BR102014028900A2 - produto nanotecnológico de uma formulação lipossomal a base de antioxidantes para o tratamento da lesão pulmonar aguda - Google Patents

Abstract

produto nanotecnologico de uma formulação lipossomal a base de antioxidantes para o tratamento da lesão pulmonar aguda. a presente invenção contempla formulações lipossomais em escala nanométrica constituídas de fosfolipídios e vitamina e como fase orgânica e vitamina c e nacetilcisteina em tampão neutro como fase aquosa. seus componentes ativos consistem da associação de antioxidantes estabilizados em solução tampão para o tratamento da lesão pulmonar aguda, infecções respiratórias e inflamações pulmonares. administrados por via inalatória. os fármacos citados 'já possuem ação comprovada contra o desbalanço redox e quando associados e encapsulados possuem uma inovadóra forma de utilização dos seus efeitos sinérgicos potencializando a atividade antioxidante das células alveolares.

Description

Relatório Descritivo PRODUTO NANOTECNOLÓGICÒ DE UMA FORMULAÇÃO LIPOSSOMAL A BASE DE ANTIOXIDANTES PARA O TRATAMENTO DA LESÃO

PULMONAR AGUDA ♦ Campo da invenção [001] , Ά presente invenção contempla formulações de vesículas lipossomais é a forma para produzi-las, em escala nanométrica, constituídas dè bicamadas fosfolipídicas ’· orientadas concentricamente em tomo de um compartimento aquosò contendo como i . . .. , ·' ■ ' . ■ ' ' ·, componentes ativos n-actetil-cisteína, ácido ascórbico e tocoferol; antioxidantes, estabilizados em solução tampão para o tratamento da lesão pulmonar aguda, infecções respiratórias e inflamações pulmonares. Esta invenção pode ser utilizada como um produto administrado pór via irialatória, através de micronebulizador ou instalação intratraqueal, para o tratamento das doenças citadas.

Antecedentes da invenção [002] O desequilíbrio do estado de oxirredução intracelular afeta as vias de sinalização • y · > ' f. - ' responsáveis pela proliferação celular, resposta imunológica, metabolismo bioenergético, expressão gênica e morte celular. Esse desequilíbrio desempenha um papel importante na patogênese da lesão pulmonar aguda (LPA) (CRIMI et al. 2006). Pacientes com LPA induzida por infecções respiratória apresentam uma diminuição significativa nas concentrações de antioxidantes, tais como n-acetil-cisteína, ácido ascórbico, tocoferol, glutationa, β-caroteno e selênio (BOWLER et al. 2003, RICHARD et al. 1990). Diante do exposto, a presente invenção propõe um produto inovador utilizando formulações farmacêuticas em escala nanométrica por via inalatória capaz de limitar essa injúria ao tecido pulmonar e restaurar o balanço redox das células aíveolares ~ .····/" ' f ' \" ■ ■ afetadas.

[003] Segundo Ràtnam et al, (20Θ6), a maioria dos agentes antioxidantes possui baixa biodisponibilidade devido á um ou mais fatores, tais como, baixa solubilidade, difícil permeabilidade, instabilidade durante o processo de estocagem, efeitos de primeira passagem ou degradação enzimática pelo trato gastrointestinal ou por~ enzimas plasmáticas. Suntres Z.E. et al. (1998) e Smith L.J. et al. (1992)· mostraram que quando antioxidantes, como a glutationa (GSH), são administrados, por via intratraqueal, apenas 1% a 2% da dose administrada permanece rios. pulmões após 24 horas, enquanto que quando encapsulada por nanomateriais a retenção é de 18% da dose, nas primeiras 24 horas. Por esse motivo, a presente invenção descreve uma formulação de vesículas lipossomais, em escala nanométrica, capaz de proteger os compostos bioativos da degradação e mantém uma liberação controlada após sua administração.

