a 120, 5 120 a 130, 130 a 140, 140 a 150, 150 a 160, 160 a 170, 170 a 180, 180 a 190, 190 a 200, 200 a 225, 225 a 250 ou mais) de uma sequência de peptídeos. Assim, uma sequência de FGF19 cjü FGF21 pode ter poucos ou muitos aminoácidos substituídos, excluídos ou inseridos/adicionados (por exemplo, 1 a 3, 3 a 5, 10 5 a 10, 10 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 60, 60 a 70, , 6 70 a 80, 80 a 90, 90 a 100, 100 a 110, 110 a 120, 120 a 1,30, 130 a 140, 140 a 150, 150 a 160, 160 a 170, 170 a 180, 180 a 190, 190 a 200, 200 a 225, 225 a 250 ou mais). Além disso, uma sequência de aminoácidos FCF19 pode incluir ou consistir em 15 uma sequência de aminoácidos de cerca de 1 a 3, 3 a 5, 5 a lO, 10 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 60, 60 a 70, 70 a 80, 80 a 90, 90 a 100, 100 a 110, 1'10 a 120, 120 a 130, 130 a 140, 140 a 150, 150 a 160, 160 a 170, 170 a 180, 180 a 190, 190 a 200, 200 a 225, 225 a 250 ou mais amínoácidos d'e FGF21 ou urrt 20 aminoácido ou sequência de FGF21 pode incluir ou consistir em uma sequência de aminoácidos de cerca de 1 a 3, 3 a 5, 5 a 10, 10 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 60, 60 a 70, 70 a 80, e 80 a 90, 90 a 100, 100 a 110, 110 a 120, 120 a 130, 130 a 140, 140 a 150, 150 a 160, 160 a 170, 170 a 180, 180 a 190, 190 a 25 200, 200 a 225, 225 a 250 ou mais aminoácidos de FGF19.

Exemplos específícos de substituições incluem substituição de um resíduo de D para um resíduo L. Assim sendo, embora os resíduos estejam listados na configuração L-isômero, D- aminoácidos em. particular ou qualquer de todas as posições das 30 sequências de peptídeos da invenção estão incluídos, a não ser que um D-isômero leve a uma sequência que não tem nenhuma função detectável ou mensurável.

Exemplos específicos adicionais são substituições não- conservadoras e conservadoras. Uma "substituição conservadora" é a substituição de um aminoácido por um resíduo biologicamente, quimicamente ou estruturalmente semelhante. 5 Biologicamente semelhante significa que a substituição é compatível com uma atividade biológica, por exemplo, atívidade de redução de glicose. Estruturalmente semelhante significa que os aminoácidos têm cadeias laterais com comprimento semelhante, tal como alanina, glicina e serina, ou possuindo 10 tamanho semelhante, ou a estrutura de uma primeira, segunda ou 0 sequência de peptídeo adicional é mantida. Semelhança química significa que os residuos têrn a mesma carga ou são arnbos hidrofílicos e hidrofóbicos. Exemplos particulares incluem a substituição de um resíduo hidrofóbico, tal como isoleucina, 15 valina, leucina ou metionina por outro, ou a substituição de um resíduo polar por outro, tal como a substituição de arginina por lisina, ácido glutâmico por ácido aspártico ou glutamina por asparagina, serina por treonina, etc. Ensaios de rotina podem ser utilizados para determinar se urna 20 subsequência, variante ou forma modificada tem atividade, por exemplo, atividade de redução de glicose.

e Os exemplos particulares de subsequências, variantes e formas modificadas das sequências de peptídeos aqui exemplificadas (por exernplo, urna sequência de peptídeo listada nas Tabelas 1 25 a 8 e Figura 1) têm 50% a 60%, 60% a 70%, 70% a 75%, 75% a 80%, 80% a 85%, 85% a 90%, 90% a 95% ou 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com uma sequência de peptídeo de referência (por exeniplo, uma sequência de peptídeo em qualquer uma das Tabelas 1 a 8 e Figura 1). O termo "identidade"' e "homologia" e 30 variações gramaticais, significa que duas ou mais entidades de referência são os mesmos. Assim, quando duas sequências de aminoácídos são idênticas, elas têm a sequência de aminoácidos idêntica. "Áreas, regíões ou dominios de identidade"

significam que urria parte de duas ou mais entidades referenciadas são as mesmas. Assim, quando duas sequências de aminoácidos são idênticas ou homólogas sobre uma ou rnais regiões da sequência, partilham identidade nestas regiões.

5 O grau de identidade entre duas sequências pode ser determinado utilizando um programa de computador e um algoritmo matemático conhecido na arte. Tais algoritmos que calcularn a perc.entagem de identidade de sequência (homologia) geralrnente contam lacunas das sequências e desencontros sobre eL0 a regiào de comparação. Por exemplo, um algoritmo de busca BLAST (por exemplo, BLAST 2.0) (Ver, por exery'io, Altschul et al., j. Mol. Biol. 215:403 (19°0), acessivel ao público através NCBI) tem parâmetros de pesquisa exemplares da seguinte forma: Incompatibilid-ade -2; lacuna aberta 5; 15 extensão da lacuna 2. Para comparações de sequências de peptídeo, um algoritmo BLASTP é tipicamente utilizado em combinação com uma matriz de pontuação, tal como PAMIOO, PAM 250, BLOSUM 62 ou BLOSUM 50. Programas de cornparação de sequêncías FASTA (por exempl-o, FASTA2 e FASTA3) e SSEARCH 20 taínbém são utilizados para quantificar o grau de identidade e (pearson et al., Proc. Natl. Acad. sci. USA 85:2444 (1988); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185 (2000); e Smith et al., j.

Mol. Biol. 147:195 (1981)). Programas para a quantifícação de similaridade estrutural de proteína utilizando o mapeamento 25 topológico baseado no Delaunay também têm sido desenvolvidos (Bostick et al., Biochem Biophys Res Commun. 304:320 (2003)).

Na' presente invenção, as sequências de peptídeos, incluindo subsequêncías, variantes e formas modificadas das sequências de peptídeos aqui exemplificados (por exemplo, sequências 30 listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1), um "aminoácido" ou "resíduo" inclui ácidos alfa-amino convencionais, bem como ácidos beta-amino, aminoácidos alfa, alfa-dissubstituídos e aminoácidos N-substituídos em que pelo menos uma cadeia lateral é uma porção de aminoácído de cadeia lateral tal como aqui definido. Um "aminoácido" inclui tarnbém os ácidos alfa- .,+ amíno N-alquil, em que o grupo amino N-terminal tem um grupo 5 alquila Cj a C6 linear ou ramificado substituinte. O termo "aminoácido" inclui, por conseguinte, estereoisômeros e modificações de aminoácidos de ocorrência natural da proteína, aminoácidos não proteicos, aminoácidos rnodificados pós- tradução (por exemplo, por glicosilação, fosforilação, éster 10 ou amida de clivagem, etc) aminoácidos enzimati-carnente e modificados ou sintetizacios, aminoácidos derivados construções ou estruturas que imitarn os aminoácidos, aminoácidos com uma porção de cadeia lateral modificada, derivados de porçiSes de ocorrência natural ou sintética ou que não ocorrern 15 naturalmente, etc. Aminoácidos modificados e não usuais estão incluídos nas sequências de peptídeos da invenção (ver, por exemplo, em Synthetic Peptides: A User's Guide; Hruby et al., Biochem J. 268:249 (1990), e Toníolo C., Int. j. Peptide Proteim Res. 35:287 (1990)).

20 Além disso, grupos de proteção e modificação dos aminoácidos estão incluídos. O termo "porção de cadeia lateral 6 aminoácidos", tal como aqui utilizado, inclui qualquer cadeia lateral de qualquer aminoácido, tal como o termo "aminoácido" é aqui definido. Isto inclui, por conseguinte, a porção da 25 cadeia lateral de aminoácidos que ocorrem naturalmente. Além disso, inclui porções de cadeia lateral em aminoácidos de ocorrência natural modificados como aqui estabelecidos e são conhecidos dos. peritos na arte, tais como porções de cadeia lateral em estereoisômeros e modificações de arninoácidos de 30 ocorrência natural da proteína, aminoácidos não proteicos, aminoácidos modificados pós-traducionalmente, aminoácidos enzimaticamente modificados ou sintetizados, aminoácidos derivados, construções ou estruturas que imitam os aminoácidos, etc. Por exemplo, a porção de cadeia lateral de qualquer aminoácido aqui divulgado ou co.nhecido de um perito na arte está incluída no âmbito da definição.

A expressão "derivado de uma porção de aminoácido de cadeia 5 lateral" está incluída dentro da definição de uma porção de aminoácido de cadeia lateral. Exemplos não Iimitativos de porções de aminoácidos de cadeia lateral derivados incluem, por exemplo: (a) adição de um ou mais átornos de carbono saturados ou insaturados a um grupo alquil, arila ou aralquil e10 de cadeia existente, (b) substituição de um átomo de carbono na cadeia lateral com outro átomo, de preferência, de oxigênio ou de nitrogênio, (c) adição de um grupo terminal a um átomo de carbono da cadeia lateral, incluindo metil (-C&), metoxi (- OCH3), nitro KnoÚ, hidroxila (-OH) ou ciano (-C=N), (d) 15 porções de cadeia lateral, incluindo um grupo hidroxi,,tiol ou amíno, adicionando um hidroxi, tiol ou grupo protetor de amino adequado, ou (e) porções de cadeia lateral incluindo uma estrutura em anel, a adição de um ou mais substituintes do anel, incluindo hidroxila, halogênio, alquil ou grupos arila 20 ligados diretamente ou através de uma ligação éter. Para os e grupos amino, os grupos protetores adequados são conhecidos pelos especialistas na matéria.. Desde que taj- derivação forneça uma atividade desejada na sequência do peptídeo final (por exemplo, redução da glicemia, glicose ou o metabolismo 25 dos lipídeos rnelhorado, a atividade antidiabética, ausência de forrnação de HCC substancial ou tumorigênese, ausência de modulação significativa da massa magra ou gorda, etc).

Uma "porção de aminoácido cadeia de lateral" inclui todas tais derivações e em particular os exemplos não-limitativos 30 incluem: ácido butírico gama-amino, ácido dodecanóico 12- amino, ácido alfa-aminoisobutírico, ácido 6-arnino hexanóico, ácido carboxílico 4-(aminometil)-ciclohexano, ácido 8-

aminQoctanóico, bifenil-alanina, Boc-t-butoxicarbonil, benzila, benzoíla, citrulina, ácido diaminobutírico, pirrollisina, ácido diaminopropiônico, 3,3-difenilalanina, ortonina, . citrulina, ácido 1,3-di hidro-2H- isoindolcarboxilico, etíl, 5 Fmoc-fluorenilrnetoxicarbonil, heptanoila (CH3-(CH2).sub.5-- C(=O)--), hexanoil (CH3-(CH2)4-C(=O)-), homoarginina, homocisteína, hornolisina, hornofenilalanina, homoserina, metil, sulfóxido de metionina, metionina sulfona, norvalina (VAL), fenilglicina, propil, isopropil, sarcosina (SAR), terc- lO butilalanina e benziloxicarbonil.

e Um único aminoácido, incluindo estereoisômeros e modificações de aminoácidos da proteína de ocorrência natural, aminoácidos' não proteicos, aminoácidos modificados pós-tradução, aminoácidos enzimaticamente sintetizados, aminoácidos que não 15 ocorrern naturalmente, incluindo os aminoácidos derivados, um aminoácido alfa, alfa dissubstituído derivado a partir de qualquer um dos anteriores (por exemplo, aminoácido alfa,alfa dissubstítuído, em que pelo menos uma cadeia lateral é a mesma que a do resíduo a partir do qual é derivado), um beta- 20 aminoácido derivado de qualquer um dos anteriores (isto é, um beta-aminoácido que, exceto para a presença de urn beta- e carbono, é de outro rnodo o mesmo que o resíduo a partir do qual é derivado), etc., incluindo tudo o que precede pode ser aqui referido como um "resíduo". Substituintes adequados, em 25 adição à porção de cadeia lateral do ácido alfa-amino, incluem alquil Cl a C6 linear ou ramificado. Aib é um exernplo de um aminoácido alfa, alfa dissubstituído. Enquanto aminoácidos alfa, alfa dissubstituídos podem ser referidos usando referências convencionais isoméricas L- e D-, é para ser 30 entendido que essas referências são para conveniência, e que, quando os substituintes na posição-alfa são diferentes, tal aminoácido pode indiferentemente ser referido como um aminoácido alfa, alfa dissubstituído derivado de isômero L- ou

D'-, conforme apropriado, de um resíduo com a porção de aminoácido de cadeia lateral designada. Assim, o ácido (S)-2- Amino-2-metil- hexanóico pode ser referido tanto como um aminoácido alfa, alfa dissubstituído derivado a partir da L- 5 Nle (Norleucina) ou como um aminoácido alfa, alfa dissubstituídjderivado a partir de O-Ala. Da mesma forma, Aib pode ser referido como um aminoácído alfa, alfa dissubstituído derivado a partir de Ala. Sempre que um aminoácido alfa, alfa dissubstituído é fornecido, é para ser entendido corno 10 incluindo todos as configurações (R) e (S) da mesma.

€3 Um "amino ácido N-substituído" inclui qualquer aminoácido, em que uma fracão ? de arnirioácido de cadeia lateral é covalentemente j-igado ao grupo amino da espinha dorsal, opcionalmente, ern que não existem outros substituintes que não 15 H na posição alfa-carbono. Sarcosina é um exemplo de um aminQácido N-substituído. A título de exemplo, sarcosina pode ser referida como um derivado de aminoácido N-substituído de Ala, em que a porção de aminoácido de cadeia lateral de sarcosina e Ala é a mesma, isto é, metila.

20 As modificações covalentes das sequências de peptídeos da 6 invenção, incluindo subsequências, variantes e formas modificadas das sequêrjcias de peptídeos aqui exemplificados (por exemplo, sequências listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1), estão incluídas na ínvenção. Um tipo de rnodificação 25 covalente inclui reagir resíduos de aminoácido alvo com um agente de derivação orgânico que é capaz de reagir com cadeias - laterais selecionadas ou resíduos . N- ou C-terminais do peptídeo. A derivação com agentes bifuncionais é útil, por exemplo, para o peptídeo de ligação cruzada para uma matriz de 30 suporte ínsolúvel em água ou ·s-uper.fície para uso no método para purificação de anticorpos anti-peptídeo e vice-versa. Os agentes de reticulação vulgarmente utilizados incluem, por exemplo, 1,1-bis(diazoacetil)-2-feniletano, glutarald'eído, ésteres de N-hidroxissuccinimida, por exemplo, ésteres com ácido 4-azidossalicí1ico, imidoésteres homobifuncionais, incluindo ésteres de d.issuccinimidil tais como 3,3'- 5 ditiobis(succinimidilpropionato), maleimidas bifuncionais tais como bis-N-maleimido-1,8-octano e agentes tais como metil-3- [(p-azidofenil)ditio]propioimidato.

Outras modificações incluem desamidação de resíduos glutaminil e asparaginil aos resíduos glutamil e aspartil e10 correspondentes, respectivamente, hidroxilação de prolina e lisina, fosforilação de grupos hidroxila de resíduos serila ou treonila, metilação dos grupos alfa-arnino de lisina, arginina, e cadeias laterais de histidina (TE Creighton, Proteins: Structure e Molecular Properties, WH Freeman & Co., San 15 Francisco, pp 79-86 (1983)), acetilação da amina N-terminal, a amidação de qualquer grupo carboxila C-terminal, etc.

Sequências de peptídeos exemplificadas, e subsequências, variantes e formas modificadas das sequências de peptídeos aqui exemplificados (por exemplo, sequências listadas nas 20 Tabelas 1 a 8 e Figura 1), pode tarnbém incluir alterações da 0 coluna vertebral para a estabilidade, derivados e peptidomiméticos. O terrno "peptidomimético" incluí uma molécula que é um mímico de um resíduo (referido como um "mimético"), incluindo, mas não se limitando a moléculas de 25 núcleo de piperazina, moléculas de núcleo ce'to-pipeEazina e moléculas de núcleo de diazepina. A menos que especificado de outra forma, um mimético de aminoácido de uma sequência de peptídeo da invenção inclui tanto um grupo carboxila e um grupo amino e um grupo que corresponde a uma cadeia lateral de b 30 amínoácido, ou, no caso de um mimético de gl:i[èl"n"a'Tji'?'sem'-c"adêia lateral a não ser hidrogênio.

A título de exemplo, estas incluem os compostos que imitam os estéricos, distribuição da carga de superfície, polaridade, etc, de um aminoácido que ocorre naturalmente, mas não tem de ser um aminoácido, que conferem estabilidade no sistema 5 biológico. Por exemplo, a Prolina pode ser substituída por outras lactamas ou lactonas de tamanho e de substituição adequado; Leucina pode ser substituída por urría alquil-cetona, amida N-substituída, bern como as variações de aminoácidos em comprimento da'cadeia lateral L'sando um grupo alquil, alcenil 10 ou outros substituintes, outros podem ser evidentes para o e perito na arte. O elemento essencial para fazer tais substituições é proporcionar uma molécula de aproximadamente o mesmo tamanho e carga e configuração que o resíduo utilizado para desenhar a molécula. Refinamento destas modificações será 15 feito por meio da análise dos compostos em um funcional (por exemplo, redução da glicemia) ou outro ensaio, e comparando a relação de atividade da estrutura. Tais métodos estão dentro do âmbito de trabalho do perito na especialidade em química medicinal e o desenvolvimento de drogas.

20 Urn outro tipo de modificação das sequências de peptídeos da invenção, incluindo subsequências, variantes de sequências e e formas modificadas das sequências de peptídeos exemplificados (incluindo os peptídeos listados nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1), é glicosilação. Tal como aqui utilizado, "glicosilação" 25 refere-se amplamente à presença, adição ou inserção de uma ou mais porções de açúcar , (por exemplo, carboidratos) a proteínas, lipídeos ou outras moléculas orgânicas. O uso do termo "desglicosilação" aquí geralmente pretende significar a eliminação ou supressão de uma ou mais porções de açúcar (por 30 exemplo, carboidratos). Além disso, a frase inclui alteraçães qualitativas na gliçosilação das proteínas nativas envolvendo uma alteração no tipo e proporções (quantidade) das várias porções de açúcares (por exemplo, carboidratos) presentes.

A glicosilação pode ser conseguida por modificação de um resíduo de aminoácido ou pela adição de um ou mais locais de glicosilação que podem ou não estar presentes na sequência nativa. Por exernplo, um resíduo tipicamente não-glicosilado 5 pode ser substituído por um residuo que pode ser glicosilado. A adição de locais de glicosilação pode ser realizada alterando a sequência de aminoácidos. A alteração da sequência de peptídeo pode ser feita, por exemplo, pela adição ou substituição por um ou mais resíduos de serina ou treonina 10 (para locais de glicosilação O-ligados) ou resíduos de ,,e asparagina (para locais de glicosilação N-ligados). As estruturas de oligossacarídeos N-ligados e O-lígadois e os resíduos de açúcar encontrados em cada tipo podem ser díferentes. Um tipo de açúcar que é comumente encontrado em 15 ambos é o ácido N-acetil-neuramico (doravante referido como ácido siálico). O ácido siálico é normalmente o resíduo terminal tanto de oligossacarídeos N-lígados e O-ligados e, em virtude da sua carga negativa, pode conferir propriedades ácidas à glicoproteína.

20 As sequências de peptideos da invenção podem opcionalmente ser alteradas através de alterações no nível nucleotídeo (por 0 exemplo, DNA), em particular por mutação do DNA que codifica o peptídeo ein bases pré-selecionadas tal que sejam gerados códons que irão traduzir nos aminoácidos desejados. Outro meio 25 de aumentar o número de porções de carboidrato no peptídeo é por acoplamento químico ou enzimático de glicosídeos ao polipeptídeo (ver, por exemplo, em WO 87/05330). Desglicosilação pode ser conseguida através da remoção do local de glicosilação subjacente por deleção da glicosilação 30 por meios químicos e/ou enzimáticos ou por substituição de i cÓdons que codificam os resíduos de aminoácídos que são glicosilados. As técnicas de desglicosilação química são conhecidas e a clivagem enzimática de porções do carboidrato em polipeptídeos pode ser alcançada através do uso de uma variedade de endo- e exo-glicosidases.

Várias linhas de células podern ser usadas para produzir proteínas que estão glicosíladas. Urri exemplo não lirnitativo é 5 redutase di-hidrofolato (DHFR) - células de ovário de hamster chinês deficiente (CHO), que são de uma célula hospedeira utílizada para a produção de glicoproteínas recombinantes. Estas células não expressam a enzima beta-galactosídeo alfa- 2,6-sialiltransferase e, portanto, não adicionam ácido siálico e10 na lígação alfa-2,6 de oligossacarídeos N-ligados de glicoproteínas produzidas nestas células.

Um outro tipo de modificação é conjugar (por exemplo, ligar) um ou mais componentes adicionais ou moléculas no N- e/ou C- terminal de uma sequência de peptídeo da invenção, tais como 15 uma outra proteína (por exemplo, uma proteina que possua uma sequência de grupo amino de ácido heterólogo para a proteína paciente) ou uma molécula carreadora. Assim, uma sequência de peptídeo exemplar pode ser um conjugada com um outro componente ou molécula.

;;'20 Ern determinadas formas de realização, amino- ou carboxi- terminais de uma sequência de peptídeo da invenção podem ser fundidas com uma região Fc de imunoglobulina (por exemplo, Fc humana) para formar um conjugado de fusão (ou molécula de fusão). conjugados de fusão Fc podem aumentar a meia-vida 25 sistêmica de produtos biofarmacêuticos e, assim, o produto biofarmacêutico pode ter atividade prolongada ou exige uma administração menos frequente. Fc liga-se ao receptor Fc neonatal (FcRn) nas células endoteliais que revestern os vasos sanguíneos e, após ligação, a molécula de fusão de Fc está 30 protegido contra a degradação e re-liberação para dentro da circulação, mantendo a molécula em circulação por mais tempo.

Acredita-se que esta ligação Êc seja o mecanismo pelo qual a IgG endógeno rnantém a sua rneia-vida no plasma por mais tempo.

Drogas de fusão Fc bem conhecidas e validadas consistem em duas cópias de um biofarmacêutico ligadas com a região Fc de 5 um anticorpo para melhorar a farmacocinética, solubilidade e a eficiência da produção. Mais recentemente, a tecnologia de fusão de Fc liga uma única cópia de um biofarmacêutico a uma região Fc de um anticorpo para otimizar as propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas do biofarmacêutico, em 10 comparação com os conjugados de fusão Fc tradicionais. "a- 0 Uma modificação do conjugado pode ser usada para produziis uma sequência de peptídeo que retém a atividàde com uma função ou atividade adicional ou complementar da segunda molécula. Por exemplo, uma sequência de peptídeo pode ser conjugada corn uma 15 molécula, por exemplo, para facilitar a solubilidade, arma7,enarrlento, in vivo ou meia-vida de "pratelêira ou estabilidade, redução da imunogenicidade, liberação control-ada ou retardada in vivo, etc. Outras funções ou atividades incluem um conjugado que reduz a toxicidade em relação a uma 20 sequência de peptídeo não conjugado, um conjugado que atinge urn tipo de célula ou .órgão mais efícientemente do que uma 0 sequência de peptídeo não conjugado ou um medicamento para combater rnelhor as causas ou efeitos associados com uma desordem ou doença, tal como definido aqui (por exempl-o, a 25 diabetes).