[004] Certos artigos e patentes fizeram uso isolado de ácido ascórbico, tocoferol ou n-acetil-cisteína encapsuládos em lipossomas, porém a administração isolada desses compostos apresentam efeitos controversos na prevenção do dano pulmonar. Fan J et al. (2000), por exemplo, evidenciaram que a formulação de n-acetil-cisteína (NAC) ' encapsulada por lipossomas (L-NAC) é mais eficaz do que a NAC, formülada convencionalmente, em atenuar as lesões oxidativas pulmonares'' induzidas pela endotoxina de Escherichia coli. Porém, a administração isolada de L-NAC (25 mg/kg intravenoso) não foi capaz de prevenir a gravidade da lesão, partieularmente quando a v * , doença pulmonar estava num estágio severo. Enquanto isso, a presente invenção mostrou que a combinação de NAC com ácido ascórbico e tocoferol encapsulado em lipossomas, administrado intratraquealmènte, foi capaz de aumentar a atividade antioxidante alveolar, diminuir o edema pulmonar, á péroxidação lipídica e proteger as célulás alveolares contra o dano oxidativo pulmonar até cinco dias após a infecção induzida pela E.coli: [005] A inalação de lipossomas constituídos apenas por lipídeos (nas concentrações de 15 e 150 mg/mL de Dipalmitoilfosfatidilcolina, DP PC) durante 1 hora, em voluntários saudáveis, não tabagistãs, mostraram que a inalação de lipossomas é bem tolerada, não .induz dessaturação de oxigênio, não afeta, a função pulmonar e não induz efeito ' ' ' ' f ' ■ " colateral (THOMAS et al. 1996). Outros pesquisadores utilizando lipossomas marcados com fluoresceína examinaram a sua taxa de eliminação pulmonar em voluntários, e observaram ausência de efeitos colaterais (EICHLER et al., 1988). A administração intravenosa de DPPC (5 a 50 mg de. lipídeo) não induziu toxicidade imediata ou retardada em camundongos e não produziu quaisquer alterações no peso corporal ou de órgãos após duas semanas de tratamento. A toxicidade de lipossomas constituídos por ' i DPPC, administrados por via intravenosa, é baixa e o valor da DL50 é estimado em 10 g/kg de peso em camundongos (STORM et al. 1991).

[006] No entanto, é importante notar que adição de outros constituintes para formular os lipossomas pode alterar a estabilidade e resultar em aumento da toxicidade (PARNHAM et al. 1993). Um problema potencial com lipossomas convencionais, quarido entregue por via intravenosa ou gastroenteral, é a sua rápida biodegradação ou remoção da circulação sanguínea por células do sistema retiçuloendotelial (RES), particularmente no fígado e baçó (SRINATH et al. 2000).

[007] Uma das vantagens da presente invenção deve-se ao uso de lipídeos naturais que apresentam elevada biocompatibi 1 idade quando comparado aos outros lipídeos usados nos artigos e patentes e a ausência de componentes de inclusão os quais podem apresentar elevado potencial alergênico. Além disso, são sistemas altamente versáteis, cujo tamanho, lamelaridade, superfície, composição e volume aquoso interno podem ser 7 - ' - manipulados em função das propriedades farmacêuticas e farmocológicas (BATISTA et al. 2007). 1 .

[008] Yao et al. (1994) evidenciaram que a administração intravenosa de ésteres de tocoferol (TOH) encápsulado em. lipossomas foi mais efetiva na diminuição da mortalidade de camundongos após uma dose. letal de tetracloreto dè carbono (CCI4). Todavia, essas formulações de lipossomas contendo TOH acumularam-se principalmente nas células de Kupffer no fígado e muito pouco nos pulmões. Ésteres de tocoferol não são absorvidos no pulmão e devem ser primeiramente atacados por estearases, presentes rio trato intestinal, para que o tocoferol, não esterificado, possa ser liberado e então realizar sua atividade biológica.