A eficácia cIínica da terapia de proteínas pode ser limitada pela curta rneia-vida plasmática e susceptibilidade à degradação. Estudos de várias proteínas terapêuticas mostraram que várias modificações, incluindo a conjugação ou ligação da 30 sequência de peptídeo de qualquer uma de uma variedade de poIímeros não proteináceos, por exemplo, polietileno glicol (PEG), polipropilenoglicol ou políoxialquilenos (ver, por exemplo, tipicamente através de uma ligação da fração ligada covalentemente tanto à proteína e ao polímero não proteinác'eo (por exemplo, um PEG) pode prolongar a meia-vida. Tais biomoléculas conjugadas de PEG rriostraram possuir propriedades 5 clínicamente úteis, incluindo melhor estabilidade física e térmica, proteção contra a su,sceptibilidade à degradação enzirnática, solubilidade aumentada, meia-vida circulante in vivo mais prolongada e uma depuração diminuída, imunogenicidade e antigeni-cidade reduzidas e toxicidade 10 reduzida. ., PEGS adequados para conjugação à uma sequência da invenção é geralmente solúvel em água à temperatura ambiente e têm a fórmula geral R(O-CH2-CH2)nO-R, onde R é hidrogênio ou um grupo protetor tal como um grupo alquil ou um grüpQ alcanol e em que 15 n é um número inteiro de 1 a 1000. Quando R é um grupo de proteção, tem 'geralmente 1 a 8 átomos de carbono. O PEG conjugado à sequ.ência de peptídeo pode ser linear ou ramificado. Os derivados de PEG rarnificados, "estrela-PEG" e PEG multi-armados são incluídos na invenção. Um peso molecular 20 do PEG utilizado na presente invenção não é restrito a qualquer intervalo particular, mas certas formas de realização 'K tem urn peso molecular entre 500 e 20.000, enquanto outras formas de realização tem um peso molecular entre 4.000 e

10.000.

25 A invenção inclui composições de conjugados em que os PEGS têm diferentes valores de "n'" e, portanto, os vários diferentes prg estão presentes em proporções espec.íficas. Por exempl-o, algumas composições compreendem uma mistura de conjugados em que n=1, 2, 3 e 4. Em algumas composições, a percentagem de 30 conjugados em que n=l é de 18 a 25%, a percentagem de conjugados em que n=2 é 50 a 66°s, a percentagem de conjugados em que n=3 é 12 a 16% e a percentagem de conjugados ern que n=4 é até 5%. Tais composições podem ser produzidas por condições de reação e os métodos de purificação conhecidos na arte.

PEG pode diretarnente ou indiretamente (por exemplo, através de um intermediário) Iigar-se às sequências de peptídeos dá 5 invenção. Por exemplo, em urna forma de realização, o PEG se liga por meio de uín grupo reativo do terminal (um "espaçador"). O espaçador é, por exemplo, um grupo reativo termínal que media uma ligação entre os grupos amino ou carboxila livres de uma ou mais das sequências de peptídeos e êQ de polietileno glicol. O PEG que tem o espaçador, que pode ser ligado ao grupo amino livre, incluindo o polieti-lenoglicol N- hídroxisuccinilimida, que pode ser preparado por ativação de éster do ácido succínico de. polietilenoglicol com N- hidroxisuccinilimida. Outro polietilenoglicol ativado, o qual 15 pode ser ligado ao grupo amino livre, é 2,4-bis(O- metoxipolietilenoglicol)-6-cloro-s-triazina, que pode ser preparado por reação de polietileno glicol éter monometílico com cloreto cianúrico. O poIietileno glicol ativado que é ligado ao grupo carboxila livre, inclui poIioxietilenodiamina.

20 A conjugação de uma ou mais das sequências de peptídeos da @ invenção ao PEG"que tem um espaçador pode ser efetuada através de vários métodos convencionais. Por exemplo, a reação de conjugação pode ser realizada em solução a um pH de 5 a 10, à teutperatura de 4°C até à temperatura ambiente, durante 30 25 minutos a 20 horas, utilizando uma razão molar de reagente de proteína de a partir de 4:1 a 30:1. As condições de reação podem ser selecionadas para direcionar a reação no sentido de produzir predominanternente um grau de substituição desejado.

Em geral, temperatura baixa, pH baixo (por exemplo, pH=5) e 30 tempo de reação curto tendem a dirninuir o número de PEGs >. ligados, enquanto que a alta temperatura, urri pH neutro a " elevado (por exemplo, pH27) e maior tempo de reação tendem a aumentar o número de PEGs ligados. Vários métodos conhecidos no estado da arte podem ser utilizados para terminar a reação.

Em algumas formas de realização, a reação é terminada por acidificação da mistura reacional e congelamento a, por 5 exemplo, -20°C.

Sequências de peptídeos da invenção, incluindo subsequências, variantes de sequências e forrnas modificadas de as sequências de peptídeos exemplificados (incluindo os peptídeos listados rias Tabelas 1 a 8 e Figura 1), incluem ainda a conjugação de Ey0 macromoléculas grandes, lentamente metabolizadas, tais como proteínas; polissacáridos, tais como sefarose, agarose, celulose, esferas de celulose, arninoácidos poliméricos, tais como ácido poliglutâmico, polilisina, copolímeros de aminoácidos; partículas de vírus inativos; toxinas bacterianas 15 inativadas tais como toxóide da difteria, tétano, cólera, moléculas de leucotoxina; bactérias inativadas e as células dendríticas. Tais formas conjugadas, se desejado, podem ser utilizadas para produzir anticorpos contra as sequências de peptídeos da invenção.

20 Componentes ad.equados adicionais e moléculas de conjugação C) , incluem, por exemplo, a tiroglobulina, alburninas tais como albumina do soro humano (HSA); toxóide do tétano; toxóide diftérico, poliaminoácidos tais como poli(O-lisina:ácido D- glutâinico); polipeptídeos de rotavírus VP6; hemaglutinina do 25 vírus da gripe, a nucleoproteína dç' vírus influenza; hemocianina Keyhole Limpet (KLH) e proteína do núcleo do vi.rus da hepatite B e do antígeno de superfície ou qualquer combinação dos anteriores.

A fusão de albumina a uma sequência de peptídeo invenção pode, 30 por exemplo, ser conseguida por manipulação genética, de tal modo que o DNA que codifica a HSA (alburnina sérica humana) ou um seu fragmento, seja ligado ao DNA que codifica para urna sequência de peptídeo. Depois dísso, um hospedeiro adequado pode ser transformado ou transfectado com a sequência de nucleotídeos fundida sob a forma de, por exemplo, um plasmídeo 5 adequado, de modo a expressar um polipeptídeo de fusão. A expressão pode ser efetuada in vitro a partir de, por exemplo, células procarióticas ou eucarióticas, ou in vivo, a partir de, por exemplo, um organismo transgênico. Em algumas formas de realização da invenção, a expressão da proteína de fusão é' 10 realizada em l.inhas celulares de mamíferos, por exemplo, B linhas celulares de CHO.

Outros meios para fundir geneticamente proteínas alvo ou peptídeos de albumina incluem uma tecnologia conhecida como Albufuse® (Novozymes Biopharma A/S, Dinamarca) e as sequências 15 de peptideos terapêuticos conjugados frequentemente tornam-se muito mais eficazes com melhor absorção no organismo. A tecnologia tem sido utilízada comercialmente para produzir Albuferon" (Human Genome Sciences), uma c"ombinação de alburnina e interferon cx-2B utilizados para tratar a infecção pelo vírus 20 da hepatite C.

e Uma outra forma de realização envolve o uso de um ou rnais anticorpos humanos de domínio (c1Ab). c1Abs são as nienores unidades funcionais de ligação de anticorpos humanos (IgGs) e têm características de estabilidade e solubílidade favoráveis.

25 A tecnol-ogia envolve um dAb (s) conjugado à HSA (formando assim um "AlbudAb", ver, por exemplo, EP1517921B, WO2005/118642 e WO2006/051288) e uma molécula de interesse (por exemplo, uma sequência de peptídeos da invençãc'). Albuàbs são muitas vezes menores e mais fáceis de fabricar em 30 sistemas de expressão microbianos, tais como bactérias ou fungos, do que as atuais tecnologias utilizadas para prolongar o tempo de meia-vida dos peptídeos. Como HSA tem uma meia-vida,

de cerca de três semanas, a molécula conjugada resultante Ç ' rnelhora a meia-vida. Uso da tecnologia de dAb pode tarrbérn melhorar a eficácia da molécula-de interesse.

Componentes adequados adicionais e moléculas para conjugação 5 incluem as que são adequadas para o isolamento ou purificação. Exemplos não-limitativos particulares incluem moléculas de ligação, tal como biotina (par de ligação específico avidina- biotina), um anticorpo, um receptor, um ligante, uma lectina ou moléculas que compreendem um suporte sóIido, incluindo, por ey0 exemplo, de plástico ou de pérolas de poliestireno, pIacas ou grânulos, esferas magnéticas, tiras de teste e membranas.

Os métodos de purificação, tais como crQmatografia de troca catiônica, podem ser 'usados para separar conjugados por ¶ diferença de carga, o que separa efetivamente os conjugados 15 nos seus vários pesos moleculares. Por exemplo, a coluna de permuta catiônica mde ser carregada e depois lavada com -20mM ~ de acetato de sódio, pH-4 e, em seguida, eluída com um gradiente Iinear (OM a 0,5 M) de NaCl tamponada a um pH de 3 a 5,5, de preferência a um pH-4.5. O conteúdo das frações 20 obtidas por cromatografia de permuta catiônica pode ser 'O identificado pelo peso molecular usando métodos convencionais, por exemplo, espectroscopia de massa, SDS-PAGE ou outros métodos conhecidos para separar entidades moleculares pelo peso molecular. Uma fração é então adequadamente identificada, 25 que contém o conjugado possuindo o número desejado de PEGs lig'ados, purificada livre de sequências de proteínas não modificadas e de conjugados com outros números de PEGS ligados.

Ainda em outras formas de reaj-ização, uma sequência de 30 peptídeo da invenção está rela,cionada cont um agente quimico (por exemplo, uma imunotoxina ou agente quimioterapêutico),

íncluindo, mas não se limitam a, um agente citotóxico, incluindo taxol, citocalasina B, gramicidina D, mitomicina, etoposídeo, tenoposídeo, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorrubicina, daunorrubicina e análogos ou homólogos destes. 5 Outros agentes quimicos incluem, por exemplo, anti-metabólitos (por exemplo, metotrexato, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluorouracila decarbazina), agentes' alquilantes (por exemplo, rnecloretamina, carmustina e lomustina, ciclotosfamida, bussulfano, dibromomanitol, estreptozotocina, 10 mitomicina C e cisplatina), antibióticos (por exemplo, 0 bleomicina) e agentes anti-mitóticos (por exernplo, vincristina e vinblastina). Citotoxinas podem ser conjugadas a um peptídeo da invenção utilízando a tecnologia de Iigante conhecido na arte e aqui descrito.

15 Outros componentes adequados e moléculas para conjugação incluem as que são adequadas para a detecção de um ensaio.

Exemplos não-limitativos particulares incluem marcadores detectáveis, tal como um radioisótopo (por exernplo, 125I, 35S, 32p, 33p), urrta enzima que gera um produto detectável (por 20 exernplo, luciferase, j3-galactosidase, peroxidase de rábano e siívestre e fosfatase alcalina), uma proteína fluorescente, uma proteína cromogênica, corante (por exemplo, isotiocianato de fluoresceína); metais emissores de fluorescência (por exemplo, 152Eu); compostos quimioluminescentes (por exemplo, 25 luminol e sais de acridinio), compostos bioluminescentes (por exemplo, luciferina) e as proteínas fluorescentes. Marcadores indiretos incluem anticorpos marcados ou detectáveis que se ligam a uma sequência de peptídeo, em que o anticorpo pode ser de"tectado.

30 Em certas formas de realização, uma sequência de peptídeo da presente invenção é conjugada a um isótopo radioativo para gerar um radiofármaco citotóxico (radioímunoconjugados) úteis como um agente de diagnóstico ou terapêutico. Exernplos de tais isótopos radioativos incluem, rrias não estão limitados a, iodo'3 índio1I', ítrio90 e lutécio177, Métodos para a preparação de radioimunoconjugados são conhecidos pelos especialistas na 5 matéria. Exemplos de radioimunoconjugados que estão disponíveis comercialmente incluem ibritumomab, tiuxetano e tositumomab. q Outros meios e métodos incluídos na invenção para prolongar a meia-vida de circulação, aumentarido a estabilidade, reduzindo «0 a folga ou alterar a imunogenicidade ou alergenicidade de uma sequência de peptídeos da invenção envolve a modificação da sequência d"e peptídeo por HESylation, que utiliza derivados de amido hidroxietil ligados a outras moléculas, a fim de . modificar as características da mol-écula. Vários aspectos da 15 HESylation são descritos na, por exemplo, Patente U.S. Appln. N°s 2007/0134197 e 2006/0258607.

- Qualquer um dos componentes acima e moléculas usadas para rnodificar as sequências de peptídeos da invenção podem opcionalrnente ser conjugados através de um ligante. Os . 20 ligantes adequados incluem ligantes "fl-exíveis" que são, ê geralmente, de comprimento suficiente para permitir algum movimento entre as sequências de peptídeos modificados e os componentes ligados e moléculas. As moléculas de ligação são geralrnente de cerca de 6 a 50 átomos de comprimento. As 25 moléculas de ligação podem também ser, por exemplo, aril acetileno, oligômeros de etileno glicol contendo 2 a 10 unidades monoméricas, diaminas, diácidos, aminoácidos ou suas combinações. Os ligantes adequados podem ser facilmente selecionados e pode ser de qualquer comprimento adequado, tais 30 corno 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 10 a 20, 20 a 30, 30 a 50 aminoácidos (por exemplo, Gli).

Os ligantes flexíveis exemplares incluem polímeros de glicina (G)n, polímeros de glicina-serina (por exemplo, (GSÁ, GSGGSn e GGGSn, onde n é um número inteiro de pelo menos um), polimeros de glícina-alanina, polímeros de alanina—serina e outros 5 ligantes flexíveis. Os polímeros de glicina e glicina-serina são relativamente não estruturados e, portanto, podem servir como uma amarra neutra entre componentes. Os ligantes flexíveis exemplares incluem, mas não estão limitados a GGSG, GGSGG, GSGSG, GSGGG, GGGSG e GSSSG.

6!0 As sequências de peptídeos da invenção, incluindo as variantes e subsequências FGF19 e FGF21 e as fusões e quimeras FGF19/"GF21 listadas nas Tabelas I a 8 e Figura 1, bem como subsequências, variantes de sequências e formas modificadas das sequências listadas nas As tabelas 1 a 8 e Figura 1 tem 15 uma ou mais atividades como aqui estabelecido. Um exemplo de uma atividade é atividade de redução de glicose. Outro exemplo de uma atividade é a estimulação ou formação reduzida de carcinoma hepatocelular (HCC), por exempj-o, em comparação com EGF19. Um exemplo adicional de uma atividade é diminuíção ou 20 redução de lipídeos (por exemplo, triglicerídeos, colesteroi, não-HDL), aumento de atividade HDL, por exemplo, em comparação C) corn o FGF21. Outro exemplo de uma atividade é uma baixa ou reduzida massa muscular magra reduzindo a ativídade da massa, por exemplo, em comparação com FGF21_ Ainda outro exemplo de 25 uma atividade é a ligação ao receptor-4 do fator de crescimento de fibroblastos (GFR4) ou ativando FGFR4, por exemplo, as sequências de peptídeos que se ligam a FGFR4 com uma afinidade comparável ou maior do que a afinidade de ligação FGF19 para FGFR4, e sequências de peptídeos que ativam 30 FGFR4 a urna extensão ou quantidade equivalente ou maior do que FGF19 ativa E'GFR4. Ainda outros exemplos de atividades incluem a regulação negativa ou redução da expressão do gene da aldo- ceto redutase, por exemplo, em comparação corn FGFI9; sobre-

regulação ou o aumento da ,expressão do gene Slc1a2em comparação com FGF21.

Mais particularmente, as sequências de peptídeos da invenção, inciuindo variantes e subsequências FGF19 e FGF21 e as fusões 5 e quimeras FGF19/FGF21 listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1, bem como subsequências, variantes e formas modificadas das sequências listados nas Tabelas 1 a 8 e na Figura 1 incluem os que têm as seguintes atividades: sequências de peptídeo tendo reduzida formação de carcinoma hepatocelular (HCC), em

P 6Q cornparação com a formação de FGF19 ou uma variante de sequência de FGF 19 tendo qualquer das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituído para a sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19; sequências de peptídeos com 15 maior atividade de redução da glicemia em comparação com FGF19 ou sequência variante FGF 19 com uma das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituído para a sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19; sequências de peptídeos 20 com menor ativídade crescente dos lipídios (por exemplo, menos de trigLicerídeos, colesterol, não-HDL) ou maior aumento da e atividade de HDL em comparação corn FGF19, ou uma sequência variante FGF 19, com uma das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, giÍ, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, 25 WGDI, WGDP ou FGDPI substituído para a sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19, e sequências de peptídeos com menos massa magra reduzindo a atividade ern comparação com FGF21.

Maís particujarmente, as sequências de peptídeos da invenção, 30 incluindo variantes e subsequências de FGF19 e FGF21 e fusões e quimeras de FGF19/FGF21 listados nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1, bem como subsequências, variantes e formas modificadas das sequências listados nas Tabelas 1 a 8 e na Figura 1 incluem os que têm as seguintes atividades: sequêncías' de peptídeos que se ligam ao receptor do fator de crescimento de fibroblastos-4 (FGFR4) ou ativar FGFR4, tais como sequências de peptídeos que 5 se ligam a FGFR4 com uma afinidade de FGF19 comparável ou maior que afinidade de ligação para FGFR4; sequências de peptídeo que ativam FGFR4 a uma extensão ou quantidade equivalente ou maior do que FGF19 ativa FGFR4; sequências de peptídeos que regulam para baixo ou reduzem a expressão do 10 gene da redutase aj-do-ceto, por exemplo, ern comparação com 0 FGF19; sequências de peptídeo que regulam para cima ou aumentam a família portadora do carreador 1, membros 2 (Slc1a2) a expressão do gene em comparação com FGF21.

As atividades tais como, por exemplo, formação de carcinoma 15 hepatocelular (HCC) ou tumorigenesis, atividade de redução da glicose, aumento da atividade de lipídios ou redução da atividade massa magra pode ser verificada em um animal, como um rato db/db. Medição da ligação a FGFR4 ou ativação do F'GFR4 pode ser determinada através de ensaios aqui descritos (ver, 20 por exemplo, Exemplo 1) ou conhecida para o especialista na matéria.

e O termo "ligar'" ou "ligação", quando utilizado em referência a uma sequência de peptídeo, significa que a sequência do peptídeo interage ao nível molecular. Assim, uma sequência de 25 peptíde.o que se liga a FGFR4 liga-se a totalidade ou uma parte da sequência do FGFR4. Ligação específica e seletiva pode ser distinguida de ligação utilizando ensaios não específicos, conhecidos na arte (por exemplo, ligação de cornpetição, imunoprecipitação, ELISA, citometria de fluxo, Western blot).

30 Os peptídeos e peptidomiméticos podim ser produzidos e isolados utilizando métodos conhecidos na arte. Os peptídeos podem ser sintetizados, nò todo ou em parte, usando métodos químicos (veja, por exemplo, Caruthers (1980) Nucleic Acids

Res.

Symp.

Ser. 215, Horn (1980); e Banga, A.K., Therapeutic Peptides and Proteins, Formulation, Processing and Delivery

5 Systems (1995) Technomic Publishing Co., Lancaster, PA). A síntese de peptídeos pode ser realizada usando várias técnícas de fase sólida (ver, por exemplo, Roberge Science 269:202 (1995); Merrifield, Methods Enzymol 289:3 (1997)) e a síntese automática pode ser conseguida, por exemplo, utilizando o ABI

10 431A Peptide Synthesizer (Perkin Elmer), de acordo coiil as

@ instruções do fabricante.

Os peptídeos e miméticos de peptídeos podem tambérn ser sintetizados utilizando rnetodologias combinatórias.

Resíduos síntéticos e . polipeptídeos incorporando mirnéticos podem ser sintetizados

15 utilizando urrta variedade de processos e metodologias conhecidas na técnica (ver, por exemplo, Organic Syntheses Collective Volumes, Gilman, et al. (Eds) john Wíley & Sons, Inc., Nova Iorque). Peptídeos rnodificados podêm ser produzidos por métodos de modificação química (ver, por exemplo, 20 Belousov, Nuc-Zeic Acids Res. 25:3440 (1997); Frenkel, Free Radic.

Biol.

Med. 19:373 (1995); e Blommers, Biochemistry

0 33:7886 (1994)). Variações na sequência de peptídeo, derivados, substituições e modíficações podein ser feitas usando métodos tais como mediada por oligonucleotídeos 25 (dirigida ao local), mutagênese, varrimento de alanina e mutagênese baseado PCR.

A m'-itagênese dirigida ao local (Carter 'et al., Nucl.

Acids Res. , 13:4331 (1986), Zoller et al.,

Nucl.

Acids Res. 10:6487 (1987)), mutagênese de cassete (Wells et al., Gene 34:315 (1985)), mutagênese de seleção de 30 restrição (Wells et al. phílos.

Trans.

R.

Soc.

London SerA 317:415 (1986)) e outras técnicas podem ser realizadas no DNA clonado para produzir sequências de invenção peptídicos,

variantes, fusões, quimeras e variações, derivados, substituições e modificações destes.

A sequência de peptídeo "sintetizada" ou "fabricada" é um peptídeo feito por qualquer método que envolve a manipulação 5 pela mão do homem. Tais métodos incluern, mas não estão limitados ao acima mencionado, tal como a síntese química, a tecnologia de DNA recornbinante, a fragmentação bioquímica ou enzimática de moléculas maiores e combinações dos anteriores.

As sequências de peptídeos da invenção, incluindo ELO subsequências, variantes de sequências e formas modificadas das sequências exemplificadas de peptideos (por exemplo, sequências listadas nas Tabelas 1 a 8 e na Figura I), podem também ser modificadas de modo a formar uma molécula quimérica. De acordo com a invenção, há sequências de 15 peptídeos previstas que incluem um domínio heterólogo. Esses domínios podem ser adicíonados ao terminal amino ou no terminal carboxila da sequência de peptídeo. Domínios heterólogos também podem ser posicionados no interior da sequência de peptideo, e/ou alternativamente flanqueado por 20 FGF19 e/ou sequências de aminoácidos derivadas FGF21.

e O termo "peptídeo" inclui também dímeros ou multímeros (oligômeros) de peptídeos. De acordo com a invenção, também são fornecidos dímeros ou multímeros (oligômeros) das sequências de peptídeos exemplificados, bem corno 25 subsequências, variantes e formas modificadas das sequências de peptídeos exemplificados (por exemplo, sequências listadas nas Tabelas 1 a 8 e na Figura 1).

A invenção proporciona ainda moléculas de ácido nucleico que codificam sequências de peptídeos da ínvenção, incluindo 30 subsequências, variantes de sequências e formaS modificadas das sequências listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1 e vetores que incluem o ácido nucleico que codifica o peptídeo. Por conseguinte, "ácidos nucleicos'" incluem aqueles que codificam as sequências de peptídeos exemplificados aqui descritos, bem 5 como aqueles que codificam para subsequências funcionais, variantes de sequências e as formas modificadas das sequências de peptídeos exemplificados, tanto tempo quanto o que precede retêm a atividade ou função detectável ou mensurável. Por exemplo, uma subsequência, uma variante ou uma forma lO modificada de um peptídeo de sequência exemplificada aqui 0 divulgadas (por exemplo, uma sequência listada nas Tabelas 1 a 8 e E'igura 1) que retém alguma capacidade para diminuir ou reduzir a glicose, fornece a homeostase normal da glicose ou reduz as condições histopatológicas associadas à hipergl-icernia 15 crônica ou aguda in vivo, etc.

O ácido nucleico, o qual também pode ser referido aqui como um gene, polimjcleotídeo, sequência de nucleotídeos, iniciadores, oligonucleotídeo ou sonda refere-se a polímeros contendo purina e pirimidina, naturais ou modificados, de qualquer 20 comprimento, sejam polirribonucleotídeos ou polidesoxir- ribonucleotídeos ou mistura polirribo-polidesoxirribo e nucleotídeos e foru'.as a-anoméricas do mesmo. Dois ou rnais poIímeros contendo purina e pirimidina são tipicamente ligados por uma ligação fosfoéster ou seu análogo. Os termos podem ser 25 utílizados indiferentemente para se referir a todas as formas de ácido nucleico, íncluindo o ácido desoxirribc)nuc1eicQ (DNA) e ácido ribonucleico (RNA). Os ácidos nucléicos podem ser vertente individual, dupla ou triplex, Iinear ou circular. Ácidos nucleicos incluem DNA genômico e CDNA. RNA de ácido 30 nucleico pode ser cortado ou não cortado RNArrt, RNAr, RNAt ou anti-sentido. Os ácidos nucleicos que ocorrem naturalmente incluem, sintético, bem como os análogos de nucleotídeos e seus derivados.

Como resultado da degenerescê-ncia do código genético, as moléculas de ácidos nucleic.os que i.ncluem sequêricias degeneram em relação a moléculas de ácido nucleico que codificam as sequências de peptídeos da invenção. Assim, as sequências de 5 ácido nucleico degeneradas que codificam as sequências de peptídeos, incluindo subsequências, variantes e formas modificadas das sequências de peptídeos aqui exemplificados (por exernplo, sequências listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1), são fornecidos. O termo "complementar", quando utilizado 10 em referência a uma sequência de ácido nucleico, significa que 0 as regiões mencionadas são 100% complementares, isto é, exibem 100% de emparelhamento de base sem incompatibilidades.

O ácido nucleico pode ser produzido utilizando qualquer uma variedade de padrão de clonagem e métodos de síntese química 15 conhecidos e pode ser alterado intencionalmente por rnutagênese . dirigida ao local ou outras técnicas recombinantes conhecidas de um perito na arte. Pureza de polinucleotídeos pode ser determinada através de sequenciamento, eletroforese em gel, espectrometria de UV.

20 Os ácidos nucleicos podem ser inseridos em uma construção de 0 ácido nucleico, em que a expressão do ácido nucleico é influenciada ou regulada por um "elemento de controle de expressão", aqui referido como um "cassete de expressão'". O termo "elemento de controle de expressão" refere-se a um ou 25 mais elementos da sequência de ácido nucleico que regulam ou influenciam a expressão de urna sequência de ácido nucleico ao qual está ligado operacionalmente. Um elemento de controle de expressão pode incluír, conforme apropriado, promotores, potenciadores, terminadores de transcrição, silenciadores de 30 genes, um códon de inicio (por exemplo, ATG) na frente de um . gene que codifica proteína, etc.

Um eíemento de controle de expressão operativamente ligado a uma sequência de ácido nucleico controla a transcrição e, quando adequado, a tradução da sequência de ácido nucleico. O termo "ligado operacionalmente" refere-se a uma justaposição 5 em que os componentes referidos estão numa relação que lhes permite funcionar no seu modo pretendido. Tipicamente, os elementos de controle de expressão são justapostos nas extremidades 5' ou 3' dos genes, mas tambérn pode ser intrônica.

éL0 Os elementos de controle de expressão incluem elementos que ativam a transcrição de forma constitutiva, que são induzíveis (isto é, requere um sinal externo ou estímulos de ativação), ou inativação (ísto é, requer urrt sinal para desativar a transcrição, quando o sinal não está mais presente, 15 transcrição é ativada ou "desativada"). Também incluído nos cassetes de expressão da presente invenção estão elementos de controle suficientes para tornar a expressão de genes controlável para tipos de células ou tecidos (por exemplo, elementos de controle específicos do tecido) específicas. 20 Tipicamente, tais elementos estão localizados a rnontante ou a jusante (isto é, 5' e 3') da sequência de codificação. Os prornotores são geralmente posicionados a 5' da sequência de codificação. Os promotores produzidos por DNA recombinante ou técnicas de síntese podem ser utilizados para proporcionar a 25 transcrição dos polinucleotídeos da invenção. Um "promotor" normalmente significa um elemento de uma sequência mínima suficiente para transcrição direta.

Os ácidos nucleicos podem ser inseridos dentro de um [£Lasmídeo para a transformação em uma célula hospedeíra e para 30 subsequente expressão e/ou manipulação genética. Um plasmíde'o é um ácido nucleico que pode ser estavelmente propagado numa célula hospedeíra; plasmídeos podem, opcionalmente, conter os elementos de controle da expEessão, a fim de dirigir a expressão do ácido nucleíco. Para os fins desta invenção, um vetor é sinônimo de um plasmídeo. Plasmídeos e vetores geralmente contêm pelo menos uma origem de replicação para a 5 propagação de uma célula e um promotor. Os plasmídeos e os vetores também podem incluir um elemento de controle de expressão para a expressão numa célula hospedeira, e são, portanto, úteis para a expressão e/ou a manipulação genética dos ácidos nucleicos que codificam sequências de peptídeos, 10 que expressam as sequências de peptídeos em células e hospedeiras e organismos (por exemplo, um paciente em necessidade de tratamento) ou a produção de sequências de peptídeos, por exemplo.

Tal como aqui utilizado, o termo "transgene" designa. um 15 polínucl-eotídeo que tenha sido introduzido numa célula ou organismo por artifício. Por exemplo, uma célula tendo um transgene, o transgene 7 foi introduzido por manipulação genética ou "transformação'" da célula. Uma célula ou progenia em que o transgene foi introduzido é referida como uma "célula 20 transformada" ou "transformante". Tipicamente, o transgene está incluído na progenitura do transformante ou torna-se uma e parte do organismo que se desenvolve a partir da célula. Os transgenes podem ser inseridos no DNA cromossômico ou mantidos como um plasmídeo auto-replicante, YAC, minicromossomo ou 25 semelhantes.

Promotores do sistema bacteriano inclu.em T7 e promotores indutíveis tais como pL do bacteriófago 2\, plac, ptrp, ptac (promotor híbrido ptrp-lac) e promotores que respondem a tetraciclina. Os prornotores do sistema de células de inseto 30 incluem promotores constitutivos ou induzíveis (por exemplo, de ecdisona). Prornotores constitutívos celulares de mamíferos incluem SV40, RSV, vírus do pa,piloma bovino (BPV) e outros promotores de vírus ou promotores indutíveis derivados do genoma de células de mamíferos. (por exemplo, promotor de metalotioneína IIA; promotor de choque térmico) ou de vírus de mamíferos (por exemplo, o promotor tardio de adenovirus, 5 repetição terminal longa do vírus do tumor marnário de rato induzível). Alternativamente, o genoma retroviral- pode ser geneticamente modificado para introduzir e dirigir a expressão de uma sequêncía de peptídeos em células hospedeiras apropriadas.

e10 Como os rnétodos e usos da presente invenção incluem a distribuiçào in vivo, os sistemas de expressão incluem ainda vetores desenhados para o uso in vivo. Exemplos não- limita'tivos part.iculares incluem vetores adenovirais (Patentes U.S. No. 5.700.470 e 5.731.172), vetores adeno-associados 15 (Patente U.S. No. 5.604.090), vetores de vírus herpes simplex (Patente U.S. No. 5.501.979), vetores retrovirais (Patente U.S. No. 5.624.820, 5.693.508 e 5.674.703), vetores BPV (Patente U.S. No. 5.719.054), vetores de CMV (Patente U.S. No.

5.561.063) e vetores parvovírus, rota,vírus, vírus de Norwalk e 20 lentivirais (\Ter, por exemplo, Patente U.S. No. 6.013.516). Os vetores incluem aqueles que distríbuem genes às células do e trato intestinal, incluindo as células estaminais (Croyle et al., Gene Ther. 5:645 (1998); S.J. Flenning, Adv. Drug Deliv. Rev. 17:341 (1997), U.S. Patent Nos. 5,821,235 e 6,110,456). 25 Muitos destes vetores têm sido aprovados para estudos em humanos.

Os vetores de levedura incluem promotores constitutivos e induzíveis (ver, por exemplo, Ausubel et al., In: Current Protocols in Molecular Biology, Vol'. 2, Cap. 13, ed, Greene 30 Publish Assoc & Wiley Interscience, 1988; Grant et al. Methods in Enzymology, 153:516 (1987), eds. Wu & Grossman; Bitter Methods in Enzymology, 152:673 (1987), eds Berger & Kimmel,

Acad Press, N.Y.; e, Strathern et al., The Molecular Bio1ogy of the Yeast Saccharomyces (1982) eds. Cold Spring Harbor Press, Vols. I and II). Dm promotor de levedura constitutivo como ADH ou LEU2 ou um promotor de índução, como GAL pode ser 5 usada (R. Rothsteín In: DNA Cloning, A Practical Approach, Vol.11, Ch. 3, ed. D.M. Glover, IRL Press, Wash., D.C., 1986). Os vetores que facilitam a integração das sequências de ácidos nucleicos estranhos no cromossoma de levedura, através de recombinação homóloga, por exemplo, sào conhecidos na arte.

10 Cromossomas artificiais de levedura (YAC) são tipicamente e utilizados quando os polinucleotídeos inseridos são demasiado grandes para os vetores mais convencionais (por exemplo, superior a cerca de 12 Kb).

Os vetores de expressão também podem conter um marcador 15 selecionável que confere resistência a uma pressão seletiva ou marcador identificável (por exemplo, beta-galactosidase), permitindo assim que as células com o vetor sejam selecionadas para cultivo e expandidas. Alternativamente, um marcador selecionável pode ser um" segundo vetor co-transfectado para 20 uma célula hospedeira corri um primeiro vetor contendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de peptídeos. Sistemas de e seleção incluem, mas não estão limitados ao vírus herpes sirnplex do gene da timidina-cinase (Wigler et al., Cell 11:223 (1977)), gene da hipoxantina-guanina (Szybalska et al. Proc.

25 Natl. Acad. Sci. USA 48:2026 (1962)) e genes da adenina- fosforribosiltransferase (Lowy et al., Cell 22:817 (1980))) que podem ser empregues em células tk-, hgprt- ou aprt-, respectivamente. Além disso, a resistência anti-metabólito pode ser utilizada como a base de seleção para dhfr, que 30 confere resistência ao metotrexato (O'Hare et al., Proc. Natl.

Acad. Sci. USA 78:1527 (1981)); o gene gpt, que confere resistência ao ácido micofenólico (Mulligan et al., Proc.

Natl. Acad. Sci. USA 78:2072 (1981)); gene da neomicina, que confere resistência ao aminoglicosídeo G-418 (Colberre-Garapin . et al., j. Mol. Biol. 150:1 (1981)); puromicina; e gene da higromicina, que confere resistência à higromicina (Santerre et al., Gene 30:147 (1984)). Genes selecionáveis adicionais 5 ' incl-uem o trpB, que permite que as células utilizem indol ern vez de triptofano; hisO, que perrnite que as células utilizern histinol em vez de histidina (Hartrnan et al., Proc. Natl.

Acad. Sci. USA 85:8047 (1988)) e ODC (ornitina descarboxilase), que confere resistência ao inibidor da 10 ornitina-descarboxij-ase, 2-(difluorometil)-DL-ornitina, DFMO @ (McConlogue (1987) In: Current Communications in Molecular . Biology, Cold Spring Harbor Laboratory).

De acordo com a invenção, são proporcionadas célu1-a(s) transformada(s) (in vitro, ex vivo e in vivo) e células 15 hospedeiras que produzem uma variante ou fusão de FGF19 e/ou FGF21 como aqui estabelecido, onde a expressão de uma variante ou fusão de FGFI9 e/ou FGF21 é conferida por um ácido nucleico que codifica a variante ou fusão de FGF19 e/ou FGF21. Células transformadas e hospedeiras que expressam as sequências de 20 peptídeos da invenção incluem tipicamente um ácido nucleico @ que codifica a sequência de peptídeo invenç.ão. Numa forma de realização, uma célula transforrnada ou hospedeira é uma célula procarióti-ca. Numa outra forma de realização, uma célula transformada ou hospedeira é uma célula éucariótica. Em vários 25 aspectos, a célula eucariótica é uma célula de levedura ou mamífero (por exemplo, humano, prirnata, etc.).

Tal como aqui utilizado, uma célula "transforrnada" ou "hospedeira" é uma célula na qual um ácido nucleico é introduzido, 1 que pode ser propagado e/ou transcrito para a 30 expressão de uma sequência de peptídeos codificada. O termo inclui também qualquer descendência ou subclone.s da célula hospedeira.

As células hospedeiras e transformadas incluem, mas não estão limitadas a microorganismos, tais como bactérias e leveduras e plantas, insetos e células de mamíferos. Por exemplo, as bactérias transformadas corn o ácido nucleico recombinante de 5 vetores de expressão de bacteriófago, plasmídeo ou ácido nucleico cosmídeo; levedura transforrnada com vetores de expressão de levedura recombinante, sistemas de células vegetais infectadas com vetores de expressão de vírus recorribinantes (por exemplo, vírus do mosaico da couve flor, IO CaMV; vírus do mosaico do tabaco, TMV) ou transformadas com 6 vetores recombinantes de expressão de plasinídeo (por exemplo, plasmídeo Ti), sistemas de células de insetos infectados com vetores de expressão de vírus recombinantes (por exemplo, baculovírus) e os sistemas de células animais infectadas com 15 vetores de expressão de virus recombinantes (por exemplo, retrovírus, adenovirus, vírus vaccinia) ou sistemas de células de animais transforrnados modificados para a propagação ou eXpressão transitória ou estável.

Para usos e métodos de terapia genética, uma célula 20 transformada pode ser de um paciente. U-na célula de um paciente pode ser transformada com um ácido nucleico que O codifica uma sequência de peptídeo invenção, como aqui estabelecida in vivo. Em alternativa, uma célula pode ser transformada in vitro com um transgene ou urri poIinucleotídeo, 25 e, em seguida transplantada para um tecido do paciente, a fim de efetuar o tratamento. Alternativamente, células primárias isoladas ou de uma Iinha de células estabelecidas podeín ser transformadas com um transgene ou um polinucleotídeo que codifica uma variante de FGF19 e/ou FGF21 ou uma 30 fusão/sequência quiméríca (ou variante) do mesmo, tal como uma sequência de peptídeo quimérico, incluindo toda ou uma porção de FGE19 ou'incluindo a totalidade ou uma porção de FGF21 e em seguida, opcionalmente, transplantadas paFa um tecido de um paciente.

Células-alvo não-limitantes para a expressão de sequências de peptídeos, em particular para a expressão in vivo, incluem 5 células do pâncreas (células ilhotas), células musculares, células das mucosas e células endócrinas. Tais células endócrinas pòdern proporcionar a produção indutível (secreção) de uma variante de FGF19 e/ou FGF21 ou uma fusão/sequência quimérica (ou variante) do rnesmo, tal como uma sequência de 6Q peptídeo quimérico, incluindo toda ou uma porção de FGF19 ou incluindo todas ou uma porção de FGF21. As células adicionais para transformar incluem células estaminais ou outras células multipotentes ou pluripotentes, por exemplo, as células . progenitoras se diferencia-n em várias células do pâncreas 15 (células ilhotas), céluj-as musculares, células das mucosas e células endócrinas. Segmentação das células estaminais fornece expressão de longo prazo de sequências de peptídeos da invenção.

Tal como aqui utilizado, o termo "cultura", quando utilizado 20 em referência a uma célula, significa que a célula é cultivada e in vitro. Um exemplo particular de tal célula é uma célula isolada a partir de um paciente e cultivada ou adaptada para crescimento em cultura de tecidos. Outro exemplo é uma célula geneticamente manipulada, in vitro e transplantada de volta 25 para o mesmo tipo ou um paciente díferente.

O termo "isolado", quando utilizado em referência a uma célula, significa que uma célula ·é separada a partir do seu ambiente natural in vivo. Células "cultivadas"" e "isoladas" podem ser manipuladas pela mão do homem, tais como 30 geneticamente transformada. Estes termos incluem toda a descendêncía das células, incluindo as células descendêntes que podem não ser idênticas à célul-a parental, devido a mutações que ocorrem durante a dívisão celular. Os termos não incluem urn ser humano completo.

Ácidos nucleicos que codificam sequências de peptídeos da 5 invenção podem ser introduzidos para a expressão estável em células de um organismo inteiro. Tais organismos, inc1uindo animais transgênicos não humanos, são úteis para estudar o efeito da expressão de peptídeos em todo um animal e o benefício terapêutico. Por exemplo, como aqui descrito, a @!0 produção de uma variante de FGF19 e/ou FGF21 ou uma.

fusão/sequência quiméríca (ou variante) do mesmo, tal como uina sequência de peptídeo quimérico, incluindo toda ou uma porção de FGF19 ou incluindo a totalidade ou uma porção de FGF21 como ' aqui estabelecido, em ratos glicose reduzido e é 15 antidiabética. 7m--- Estirpes de ratos que se desenvolvem ou que são susceptíveis ao desenvolvimento de uma doença em particular (por exemplo, diabetes, desordens degenerativas, câncer, etc) também são úteis para a introdução de proteínas terapêuticas, tal como 20 aqui descrito, a fim de estudar o efeito da expressão da © proteína terapêutica do rato su,scetíveis à. doença. Modelos « transgênicos e animais genéticos que são suscetíveis à doença em particular ou em condições fisiológicas, como ratos diabéticos (STZ) induzidos. por estreptozotocina (STZ), são 25 metas adequadas para expressar as variantes de FGF19 e/ou FGF21, fusões/sequências quiméricas (ou variante) destes, tais como uma sequência de peptídeo quimérico, incluindo toda ou uma porção de FGF19 ou incluindo a totalidade ou uma porção de FGF21, como aqui estabelecido. Assim, de acordo com- a 30 invenção, são proporcionados anirriais transgênicos não humanos que prodüzem uma' variante de FGF19 e/ou FGF21 ou uma fusão/sequên,c.ia quirnérica (ou variante) do mesmo, tal como uma sequência de peptídeo quimérico, incluindo toda ou uma porção de FGF19 ou incluindo a totalidade ou uma porção de FGF21, a produção das quais não ocorre naturalmente no animal que é conferida por um transgene presente nas células somáticas ou 5 germinais do animal.

O termo "animal transgêni.co" refere-se a urn anirnal cujas células somáticas ou da linha germinal contém ínformação genética recebída, direta ou indiretamente, através de manípulação genética deliberada a nível subcelular, tal COUlO €g10 por micro-injeção ou infecção com vírus recombinante. O termo "transgênico" inclui ainda as células ou tecidos (por exemplo, "célula "transgêníca", "tecido transgênico") obtidos a partir de um animal transgênico geneticamente rnanipulado, como aqui descrito. No presente contexto, um "animal transgênico" não 15 abrange animais produzidos por cruzamento clássico ou de fertilização in vitro, mas indica animais nos quais uma ou mais células recebem uma molécuj-a de ácido nucleíco. Animais transgênicos da invenção podem ser heterozigóticos ou homozigótícos no que respeíta ao transgene. Métodos para 20 produzir animais transgênicos, incluindo ratos, ovelhas, porcos e sapos são bem conhecidos na arte (ver, por exemplo, 6' Patente U.S. N°s 5.721.367, 5.695.977, 5.650.298 e 5.614.396) e, como tal, estão adicionalmente incluídos.

As sequências cie peptídeos, ácidos nucleicos que codificam 25 para as sequências de peptideos, vetores e células hospedeiras transformadas que expressam as sequências de peptídeos incluem as formas isoladas e purificadas. O termo "isolado", quando utilizado como urn rnodificador de uma cornposíção da invenção, significa que a composição é separada, substancialmente 30 completa ou pelo menos em parte, a partír de um ou mais componentes de um arnbiente. geralmente, as composições que existem na natureza, quando isolados, são substancialmente isentas de um ou mais materiaís com que normalmente . se associam com a natureza, por exemplo, uma ou mais proteínas, ácidos nucleicos, lipídeos, carboidratos ou membrana celular. O termo "isolado" não exclui forrnas físicas alternativas da 5 composição, tais como as variantes, modificações ou forrnas derivadas, fusões e quimeras, multimeros/oligômeros, etc., ou formas expressas em células hospedei-ras. C) terrno "isolado" tarnbém não exclui formas (por exemplo, composições farrnacêuticas, composições de combinação, etc.), em que nelas 10 existem combinações, qualquer um dos quais é produzido pela e máo do homem.

Uma composição "ísolada'" taníbém pode ser "purificada" quando livre de alguns, um número substancial de ou a maioria ou a totalidade de um ou mais outros materiais, tais como um 15 contaminante ou uma substância ou material indesejado. as sequências de peptídeos da invenção geralmente não são conhecidas ou acredita-se que existem na natureza. No entanto, para uma composição que não existe na natureza, uma composição isolada será geralmente livre de alguns, um número substancial 20 de ou a maioria ou t.odos os outros rnateriais com os quais tipicamente associa na natureza. Assim, uma sequência de ' 0 peptídeo isolado, que' / também ocorre na natureza, não inclui polipeptídeos ou polinucleotídeos presentes entre milhões de outras sequências, tais como as proteinas de uma biblioteca de 25 proteínas ou ácidos nucleicos de uma biblioteca genômica ou de DNAc, por exemplo. Uma composição "purificada" inclui combinações com uma ou mais outras moléculas inativas ou ativas. Por exemplo, uma sequência de peptídeo da presente invenção combinada com outro fármaco ou agente, tal como um 30 fármaco de redução da 'glicemia ou agente terapêutico, por exemplo .

Tal como aqui utilizado, o termo "recombinante", quando utilizado como um modificador de sequências de peptídeos, ácidos nucleicos que codificarn as sequências de peptídeos, etc., significa que as composições têm sido manipuladas (isto 5 é, pela engenharia) de urna forma que normalmente não ocorre na natureza (por exemplo, in vitro). Um exemplo específico de um peptídeo recombinante seria onde uma sequência de peptídeo da invenção é expressa por uma célula transfectada com um ácido nucleico que codifica a sequência de peptídeo. Um exemplo 10 específico de um ácido nucleico recombinante seria em que um e ácído nucleico (por exemplo, DNA genómico ou DNAC) que codifica uma sequência de peptídeo clonado num plasmídeo, com ou sem 5', 3' ou regiões de íntrons que o gene é normalmente contíguo no genoma do organismo. Outro exemplo de um peptídeo 15 recombinante ou ácido nucleico é um híbrido ou uma sequência de fusão, tal como uma sequência de peptídeo quimérico que compreende uma porção de FGF19 e uma porção de FGF21.

De acordo corn a invenção, são fornecidas composições e misturas de sequências de peptídeos da invenção, incluindo 20 subsequências, varíantes e formas modificadas das sequências de peptídeos exernplificados (incluindo variantes e 0 subsequências de FGF19 e FGF21 listados nas Tabelas 1 a 8 e na Figura 1 fornecidas e as fusões e quimeras de FGF19/FGF21 listados nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1). Ein uma forma de 25 realização, urna rnistura inclui uma ou mais sequências de peptídeos e um carreador ou excipiente farmacêuticamente aceitável. Nurna outra forma de realização, uma mistura inclui uma ou mais sequências de peptídeos e uma droga ou agente terapêutico. adjunto, como um" agente anti-diabético ou fármaco 30 ou agente terapêutico de redução da glicemia. Exernplos de drogas e agentes terapêuticos são apresentados a seguir. As combinações, tais como uma ou mais sequências de peptídeos em um veículo ou excipiente farrnacêuticamente aceitável, com urna

65/116 .

ou mais droga antidiabética ou droga de redução da glicemia ou agente terapêutíco também são fornecidos. Tais cordbinações de sequência de peptídeos da invenção com gutro fármaco ou agente, tal como um fármaco de redução da glícemia ou agente 5 terapêutico, por exemplo, são úteis de acordo com os métodos e usos da invenção, por exemplo, para o tratamento de um paciente.

As combinações também incluem a incorporação de sequências de peptídeos ou ácídos nucleicos da invenção em partículas ou ©iO substâncias poliméricas, tais como os poliésteres, carboidratos, ácídos de poliamina, hidrogel, polivinilpirrolidona, acetato de etileno-vinila, metilcelulose, carboximetilcelulose, sulfato de protamina ou copolímeros lactídeo/glicólido, copolímeros de 15 polilactídeo/glicólido ou copolímeros de etilenovi.nilacetato; aprisionamento em microcápsulas preparadas por técnicas de coacervação ou por polimerização interfacial, por exemplo, através do uso de microcápsulas de hidroximeÈilcelulose ou gelatina ou poli (microcápsulas de metílmetacrolato), 20 respectivamente; incorporação sistemas de liberação e dispersão no colóide da. droga, tais como complexos de @ macromoléculas, nanocápsulas, microesferas, contas e sistemas baseados em lipídeos (por exemplo, grupos acil N-gordos, tais como o N-lauroil, N-oleoil, a-minas gordas, tais como amina de 25 dodecil, amina de oleoílo, etc., ver Patente U.S. No.

6.638.513), incluindo emulsões de óleo-em-água, micelas, micelas.mistas e lipossomas, por exemplo.