[009] A instilação intratraqueal de α-tocoferol encapsulado em lipossomas alcançou altos níveis de antioxidantes no pulmão, aproximadamente 1 mg/g de peso pulmonar (SUNTRES et al. 1993), enquanto que- o total de antioxidante α-tocoferol recuperado após àdministrações orais ou parenterais foram rnenores que 40 \ig/g de tecido f , V .· . - pulmonar (KNIGHT et al. 1995 e HIDIROGLOU et al 1998). No. entanto, é interessante ressaltar que existem evidências de que o acetato de α-tocoferol, mas não o a-tocoferol, inibem a ativação do Fator Nuclear κβ (NF-κβ) em culturas de macrófagos alveolares (NAKAMURA et al. 1996) . O NF-κβ é um fator de transcrição que regula a expressão de muitas citocinas pró-inflamatórias. O equilíbrio do estado redox intracelular das células alveolares é um fator determinante para a tolerância aos danos oxidativos e inflamatórios. A exposição ao peróxido de hidrogênio (H2O2), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) ou lipopolissacarídeos (LPS) resultam na diminuição do fator de t > crescimento tumoral beta-1 (TGF-βΙ), no aumento da permeabilidade da barreira alvéolo-capilar e no aumento de citocinas pró-inflamatórias, como a IL-1 e TNF-alfa no pulmão (RAHMAN et al., 2005), [010] A patente W0200.1003669 (2001) descreve o uso do Dipalmitoilfosfatidilcolina, oí-Tocopherol, Colesterol e N-acetylcysteína, porém não utiliza o ácido ascórbico na sua composição e nem estearilamina. Portanto apresenta carga e potencial antioxidante diferente da presente invenção o que muda suas propriedades biológicas. \ . ’ 1 , * [011] A patente US 4898735 (1990) descreve o uso de lipossoma contendo alfa- tocoferol na sua fase lipídica, além de íbsfatidilcolina e colesterol. O documento difere • x , . . - v dà presente invenção, pois no seu núcleo aquoso foi encapsulado doxorrubicina com propriedades quelantes para o uso do tratamento de neoplasias. 1012] A patente US 2014/0141066 (2014) descreve uma formulação lipossomal composta de fosfolipídios para ençapsular o ácido ascórbico. Porém, essa formulação faz uso de uma lecitina de soja como componente de inclusão para a vitamina C o que pode difere da presente invenção. ’ [013] O ácido ascórbico quando administrado por via' oral é mais rapidamente absorvido em baixas doses, pois sua absorção diminui com o aumento da dose (RATNAN et al. 2006). A biodisponibilidade depois de administradas pór via oral nas doses de 30, 100, 200 e 500 mg são 87%, 80%, 72% e 63%, respectivamente. Menos de 50% de uma dose de 1250 mg de vitamina C é absorvida e a maior parte é excretada na urinà (LEVINE M et al. 1996). O' ácido ascórbico é rapidamente eliminado do corpo e, aproximadamente, .73% do ácido ascórbico são removidos em menos de 24 horas. A vitamina C quando formulada em comprimidos permanece estável por no máximo 20 semanas. Estocadas a 25 °C ou em frascos contendo comprimidos de vitaminas C, que são .abertos diariamente, resultam em perda, do seu estado reduzido, de 2% ao dia (RUBIN S et al. 1976). A encapsulação combinada das vitaminas C em lipossomas aumenta a sua retenção no tecido e aumenta a capacidade de prevenir os danos causados por lesões isquêmicas, em contraste, com as formulações livres de encapsulamento que falharam ou exibiram poucos efeitos (SINHA J et àl. 2001).

[014] A patente US 2012/0171280 (2012) descreve uma formulação lipossomal cuja. composição lipídiea inclui uma mistura de enantiômeros do ácido lipóico e na fase aquosa a presença de ácido ascórbico e glutationa. Este documento não possui lipídeos com biocompatibilidade como fosfatidilcolina ou colesterol · nem mistura de antioxidantes.

[015] A patente US 8252325 (2012) descreve uma formulação lipossomal cujo componente ativo é o antioxidantè glutationa reduzida (GSH) para o tratamento da " fibrose cística, pulmonar. Porém, essa formulação faz Uso de uma mistura de lipídeos como o Phospholipon 90® e dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) ós quais diferem da presente invenção.