Peptídeos da ínvenção, incluindo subsequências, variantes e formas modificadas das sequências de peptídeos exemplificados 30 (incluindo as variantes e subsequências FGF19 e FGF21 listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1 e as fusões e quimeras FGF19/FGF21 listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1) COUlO aqui

· -~m 66/116 estabelecido podem ser utilizados para modular o rnetabolismo de glicose e facilitar o transporte de glícose do sangue para os órgãos metabólicos, tais como o músculo, fígado e tecido adiposo. Tais sequências de peptídeos podem ser produzidas em 5 quantidades suficientes ou eficazes para restaurar a tolerância à glicose e/ou para melhorar ou proporcionar a homeostase normal da glicose.

Tal como aqui divulgado, a administração cie várias sequências de peptídeos variantes e fusão de FGF19 e FGF21 com ratos <0 reduziu com sucesso os níveis de glicose. Além disso, em contraste com o FGF19, certas sequências de peptídeo não estimularn ou induzem a formação de HCC ou tumorigênese em ratos. Assim, a administração dos peptídeos da invenção, incluindo subsequêncías, variantes e formas rnodificadas das 15 sequências de peptídeos exemplificados (incluindo as variantes e subsequências de FGF19 e FGF21 listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1 e as fusões e quimeras de FGF19/FGF21 listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1), num animal, quer direta ou indiretarnente métodos in vivo ou ex vivo (por exemplo, a 20 administração da variante de fusão ou peptídeo, um ácido nucleico que codifica a variante ou peptídeo de fusão ou uma e célula transformada ou vetor de terapía gênica que expressa a variante ou fusão de peptídeo), pode ser usada para tratar várias doenças.

. 25 Consequentemente, a invenção inclui in vitro, ex vivo e in vivo (por exemplo, sobre ou em um paciente) métodos e usos.

Esses métodos e usos podem ser praticados com qualquer das sequências de peptídeos da invenção aqui estabelecidos.

De acordo com a invenção, são proporcionados métodos de 30 tratamento de u-m paciente possuindo ou em risco de telr uma desordem. Em várias formas de realização, um método inclui a adminístração de uma sequência de peptídeo, tal como uma variante, fusão ou quimera de FGF19 ou FGF21 listadas nas Tabelas 1 a 8 e na Figura 1 ou uma subsequência, uma variante ou uma forrna modificada de uma variante, fusão ou quimera de 5 FGF19 ou FGF21 listados nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1 a um paciente numa quantidade eficaz para tratar o distúrbio.

Exemplos de desordens tratáveis, preveníveis e semelhantes com os peptideos da invenção e métodos e usos, incluem doenças e distúrbios metabólicos. Exemplos não limitantes de doenças e e10 distúrbios incluem: 1. Distúrbios do uso de glicose e sequelas que lhe estão associados, incluindo diabetes mellitus (tipo I e tipo-2), diabetes gestacional, hiperglicemia, resistência à insulina, rnetabolismo da glicose anormal, "pré-diabetes" (glicemia de jejum prejudicada (IFG) ou intolerância à glicose 15 (IGT)), e outras desordens fisiológicas associadas com ou re'sultantes de condições hiperglicêmicas, incluindo, por exemplo, mudanças histopatológicas tal como a destruição das células j3 pancreática. Para o tratamento, as sequências de peptídeos da invenção podem ser adminístradas a pacientes que 20 têm uma glicose no plasma em jejum (fpg) em nível superior a c.erca de 100 mg/dl. As sequências de peptídeos da invenção e podem também ser úteis em outras doenças relacionadas a hiperglicêmicos, incluindo danos nos ríns (por exemplo, danos túbulo ou nefropatia), degeneração do fígado, lesões oculares 25 (por exemplo, retinopatia diabética ou cataratas) e desordens do pé diabético; 2. Dislipidemias e suas sequelas, tais como, por exemplo, a aterosclerose, a doença das artérias e coronárias, doenças cerebrovasculares e semelhantes; 3. Outras condições que podern ser associadas à síndrome rnetabólica, como 30 obesidade e massa corparal elevada (incluindo as condições co- mórbidas dos mesmos, tais corno, mas não limitados a, doença hepática gordurosa não' alcoólica (DHGNA), esteatose hepática não alcoólica (NASH) e síndrome do ovário policísticos (SOP))

e também incluem tromboses, estados de hipercoagulabilidade e pró-trombõticos (arteriais e venosos), hipertensão, doenças cardiovasculares, acidente vascular eerebral e insuficiência cardíaca; 4. Distúrbios ou condições em que as reações 5 inflamatórias estão envolvidas, incluindo a aterosclerose, doenças intestinais inflamatórias crônicas (por exemplo, doença de Crohn e colite ulcerativa), asma, lúpus eritematoso, artrite ou outras desordens inflamatórias reumátiças; 5. Distúrbios de processos do ciclo celular ou diferenciação 10 celular, tais como tumores de células adiposas, carcinomas e lipomatosos, incluindo, por exemplo, lipossarcoma, tumores sólidos e doenças neoplásicas; 6. As doenças neurodegenerativas e/ou desordens do sistema nervoso central e periférico e/ou de doenças neurológicas que envolvem processos 15 neuroinflamatórios e/ou outras neuropatias periféricas, incluindo a doença de Alzheimer, esclerose múltipla, doença de Parkinson, leucoencefalopatia multífocal progressiva e síndrome de Guillain-8arre; 7. Distúrbios da pele e/ou doenças de processos de cicatrização de feridas, incluindo dermatoses 20 eritêmato-escamosas e 8. Outras doenças como síndrome X, osteoartrite e síndrome da angústia respiratória aguda.

e Tal como aqui utilizado, o termo "hiperglicêmico" ou "hiperglicemia", quando utilizado em referência a uma condição de um paciente, um nível anormalmente elevado transitório ou 25 crônico de glicose presente no sangue de um paciente. A condição pode ser causada por um atraso no metabolismo da glicose ou de absorção, de tal modo que o paciente apresenta intolerância à glicose ou um estado de elevada glicose não norrrialmente encontrados errí pacientes normais (por exemplo, em 30 pacientes pré-diabéticos, intolerantes à glicose em risco de 'desenvolver diabetes ou ern pacientes diabéticos). Glicose no plasma em jejurri (FPG), níveis de normoglicemia são menos do que cerca de 100 mg/dl, para o metabolismo de glicose deficiente, entre cerca de 100 e 126 mg/dl e para os diabéticos maiores do que cerca de 126.wstg/d1.

Tal como aqui descrito, a invenção inclui métodos de prevenção , (por exemplo, em pacientes com predisposição para ter um 5 distúrbio(s) específico(s)), atrasando, retardando ou inibindo a progressão, no início de ou 'tratamento(por exemplo, melhorando) obesidade ou uma massa corporal indesejável (por exemplo, índice de massa corporal maior do que o normal ou "IMC" em relação a um paciente apropriado combinado de idade 6Q comparável, sexo, raça, etc.). Assim, em várias formas de realização, um método da invenção para, por exemplo, q tratamento da obesidade ou de uma massa corporal indesejável (incluindo as condições co-rnórbi,das da obesidade, como por exemplo, apneia do sono obstrutiva, artrite, câncer (por 15 exemplo, da mama, do endométrio e cóIon), cálculos biliares ou hiperglicemia, inclui o contato ou a administração de um peptídeo da invenção, tal corrio definido aqui (por exemplo, uma variante .ou fusão de FGF19 e/ou FGF21 como definido nas Tabelas 1 a 8 ou na Figura 1, por exernplo) numa quantidade 20 eficaz para tratar a obesidade ou uma massa corporal indesejável. Em aspectos particulares, u-m paciente tem um C) índice de massa corporal superior a 25, por exemplo, 25 a 30, 30 a 35, 35 a 40 ou maior do que 40.

Além disso, a invenção inclui métodos de prevenção (por 25 exemplo, em pacientes com predisposição para ter distúrbio(s) específico(s)), diminuindo ou inibindo a progressão, retardar o surgimento ou tratamento de níveis indesejados ou anorrnalmente elevada de LDL no soro/plasma, VLDL, colesterol ou triglicerídeos, os quais, por si só ou em combinação, pode 30 levar, por exemplo, a formação de placas, estreitamento ou bloqueio dos vasos sanguíneos e aumento do risco de hipertensão, acidente vascular cerebral ,e doença arterial coronária. Estas perturbações podem ser devido a, por exemplo, a predisposição genética ou dieta, por exemplo.

O termo "paciente" refere-se a um animal. Normalmente o animal é um mamífero que se beneficiaria do tratamento com uma 5 sequência de peptídeo da invenção. Exemplos particulares incluem os primatas (por exemplo, seres humanos), cães, gatos, cavalos, vacas, porcos e ovelhas.

Os pacientes incluem aqueles que têrn uma doença, por exempl-o, um transtorno hiperglicêmico, tais como diabetes ou pacientes eL0 que não têrn a doença, mas podem. estar em risco de desenvolver a doença, por exemplo, pacientes pré-diabéticos com níveis FPG superior a 100 mg/dl, por exemplo, entre cerca de 100 e 126 mg/dl. Os pacientes em risco de desenvolver uma doença incluem, por exemplo, aqueles cuja dieta pode contribuir para 15 o desenvolvimento de hiperglicemia aguda ou crônica (por exemplo, diabetes), massa corporal indesejável ou obesídade, bem como aqueles que podem ter uma história familiar ou predisposição genética para desenvolvimento de hiperglicemia aguda ou crônica ou de massa corporal índesejável ou 20 obesidade.

e Tal como aqui descrito, os métodos de tratamento incluem a contatar ou adminis"trar um peptídeo da invenção, tal como definido aqui (por exemplo, uma variante ou fusão de FGF19 e FGF21 ou como definido nas Tabelas 1 a 8 ou na Figura 1, por 25 exemplo) em uma quantidade eficaz para atingir o objetivo desejado ou resultar. Um tratamento que resulta em um objetivo desejado ou resultado inclui diíninuir, reduzir ou prevenir a gravidade ou a frequência de um ou mais sintomas da condição do paciente, por exemplo, uma melhoria na condição do paciente 30 ou um efeito "benéfíco" ou "efeito terapêutico". Portanto, o tratamento pode aumentar ou reduzir ou impedir a gravidade ou a frequência de um ou mais sintomas da doença, estabilização ou inibir a progressão ou agravamento da doença, e em alguns casos, inverter a desordem, transitoriamente (por exemplo, para 1 a 6, 6 a 12 o'u 12 a 24 horas), para médio prazo (por 5 exemplo, 1 a 6, 6 a 12, 12 a 24 ou 24 a 48 dias) ou longo prazo (por exemplo, por 1 a 6, 6 a 12, 12 a 24, 24 a 48 semanas ou maior do que 24 a 48 semanas). Assim, no caso de um distúrbio hiperglicêmico, por exemplo, c) tratamento pode diminuir ou reduzir a glicose no sangue, aumentar a tolerância 10 à glicose, melhorar o metabolismo da glicose, fornecer a O homeostase normal da glicose, diminuir ou reduzír a resistência à insulina, diminuir ou reduzir os níveis de insulina ou diminuir, prevenir, melhorar ou reverter a síndrome rnetabólica ou uma alteração histopatol-ógica associado 15 com ou que resulta de distúrbio hiperglicêmíco, tal como a diabetes.

Por exemplo, urria sequência de peptídeo, método ou uso pode . diminuir ou reduzir a glicose em um ou mais pacientes com níveis de FPG superior a 100 rríg/dl, por exemplo, entre cerca 20 de 100 e 125 mg/dl ou maior do que 125 mg/dl, de cerca de 5 a 10%, 10 a 20%, 20 a 30% ou 30 a 50% ou mais, ou, por exemplo, Q a partir de maior do que 200 mg/dl e menos do que 200 mg/dl, mais de 150 rng/dl e menos do que 150 mg/dl, maior do que 125 mg/dl a menos do que 125 rng/dl, etc. Além disso, uma sequência 25 de peptídeo, método ou uso pode diminuir ou reduzir a glicose, por exemplo, para pacientes com pré-diabetes ou para a diabetes (por exemplo, tipo 2) com níveis basais HbAIc maiores do que cerca de 5°0, 6%, 7°5, 8°5, 9% ou 10°:, em especial 5°5, 6°0 ou 7°;.

30 Exemplos não limitativos de uma mej-horia de uma alteração histopatológica associada a uma condição hiperglicêmica incluem, por exemplo, diminuir, inibir, reduzir ou deter: a destruição ou degeneração de células do pâncreas (por exemplo, células-B), danos nos rins, tais como calcificação dos túbulos ou nefropatia, degeneração do fígado, lesões oculares (por exemplo, a retinopatia diabética, catarata), pé diabético, 5 úlceras na mucosa, como a boca e gengivas, peri.odontite, excesso de sangramento, cicatrização lenta ou retardada de lesões ou feridas (por exernplo, que o churribo para carbúnculos diabéticos), infecções da pele e outras doenças cutâneas, doenças coronárias e cardiovasculares, doença vascular 10 periférica, acidente vascular cerebral, dislipidemia, e hipertensão, obesidade ou o risco de desenvolver qualquer um dos precedentes. Melhoria da massa corporal indesejável ou a obesidade pode incluír, por exemplo, uma redução de massa corporal (tal como refletido pelo IMC ou semelhantes) ou uma 15 melhoria de uma patologia associada, tal como uma diminuição dos trígli.cerídeos, colesterol LDL ou VLDL, diminui.ção da pressão sanguínea, diminuição do espessamento da camada íntirna do vaso sanguineo ou dimínuição do risco reduzido de doença cardiovascular ou acidente vascular cerebral, diminuição da 20 frequência cardiaca em repouso, etc.

Uma "quantidade eficaz" ou uma "quantidade suficiente" para e uso e/ou para o tratamento de um paciente refere-se a uma quantidade que proporciona, em doses únicas ou múltiplas, por si só ou em combinação com uma ou mais outras cornposições 25 (agentes terapêuticos tal como uma droga ou tratamento de hiperglicemia), tratamentos, protocolos ou agentes de regimes de tratamento, uma resposta detectável de qualquer duração de tempo (transitório, médio ou longo prazo), um resultado desejado ou um benefício objetivo ou subjetivo para um 30 paciente de qualquer grau mensurável ou detectável ou por qualquer duração de tempo (por exemplo, por horas, dias, iiieses, anos ou curado). Essas quantidades são geralmente eficazes para melhorar uma doença, ou um, vários ou todos os sintomas adversos, consequências ou complicações da doença, um grau mensurável, embora a redução ou inibição da progressão ou agravamento da doença seja considerada um resultado satisfatório. .

5 Tal como aqui utilizado, c) termo "melhorar" significa uma melhoria na desordem do paciente, uma redução na severidade da doença ou uma inibição da progressão ou agravamento da doença (por exemplo, a estabilização da desordem). No caso 'de um distúrbio hipergíicêmico (por exemplo, diabetes, resistência a @iO insulina, intolerância à glicose, síndrome metabólica, etc.), por exemplo, uma melhoria pode ser uma redução ou uma diminuição da glicose no sangue, redução na resistência à insulina, uma redução de glucagon, uma melhoria na tolerância à glicose ou metabolismo da glicose ou homeostase. Uma 15 melhoria em urn distúrbio hiperglicêmico também pode incluir a melhoria da função pancreática (por exemplo, inibir ou impedir a destruição de células-j3/ilhota ou aumentar o número e/ou função das células-j3), uma dimínuição em urna patologia associada a ou resultante de doença, tais como uma melhoria.na 20 histopatologia de um tecido ou órgão afetado, corno aqui estabelecidos. No caso da massa corporal- indesejável ou @ obesidade, por exemplo, uma melhoria pode ser uma redução no ganho de peso, redução de massa corporal (tal como refletido na redução do IMC, por exemplo) OLl uma melhoria na condição 25 associada com a obesidade da massa corporal indesejada, por exemplo, como aqui estabelecido (por exemplo, redução ou . diminuiçáo de glicose no sangue, de triglicerídeos, colesterol LDL ou VLDL, diminuição da pressão sanguínea, diminuição do espessamento da camada intima do vaso sariguíneo, etc.).

30 Um benefício terapêutico ou melhoria, portanto, não precisa ser ablação completa de qualquer urn, a maioria ou todos os sintomas, complicações, consequências ou causas associadas ao distúrbio ou doença. Assim, um ponto final satisfatório é conseguido quando existe um prazo transiente, médio ou longo, a melhoria incremental na condição de um paciente ou a uma redução parcial na ocorrência, frequência, gravidade, 5 progressão ou a duração, ou a inibição ou reversão de urn ou mais sintomas adversos associados ou complicações ou consequências ou causas subjacentes, agravamento ou progressão (por exemplo, estabilização de um ou mais sintomas ou complicações da doença, distúrbio ou doença), da desordem ou 10 da doença ao longo de um período de tempo (horas, dias, e semanas, meses, etc.).

Assim, no caso de uma doença tratável por urna sequência de peptídeo da invenção, a quantidade de peptídeo suficiente para aliviar uma desordem irá depender do tipo, gravidade e da .15 extensão ou a duração da doença, o efeito terapêutico ou resultado desejado e pode ser facilmente determinada pelo perito na arte. As quantidades apropriadas também irão depender do paciente individual (por exemplo, a biodisponibilidade dentro do paciente, sexo, idade, etc.) Por 20 exemplo, uma restauração teInporáriÊ ou parcial da homeostasia normal da glicose num paciente pode reduzir a quantidade de 6 dosagem ou a frequência de injeção de insulina, erribora a liberação completa de insulina não tenha resultado.

Urna quantidade eficaz pode ser determinada, por exemplo, por 25 rnedição de um ou mais efeitos fisiológicos relevantes. Erri um exernplo específico não limitativo, no caso de uma condição hiperglicêrnica, uma diminuição ou redução da glicose no sangue ou uma melhora no teste de tolerância à glicose pode ser usada para determínar se a quantidade de sequência de peptídeo da 30 invenção, incluindo subsequências, variantes de sequências e formas modificadas das sequências de PePtídeOqq (por exemplo, exemplificadas, sequências Listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura

1) é eficaz para tratar uma condição híperglicêrnica.

Em outro exemplo não limitativo particular, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para reduzir ou dimi-nuir qualquer nível

(por exemplo, um nível da linha de base) de FPG, em que, por 5 exemplo, uma quantidade suficiente para reduzir c) nível de FPG superior a 200 mg/dl para menos do que 200 mg/dl, uma quantidade suficiente para reduzir o nível de FPG entre 175 mg/dl e 200 mg/dl a menos do que o nível de pré-administração,

urria quantidade suficiente para reduzir o nível de FPG entre

10 150 mg/dl e 175 mg/dl a menos do que o nível de pré-

e administração, uma quantidade suficiente para reduzir o nível de FPG entre 125mg/dl e 150mg/dl a menos do que o nível de pré-administração, e assirn por diante (por exemplo, reduzindo os níveis de FPG a menos do que 125 mg/dl, a menos do que 120

15 mg/dl, a menos do que 115 mg/dl, a menos do que 110 mg/dl, etc.) No caso de qs níveis de HbAIc, uma quantidade eficaz inclui uma quantidade suficiente para reduzir ou diminuir os níveis de mais do que cerca de 10% para 9%, em mais do que cerca de 9% a 8%, por mais do que cerca de 8% a 7%, por mais

20 do que cerca de 7% a 6°5, por mais do que cerca de 6% a 5%, e assim por diante.

Mais particularmente, a redução ou a e diminuição de níveis HbAIc por cerca de 0,1%, 0,25%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1%, 1,5%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50%, ou mais, é urna quantidade 25 eficaz de acordo com a invenção.

Em ainda outro exemplo particular não limitativo, no caso de massa corporal indesejável ou obesidade, uma quantida.de eficaz é uma quantidade suficiente para diminuir ou reduzir o índice de massa corporal- (IMC) de um paciente, uma diminuição ou redução

30 da glicose, uma redução ou redução nos níveis no sÒro/plasma de triglicerídeos, lipídeo, colesterol, ácidos gordos, LDL e/ou VLDL.

Em ainda exernplos não limitativos rnais particulares, a quantidade é uma quantidade suficiente para diminuir ou redu"zir qualquer um dos parâmetros acirna m.encionados, por exemplo, cerca de 0,1%, 0,25%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1°0 , 1,5°ó, 2 °0 , 3% , 4 °5 , 5% , 10%, 20%, 30%, 33%, 35%, 40%, 45%, 50% ou mais.

5 Os métodos e usos da invenção para tratarnento de um paciente são aplicáveis para a profilaxia para evitar uma perturbação num paciente, tal como um distúrbio hiperglicêmico ou desenvoívimento de massa corporal indesejável ou obesidade. Alternativamente, os métodos e usos podem ser praticados e10 durante ou após o tratamento de um paciente. Por exemplo, antes, durante ou após o tratamento de um paciente para reduzir a glicose utilizando insulina ou outro medicamento para redução da glicemia ou agente terapêutico, por exernplo, um método ou uso da invenção podem, por exemplo, uma sequência 15 de peptídeo da invenção pode ser administrada ao paciente. Além disso, urna composição, tal como uma sequência de peptídeo da invenção, pode ser combinada com outro fármaco ou agente, tal como um fármaco de redução da glicemia ou agente terapêutico, por exemplo.

20 Assim, os métodos e usos da invenção para tratàmento de um e paciente podem ser praticados antes, substancialmente contemporaneamente corn ou seguindo um outro tratarnento e podem ser complernentados com outras formas de terapia. Terapias complementares incluem outros tratamentos de redução de 25 glicose, como a insulina, um potenciador de sensibilidade à insulina e outros tratamentos com drogas, uma mudança na dieta (baixo açúcar, gorduras, etc), cirurgia de perda de peso (redução do volume do estômago por bypass gástrico, gastrectomia), banda gástrica, balão gástrico, manga gãstrica, 30 etc. Por exemplo, um método ou uso da invenção para o tratam.ento de uma desordem hiperglicêmica ou resistência à insulina pode ser utilizado em combinação com outras drogas ou composições farmacêuticas que reduzem a glicose ou aumentam a sensibilidade à insulína em um paciente. Medicamentos para o tratamento de diabetes incluem, por exemplo, as biguanidas e as sulfoniluréias (por exemplo, tolbutamida, cloropropamida, 5 aceto-hexamida, tolazamida, glibenclamida e glipizida), tiazolidinedionas (rosiglitazona, pioglitazona), análogos de GLP-í, inibidores da dipeptidil peptidase-4 (DPP-4), formulações de bromocriptina (por exemplo, sequestradores de ácidos biliares e de (por exemplo, colesevelam)), e insulina IO (bolus e análogos basais), metforínina (por exemplo, cloridrato e de metformina) com ou sem uma tiazolidinodiona (TZD) e inibidores de SGLT-2. Medicamentos supressores do apetite são terapias suplementares também bein conhecidos e podem ser utilizados em combinação com os métodos da invenção. Podem ser 15 administrados antes, simultaneamente ou seguindo métodos da invenção e os usos.

As sequências de peptídeos da invenção, incluindo subsequências, variantes de sequências e formas modificadas de sequências de peptídeos exemplificadas (sequências I-istadas 20 nas Tabelas 1 a 8 e na Figura 1), podem ser formuladas numa unidade de dosagem ou forma de dosagem unitária. Em uma forma e de realização particular, uma sequência de peptideo está em uma quantidade eficaz para tratar um paciente com necessidade de tratamento, por exemplo, devido à hiperglicemia. Doses 25 unitárias exemplares variam de cerca de 25 a 250, 250 a 500, 500 a 1000, 1000 a 2500 ou 2500 a 5000, 5000 a 25,000, 25,000 a 50,000 ng, a partir de cerca de 25 a 250, 250 a 500, 500 a 1000, 1000 a 2500 ou 2500 a 5000, 5000 a 25,000, 25,000 a 50,000 µg e de cerca de 25 a 250, 250 a 500, 500 a 1000, 1000 30 a 2500 ou 2500 a 5000, 5000 a 25,000, 25,000 a 50,000ing.