[016] A patente BR Pí 1104941-32 (2013) descreve o uso de uma formulação lipossomal com atividade antioxidantè, porém esta formulação usa a quercetina e o revesratrol como componente antioxidantè bioativo e além de usar complexos de inclusão à base de ciclodextrina para uso injetável. O resveratrol é um polifenol que tem a capacidade de modular o metabolismo de lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e 1 ■ ' * , I ; ~ . ' ' - inibir a agregação plaquetária ou a produção de eiéosanóides pró-aterogênicos (KRISTL et al. 2009). Enquanto que a quercetina é um flavonoide polifenólico com propriedades anti-inflámatória e antioxidantè corn os efeitos protetores contra a peroxidação lipídiea induzida pela lesão miocárdica (SOLOVIEV et al. 2012). Este documento difere da presente invenção por utilizar outros ántioxidantes e não ser adequado como formulação inalatória em escala nanométrica.

[017] A patente US 6415798 (2Ό02)'descreve uma formulação lipossomal contendo como componentes ativos enzimas antioxidantes como a superóxido dismutase e a catalase pára o tratamento dos danos oxidativos causados pelo cigarro em fumantes, porém essas enzimas exógenas são rapidamente inativadas por proteases presentes nas células alveolares. Esta invenção também é diferente pelos tipos de antioxidantes utilizados. ' [018] A patente US 2010/0119589 (2010) descreve uma formulação lipossomal v . ' ■ . ' formada à base de óleo de gérmen de trigo rico em ácidos graxos saturados (tais como o ácido pàlmítico e esteárico), ácidos graxos mono e poli-insaturados (tais como o ácido oleico e linoleico), além de toçoferol e carotenoides, enquanto que na fase aquosa ela possui ácido ascórbico, N-acetil-cisteína e benzoato de sódio. Apesar desta formulação apresentar um elevado número de corrípostos com propriedades antioxidantes, ela não apresenta em sua composição a presença de lipídeos biocompatíveis com os lipídeos presentes na membrana celular das células alveolares, tais como a fosfatidilcolina e o colesterol. \ Λ · f [019] A patente'US RE3 8407 (2004) descreve uma formulação lipossomal contendo opióides analgésicos como componentes ativos administrados por via inalatória ou sistêmica. Como lipídeos foram usàdos fosfolipídeos presentes no óleo de soja e colesterol. Os compostos bioativos diferem da presente invenção, [020] A patente US 5049388 (1991) descreve uma formulação lipossomal contendo fosfatidilcolina e fosfatidiletanolamina com potencial aplicação para o encapsulamentó de vários agentes ativos como antibióticos, anti-inflamatórios e antitumorais para administração inalatória o que difere em sua composição da presente invenção.

[021] A patente US 5006343 (1991) descreve uma formulação lipossomal contendo uma mistura lipídica' formada por dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), fosfatidilcolina (PC), fosfatidilglicerol (PG), colesterol e vitamina E, além de proteína surfactante SP A como componentes ativos no seu interior para o tratamento da lesão pulmonar aguda por via inalatória o que difere da presente invenção em sua composição.

[022] A patente ΈΡ 1 128 813 (2001) descreve uma formulação lipossomal contendo uma mistura , de lipídeos formada por dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dioleoilfosfatidiletanolamina (DÓPE), Dimiristoil fosfatidilglicerol (DMPG) e colesterol além de aminoglicosídeos como componentes ativos no seu interior para administração inalatória, mas não apresenta antioxidantes.