As sequências de ' peptídeos da invenção, incluindo subsequências, variantes de sequências e formas modificadas de sequências de peptídeos exemplificados (sequências listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1) podem ser admínistradas para proporcioríar o efeito pretendido em dose única ou doses múltíplas, por exemplo, em uma quantidade eficaz ou 5 suficiente. Doses exemplares variam de cerca de 25 a 250, 250 a 500, 500 a 1000, 1000 a 2500 ou 2500 a 5000, 5000 a 25,000, 25,000 a 50,000 pg/kg, a partir de cerca de 50 a 500, 500 a 500"0, 5000 a 25,000 ou 25,000 a 50,000 ng/kg e de cerca de 25 a 250, 250 a 500, 500 a 1000, 1000 a 2500 ou 2500 a 5000, 5000 10 a 25,000, 25,000 a 50,000 µg/kg. Doses únicas ou múltiplas e podem ser administradas, por exemplo, várias vezes por dia, em días consecutivos, dias alternados, semanalmente ou intermitentemente (por exemplo, duas vezes por semana, uma vez a cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 semanas ou uma vez a cada 2, 15 3, 4, 5 ou 6 meses).

As sequências de peptídeos da ' invenção, incluindo subsequências, variantes e formas modificadas das sequências de peptídeos exemplificados (sequências listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1), podem ser administradas e mêtodos podem ser 20 praticados por administração sistêmica, regional ou local, por qualquer rota. Por exemplo, uma sequência de peptídeo pode ser e administrada por via parentérica (por exemplo, por via subcutânea, intravenosa, intramuscular ou intraperitoneal), oralmente (por exemplo, ingestão, bucal ou sublingual), por 25 inalação, por via intradérmica, intracavidade, intracraniana, transdérmica (tópica), transmucosa ou retal. As sequências de peptídeos da invenção, incluindo subsequências, variantes e formas modificadas das sequências de peptídeos exemplificados (sequências listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1) e qs 30 métodos da invenção, incluindo coinposições farmacêuticas, podem ser administradas por meio de um sistema de liberação (micro)encapsulado ou embalados num implante para administração.

A invenção proporciona ainda "composições farmacêuticas" que incluem uma sequência de peptídeos (ou sequências) da ' invenção, incluindo subsequências, variantes e formas modificadas das sequências de peptídeos exemplificadas 5 (sequências listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1), e um ou mais veículos farmacêuticamente aceitáveis ou diluente fisiologicamente aceitável, veículo ou excipiente. Em determinadas formas de realização, uma sequência de peptídeo ou sequências estão presentes ern urna quantidade 10 terapeuticamente aceitável. As composições farmacêuticas podem e ser utilizadas em conformidade com os métodos e usos da invenção. Assim, por exernplo, as composições farmacêuticas poden ser administradas ex vivo ou in vivo a um paciente, de modo a praticar os métodos de tratamento e usos da presente 15 invenção.

As composições farmacêuticas da invenção podem ser formuladas para ser compatíveis com o método pretendido ou a via de administração; vias exemplar'es de administração são aqui apresentadas. Além disso, as composições farmacêuticas podem 20 aínda conter outros agentes terapeuticamente ativos ou compostos aqui revelados (por exemplo, agentes de redução de e glicose) ou conhecidos dos peritos na arte que podem ser utilizados no tratamento ou prevençào de várias doenças e distúrbios, como aqui estabelecidos.

25 As composições farmacêuticas que compreendem, tipicamente, urna quantidade terapeuticamente eficaz de, pelo rnenos, uma das sequências de peptídeos da invenção, incluindo subsequências, variantes e formas modificadas das sequências de peptídeos exemplificados (sequências listadas nas Tabelas 1 a 8 e Figura 30 1) e um ou mais agentes de formulação farmacêutica e fisiologicarnente aceitáveis. Os diluentes adequados, ., farrnacêuticamente aceitáveis ou fisiologicamente aceitáveis,

carreadores ou excipientes incluem, mas não estão lirriitados a, antioxidantes (por exemplo, ácido ascórbico e bissulfato de sódio), conservantes (por exemplo, álcool benzílico, parabenos de metila, etila ou n-propila, p-hidroxibenzoato), agentes 5 emulsionantes, agentes de suspensão, agentes emulsionantes, solventes, enchirnentos, agentes encorpantes, tampões, veículos, diluentes e/ou adjuvantes de dispersão. Por exemplo, um veículo adequado pode ser uma solução salina fisiológica ou solução salina tamponada com citrato, possivelmente 10 suplementado com outros materiais comuns em composições e farmacêuticas para administração por via parentérica. Solução salina tamponada neutra ou salina misturada com albumina clo soro são os veículos mais exemplares. Os peritos na arte reconhecerão facilmente urna variedade de tampões que podem ser 15 utilizados nas composi,ções farmacêuticas e formas de dosagem utilizadas na invenção. Tampões típicos incluem, mas não estão 1imitado3 a ácidos farmacêuticamente aceitáveis fracos, bases fracas ou suas misturas. Componentes tampão incluem materiaís solúveis em água, tais como ácido fosfórico, ácido tartárico, 20 ácido láctico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido acé"tico, ácido ascórbico, ácido aspártico, ácído glutâmico e os seus e ,sais. , Um solvente primário num veículo pode ser ou aquoso ou não aquoso na natureza. Além disso, o veículo pode conter outros 25 excipientes farmacêuticamente aceitáveis para modificar ou manter o pH, osmolaridade, víscosidade, estabilidade ou esterilidade da composição farmacêutica. Em certas formas de realização, o veículo farmacêuticamente aceitável é um tampão aquoso. Em outras formas de realização, urri veículo compreende, 30 por exemplo, cloreto de sódio e/ou citrato de sódio.

As composições farmacêuticas da invenção podem conter ainda outros agentes de formulação farmacêuticamente aceitáveis para modificaí ou manter a taxa de liberação de um peptídeo da invenção. Tais agentes de formulação incluem aquelas substâncias conhecidas por artesãos especializados na preparação de formulações de liberação sustentada. Para ruais 5 referências relativas a agentes de formulação farmacêutica e fisiologicamente aceitáveis, ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed. {1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa. 18042) páginas 1435 a 1712, The Merck Index, 12" ed. (1996, Merck Publishing Group, Whitehouse, NJ) e 10 pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms (1993, e Technonic Publishing Co., Inc., Lancaster, pensilvânia). As composições farmacêuticas adequadas adicionais para a administração são conhecidas na arte e são aplicáveis nos métodos e composições da invenção.

15 A composição farmacêutica pode ser armazenada em frascos para injetáveis estéreis como uma solução, suspensão, gel, emulsão, sólido ou pó desidratado ou liofilizado. Tais composições podem ser arrnazenadas quer nurna forrna pronta para usar, uma forma liofilizada que requer a reconsti'tuição antes do uso, 20 uma forma líquida que requer diluição antes do seu uso ou outra forma aceitável. Em algurnas forrnas de realização, uma e composição farmacêutica é proporcionada em um recipiente de uso único (por exemplo, um frasco para üsc) único, ampola, seringa ou auto-injetor (sernelhante a, por exemplo, um 25 Epipen")), enquanto um recipiente multi-uso (por exemplo, um frasco multi-uso) é fornecido em outras formas. de realização. Qualquer aparelho de distribuição de droga pode ser utilizado para liberar os peptídeos da invenção, incluindo os ímplantes (por exemplo, bombas implantáveis) e sistemas de catéter, 30 sendo que ambos são conhecidos dos peritos na arte. Injeções de depósito, que são geralmente administrados por via subcutânea ou intramuscular, também podem ser utilizadas para liberar os peptídeos da invenção durante um período de tempo definido. Injeções de depósito são geralmente sólidos ou à base de óleo e geralmente compreendem pelo menos um dos .componentes da formulação aqui estabelecidos. O perito na arte está familiarizado com as possiveis formulações e usos de 5 injeções de depósito.

A composição farmacêutica pode ser formulada para ser compatível com a sua via de administração pretendida. Assim, as composições farmacêuticas incluem carreadores, diluentes ou excipientes adequados para a administração por via 6L0 parentérica, incluindo (por exemplo, por via súbcutânea (SC), por via intravenosa, intramuscular ou intraperitoneal), intradérmica, oral (por exemplo, a ingestão), inalação, intracavidade, intracraniana e transdérrníca (tópica).

As composições farmacêuticas podem estar na forma de uma 15 solução aquosa injetável estéril ou suspensão oleaginosa. Esta suspensão pode ser formulada usando agentes dispersantes ou agentes molhantes adequados e agentes de suspensão aqui revelados ou conhecidos do especialista na técnica. A preparação injetável estéril pode também ser uma solução 20 injetável estéril ou suspensão em um díluente parentericamente 0 aceitável não-tóxico ou solvente, por exeraplo, como uma soluçào em 1,3-butanodiol. Meios diluentes, solventes e meios de dispersão que podem ser empregues incluem água, soluçào de Ringer, solução de cIoreto de sódio isotônica, Cremophor EL" 25 (BASF, Parsippany, NJ) ou salina tamponada com fosfato (PBS), etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propilenoglicol e polietileno glicol líquido) e suas misturas adequadas. Além disso, os óleos fixos estéreis são convencionalmente utilizadQs como urn meio soIvente ou de suspensão. Para este 30 fi-m, qualquer óleo fixo brando pode ser empregue incluindo rnono- ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, ácidos gordos, taís como ácido oleico, encontram uso na preparação de

83/116 ' injetáveis. Absorção prolongada de formulações injetáveis em particular pode ser obtida pela inclusão de um agente que retarda a absorção (por exemplo, monoestearato de alumínio ou gelatina).

5 As composições farmacêuticas podem estar numa forma adequada para uso oral, por exerríplo, na forma de comprimidos, cápsulas, trociscos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós dispersíveís ou grânulos, emulsões, cápsulas duras ou moles ou xaropes, soluções, micropérolas ou elixires. As composições ^10 farmacêuticas destinadas ao uso oral podem ser preparadas de n acordo com qualquer método conhecido na arte para a fabricação de composições farmacêuticas. Tais composições podem conter um ou mais agentes, tais corno agentes edulcorantes, agenl-es aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes a fim 15 de proporcionar preparações farmacêuticamente elegantes e saborosas. Os comprimidos que contêm' um peptídeo da invenção podem ser misturados com excipientes farmacêuticamente aceítáveís não tóxícos adequados para a fabricação de comprimidos. Estes excipientes incluem, por exemplo, 20 diluentes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio o'u fosfato de sódio; agentes de 0 granulação e de desintegração, por exemplo, amido de milho ou ácido algínico, agentes de ligação, por exemplo, amido, gelatina ou acácia e agentes lubrificantes, por exemplo, 25 estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco.

Comprimidos, cápsulas e semelhantes adequados para administração oral podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por técnicas conhecidas para retardar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e assi-m 30 proporcionar uma ação sustentada durante um período rnais Iongo. Por exemplo, um material de retardamento no tempo tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila podem ser emp'regados. Eles tardbém podem ser revestidos por técnicas -- conhecidas na arte para formar comprimi"dos terapêuticos osmóticos para liberação controlada. Agentes adicionais incluem partículas biodegradáveis ou biocornpatíveis 5 ou uma substância polimérica, como pol,iésteres, ácidos de poliamina, hidrogel, polivinilpirrolidona, polianidridos, ácido poIiglicÓlico, etileno-acetato de vinila, metilcelulose, carboximetilcelu'lose, sulfato de protamina ou copolímeros de lactídeo/glicolídeo, copolímeros de polilactídeo/glicolídeo ou 10 copolímeros de etilenovinilacetato, a fim de con'trolar c) 0 fornecimento de urna composição administrada. Por exemplo, o agente por via oral pode ser aprisionado em microcápsulas preparadas por técnicas de coacervação ou por polimerização interfacial, pelo uso de hidroximetilcelulose ou microcápsulas 15 de gelatina ou poli (microcápsulas de metilmetacrolato), respectivamente, ou num sistema de administração de fármaco coloidal. Os sistemas de dispersão coloidais incluem complexos de rnacromoléculas, nanocápsulas, microesferas, micropérolas e sistemas de base lipídica, incluindo emulsões óIeo-em-água, 20 micelas, micelas mistas e lipossomas. Os métodos para a preparação de tais formulações são conhecidos pelos peritos na arte e estão disponíveis comercialinente.

e As formulações para uso oral podem também ser apresentadas como cápsulas de gelatina dura em que o ingrediente ativo é 25 misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, caulino ou celulose microcristalina ou cápsulas de gelatína mole em que o ingrediente ativo é misturado com água ou um rneio oleoso, por exemplo, óIeo de amendoim, parafina Iíquida ou azeite de 30 oliva.

As suspensões aquosas contêm os materiais ativos em mistura com excipientes adequados para a fabricação dos rnesmos. Tais excipientes são agentes de suspensão, por exemplo, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxi- propilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona! goma tragacanto e goma acácia; dispersantes ou rnolhantes podem 5 ser um fosfatídeo de ocorrência natural, por exemplo, lecitina ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com ácidos gordos, por exemplo, produtos de estearato de polioxietileno ou condensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaetilenooxicetanol ou 10 produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres e parciais derivados de ácidos gordos e um hexítol, tal como monooleato de polioxietileno sorbitol ou produtos "condensaçào de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato 15 polietíleno sorbitano. As suspensões aquosas também podem conter um ou mais conservantes.

As suspensões oleosas podem ser formuladas suspendendo o ingrediente ativo num óleo vegetal, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de oliva, óleo de sésamo ou óleo de coco ou num 20 óleo mineral tal como parafina líquida. As suspensões oleosas poderr'. conter um agente espessante, por exemplo, cera de e abelha, parafina dura ou álcool cetílíco. Agentes adoçantes tais como os estabelecidos acima e agentes aromatizantes podem ser adicionados para proporcionar uma preparação oral 25 palatável.

Os pós e grânulos dispersáveis adequados para a preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água proporcionam o ingrediente ativo em mistura com um agente dispersante ou molhante, agente de suspensão e um ou mais conservantes. 30 Agentes dispersantes ou molhantes e agentes de suspensão apropriados são aqui exemplificados.

As composições farrnacêuticas da invenção podem tambérn estar na forma de emulsões de óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo, óleo de oliva ou óleo de amendoim ou um óleo mineral, por exemplo, parafina líquida ou misturas 5 destes. Os agentes emulsionarrtes adequados podem ser gornas de ocorrência natural, por exemplo, goma arábica ou goma adragante; fosfatídeos que ocorrem naturalmente, por exemplo, feijão de soja, lecitiria e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos gordos; anidridos de hexitol, por exemplo, 10 monooleato de sorbitano e os produtos de condensação de e ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano.

As cornposições farmacêuticas podem também incluir carreadores para proteger a composição contra a degradação rápida ou a 15 eliminação do corpo, tais como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes, lipossomas, hidrogéis, pró- fármacos e sistemas de liberação microencapsulados. Por exemplo, um material de atraso de tempo tal como monoestearato de glicerila ou estearato de glicerila por si só ou em 20 combinação com uma cera podem ser empregues. A absorção proj-ongada de composições farmacêuticas injetáveis pode ser e conseguida através da inclusão de um agente que atrasa a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio ou gelatina.

A prevenção da ação de rnicroorganisrnos pode ser conseguida 25 através de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal e outros semelhantes.

A invenção também inclui peptídeos da invenção sob a forma de supositórios para administração retal. Os supositórios podem 30 ser preparados através da mistura de um peptídeo da invenção com um excipiente não irritante adequado, que é sólido a temperaturas normais, mas líquido à temperatura retal e por isso funde no reto para liberar o fármaco. Tais materiais incluem, mas não estão limitados a, manteiga de cacau e polietileno glicóis.

De acordo com a invenção, proporcionam-se métodos de 5 identificação de um peptídeo (ou uma subsequência, variante ou forma modificada como aqui estabelecido) tendo atividade de redução da glicose sem atividade substancial carcínoma hepatocelular (HCC). Numa forma de realização, um método inclui: a triagem (por exemplo, o ensaio ou medição) de uma eL0. seq,uência de peptídeo (ou uma subsequência, variante ou forma modificada como aqui estabelecido) para a atividade de redução de glicose e o rastreio (por exernplo, o ensaio ou medição) de uma sequência de peptídeo (ou uma subsequência, variante ou forma modificada como aqui estabelecido) para a atividade de 15 HCC ou a expressão de um marcador que correlacione com atividade HCC. Um peptídeo com atividade de redução da glicemia e reduzida ou ausente atividade de HCC identifica assim o peptídeo. Em aspectos particulares, o marcador correlacionando com a atividade HCC cornpreende um perfil 20 lipídico - um peptídeo que tem menor aumento de atividade cle lipídeos em comparação com a FGF19 indica que o peptídeo tem e atividade HCC ausente ou reduzida, ou o marcador correlacionando com atividade HCC cornpreende expressão cle gene da aldo-ceto redutase - um peptídeo que regula para baixo ou 25 diminui a expressão do gene aldo-ceto redutase em comparação com FGF19 indica que o peptídeo tem atividade HCC reduzida ou ausente, ou o marcador índicativo de atividade HCC compreende expressão gene Slc1a2 - um peptídeo que regula para cima ou aumenta expreSsão do gene Slc1a2 em comparação com FGF19 30 indica que o peptídeo tem atividade HCC reduzida ou ausente.

Os termos "ensaio" e "medição" e suas variações gramaticais 'dos mesmos são aqui usados indiferentemente e referem-se tanto determinações qualitativas ou quantitativas ou ambas determinações qualitativas e quantitativas. Quando os termos são usados em referência a detecção, quaisquer meios de avaliar a quantidade relativa são contemplados, incluindo os 5 vários métodos descritos aqui e conhecidos na arte. Por exemplo, a expressão do gene pode ser ensaiada ou medida por uma transferência de Northern, transferência de Western, ensaio de imunoprecipitação ou medindo a atividade, função ou quantidade da proteína expressa (por exerriplo, aldo-ceto 10 redutase ou Slc1a2).

0 Fatores de risco para HCC, o tipo mais comum de câncer de fígado, incluem diabetes tipo 2 (provavelmente agravadas pela Qbesidade). O risco de HCC em diabéticos do típo 2 é maior {a partir de ~2,5 a -7 vezes o risco de não-diabéticos), 15 dependendo da duração da diabetes e do protocolo de tratamento.

Várias metodologias podem ser utilizadas em rastreamento e diagnóstico de HCC e são bem conhecidos dos peritos na arte.

Indicadores de HCC incluem a detecção de um fabricante de 20 tumor, tais como elevados níveis de alfa-fetoproteína (AFP) ou e des-gama carboxiprotrombi'na(DCP). Um número de diferentes técnicas de digitalização e imagem tarribém são úteis, incluindo o ultrassom, tomografia computadorizada e ressonância magnética. Em relação à invenção, a avalíação de se um 25 peptídeo (por exemplo, um peptídeo candidato) apresenta evidência de indução de HCC pode ser determinada in vivo por, por exemplo, quantificação da formação de nódulos HCC num rnodelo animal, tais como ratos db/db, administrado um peptídeo, comparado com a formação de nódulos HCC por FGF19 30 tipo selvagem. Macroscopicamente, câncer de fígado pode ser nodular, onde os nódulos turriorais (que são redondo-a-oval, cinza ou verde, bem circunscrito, mas não encapsulado)

aparecem como uma grande massa ou várias massas menores.

Alternativamente, HCC pode estar presente como um tumor i-nfiltrativo que é difuso e mal circunscrito e, frequentemente, se infiltra nas veias do portal.

5 Avaliação patológica de amostras de tecido hepático é geralmente realizada após os resultados de uma ,ou mais das técnicas acima mencionadas indícarem a presença provável de HCC. Assim, qs rnétodos da invenção podem ainda incluir avaliação de uma amostra de tecido hepático de um rriodelo e10 animal in vivo (por exemplo, urri rato db/db) útil em estudos de HCC, a fim de determinar se uma sequência de peptídeo apresenta evidência de indução do carcinoma hepatocelular. Na avaliação microscópica, um patologista pode determinar se um dos quatro tipos de arquitetura e citológicos gerais (padrões) 15 de HCC estão presentes (ou seja, fibrolamelar, pseudoglandular (adenóide), pleomórfico (células gigantes) e células claras).

A invenção também inclui a geração e uso de anticorpos e os seus fragmentos, que se ligam às sequências de peptídeos da invenção, incluindo variantes de sequências de subsequências e 20 forrnas modificadas das sequências de peptídeos exernplifícados e (jncluindo os peptídeos listados nas Tabelas 1 a 8 e Figura 1).

Tal como aqui utilizados, os termos "anticorpos" (Ab) e "imunoglobulinas'" (Ig) se referem a glicoproteinas possuindo 25 as mesmas características estruturais. Enquanto que os anticorpos exibem especificidade de ligação a um antígeno, as imunoglobulinas incluem tanto os anticorpos como outras moléculas semelhantes a anticorpos, que podem não ter a especificidade do antígeno.

O termo "anticorpo" inclui anticorpos monoclonais intactos, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos bi específicos) formados a partir de pelo " menos dois antícorpos intactos, e fragmentos de Iigação de 5 anticorpos, incluindo fragmentos Fab e F(ab)'2, desde que estes exibam a atividade biológica desejada. a unidade de base estrutural do anticorpo compreende um tetrâmero e cada tetrâmero é composto de dois pares idênticos de cadeias de polipeptídeo, tendo cada par uma cadeia "leve" (cerca de 25 IO kDa) e uma cadeia "pesada" (cerca de 50 a 70 kDa). A porção e amino-termínal de cada cadei.a inclui uma região variável de cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos primeiramente responsáveis pelo reconhecimento do antigeno. Em contraste, a "porção carboxi-terrninal de cada cadeia define uma região 15 constante prímeiramente responsável pela função efetora. Cadeias leves humanas são classificadas como cadeias leves kappa e lambda, ao passo que as cadeias pesadas humanas são classificadas como mu, delta, gama, alfa ou silon, 12 definem o isotipo do anticorpo como IgM, IgO, IgA e IgE, 20 respectivamente. Fragmentos de ligação são produzidos por técnicas de DNA recombinante ou por clivagem enzimática ou e química de anticorpos intactos. Fragmentos de ligação incluem Fab, Fab', F(ab')2, Fv e anticorpos de cadeia simples.

Cada cadeia pesada tem nurna extremidade um domínio variável 25 (VH) seguido por um número de domínios constantes. Cada cadeia leve tern um domínio variável numa extremidade (VL) e um domínio constante na sua outra extremidade, o domínio constante da cadeia leve está alinhado com o primeiro domínio constante da cadeia pesada, e o domínio variável da cadeia 30 leve está alinhado com o domínio variável da cadeia pesada. Nas cadeias leves e pesadas, as regiões variáveis e constantes " são unidas por uma região "J" de cerca de 12 ou mais aminoácidos com a cadeia pesada incluindo igualmente uma regiào "D" de cerca de mais 10 aminoácidos. Todas as cadeias de anticorpos apresentam a mesma estrutura geral de regiões de estru'tura relativamente conservadas (FR) unidas por três regiões hiper variável, também chamadas de regiões 5 determinantes da complementarídade ou CDRS. As CDRS das duas cadeias de cada par estão alinhadas pelas regiões de estruturas, permitindo ligação a um epítopo específico. A partir de N-terminal para C-terminal, ambas as cadeias leves e pesadas compreendern os domínios FRI, CDRI, FR2, CDR2, FR3, 10 CDR3 e FR4.

e Um anticorpo intacto tem dois locais de ligação e, exceto nos anticorpos bifuncionais ou bi específicos, os dois locais de ligação sÊio os mesmos. Um anticorpo bi específico ou bifuncional é um anticorpo híbrido artificial, tendo dois 15 pares de cadeias pesadas/leves diferentes e dois sítios de ligações diferentes. Os anticorpos bi específicos podem ser produzidos por uma varíedade de métodos, incluindo a fusão de hibridomas ou ligação de fragmentos Fab'.

Tal como aqui utilizado, o terrno "anticorpo monoclonal" se 20 refere a um anticorpo obtido de uma população de anticorpos e substancialmente homogêneos, ou seja, anticorpos individuais que constituem a população são idênticos exceto quanto a possíveis mutações de ocorrência natural que podem estar presentes em quantidades menores. Os anticorpos monoclonais 25 são altamente específicos, sendo dirigidos contra um único local antigênico. Em contraste com preparações de anticorpos policlonais, que incluem diferentes anticorpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é dirigido contra um único determinante no 30 antígeno.

Um "anticorpo neutralizante" é uma molécula de anticorpo que é capaz de eliminar ou reduzir de forma significativa uma função de efetor de um antígeno alvo ao qual se liga.

Fragmentos de ligação de anticorpos,podem ser produzidos por 5 clivagerrt enzimática ou química de anticorpos intactos. A digestão de anticorpos com enzima papaína resulta em dois fragmentos de ligação ao antígeno idênticos, também conhecidas como fragmentos "Fab'" e um fragmento "Fc", que não tem atividade de ligação ao antígeno. A digestão de anticorpos com ®iO enzima pepsina resulta em um fragmentos de F(ab')2 em que os ' dois braços da molécula de anticorpo permanecem ligados e formam locais de ligação de dois antígenos. O fragmento de F(ab')2 tem a capacidade de reticular o antígeno.

O termo "Fab" se refere a urn fragmento de um anticorpo que 15 coínpreende o domínio constante da cadeia leve e o domínio CHl da cadeia pesada; O termo "Fv", quando aqui utilizado, se refere ao fragmento mínimo de anticorpo que retém ambos os antígenos de reconhecimento e locais de ligação ao antígeno.

Numa espécie Fv de duas cadeias, esta região consiste num 20 dímero de domínio de uma cadeia pesada e u.ma variável de @ cadeia leve em associação não covalente. Numa espécie Fv de cadeia simples, um domínio de uma cadeia pesada e uma variável- de cadeia leve pode ser covalentemente ligado por um ligante peptídico flexível, de "tal modo que as ca.deias leves e pesadas 25 podem se associar numa estrutura "dimérica"' análoga a este em espécie Fv de duas cadeias. É nesta configuração que os três CDRS de cada domínio variável interagem para definir um Iocal de ligação ao antigeno na superfícié do dímero VH-VL. Enquanto os seis CDRs, em conjunto, conferem especificidade de ligação 30 ao antígeno ao anticorpo, mesmo um 'único domínio variável (ou metade de um Ev compreendendo apenas três CDRS específicos pará um antígeno) tem a capacidade de reconhecer e se ligar ao antígeno.

O termo "regiões determinantes de complementaridade" ou "CDRS"' se refere a peças de receptores imunológicos q'.ie entram em 5 contato com um ligante específico e determína a sua especificidade. O termo "região hiper varíável" se refere aos resíduos de aminoácido de um anticorpo que são responsáveis pela Iigação ao antígeno': A região hiper variável corripreende geralmente resíduos de aminoácidos de uma "região determinante .10 de complementaridade" ou "CDRS" e/ou os resíduos de uma "volta e hiper variável".

Tal como aqui utilizado, o termo "epítopo " refere-se a sítios de ligação de anticorpos de antígenos de proteínas. Os determinantes epitópicos consistem normalmente em agrupamentos 15 de superfície quimicamente ativos de moléculas tais como aminoácidos ou cadeias laterais de açúcar, bem como três características estruturais e dimensionais de carga específicas. Urn anticorpo se diz ligar a um antígeno quando a constante de díssociação é < 1µM, preferencialmente S 1OOµM e 20 mais preferencialrnente < 1OµM. Um aumento da constante de e equilíbrio ("Kd") significa que há menos de afinidade entre o epítopo e o anticorpo, ao passo que urna diminuição da constante de equilíbrio significa que existe uma maior afinidade entre o epítopo e o anticorpo. Um anticorpo com uma 25 Kd de "não mais do que" uma certa quantídade significa que o antícorpo se liga ao epítopo com q dado Kd ou mais fortemente.

Enquaríto Kd descreve as característícas de ligação de um epítopo e um anticorpo, "potência" descreve a eficácia do próprio anticorpo para uma função do anticorpo. Não existe 30 necessariamente uma correlação entre a constante de equilíbrío e a potência, assim, por exemplo, um P(d relativamente baixo não significa automaticamente urna potência elevada.

s'm .==

O termo "liga-se seletivamente", em referência a um anticorpo, não significa que o anticorpo se liga apenas a uma única substância, mas s'im que o K[) Kd do anticorpo com uma primeira substância é menor do que a Kd do anticorpo para uma segunda 5 substância. Um anticorpo que se liga exclusivamente a um epítopo se liga apenas a esse epítopo simples.

Quando administrados em humanos, os anticorpos que contêm regiões de roedor (murino ou rato) variáveis e/ou constantes são rnuitas vezes associadas com, por exemplo, depuração rápida e10 a partir do corpo ou a geração de uma resposta imunológica por 4 parte do corpo contra o anticorpo. A fim de evitar o uso de anticorpos derivados de roedores, os anticorpos totalmente hurnanos podern ser gerados por meio da introdução da função de anticorpo humano num roedor, de modo que o roedor produza 15 anticorpos totalmente humanos. A menos que aqui especificamente identifícados, antícorpos "humanos" e "completamente humanos" podem ser aqui utilizados in.distintamente . O termo '"plenamente humano" pode ser útil ao distinguir os anticorpos que são apenas parcialmente humanos 20 daquej-es que são completamente ou totalmente humanos. O especialista na técnica está ciente de diversos métodos de e produção de anticorpos completamente hurnanos.

A fim de resolver as possíveis respostas, anticorpos humanos anti-rato, anticorpos quiméricos ou humanizados podem ser 25 utilizados de outra forma. Os anticorpos quiméricos possuem uma região constante humana e uma região variável de murino, e, como tal, as respostas de anticorpos anti-quiméricos humanos podem ser observadas em alguns pacientes. Por isso, é vantajoso proporcionar anticorpos totalmente .humanos contra 30 enzimas rnultiméricas a fim de evitar possível anticorpo humano anti-rato ou respostas de anticorpos anti-quiméricos humanos.

Os anticorpos monoclonais totalmente humanos podem ser preparados, por exemplo, através da geração de linhas celulares de hibridoma por técnicas conhecidas dos peritos na arte. Outros rnétodos de preparação envolvem o uso de 5 sequências que codificam os anticorpos específi-cos para a transformação de uma célula hospedeira de mamífero adequada, tal como uma célula CHO. A transformação pode ser feita por qualquer método conhecído para introduzir polinucleotídeos numa célula hospedeira, incluindo, por exemplo, c) 10 empacotarnento do polinucleotídeo num vírus (ou num vetor e viral) e a transdução de uma célula hospedeira corn o vírus (ou vetor) ou 'por procedimentos de transfecção conhecidos na arte.

Os rnétodos para introduzir polinucleotídeos heteról-ogos em células de mamífero são bem conhecidos na arte e incluem 15 transfecçào mediada por dextrano, precipitação coni fosfato de cálcio, transfecção mediada por polibreno, fusão de protoplastos, eletroporação, encapsulamento do polinucleotídeo (S) em lipossorrtas e microinjeção direta do DNA em núcleos. Linhas de células de rnamíferos disponíveis como hospedeiros 20 para a expressão são bem conhecidas na arte e incluem, rnas não estão limitadas a, células CHO, células HeLa e células de e carcinoma hepatocelular humano.

Os anticorpos podem ser utilizados para diagnóstico e/ou terapia. Por exemplo, os anticorpos podem ser utilizados como 25 um diagnóstico através da detecção do nível de um ou rnais peptídeos da invenção em um paciente e ou a comparação do nível detectado ao nível de controle normal ou a um nível de linha de base ern um assunto previamente determínado (por exemplo, antes de qualquer doença). Os anticorpos podem ser 30 usados como terapêutica para modular a atividade de um ou rnais peptídeos da invenção, tendo assim um efeito de uma condição ou desordem.

A presente invenção proporciona kits, incluindo, mas não limitado a, sequências de peptídeos da invenção, opcíonalmente em combinação com um ou mais agentes terapêuticos, as composições e as suas composições farmacêuticas embalados em 5 material de embalagem adequado. Um kit inclui, opcionalmente, uma etiqueta ou inserção de embalagem que inclui uma descriçãc' dos componentes ou instruções para o uso in vitro, in vivo ou ex vivo dos seus componentes. Instruções exemplares incluem instruções para reduzir ou minimizar a glicose no sangue, o 10 tratamento de hiperglícemia, o tratamento da diabetes, etc.

0 Um kit pode conter um conjunto de tais componentes, por exemplo, duas ou mais sequências de peptídeos sozinhas ou uma combinação de uma sequência de peptídeo com uma outra composição terapeuticamente útil (por exemplo, uma droga 15 antidiabética, tal como um composto de gastrina).

O termo "material de embalagem" refere-se a uma caixa de estrutura física arrnazenando dos cornponentes do 'kit. o material de embalagem pode manter os componentes de forma estéril e pode ser feito de material comumente usado para tais 20 fins (por exemplo, papel, fíbra de papelão ondulado, vidro, e plástico, papel alumínio, ampolas, frascos, tubos, etc.).

Os kits da invenção podem i-ncluir etiquetas ou inserçães. Etiquetas ou inserções i.ncluem "impressos", por exemplo, papel ou papelão, separado ou afixado num componente ou um kit ou 25 material de embalagem (por exemplo, uma caixa), ou ligado a, por exemplo, uma ampola, tubo ciu frasco contendo um componente do kit. Etiquetas ou inserções podem ainda incluir um meio legível por computador, como um di.sco (por exemplo, disco rígido, cartão, disco de memória), disco óptico, como CD- ou 30 DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, fita magnética ou uma mídia de armazenamento el-étrica, como memória RAM e ROM ou híbridos desses como meios magnéticos/ópticos de armazenamento, mídia flash ou tipo de memória cartões.

As etiquetas ou inserções podem incluir informações de identificação de um ou mais comporientes, valores de dose, 5 farmacologia clinica do(s) ingrediente(s) ativo(s) incluindo mecanismo de ação, farrnacocinética e farrnacodinâmica. Etiquetas ou inserções podern incluir informações de identificação informações do fabricante, número de lote, Iocalização do fabricante e data.

Cio As etiquetas ou inserções podern incluir informações sobre uma condição, desordem, doença ou síntoma para c) qual pode ser utilizado um componente do kit.. Etiquetas ou inserções podem incluir instruções para o clínico ou de um objeto para o uso de um ou mais dos componentes do kit em um método, protocolo 15 de tratamento ou regime terapêutico. As instruções pode-n incluir- quantidades de dosagem, frequência ou duração e as instruções para a prática de qualquer um dos métodos, protocolos de tratamento ou regimes terapêuticos aqui estabelecidos. Instruções exemplares incluern instruções para o 20 tratamento ou u'so de uma sequência de peptídeo como aqui e estabej-ecido. Os kits da invenção, portanto, pode incluir, adicionalmente, as etiquetas ou as instruções para a prátíca de qualquer dos métodos e usos da presente invençào aqui descrita, incluindo os métodos de tratamento e usos.

25 As etiquetas ou inserções podem incluir i-nforwações sobre qualquer benefício que um cornponente pode proporcionar, como um benefício profilático ou terapêutico. Eti-quetas ou inserções podem incluir informações sobre os potenciais efeitos colaterais adversos, tais como avisos ao paciente ou 30 situações médicas em que não sería apropriado usar uma composição particular. Efeitos coIaterais adversos podem também ocorrer quando o paciente tem, vai ser ou está atualrriente tomando um ou mais medicamentos que podem ser incompatíveis com a composição, ou o paciente tem, será ou está passando por outro protocolo de tratamento ou esquema 5 terapêutico que seria incompatível com a composição e, por conseguinte, as instruções podem incluir inforrnações relativas a tais incompatibilidades.

Kits da invenção podem incluir adicionalmente outros componentes. Cada componente do kit pode ser fechado dentro de B10 um recipiente individual e todos cjs diversos recipientes podem estar dentro de um único pacote. Kits de invenção podem ser projetados para o armazenamento a frio. Kits da invenção podem ainda ser concebidos para conter sequências de peptídeos da invenção ou que contêm ácidos nucleicos que codificam. 15 sequências de peptídeos. As células do kit podem ser mantídas sob condições de armazenamento adequadas até estarem prontas para uso .

A menos que de outro modo definido, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado que o 20 normalmente entendido por um vulgar perito na arte à qual este e invenção pertence. Embora métodos e materiais similares ou equivalentes aos aqui descritos possam ser utilizados na prática ou testes da invenção, os métodos e materiais adequados são descritos aqui.

25 Todos os pedídos, publicações, patentes e outras referências, citações GenBank e citações ATCC aqui citadas são incorporadas por referência na sua totalidade. Em caso de conflito, a espec'ificação, incluindo definições, irá controlar. Tal como aqui utilizado, as formas singulares "um, "e" e "O" incluem 30 referentes plurais a menos que o contexto indique claramente o contrário. Assim, por exemplo, a referência a "uma sequência de peptídeos" ou "tratamento" inclui uma pluralidade de tais sequências, tratamentos, etc.

Tal corno aqui utilizados, os valores numéEicos são frequentemente apresentados num formato de faixa ao longo 5 deste documento. O uso de um formato de faixa é apenas por conveniência e brevidade e não deve ser interpretado como uma limitação inflexível sobre o âmbito'da invenção a inenos que o contexto indique claramente o contrário. Consequentemente, o uso de uma faixa inclui expressamente todos os possíveis sub- d intervalos, todos os valores numéricos individuais dentro desta faixa e todos os valores numéricos ou intervalos numéricos incluindo números inteiros dentro dessas faixas e das frações de valores ou números inteiros dentro dos padrões, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Esta 15 construção é aplicável independentemente da largura do intervalo e em todos os contextos ao longo deste documento de patente. Assim, por exemplo, a referência a uma faixa de 90 a 100%, inclui 91 a 99%, 92 a 98%, 93 a 95%, 91 a 98%, 91 a 97%, 91 a 96%, 91 a 95%, 91 a 94%, 91 a 93%, e assim por díante. A 20 referência a 'um intervalo de 90 a 100%, tambérn inclui 91%, 92%, 93%, 94%, 95%,, 95%, 97%, etc, assim como 91,1%, 91,2%, e 91,3%, 91,4%, 91,5%, etc, 92,1%, 92,2%, 92,3%, 92,4%, 92,5%, etc, e assim por diante.

Além disso, a referência a uma faixa de 1 a 3, 3 a 5, 5 a 10, 25 10 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 60, 60 a 70, 70 a 80, 80 a 90, 90 a 100, 100 a 110, 110 a 120, 120 a 130, 130 a 140, 140 a 150, 150 a 160, 160 a 170, 170 a 180, 180 a 190, 190 a 200, 200 a 225, 225 a 250 incluindo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, etc. Ern mais um 30 exemplo, a referência a uma faixa de 25 a 250, 250 a 500, 500 a 1000, 1000 a 2500 ou 2500 a 5000, 5000 a 25,000, 5000 a 50,000 inclui qualquer valor numérico ou um intervalo dentro ou englobando tais valores, por exemplo, 25, 26, 27, 28, 29 ... 250, 251, 252, 253, 254....500, 501, 502, 503, 504..., etc.

Tal como aqui utilizado, também uma série de intervalos são 5 descritos ao longo deste documento. O uso de uma série de faixas incluem combinações das faixas superior e inferior para proporcionar uma faixa mais ampla. Esta construção é aplicável independentemente da largura do intervalo e em todos os contextos ao longo deste documento" de patente. Assim, por g10 exemplo, a referência a uma série de faixas, tais como 5 a 10, 10 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 75, 75 a 100, 100 a 150, inclui faixas como 5 a 20, 5 a 30, 5 a 40, 5 a 50, 5a 75, 5 a 100, 5 a 150 e 10 a 30, 10 a '40, 10 a 50, 10 a 75, lO a 100, 10 a 150 e 20 a 40, 20 a 50, 20 a 75, 20 a 100, 20 a 15 150 e assim por diante.

Èor razões de concisão, certas abreviaturas são aqui usadas.

Um exemplo é a única letra de abreviatura para representar resíduos de arninoácidos. Os aminoácidos e suas abreviaturas correspondentes" de três letras e uma única letra sãQ como se 20 segue: e alãriina Ala (A) arginina Arg (R) asparagina Asn (N) ácido aspártico Asp (D) cisteína Cys (C) ácido glutâmico glu (E) glutamina .Gln (Q) glicina Gly (G) histidina His '(H)

isoleucina Ile (I) leucina Leu (L) E lisina Lys (K) metionina Met (M) fenilalanina Phe (F) prolina Pro (P) serina Ser - (S) treonina Thr (T) triptofano Trp (W) tirosina Tyr (Y) valina Val (V) e A invenção é geralmente revelada aqui utilizando Iinguagem afirmativa para descrever as várias formas de realização. A invenção também inclui especificamente formas de realização em 5 que determinado assunto é excluido, no todo ou em parte, como substâncias ou materiais, as etapas do rnétodo e condições, protocolos, procedimentos, ensaios ou análises. Assim, embora a invenção geral não seja aqui expressa em termos do que a invenção não inclui, aspectos que não estão expressamente 10 incluídos na presente invenção são, no entanto, aqui e divulgados.

Foram descritos uma série de for-nas de realização da ínvenção.

No entanto, será entendido que várias mo'dificações podern ser feitas serri se afastar do espíríto e âmbito da invenção. Por 15 conseguinte, os exemplos seguintes destinam-se a ilust'rar, mas não limitar o âmbito da invenção descrita nas reivindicações.

Exemplos Exemplo 1 O que se segue é uma descrição de vários métodos e materiais utilizados nos estudos aqui descritos.

5 Anímaís. Ratos cib/db foram adquiridos no The jackson Laboratory (Bar Habor, ME). Os ratos foram mantidos cie acordo com as diretrizes de bem-estar sob luz controlada (12 horas de luz e 12 horas de ciclo escuro, escuro 06:30 prn a 6:30 am), 6 condições de temperatura (22±4°C) e umidade (50%±20%). Eles 10 tinham livre acesso à água (água destilada autoclavada) e foram alimentados ad libitum com urna dieta comercial (Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, Irradiated 2018 Teklad Global 18% Protein Rodent Diet), contendo 17 kcal%de gordura, 23 kcal°sde proteí'na e 60 kcal%cle carboidratos. Para obesidade 15 induzida por dieta, os ratos C57BL6/J (jackson Laboratory) foram rnantidos em uma dieta rica em gordura (D12492, Research Diet, New Brunswick, NJ. USA), contendo 60 kcal%de gordura, 20 kcal%de proteína e 20 kcal%de carboidratos durante 16 a 20 semanas. Todos os estudos com animais foram a.provados pelo NGM e0 Institutional Animal Care and Use Comrnittee.

Sequêncías de DNA e de amínoácidos. CDNA de ORF codificando variantes FGF19 humano (Homo sapiens FGF19, Gen8ank Accession . No. NM 005117.2).

Sequência de proteínas codificadas pelo cDNA (GenBank 25 Accessíon No. NP 005108.1) PCR. FGF19 ORF foi amplificado com reaçáo em cadeia de polimerase (PCR) utilizando DNA recombinante (cDNA) preparado a partir de tecido do intestino delgado , humano. Kits reagentes PCR com Phusion de alta fidelidade da polimerase de DNA foram adquiridos de New

England 81oLabs (F-530L, Ipswich, MA). Foram- utilizados os seguintes iniciadores: iniciador de PCR para a frente: 5' CCGACTAGTCACCatgcggagcgggtgtgtgg e iniciador de PCR inverso: 5' .ATAAGAATGCGGCCGCTTACTTCTCAAAGCTGGGACTCCTC.

5 Fragmento de DNA amplificado foi diqerido com as enzimas de restriçào Spe I e Not I (qs locais de restrição foram incluídos nos iniciadores de PCR 5' e 3', respectivamente) e foi em seguida ligado com vetores transgene AAV que tinham sido digeridos com a mesma restrição enzimas. O vetor eiL0 utilizado para a expressão continha um marcador selecionável e uma cassete de expressão constituída por um promotor eucariota forte 5' de um loc-al para a inserção da sequência de codificação clonada, seguida por uma região 3' não traduzida e de políadenilação do hormônio de crescimento da cauda bovino.

15 A construção de expressão também é flanqueada por repetições terminais internas na extremidade 5' e 3'.

Produção e purifícação de AAV. Células AAV293 (obtidas a partir da Agilent Technologies, Santa Clara, CA) foram cultivadas em Dulbeco's Modification of Eagle's Medium (DMEM, 20 Mediatech, Inc. Manassas, VA) suplementado com 10% de soro e fetal bovino e solução de antibiótico-antimicótico lx (Mediatech, Inc. Manassas, VA). As células foram plaqueadas a uma densidade de 50% no dia 1 em placas de cultura de células de 150 mílímetros e transfectadas no dia 2., utilizando o 25 método de precipitação com fosfato de cáiciQ com os três plasmídeos que se seguem (20 µg/ cada placa):, plasmídeo de AAV transgene, plasmídeos pHelper (Agilent Technologies) e p'lasmídeo AAV2/9 (Gao et al., j. Virol. 78:6381 (2004)). 48 horas após a transfecçào, as células foram raspadas das 30 placas, sedimen'tadas por centrifugação a 300Oxg e ressuspendida em tarnpão contendo 20 mM Tris pH 8,5, NaCl 100 mM e MgC12 1 mM. A suspensão foi congelada num banho de gelo seco e álcool foi então descongelada em banho de água a 37°C.

Os ciclos de congelamento e descongelamento foram repetidos três vezes; Benzenase (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) foi adicionado a 50 unidades/ml; desoxicolato foi adicionado a uma 5 concentração final de 0,25%. Após urria incubação a 37°C durante 30 minutos, os detritos celulares foram sedimentados por cerrtrifugação a 500Oxg durante 20. min. As partículas virais presentes no sobrenadante foram purificadas utilizando um gradiente descontinuado iodixanal (Sigma-Aldrich, St. Louis, 10 MO) como anteriormente descríto (Zolotukhin S. et al (1999) €J Gene Ther. 6:973). O estoque viral foi concentrado utilizando Vivaspin 20 (MW cutoff 100.000 Dalton, Sartorius Stedim Bio"tech, Aubagne, França) e ressuspenso em solução salina tamponada com fosfato ("BS) com 10% de glicerol e armazenado a 15 -80°C. Para determinar o número de cópia do genoma viral, 2 µ1 de estoque viral foram incubadas em 6 µ1 de solução contendo 50 unidades/ml de Benzonase, 'iO mM Tris-HCl pH 7,5, MgC12 10 MM e CaCl2 10 mM a 37°C durante 30 minutos.

Em seguida, 15 µ1 de solução contendo 2 mg/ml de protei.nase K, 20 SDS a 0,5% e EDTA 25 mM foram adicionados e a mistura foi incubada durante mais 20 min a 55°C para libertar o DNA viral. C) O DNA viral foi limpo com mini-kit DNeasy (Qiagen, Valencia, CA) e eluído com 40 µ1 de água. Cópia do genoma viral (GC) foi determinada utilizando PCR quantitativo.

25 Estoque viral foi diluído com PElS para desejável GC/ml. Solução de trabalho viral (200 µ1) foi entregue em ratos através de injeção na veia da cauda.

Ensaío de glícose no sangue. Glicemia em recorte da cauda de rato foi medida utilizando tiras de teste ACCU-CHEK Active 30 lidos por ACCU-CHEK Active medidor (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN) seguindo as instruções do fabricante.

Ensaío per£í1 Iípídico. O sangue total a partir de recortes da cauda de rato foi coletado em tubos capílares lisos (BD Clay Adams SurePrep, Becton Dickenson e Co. Sparks, MD). O soro e as células do sangue foram separados por centrifugação dos 5 tubos em um Autocrit Ultra 3 (Becton Dickinson and Co. Sparks, MD). As amostras de soro forarn testadas para o perfil lipídico (triglicerídeos, colesterol total, HDL e não-HDL), utilizando Integra 400 Clinical Analyzer (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN) seguindo as instruções do fabricante.

éQ Ensaío de nível de exposíção do soro FGF19/FGF21/varíantes. O sangue total (cerca de 50 µ1/mouse) a partir de recortes da cauda do rato foi coletado em tubos capilares lisos (BD Clay Adams SurePrep, Becton Dickenson e Co. Sparks, MD). O soro e as células do sangue Eoram separados por centrifugação dos 15 tubos em um Autocrit Ultra 3 (Becton Dickinson and Co. Sparks, MD). Níveis de exposição de FGF19, FGF21 e variante no soro forarn determinados utilizando kits de EIA (Biovendor), seguindo as instruções do fabricante.