[023] A patente1 US ,2005/0175681 (2005) descreve uma. formulação lipossomal contendo lecitina e colesterol e como componenté ativo a vitamina A, porém os níveis de vitamina A obteve baixa estabilidade e biodisponibilidade plasmática. O documento difere da presente invenção por não utilizar associação de antioxidantes hidrossolúveis o que potencializa o efeito farmacológico dos mesmos. ' [024] A patente US 5049389 (1991) descreve uma formulação lipossomal para administração intrapulmonar de esteroides para o tratamento de doenças pulmonares intersticiais, além de usar em sua composição lipídeos como ácido fosfatídico, fosfatidilglicerol, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina ' e • v / « ... fosfatidilionositol. Essa formulação apresenta como fragilidade a baixa elasticidade das-vesículas [025] O mercado brasileiro de aerosol, antes estagnado e com modestas projeções de crescimento entre o período de 1998 a 2004, atualmente vive uma fase animadora, com previsões otimistas para os próximos anos. Esse mercado de propelentes dobrou de tamanho, sendo vendidos 282 milhões, em 2005, e 545 milhões de unidades em 2010 (CHALULEU H et al. 2009). A estimativa, desde que seja mantido o crescimento •populacional e o da economia, é que o Brasil atinja a marca de 1,4 bilhões de . unidades propelentes comercializado em 2021(FRANQUILINQ et al. 2011). As participações das áreas medicinais e veterinárias representam 5% do mercado dè aerossóis e em 2009 foram consumidas 27 milhões de unidades de aerossóis medicinais e veterinários no país (CHALULEU H et al. 2009).

[0261 Diante do exposto acima, o uso de antioxidantes encapsulados em lipossomas contendo lipídeos naturais e componentes ativos como a n-acetil-cisteína, tocoferol e ácido ascórbico, por via intratraqueal, poderá aumentar a eficácia do tratamento da lesão pulmonar aguda, infecções respiratórias e inflamações pulmonares diminuindo o dano oxidativo ,ao tecido pulmonar e restaurar o éstado redox dos alvéolos. Além disso, pela primeira vez são combinados componentes ativos com propriedades quelantes e antioxidantes em um sistema lipídico biocompatível com a membrana das células pulmonares. N

[027] Do que se. depreende da literatura pesquisada, não foram encontrados • . · í - documentos em bases de dados de patente, artigos científicos ομ quaisquer outros * · / \ documentos divulgando ensinamentos da presente invenção, comprovando que esta possui novidade frente ao estado da técnica.

I

Descrição da invenção [028] Para fins desta invémpau, Lipussuma uaia-sc uc uma vesicuia npiuica em escaia nanométrica. Fosfolipídios em solução aquosa naturalmente formam vesículas, mas é necessária a utilização de técnicas específicas para o preparo destas vesículas em escala nanométrica. O colesterol utilizado nas formulações concede rigidez à bicamada lipídica aumentando a sua estabilidade. A estearilamina tem como função conceder carga a bicamada lipídica evitando a agregação e aumentando a sua estabilidade.

[029] Para fins desta invenção, a Fase orgânica é caracterizada como a porção lipídica do lipossoma onde podem ser encasulados os fármacos hidrofóbicos.

[030] Para fins desta invenção, a Fase aquòsa é caracterizada como a porção aquosa \ adicionada à fase orgânica Contendo um agente tamponante e também fármacos hidrofílicos.

[031] Pára fins desta invenção, lipossomas em escala nanométrica foram produzidos pelo método de Hidratação do Filme Lipídico que consiste na preparação deôima fase orgânica contendo os lipídeos em solvente, sendo este último evaporado no processo para a formação de um delgado filme lipídico, sendo depois, vertida uma fase aquosa onde ocorre o processo de hidratação deste filme. As vesículas formadas não se i . ·.',·· · , . apresentam em escala nanométrica sendo necessário um método adicional como a \ \ extrusão ou a sonicação para reduzir o tamanho das vesículas, [032] Seguem abaixo descrições da invenção em algumas das suas modalidades preferidas, em relação à figura 1. 1. Microscopia óptica de fluorescência confocal de maCrófagos alveolares incubados, por 6 'horas, com Rodamina 101 encapsulada ém lipossomas (Fluorescência λβχ 560 nm; X«nl 589 nm); * . . ' [033] Na primeira modalidade preferida, os lipídeos fosfatidilcolina de soja (PC), colesterol (CH) e estearilamina (ECA) fórum misturados preferencialmente em uma relação molar de 7:2:1 e dissolvidos em , urna mistura de CHCfirMeOFÍ preferencialmente na proporção de 3:1 (v/v), sob agitação. Nesta fase orgânica também foi adicionada a vitamina E devido a sua característica hidrofóbica. Em seguida, os solventes foram removidos sob pressão preferencialmente a 60 min (37 ± 1 °C, 80 rpm), o que resultou na,formação de um filme lipídico. Este filme foi então hidratado com uma solução tampão em pH neutro preferencialmente tampão fosfato a 0,15 Μ,.ρΗ 7,4. A vitamina Ceo n-acetilcisteína (NAC) foram adicionados nesta fase devido as suas caractérísticas hidrofílicas. A proporção entre os antioxidantes pode ser preferencialmente uma relação em peso de 5:2:1 (m/m) (Vitamina C, n-acetilcisteína e Vitamina E). Desta forma, São obtidos lipossomas multilamelares. À suspensão lipossomal pode ser então sonicada ou extrusada para formar pequenos lipossomas unilamelares. Para garantir maior tempo de armazenamento do produto pode-se adicionar um crio-protetor a formulação como a tíealose permitindo que a mesma seja - \ ' *■ · v . ' ' : V liofilizada. A tabela 1 apresenta diversas formulações lipossomais" desenvolvidas em escala nanométrica. •I - · Tabela 1. Influencia da proporção de lipídeos e dá concentração do tampão no tamanho e na estabilidade das formulações lipossomais em escala nanométrica.