"Ensaío de careínoma hepatocelular (HCC). Espécime de fígado 20 foi colhido a partir de ratos db/db 6 meses após a injeção de e AAV. Pontuação de HCC é registada como o número de nódulos de HCC na superfície de todo o fígado de ratos injetados com variantes dividido pelo núrr'.ero de nódulos de HCC de ratos injetados com FGF19 de tipo selvagern.

25 Ensaío expre's3ão gêniea hepátíca. Espécime de fígado foi colhido e homogeneizado em reagente Trizol (Invitrogerí). O RNA total foi extraido seguindo as instruções do fabricante. O RNA foi tratado com DNase (Ambion), seguido por análise quantitativa de RT-PCR utilizando iniciadores Taqman e 30 reagentes de Applied Biosystems. Os níveis de ARNm relativos da aldo-ceto redutase e slc1a2 no fígado foi calculado utilizando o método de LlnàCt.

Ensaios de atividade e ligação FGFR4. ELISA em fase sólida (Iigação) e ensaio de fosforilação de ERK fora-n realizados 5 utilizando proteínas recombinantes purificadas. Ensaío de ligação de FGFR foi realizado utilizando ELISA fase sólida.

Resumidamente, placa de 96 poços foi revestida com 2 ug/ml anticorpo anti-hFc e incubada com I ug/ml- de FGFR1-hFc ou FGFR4-hFc. A ligação às variantes FGF19 na presença de 1 ug/ml 10 de b-klotho solúvel e 20 ug/ml de heparina foi detectada por e anticorpos biotinílados anti-FGF19 (0.2ug'/mL), seguido por incubação com estreptavidina-HRP (lOOng/ml). Para o ensaio de ativação FG"R4, células Hep3B foram estimuladas com variantes FGF19 durante 10 minutos a 37°C, em seguida, imediatamente 15 lisadas e ensaiadas para a fosforilação de ERK, utilizando um kit disponível comercialmente a partir de Cis-8io. ' Exemplo 2 O que se segue é uma descrição de estudos que mostraín a atividade de redução de glicose de várias variantes de e0 sequências de FGF19 e FGF21 e construções de fusão FGF19/FGF21.

A Figura 2 ilustra estruturas de fusão FGF19/FGF21 exemplificativas e os segrnentos de cada um dos FGF1° e FGF21 presentes nos peptídeos fundidos. Estes peptídeos foram 25 analisados para atividade de redução da glicose e, estatisticamente, significativa elevação ou urri aumento da atividade de lipídeo (Tabelas 1 a 8 e Figura 1).

' Ratos (db/db) foram injetados com vetor viral expressando FGE"19, FGF21 ou variantes, e analisados após a injeção.

Atividade de redução de glicose de cada sequência é representada por um símbolo "+" (um símbolo "-" significa nenhuma atividade de redução da glicemia, um símbolo "+/-" significa que variantes mantém atividade minima de redução da 5 glicose); atividade de elevação de lipideo é representada por um sinal "+" (unt símbolo "-" significa que não há atividade de elevação de lipídeo, urn símbolo "+/-" significa que variantes mantém a atividade rnínima de elevação do lipídeo, Figura 2).

Duas fusões de FGF21 e FGF19, denotadas variante M5 e variante 6L0 45 (M45), exibiram atividade de redução de glicose e uma ausência estatísticamente significativa de elevação de lipídios ou aumento da atividade. Variantes denotadas Ml, M2 e M69, respectivamente (Figura 1), também exibiu atividade de redução de glicose (Figura 3B e 3C, Tabela 5). Dados 15 comparando atividade de redução de glicose e elevação de lipídios ou aumento da atividade de M5, Ml, M2 e M69 com FGF19 e FGF21 estão ilustrados nas Figuras 3A a 3C e 4A a 4C.

Exemp1 o 3 O que se segue é uma descrição de estudos que mostram que as e20 variantes M5, Ml, M2 e M69 não são tumorgênicas, conforme determinado pela formação de carcinoma hepatocelular (HCC) e que as variantes que M5, M2 e M69 tarnbém não reduzem a massa rnuscular magra e massa gorda.

Anirnais (db/db) forarn injetados com vetores AAV expressando 25 FGF19, FGF21, M5, M1, M2, ou M69 ou injetados com solução salina e analisados 6 meses após '"à injeção- Os dados indicam que as variantes M5, Ml, M2, e M69 não induzirarn a formação (HCC) significativa (Figuras 5A a 5C).

Animais (ratos db/db) também foram injetados com vetor viral expressando FGF19, FGF21, M5, Ml, M2 ou M69 ou injetados com solução salina e analisados seis meses após a injeção para o efeito sobre a massa magra e massa gorda. Os dados indicam que 5 peptídeos M5, M2 e M69 não provocaram urna redução estatisticamente significativa da massa magra ou massa gorda, em contraste com o FGF21, e que peptídeo Ml reduz a massa magra (Figuras 6A a 6C).

Exemplo 4 €)10 A seguir, um resumo dos dados de 25 peptideos variantes adicionais analisados para a atividade de elevação de lipídios e tumorigênese. Os dados mostram claramente uma correlação positiva entre a elevação de lipídeos e a tumorigênese, conforme determinado pela formação carcinoma hepatocelular 15 (HCC) em ratos db/db'.

Tabelas 1 a 3 resumem dados para 26 peptídeos variantes diferentes. Tais peptídeos variantes exemplificados têm sequência C-terminal FGF19: PHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLE

IKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPV èzo SLSSAKQRQT,YKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTG LEAVRSPSFEK na porção C-terminal, por exemplo, seguindo os resíduos de aminoácidos "ETG". Notavelmente, peptídeos variantes (total de 7, incluindo M5) que não causam um aumento estatisticamente significativo de lipídíos ' não induziram 25 formação carcinoma hepatocelular (HCC). Em contraste, todos os peptídeos variantes (17 no total) que causaram um aumento estatisticamente significativo de lipídeos também causou formação de carcinoma hepatocelular (HCC) erri ratos. Estes dados indicam que existe uma forte correlação positiva entre a 30 atividade de elevação de lipídios e formação de carcinoma hepatocelular (HCC). Por conseguinte, a atividade de elevação de lipideo pode ser usada como um indicador e/ou prognóstico de forrnação de carcinoma h'epatocelular (HCC) em animais.

Tabela 1: Tríglícerídeos e coIesterol elevados em ratos db/db parece correlacíonar-se positívamente com a formação de HCC.

Domínío N-termínal Príncípal Elevação Formação -^- Lípídeos HCC r > FGF19 RPLAFSDAGPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG + + FGF21 HPIPDSSPLLQ--FGGQV RQRYLYTDD M5 · R-HPIPDSSPLLQ--FGGQV RLRHLYTSG - ~ M74 R --------DAGPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG + + M75 R -------------VHYGWGDPI RLRHLYTSG — M76 R ------------------GDPI RLRHLYTSG - M77 R RLRHLYTSG M78 R -------- AGPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG + + M79 R ----------GPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG + + M80 R -----------PHVHYGWGDPI RLRHLYTSG M81 R ----------- HVHYGWGDPI RLRHLYTSG - 5 Tabela 2: Tríglícerídeo e colesterol elevado ~ ratos db/db parece se correlacíonar posítívamente com formação de HCC €) Domínío N-termínal ^ Príncipal Eíevação Iípídeos Formação de HCC /" > FGF19 RPLAFSDAGPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG + + FGF21 HPIPDSSPLLQ--FGGQV RQRYLYTDD M82 RPLAFSAAGPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG + + M83 RPLAFSDAAPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG +/- +/ M84 RPLAFSDAGAHVHYGWGDPI RLRHLYTSG +/- +/ M85 RPLAFSDAGPHVHYGAGDPI RLRHLYTSG — M86 RPLAFSDAGPHVHYGWGAPI RLRHLYTSG + + M87 RPLAFSDAGPHVHYGWGDAI RLRHLYTSG + +

Tabela 3: Tríglícerídeo e coIesterol elevado em ratos db/db parece se correlacíonar posítívamente com Eormação de HCC Domínio N-terminal Principal Elevação Formação lipídeos de HCC FGF19 RPLAFSDAGPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG + + FGF21 HPIPDSSPLLQ--FGGQV RQRYLYTDD H31A/S141A(M88) FGF19 + + H31A/H142A(M89) FGF19 + + K127A/R129A(M90) FGF19 + + K127A/S141A(M91) FGF19 + + K127A/H142A(M92) FGF19 + + êj R129A/S141A(M93) FGF19 + + S141A/H142A(M94) FGF19 + + K127A/H142A(M95) FGF19 + + K127A/R129A/S141A(M97) FGF19 + 4- K127A/R129A/H142A(M98) FGF19 + + K127A/R129A/S141A/HI42A{M99) FGF19 + + Exemplo 5 5 A seguir, um resumo dos dados de peptídeos variantes FGF19 €3 adicionais analisados para a atividade de redução de glicose e atividade de elevação de lipídios.

A Tabela 4 ilustra as "sequências principais" de peptídeo de 35 variantes FGF19 adicionais, denotadas M5 a M40. Tais 10 peptídeos variantes exernplificados têm sequência FGF19 C- terminal, PHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYL

CMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPL SHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLFSDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK na por- ção C-terminal, por exempl-o, seguindo os resíduos de 15 aminoácidos "ETG" da sequência principal. Os dados mostram claramente que as variantes M6, MJ, M8, rriM38 e M39 têm as características desejadas de atividade de redução de glicose e não estatisticamente significativa atividade de elevação de lipídeos em ratos db/db.

Tabela 4: Varíantes adícíonaís e Mapeamento do domínio N- 5 termínal Domínío N—terminal Princípal Redução Elevação de de GIícose Iípídeos FGF19 RPLAFSDAGPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG + + EGF21 HPIPDSSPLLQ--FGGQV RQRYLYTDD + M5 R-HPIPDSSPLLQ--FGGQV RI.RHLYTSG + ~ M6 R-------DSSPLLQ--FGGQV RLRHLYTSG + + ê) M7 RPLAFSDSSPLLQ--FGGQV RLRHLYTSG + ~ M8 R-HPIPDSSPLLQ--WGDPI RLRHLYTSG + M9 R-FIPIPDSSPLLQFGWGDPI RLRHLYTSG + + MlO R-HPIPDSSPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG + Mll RPLAFSDAGPLLQ--WGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M12 RPLAFSDAGPLLQFGWGDPI RLRHLYTSG + M13 RPLAFSDAGPLLQ--FGGQV RLRHLYTSG M14 R-HPIPDSSPHVHYG--GQV RLRHLYTSG ~ M15 RPLAFSDAGPHVHYG--GQV RLRHLYTSG + + M16 RPLAFSDAGPHVH--WGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M17 RPLAFSDAGPHV--GWGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M18 RPLAFSDAGPH--YGWGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M19 RPLAFSDAGP-V-YGWGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M20 RPLAFSDAGP-VH-GWGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M21 RPLAFSDAGP-VHY-WGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M22 RPLAFSDAGPHVH-GWGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M23 RPLAFSDAGPH-H-GWGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M24 RPLAFSDAGPH-HY-WGDPI RLRHLYTSG N/D N/D €) M25 RPLAFSDAGPHV-Y-WGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M26 RPLAFSDSSPLVH--WGDPI RLRHLYTSG N/D N/D " M27 RPLAFSDSSPEIVH--WGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M28 RPLAFSDAPHV---WGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M29 RPLAFSDAGPHVHY-WGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M30 RPLAFSDAGPHVHYAWGDPI RLRHLYTSG N/D N/D M31 R-HPIPDSSPLLQ--FGAQV RLRHLYTSG +/- M32 R-HPIPDSSPLLQ--FGIYQV RLRHLYTSG M33 R-HPIPDSSPLLQ--FGGQV RLRHLYTSG - ~ M34 'R-HPIPDSSPLLQ--FG7AV RLRHLYTSG +/- — M35 R-HPIPDSSPLLQ--FGGEV RLRHLYTSG +/- +/ M36 R-HPIPDSSPLLQ--FGGQV RLRHLYTSG +/- — M37 R-HPIPDSSPLLQ--FGGUA RLRHLYTSG M38 R-HPIPDSSPLLQ--FGGQT RLRHLYTSG + ~ M39 R-HPIPDSSPLLQ--FGGQT RLRHLYTSG + M40 . R-HPIPDSSPLLQFGWGQPO RLRHLYTSG ~ +

112,/116 Tabela 4a: R¢duçáo dèi Elèvação dà Formaçáo dc Dominio N-temiinal Glicose Lipideos IiCC' Principal FGFI9 " RPL.AFSDAGPHVFIYGWGDPI RLRHLYTSG + + + FGF21 HPIPDSSPLLQ--FCGQV RQRYLYTDD + - W M5 R-HPIPDSSPLLQ--FGGQ.V RLRHLYTSG + -.

M9 R-HPIPDSSPLLQFGWGDPI RLRHLYTSG 4- ' + " M8 R-HPIPDSS'PLLQ--WGDPI RLRHLYTSG + + + Ml2 RPLAFSDAGPLLQFGWGDPI RLRHLYTSG % + . " + MlO R4IPIPDSSPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG W + + Ml3 RPLAFSDAGPLLQ-FGGQV RLRHLYTSG - + + M15 RPLAFSDAGPHVHYG--GQV RIRHLYTSG ' - +/· - MI4 RAPIPIJSSPHVHYG-GQV RLRHLYTSG - +/- - M43 RPLAFSDAGPHVHYG-GD-I RLRHLYTSG , - --' +/'- 0 M6 M7 R—DSSPLLQ--FGGQV RLRHLYTSG RPLAFSDSSPLLQ-FGGQV RLRHLYTSG + + ' +

W 5 Tabela 4b: 'Reduçâo de Ekvaçào de Fomação de Domínia N-terminal GLicose -Lipídeos HCC

I t t Principal FGF19 RPLAFSDAGPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG "- + + FGF21 HPIPDSSPI.LQ--FGGQV RQRYLYTDD + b . MS R-HPIPDSSPL.LQ--FGGQV RLRHLYTSG " - M31 R-HPIPDSSPLLQ--FGAQV RLRHLYTSG + - + M32 R-HPIPDSSPLLQ--FGDQV RLRHLYTSG -r- 0 . .

e M33 M34 M35 R-HPIPDSSPLLQ-FGPQV RLRHLYTSG R-HPIPDSSPLLQ--FGGAV RLRHLYTSG R-HPIPDSSPLLQ-FGGEV RLRHLYTSG m . . - + + + ' 'M36 R-HPIPDSSPLLQ--FGGNV RLRHI.YTSG + +/'- . R-IÍPIPDSSPLLQ-FGGQA RLRHLYTSG - + M37 R-HPIPDSSPLLQ--FGGQI RLRHLYTSG + M38 . RAIPIPDSSPLLQ--FGGQT RLRHLYTSG + M39 - RJIPTPDSSPLLQFGWGQPV RLRHLYTSG - + +" M4Q

Tabela 4c: Reduçào de Ejevàçãò dc Émnaçãô dê Doininio N-terminal - Glicosc Lipídeos HCC t t i Principaj FGFI9 RPTAFSDAGPI-IVHYGWGDPI RLRHLYTSO + " " FGF21 HPIPDSSPLLQ--FGGQV RQRYLYTDD " m - Mj" R-HPIPDSSPLLQ--FGGQV RLRHLyTsg + Q W M52 R—-DSSPLLQ-WGDPI RLRHLYTSG + - + . + M54 RPLAFSDAGPLLQ-JVGDPI RLRHLYTSG + + RPLAFSDAGPH--YGWGDPI RLRHLYTSG + + M55 M56 RPLAFSDAGP-V-YGWGDPI RLRHLYTSG + + - M57 RPLAFSDAGP-VH-GWGDPI RLRHLYTSG - " " M58 RPLAFSDAGPNHY-WGDPI RLRHLYTSG 4. + M59 RPLAFSDAGPH-H-GWGDPI RLm-YTsg - +' + M60 RPLAFSDAGPH-HY-WGDPI RLRHLYTSG m " + + M61 RPLAFSDAGPHV--GWGDPI RLRHLYTSG m + + M62 RPLAFSDAGPHV-Y-WGDPI RLRHLYTSG m -r , * M63 RPLAFSDAGPHVH-WGDPI RLRHLYTSG +" + + M64 RPLAFSDSSPLVH-.WGDPI RLRHLYTSG + _ + " + MGS RPLAFSDSSPHVH-JVGDPI RLRHLYTSG ' - + + Gl RPLAFSDAGPHLQ--WGDPI RLRHLYTSG % -r- + + '<> M66 M67 RPLAFSDAGPHV---WGDPI RI..RHLYTSG % +/- - M68 RPLAFSDAGPHVIIY-WGDPI RLRHLYTSG W +. ~ M4 RPLAFSDAGPHVHYAWGDPI RLRHLYTSG . + + + M69 R'---DSSPLVHYGWGDPI RLRHLYTS"G + + - M70 MR---DSSPLVHYGWGDPI RLRHLYTSG - 4- +' - M53 M-—-DSSPLV.HYGWGDPI 'RJ-RHLYTSG + " - A Tabela 5 ilustra as sequências de peptídeos de 3 variantes 5 FGF19 adicionais, denotadas Ml, M2 e M69. Os dados mostram claramente que estas três variantes possuem as características desejadas de atividade de redução da glicemia em ratos db/db (Figuras 3B e 3C). Estas três variantes parecem elevar C) lipídeos em ratos db/db (Figuras 4B e 4C).

10 Tabela 5: Varíantes adícíonaís MI:RPLAFSDASPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCA-RGQSAHSLLE

IKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPV

SLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTG LEAVRSPSFEK . 15 M2:RPLAFSDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGWDCARGQSAHSLLE IKAVALRTVA-IKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPV

SLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHELPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTG

LEAVRSPSFEK M69:RDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAV 20 ALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSS

AKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAV RSPSFEK

Exemplo 6 A seguir, um resumo de dados rnostrando que FGF19 reduz o peso corporal em ratos obesos induzidos por dieta e em ratos ob/ob e atividade de formação de tumores de fígado e peso corporal 5 em ratos db/db.

Os ratos foram injetados com FGF19 ou FGF21 em vetor AAV. O peso corporal foi registado 4 semanas após a injeção.

Tabela 6: FGF19 reduz o peso corporal em ratos obesos e' índuzídos por dieta e exn ratos ob/ob Redução do Peso Redução do Peso . DomÍnio N-terminal Corporal em Dro Corporal eín Ob/ob , P·rincipal FGF19 RPLAFSDAGPHVHYGWGDPI RLREILYTSG + " RPIPDSSPLLQ--FGGQV RQRY.LYTDD + + FGE21 10 Tabela 7: Correlação entre peso corporal e formação de tumor no fígado de FGF19, FGF21 e varíantes selecíonadas em ratos db/db ' Nódulo Peso €) .Dominio N-terminal Tumoral no Fígado Coiporal j '. i Principal FGF19 RPLAFSDAGPHVHYGWGDPI RLRHLYTSG + Aumentou FGF21 'HPIPDSSPLLQ--FGGQV RQRYLYTDD - Diminuiu M5 R-HPIPDSSPLLQ--FGGQV RLRHLYTSG· Aumentou Diminuiu M6 R--—DSSPLLQ-FGGQV RLRHLYTSG Diminuiu M32 ,R-HPIPDSSPLLQ--FGDQV RLRHLYTSG M52 R-—-DSSPLLQ--WGDPI RLRHLYTSG Diminuiu M69 R----DSSPLVHYGWGDPI RLRHLYTSG Aumentou 15

1l5l11'6 Exemplo 7 O que se segue é um estudo mostrando que peptídeos variante M5 e varíante M69 reduzein a glicose no sangue.

Ratos (ob/ob) foram injetados (por via subcutânea) com M5 (0,1 5 e 1 mg/kg, s.c.) ou FGF19 (1 mg/kg, s.c.) ou variante M69 (0,1 e 1 mg/kg, S.c.) o'u FGF19 (1 mg/kg, S.c.). Os níveis de glicose no plasma foram medidos a 2, 4, 7 e 24 horas após a injeção e os resultados sãci mostrados na Figura 7. M5 (Figura 7A) e variante M69 (Figura 7B) mostraram efeitos de redução de èo glicose similares como tipo selvagern FGF19.

Exemplo 8 Este exemplo descreve um estudo mostrando que a expressão hepática de familia 1 aldo-ceto redutase, membro C18 (Akr1C18) e família 1 carreadora de soIuto, m.ernbro 2 (slc1a2) parece 15 correlacíonar-se com a atividade HCC.

Ratos (db/db) foram injetados com vetor viral que expressam FGF19 (HCC +), FGF21 (HCC-), dN2 (HCC-) ou M5 (HCC-) ou €3 injetados com GFP. Amostras de fígado foram colhidas e analisadas por RT-PCR 2 quantitativa semanas após a injeção. 20 Os dados, apresentados na Figura 8, mostram que a expressão hepática do Akr1C18 e slc1a2 parece correlacionar-se com a atividade de HCC.

Tabela 8 : Resumo de varíantes de FGF19 ~ Ensaío de sínalização de adípócíto 3T3L1

P-Erk Ensaío em adípócítos 3T3L1 ! FGF19 I FGF21) M5 M2 I M63 I M64 I Ml I M8 I Experimento€L:

I Emax I 3,67 I 4,33 l 3,52 4,19 i 3,21 I 3,67 l 4,24 |4,16 I EC50 (nM) I 0,05 I 0,65 I 0,03 0,05 I 0,92 I 0,02 I 0,03 |O,03 I Experimento#2 : I Emax ! 4,52 I 4,83 | 4,01 5,56 i 4,17 ! 4,85 : 5,30 j5,34 I EC50 (nM) I 0,33 I 1,48 I 0,14 0,15 I 0,66 I 0,12 I 0,09 |0,09 I Experímento#3: I Ern.ax I 4,09 I 4,14 I 3,74 4,24 I 3,15 I 4,15 i 4,77 |4,16 e I EC50 (nM) I 0,16 I 1,50 I 0,24 0,14 I ()v28 I 0,14 I 0,07 |0,14 e

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Sequência de peptídeo quimérico caracterizada por compreender: (A) (a) urna região N-terminal compreendendo pelo menos sete resíduos de aminoácidos, a região N-terminal possuindo uma primeira posição de aminoácido e urna óltima posição de aminoácido, em que a região N- terminal compreende DSSPL ou DASPH; e (b) uma região e-terminal compreendendo uma porção de SEQ ID NO: 99 [FGF19], a região e-terminal possuindo uma primeira posição de aminoácido e uma óltima posição de aminoácido, em que a região e-terminal compreende os resíduos de aminoácidos 16 a 29 de SEQ ID N0:99 [FGF19], WGDPIRLRHLYTSG, em que o resíduo W corresponde à primeira posição de aminoácidos da região e-terminal; ou (B) (a) uma região N-terminal compreendendo uma porção de SEQ ID N0:100 [FGF21], a região N-terrninal possuindo uma primeira posição de aminoácido e uma óltima posição do aminoácido, e em que a região N-terminal é compreendendo resíduos de aminoácidos GQV e em que o radical V corresponde à óltima posição de aminoácidos da região N-terminal, e (b) uma região e-terminal compreendendo uma porção de SEQ ID N0:99 [FGF19], a região e-terminal possuindo uma primeira posição de aminoácido e uma óltima posição do aminoácido, em que a região e-terminal compreende os resíduos de aminoácidos 21 a 29 da SEQ ID NO: 99 [FGF19], RLRHLYTSG, e em que o radical R corresponde à primeira posição da região e-terminal.

2. Sequência de peptídeo quimérico caracterizada por compreender: a) uma região N-terminal compreendendo uma porção de SEQ ID N0:100 [FGF21], a região N-terminal possuindo uma primeira posição de aminoácido e uma última posição do aminoácido, em que a região N-terminal compreende pelo menos cinco aminoácidos contíguos da SEQ ID N0:.100 [FGF21], incluindo os resíduos de aminoácidos GQV, e em que o radical V corresponde à última posição de aminoácidos da região N-terminal, e b) uma região e-terminal compreendendo uma porção de SEQ ID NO: 99 [FGF19], a região e-terminal possuindo uma primeira posição de aminoácido e uma última posição de aminoácido, em que a região e-terminal compreende os resíduos de aminoácidos 21 a 29 da SEQ ID N0:99 [FGF19], RLRHLYTSG, e em que o radical R corresponde à primeira posição da região e-terminal.

3. Sequência de peptídeo de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a região N-terminal compreende pelo menos 6 ou pelo menos 7 aminoácidos contíguos da SEQ ID N0:100 [FGF21], incluindo os resíduos de aminoácidos GQV.

4. Sequência de peptídeo caracterizada por compreender ou consistir em qualquer urn de: a) urna variante de sequência de urn fator de crescimento de fibroblastos 19 (FGF19) possuindo urna ou mais substituições, inserções ou deleções de aminoácidos em comparação corn urna referência ou tipo selvagem FGF19; b) urna variante de sequência de urn fator de crescimento de fibroblastos 21 (FGF21) possuindo urna ou mais substituições, inserções ou deleções de aminoácidos, em comparação corn urna referência ou tipo selvagem FGF21; c) urna porção de urna sequência de FGF19 fundida corn urna porção de urna sequência de FGF21; ou d) urna porção de urna sequência de FGF19 fundida corn urna porção de urna sequência FGF21, em que a(s) porção(ões) de sequência(s) FGF19 e/ou FGF21 tern urna ou mais substituições, inserções ou deleções de aminoácidos em comparação corn urna referência ou tipo selvagem FGFl 9 e/ou FGF21.

5. Sequência de peptídeo de acordo corn a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que sequência peptídica tern (i) aminoácidos amino-terminal de 1 a 16 da SEQ ID NO: 100 [FGF21] fundidos à aminoácidos de carboxi- terrninal de 21 a 194 de SEQ ID N0:99 [FGF19], (ii) aminoácidos amino-terminal 1 a 147 de SEQ ID N0:99 [FGF19] fundido corn aminoácidos carboxi-terrninal 147 a 181 da SEQ ID N0:100 [FGF21] (M41),

(iii) aminoácidos amino-terminal 1 a 20 de SEQ ID NO: 99 [ FGFl9] fundidos com aminoácidos carboxi-terminal 17 a 181 de SEQ ID N0:100 [FGF21] (M44), (iv) aminoácidos amino-terminal 1 a 146 de SEQ ID N0:100 [FGF21] fundido com aminoácidos carboxi-terminal 148 a 194 da SEQ ID NO: 99 [FGF19] (M45), ou (v) aminoácidos amino-terminais 1 a 20 da SEQ ID N0:99 [FGF19] fundidos com aminoácidos internos 17 a 146 da SEQ ID NO: 100 [FGF21] fundido com aminoácidos carboxi-terminal 148 a 194 da SEQ ID N0:99 [FGF19] (M46) .

6. Sequência de peptídeo quimérico ou sequência peptídica de acordo com as reivindicações 1 ou 4, caracterizada pelo fato de que (a) a sequência peptídica tem um motivo de sequência WGDPI correspondente à sequência de aminoácidos WGDPI 16 a 20 de SEQ ID N0:99 [FGF19], em que opcionalmente a sequência do peptídeo mantém ou aumenta uma atividade mediada de FGFR4; (b) a sequência peptídica tem um motivo de sequência WGDPI substituído, mutado ou ausente correspondente à sequência de FGF19 WGDPI de aminoácidos 16 a 20 de FGF19; (c) a sequência WGDPI tem um ou mais aminoácidos substituídos, mutados ou ausentes; (d) a sequência do peptídeo é diferente de uma sequência variante de FGF 19 tendo uma das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI,

AGDPI, WAD PI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituídas para a sequência FGF19 WGDPI em aminoácidos 16 a 20; (e) a região N-terminal compreende resíduos de aminoácidos DSSPLLQ e em que o resíduo Q é a última posição de aminoácidos da região N-terminal; em que opcionalmente a região N-terminal compreende ainda: (i) RHPIP, em que R é a primeira posição de aminoácidos da região N-terminal, (ii) HPIP, em que H é a primeira posição do aminoácido da região N-terminal, (iii) RPLAF, em que R é a primeira posição de aminoácidos da região N-terminal, (iv) PLAF, em que P é a primeira posição de aminoácidos da região N-terminal, (v) R, em que R é a primeira posição de aminoácido da região N-terminal; ou (f) a referida região N-terminal ou a referida região e-terminal compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos de cerca de 5 a 10, 10 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 60 a 70, 70 a 80, 80 a 90, 90 a 100 ou mais aminoácidos.

7. Sequência de peptídeo quimérico ou sequência peptídica de acordo com uma das reivindicações 1, 2 ou 4, caracterizada pelo fato de que

(a) a região N-terrninal ou e-terminal é de cerca de 20 a cerca de 200 resíduos de aminoácidos de comprimento; (b) a sequência de peptídeo compreende ou é constituída por qualquer das sequências peptídicas variantes Ml a M98 ou urna subsequência ou fragmento de qualquer urna das sequências peptídicas variantes Ml a M98; em que opcionalmente a subsequência ou fragmento da mesma possui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou mais deleções de aminoácidos no terminal amino, carboxi-terrninal ou internamente; (c) os resíduos de aminoácidos HPIP são os primeiros 4 resíduos de aminoácidos da região N-terrninal; (d) a última posição da região e-terminal corresponde ao resíduo 194 da SEQ ID N0:99 [FGF19]; (e) a sequência de peptídeo compreende ou consiste em: HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSeFLRIRADGVVOeARGQSAH SLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLeMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRP

DGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDL RGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK; DSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSeFLRIRADGVVDeARGQSAHSLLE IKAVALRTVAIKGVHSVRYLeMGADGKMQGLLQYSEEDeAFEEEIRPDGYN

VYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHL ESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK; RPLAFSDASPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDeARG QSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLeMGADGKMQGLLQYSEEOeAFEE

EIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEE PEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK;

RPLAFSDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARG

QSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEE

EIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEE PEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK; ou

DSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSL

LEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDG

YNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRG HLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK; ou uma subsequência ou seu fragmento; em que opcionalmente a subsequência ou fragmento da mesma possui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou mais deleções de aminoácidos no terminal amino, carboxi-terminal ou internamente; ( f) a referida região N-terminal ou a referida região e-terminal ou a ref e rida porção de sequência de FGF19 ou a referida porção da sequência de FGF21 são unidos através de um ligante ou espaçador; (g) o N-terminal da sequência de peptídeo compreende ou consiste em qualquer um dos: HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (MS); DSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M6); RPLAFSDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M7); HPIPDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSG (MS); HPIPDSSPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG (M9); HPIPDSSPHVHYGWGDPIRLRHLYTSG (MlO); RPLAFSDAGPLLQWGDPIRLRHLYTSG (Mll); RPLAFSDAGPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG (M12); RPLAFSDAGPLLQFGGQVRLRHLYTSG (M13);

HPIPDSSPHVHYGGQVRLRHLYTSG (M14);

RPLAFSDAGPHVHWGDPIRLRHLYTSG (MlS);

RPLAFSDAGPHVHWGDPIRLRHLYTSG (M16);

RPLAFSDAGPHVGWGDPIRLRHLYTSG (M17);

RPLAFSDAGPHYGWGDPIRLRHLYTSG (M18);

RPLAFSDAGPVYGWGDPIRLRHLYTSG (Ml9);

RPLAFSDAGPVHGWGDPIRLRHLYTSG (M20);

RPLAFSDAGPVHYWGDPIRLRHLYTSG (M21);

RPLAFSDAGPHVHGWGDPIRLRHLYTSG (M22);

RPLAFSDAGPHHGWGDPIRLRHLYTSG (M23);

RPLAFSDAGPHHYWGDPIRLRHLYTSG (M24);

RPLAFSDAGPHVYWGDPIRLRHLYTSG (M25);

RPLAFSDSSPLVHWGDPIRLRHLYTSG (M26);

RPLAFSDSSPHVHWGDPIRLRHLYTSG (M22);

RPLAFSDAGPHVWGDPIRLRHLYTSG (M28);

RPLAFSDAGPHVHYWGDPIRLRHLYTSG (M29);

RPLAFSDAGPHVHYAWGDPIRLRHLYTSG (M30);

RHPIPDSSPLLQFGAQVRLRHLYTSG (M31) ;

RHPIPDSSPLLQFGDQVRLRHLYTSG (M32) ;

RHPIPDSSPLLQFGPQVRLRHLYTSG (M33);

RHPIPDSSPLLQFGGAVRLRHLYTSG (M34);

RHPIPDSSPLLQFGGEVRLRHLYTSG (M35);

RHPIPDSSPLLQFGGNVRLRHLYTSG (M36);

RHPIPDSSPLLQFGGQARLRHLYTSG (M3 7) ;

RHPIPDSSPLLQFGGQIRLRHLYTSG (M38); RHPIPDSSPLLQFGGQTRLRHLYTSG (M39); RHPIPDSSPLLQFGWGQPVRLRHLYTSG (M40); DAGPHVHYGWGDPIRLRHLYTSG (M74); VHYGWGDPIRLRHLYTSG (M75);

RLRHLYTSG (M77); ou qualquer uma das sequências peptídicas anteriores, em que o resíduo R do terminal amino é eliminado; em que opcionalmente a sequência peptídica ainda compreende a adição de resíduos de aminoácidos 30 a 194 de SEQ ID N0:99 [FGF19] na extremidade C- terminal, resultando num polipeptídeo quimérico; ou em que opcionalmente a sequência peptídica ainda compreende a totalidade ou uma porção de uma sequência FGFl~ definida como: PHGLSSCFLRIRADGVVDC

ARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCA

FEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMV PEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK posi- cionado na extremidade e-terminal do peptídeo ou em que o terminal amino de resíduos "R" é excluído do peptídeo; _.

(h) o N-terminal da sequência peptídica compreende ou consiste em qualquer um dos: RHPIPDSSPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSG; RPLAFSDAGPLLQFGWGDPIRLRHLYTSG; RHPIPDSSPHVHYGWGDPIRLRHLYTSG; RPLAFSDAGPLLQFGGQVRLRHLYTSG; RHPIPDSSPHVHYGGQVRLRHLYTSG; RPLAFSDAGPHVHYGGDIRLRHLYTSG; RDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG; RPLAFSDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGAQVRLRHLYTSG;

RHPIPDSSPLLQFGDQVRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGPQVRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGGAVRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGGEVRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGGNVRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGGQARLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGGQIRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGGQTRLRHLYTSG; RHPIPDSSPLLQFGWGQPVRLRHLYTSG; ou qualquer urna das sequências peptídicas anteriores, em que o resíduo R do terminal amino é eliminado; em que opcionalmente a sequência peptídica ainda compreende a adição de resíduos de aminoácidos 30 a 194 de SEQ ID N0:99 [FGF19] na extremidade C- terrninal, resultando num polipeptídeo quimérico; ou em que opciúnàlrnente a sequência peptídica ainda compreende a totalidade ou urna porção de urna sequência FGF19 definida corno: PHGLSSCFLRIRADGVVDC

ARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCA

FEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMV PEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK posi- cionado na extremidade e-terminal do peptídeo ou em que o terminal amino de resíduos "R" é excluído do peptídeo; (i) em que opcionalmente a subsequência tern pelo menos urna deleção de aminoácido; em que opcionalmente a subsequência tern 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18,

19, 20 ou mais deleções de aminoácidos a partir do amino-terminal, do carboxi-terminal ou internamente;

( j) a posição do primeiro aminoácido da região N-

terminal é um resíduo "M"' um resíduo "R"' um resíduo "S", um resíduo "H", um resíduo "P", um resíduo "L" ou um resíduo "D" ou em que a sequência do peptídeo não tem um resíduo "M" ou um resíduo "R" na posição do primeiro aminoácido da região N- terminal; (k) a região N-terminal compreende qualquer uma das seguintes sequências: MDSSPL, MSDSSPL, SDSSPL, MSSPL ou SSPL; (1) a sequência peptídica reduz a formação do carcinoma hepatocelular (HCC) em comparação com FGF19 ou uma sequência variante de FGF 19 tendo qualquer das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituído para a sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19; em que opcionalmente a formação carcinoma hepatocelular (HCC) é determinada em ratos db/dB; (m) a sequência peptídica tem maior atividade de diminuição da glicemia em comparação com FGF19 ou uma sequência variante de FGF19 tendo qualquer das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituído para a sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19;

em que opcionalmente a atividade hipoglicemiante é determinada em ratos db/dB; (n) a sequência de peptídeo possui menor atividade de aumento de lípidos em comparação com FGF19 ou uma sequência variante de FGF 19 tendo qualquer das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WADPI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituído para a sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19; em que opcionalmente a atividade de aumento de lipídeos é determinada em ratos db/dB; (o) a sequência do peptídeo tem menor atividade de aumento de triglicerídeos, colesterol não-HDL ou HDL em comparação com o FGFl 9 ou uma sequência

1• variante de FGF 19 tendo qualquer das GQV, GDI, WGPI, WGDPV, WGDI, GDPI, GPI, WGQPI, WGAPI, AGDPI, WAD PI, WGDAI, WGDPA, WDPI, WGDI, WGDP ou FGDPI substituído por sequência WGDPI em aminoácidos 16 a 20 de FGF19; (p) a sequência peptídica tem menor atividade de redução de massa magra em relação ao FGF21; em que opcionalmente a atividade de redução de massa magra é determinada em ratos db/dB; (q) a sequência do peptídeo liga-se ao receptor do fator de crescimento de fibroblastos 4 ( FGFR4) ou ativa FGFR4 ou se liga de forma não detectável ao receptor do fator de crescimento de fibroblastos 4 (FGFR4) ou ativa FGFR4; ..

(r) a sequência do peptídeo liga-se a FGFR4 com uma afinidade menor do que, comparável ou maior do que a afinidade de ligação do FGF19 para FGFR4; (s) a sequência peptídica ativa FGFR4 a uma extensão ou quantidade menor do que, comparável ou superior a FGF19 ativa FGFR4 (t) a sequência peptídica tem 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 substituições de aminoácidos, deleções ou inserções; em que opcionalmente as deleções de aminoácidos são no extremo N- ou e-terminal ou internas; ou em que a substituição de aminoácidos ou deleção é em qualquer das posições dos aminoácidos 8 a 20 de FGF19 (AGPHVHYGWGDPI) (u) a sequência peptídica compreende um ou mais L- aminoácidos, D-aminoácidos, aminoácidos de ocorrência não natural ou aminoácidos miméticos, derivados ou análogos.

8. Sequência de peptídeo quimérico de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que (a) a região N-terminal compreende resíduos de aminoácidos (i) VHYG, (ii) DASPHVHYG, ou (iii) DSSPLVHYG; em que opcionalmente G corresponde à última posição da região N-terminal; em que opcionalmente a região N-terminal compreende ainda:

( i) RHPIP, em que R é a primeira posição de aminoácidos da região N-terminal; (ii) HPIP, em que H é a primeira posição do aminoácido da região N-terminal; (iii) RPLAF, em que R é a primeira posição de aminoácidos da região N-terminal; (iv) PLAF, em que p é a primeira posição de aminoácidos da região N-terminal; ou (v) R, em que Ré a primeira posição de aminoácido da região N-terminal; ou (b) a região N-terminal compreende resíduos de aminoácidos DSSPLLQFGGQV, e em que o resíduo V corresponde à última posição da região N-terminal.

9. Sequência de peptídeo quimérico ou sequência peptídica de acordo com qualquer das reivindicações 1, 2 ou 4, caracterizada pelo fato de que a sequência do peptídeo compreende ou é constituída por qualquer um dos:

RDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKA

VALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRL

PVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMD PFGLVTGLEAVRSPSFEK (M69);

RDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVA

LRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPV

SLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPF GLVTGLEAVRSPSFEK (M52);

HPIPDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIK

AVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHR

LPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSM DPFGLVTGLEAVRSPSFEK (MS);

HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKA

LKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHSL

PLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGP SQGRSPSYAS (M71);

HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKA

LKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGL

PLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPAPPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGP SQGRSPSYAS (M72);

HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKA

LKPGVIQILGVKTSRSLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGL

PLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVVQ DELQGVGGEGCHMHPENCKTLLTDIDRTHTEKPVWDGITGE (M73);

RPLAFSDASPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSL

LEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRS

EKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLE TDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (Ml);

RPLAFSDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSL

LEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRS

EKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLE TDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M2);

RPLAFSDAGPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSL

LEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEILEDGYNVYRS

EKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLE TDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M3);

RDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVA

LRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPV

SLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPF GLVTGLEAVRSPSFEK (M48);

RPLAFSDSSPLLQFGGQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLE

IKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEK

HRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETD SMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M49);

RHPIPDSSPLLQFGDQVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEI

KAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEILEDGYNVYRSEKH

RLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDS MDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M50);

RHPIPDSSPLLQFGGNVRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEI

KAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKH

RLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDS MDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M51);

MDSSPLLQWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVA

LRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPV

SLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPF GLVTGLEAVRSPSFEK (M53); e

MRDSSPLVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIK

AVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHR LPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDS1 6MDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (M70) ou uma subsequência ou fragmento de qualquer uma das sequências peptídicas anteriores ou qualquer uma das sequências peptídicas anteriores, onde o resíduo do terminal Restá suprimido; em que opcionalmente a subsequência ou fragmento da mesma possui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15,

16, 17, 18, 19, 20 ou mais deleções de aminoácidos no terminal amino, carboxi-terrninal ou internamente.

10. Sequência de peptídeo quimérico ou sequência peptídica de acordo corn urna das reivindicações 1, 2, 4 OU 9f caracterizada pelo fato de que (a) a primeira posição da região N-terrninal é (i) urn resíduo R, ou (ii) urn resíduo de M; (b) a primeira e segunda posição da região N-terrninal é ( i) urna sequência MR, (ii) urna sequência de RM, (iii) urna sequência de RD, (iv) urna sequência de OS, (v) urna sequência de MD, ou (vi) urna sequência de MS; (c) da primeira a terceira posição da região N-terrninal é ( i) urna sequência de MOS, (ii) urna sequência de RDS, (iii) urna sequência de MSD, (iv) urna sequência de MSS, ou (v) ·urna sequência de DSS, (d) da primeira a quarta posição da região N-terrninal é (i) urna sequência de ROSS, ou (ii) urna sequência de MOSS, (e) da primeira a quinta posição da região N-terrninal é (i) urna sequência MRDSS, ou (ii) urna sequência

MSSPL ( f) da primeira a sexta posição da região N-terrninal é urna sequência MDSSPL, ou (g) da primeira a sétima posição da região N-terrninal é urna sequência MSDSSPL.

11. Sequência peptídica de acordo corn as reivindicações 2 ou 4, caracterizada pelo fato de que a referida porção da sequência de FGFl 9 ou a referida porção da sequência de FGF21, compreende ou consiste em urna sequência de aminoácidos de cerca de 5 a 10, 10 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 60, 60 a 70, 70 a 80, 80 a 90, 90 a 100 ou mais aminoácidos de FGF19 ou FGF21.

12. Sequência de peptídeo de acordo corn a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que (i) a referência ou sequência de tipo selvagem FGF19 é apresentada corno:

RPLAFSDAGPHVHYGWGDPIRLRHLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARG

QSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEE

EIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEE PEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK (SEQ ID N0:99); ou (ii) a referência ou sequência de tipo selvagem FGF21 é apresentada corno:

RHPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPE

SLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLE

DGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGI LAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS (SEQ ID N0:100).

13. Composição ou composição farmacêutica caracterizada por compreender a sequência de peptídeo quimérico ou sequência peptídica de acordo corn qualquer urna das reivindicações 1 a 12;

ll 19/23 em que a composição farmacêutica opcionalmente compreende um agente hipoglicemiante.

14. Sequência de peptídeo quimérico ou sequência peptídica de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que a sequência de peptídeo é isolada ou purificada.

15. Molécula de ácido nucleico caracterizada pelo fato de que codifica a sequência de peptídeo quimérico ou uma sequência peptídica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-12 em que a molécula de ácido nucleico compreende ainda um elemento de controle da expressão em ligação operável que confere a expressão da molécula de ácido nucleico que codifica o peptídeo in vitro, em uma célula ou in vivo.

16. Vetor caracterizado por compreender a molécula de ácido nucleico de acordo a reivindicação 15; em que o vetor compreende opcionalmente um vetor viral.

17. Célula transformada ou hospedeira caracterizada pelo fato de que expressa a sequência de peptídeo quimérico ou uma sequência peptídica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12.

18. Uso da sequência de peptídeo quimérico ou uma sequência peptídica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12 caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para tratar um indivíduo possuindo, ou em risco de ter, uma doença ou uma desordem tratável pela sequência de peptídeo quimérico ou uma sequência peptídica;

em que opcionalmente

(a) a doença ou desordem compreende uma condição hiperglicêmica, resistência à insulina, hiperinsulinemia, intolerância à glicose ou síndrome metabólica; em que ocionalmente a condição hiperglicêmica compreende (i) diabetes; em que opcionalmente o uso resulta em níveis reduzidos de glicose, aumento da sensibilidade à insulina, diminuição da resistência à insulina, glucagon reduzida, melhoria na tolerância à glicose ou metabolismo da glicose ou homeostase, melhora da função do pâncreas, triglicerídeo reduzido, colesterol, HDL, LDL e VLDL, diminuição da pressão sanguínea, diminuição do espessamento da camada íntima do vaso sanguíneo ou uma diminuição da massa corporal ou ganho de peso; ou (i) diabetes insulina-dependente (Tipo I), diabetes tipo II ou diabetes gestacional; ou (b) a desordem compreende a obesidade ou uma massa corporal indesejável.

19. Uso da sequência de peptídeo quimérico ou uma sequência peptídica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12 caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para melhorar o metabolismo da glicose em um indivíduo com necessidade do mesmo; em que opcionalmente o indivíduo tem um nível de glicose no plasma em jejum superiores a 100 mg/dl ou tem um nível de hemoglobina Ale (HbAlc) acima de 6%; ou em que opcionalmente o uso resulta em níveis reduzidos de glicose, aumento da sensibilidade à insulina, diminuição da resistência à insulina, glucagon reduzida, melhoria na tolerância à glicose ou metabolismo. da glicose ou homeostase, melhora da função do pâncreas, triglicerídeo reduzido, colesterol, HDL, LDL e VLDL, diminuição da pressão sanguínea, diminuição do espessamento da camada íntima do vaso sanguíneo ou uma diminuição da massa corporal ou ganho de peso.

20. Método para identificar uma sequência peptídica tendo atividade hipoglicemiante sem substancial atividade carcinoma hepatocelular (HCC), caracterizado por compreender: a) providenciar uma sequência peptídica candidata; b) administrar a sequência do peptídeo candidata a um animal de teste; e) medir os níveis de glicose do animal após a administração da sequência peptídica candidata, para determinar se a sequência peptídica candidata reduz os níveis de glicose; e

I •I

22/23 d) analisar a sequência peptídica candidata para a indução de HCC no animal ou a expressão de um marcador de correlacionado com a atividade HCC, em que um peptídeo candidato que possui atividade hipoglicemiante e não substancial atividade de HCC identifica, assim, a sequência de peptídeo candidata como uma sequência peptídica tendo atividade hipoglicemiante sem substancial atividade de carcinoma hepatocelular (HCC); em que opcionalmente (i) o animal de teste é um rato db/dB; (ii) o método compreende ainda avaliação de uma amostra de tecido hepático do animal de teste para determinar se a sequência peptídica candidata apresenta evidência de indução do HCC; (iii) o marcador correlacionado com atividade HCC compreende perfil lipídico e em que menos aumento de atividade de lípidos em comparação com FGF19 indica que o peptídeo não tem substancial atividade HCC (iv) o marcador correlacionado com atividade HCC compreende a expressão do gene da aldo-ceto redutase, e em que elevação ou aumento da expressão do gene da aldo-ceto redutase em comparação com FGF19 indica que o peptídeo não tem substancial atividade HCC; ou (v) o marcador indicativo de atividade HCC compreende a expressão do gene S1cla2, e em que a expressão do gene regulador para baixo ou diminuidor S1c1a2 em comparação com FGF21 indica que o peptídeo não tem atividade HCC substancial.

21. Sequência de peptídeo, subsequência, composição, composição farmacêutica, molécula de ácido nucleico, vetor, célula transformada ou hospedeira, uso de uma sequência de peptídeo quimérico ou uma sequência peptídica, método de tratamento de um indivíduo, método para melhorar o metabolismo da glicose em um indivíduo e método para identificar uma sequência peptídica caracterizados por serem conforme aqui descri to e mostrado no escopo da matéria técnica inicialmente descrita, revelada ou ilustrada no presente pedido de patente.