[034] Na segunda modalidade preferida é apresentado o método de administração das formulações lipossomais em escala nanométrica por-nebulização ou instilação. Para a nebulização, a formulação lipossomal em escala nanométrica deve ser administrada \ através de micronebulizador, pois fornece partículas com massa média de diâmetro aerodinâmico (MMAD) menor ou igual a 500 nm preservando as características físico-químicas do produto, além de influenciar no desempenho do aerossol. Para a instilação intratraquel pode ser utilizada uma sonda de aspiração que permite que o produto em sua forma líquida alcance as vias aéreas inferiores. EXEMPLO 1 * Desenvolvimento de lipossomas em escala nanométrica contendo vitamina C, n- ι x r - · - acetilcisteína e vitamina E v * . - * [035] Para o estudo das melhores concentrações utilizadas nas formulações em escala nanométrica contendo os antioxidantes: Vitamina E na fase, orgânica; e Vitamina C e n-acetilcisteína na fase aquosa, foi desenvolvido um planejamento fatorial 23 completo variando as concentrações. de fosfatidilcolina, colesterol e estearilamina. Esta última confere carga às vesículas. As características físico-químicas foram utilizadas como variáveis respostas: Tamanho, índice de polidispersão (PDI), potencial zeta, pll e peroxidação lipídica. Este estudo foi realizado para desenvolver formulações que apresentassem tamanho de vesícula adequado ((< 150 nm), baixo PDI (< 0,300) o que indica boa uniformidade das vesículas e alta carga de superfície (> 30 mV) a qual aumenta a estabilidade dás formulações evitando, a agregação. Além disso, um pH próximo ao fisiológico (pH 7,4) e baixa peroxidação lipídica garantem a integridade dos antioxidantes utilizados na preparação das formulações, por este motivo, estes parâmetros também foram avaliados. Diante disto, os resultados observados na Tabela 2 demonstraram que as formulações de 9 a 11 apresentaram as características físico-químicas mais adequadas. / .

Tabela 2. Planejamento fatorial completo para a obtenção de diversas formulações lipossomais em escala nanométrica e suas propriedades físico-químicas: Tamanho e índice de polidispersão (PD1); e Potencial , zeta (mV); pH e Equivalente malonaldeído.

Legendas: PC - fosfatidilcolina, CH - colesterôl, ECA - Estearilamina, PDI - índice de polidispersão, ζ-potencial Zeta (m V), pH - potencial hidrogêniônico, Eq. de MDA - Equivalente de Malonaldéido. EXEMPLO 2 Aumento da viabilidade celular e redução do estresse oxidativo de macrófagos álveolares de ratos Wistar tratados com antioxídantes encapsulados em lipossomas. m [036] Para avaliar os efeitos biológicos das formulações lipossomais em escala nanométrica, ratos wistar previamente,anestesiados com cetamina (80 mg/kg) e Xilasina (15 mg/kg), dose de 0,2 mL/100 g de peso, receberam por via intratraqueal 20 pL das seguintes formulações: lipossomas brancos (42 mM de lipídeos), antioxidàntes encapsulados em lipossomas (8 mg/ml de antioxídantes e 42 mM de lipídeos) ou antioxídantes livres (5 mg de. vitamina C, 1 mg de n-acetilcisteína e 2 mg de vitamina E em 1 mL de H2O ultrapura). As formulações foram administradas através de micronebulizador de membrana ultrassômca (MESH) durante 20 segundos,-a cada 24 horas por cinco dias consecutivos. Ao final do experimento foram realizadas lavagens broncoalveolares e, em seguida, os animais foram eutanasiados por superdosagem anestésica para retirada dos pulmões. Vinte e quatro horas após a incubação com endotoxina de E.coli observou-se um redução nos marcadores de viabilidade celular (Tabela 3) e aumento dos níveis de estresse oxidativo (Tabela 4) em todas as culturas de macrófagos. alveolares de ratos Wistar. Os resultados também mostraram que as culturas contaminadas com a endotoxina de E.coli e tratados com NAC, vitamina C e E encapsulados em Iipossomas diminuiu os níveis de nitratos/nitritos e aumentaram a viabilidade dos macrófagos alveolares (Figura 1). Em conclusão, os Iipossomas em escala nanométrica contendo os antioxidantes encapsulados restauraram o estado redox das células alveolares e reduziram a citotoxicidade.

Tabela 3. Viabilidade celular de macrófagos alveolares tratados com endotoxina de E.coli e antioxidantes encapsulados em Iipossomas.

Reivindicações'

Claims (5)

1. PRODUTO NANOTECNOLÓGICO DE' UMA FORMULAÇÃO LIPOSSOMAL A BASE DE ANTIOXIDANTES PARA O TRATAMENTO DA LESÃO PULMONAR AGUDA caracterizado pelâ presente invenção compreender èm sua constituição: i. Lipídeos de membrana e vitamina E como fase: orgânica, ii. Vitamina C e n-acetilcisteína e tampão neutro como fase aquosa. , . /

2. PRODUTO NANOTECNOLÓGICO DE UMA FORMULAÇÃO , LIPOSSOMAL A BASE DE ANTIOXIDANTES PARA O TRATAMENTO Λ. , . ' DA LESÃO PULMONAR AGUDA conforme reivindicação 1 caracterizado \ - . : pela presente invenção compreender como lipídeos de membrana: i. /osfàtidilcolina, ii. Colesterol, iii. Estearilamina.

3. PRODUTO NÃNOTECNOLÓGICO DE UMA FORMULAÇÃO LIPOSSOMAL A BASE DE ANTIOXIDANTES PARA O TRATAMENTO . » \ I DA LESÃO PULMÒNAR AGUDA, conforme reivindicação 1 caracterizado pela presente invenção consistir de Vitamina E ria fase orgânica e Vitamina. C e n-acetilcisteína na fase t aquosa o: que confere a mesma potencial antioxidante pela associação das três substâncias. ' r

4. PRODUTO NANOTECNOLÓGICO DE UMA FORMULAÇÃO LIPOSSOMAL A BASE DE ANTIOXIDANTES PARA O TRATAMENTO ' DA LESÃO 1 PULMONAR AGUDA caracterizado pela presente invenção compreender lipossomas em escala nanòmétrica contendo antioxidantes que podem ser utilizados na forma de aerossóis por nebulização ou na forma líquida por instilação. /,

5. PRODUTO, NANOTECNOLÓGICO DE UMA FORMULAÇÃO ’ LIPOSSOMAL A BASE DE ANTIOXIDANTES PARA O TRATAMENTO - /. ■ , ' DA LESÃO PULMONAR AGUDA de acordo com reivindicação .4 caracterizado pela presente invenção compreender lipossomas em escala nanòmétrica^ contendo antioxidantes para o tratamento de doenças das vias respiratórias.