BG97662A

BG97662A - Антинеоплазмено лекарствено средство и метод за получаването му

Info

Publication number: BG97662A
Application number: BG97662A
Authority: BG
Inventors: Claudio D'arrigo
Original assignee: Claudio D'arrigo
Priority date: 1991-08-28
Filing date: 1993-04-26
Publication date: 1994-03-31
Also published as: BG61065B1; HUT64861A; AU2549892A; ITRM910637A1; US5556626A; CA2093914A1; EP0554445A1; IT1249447B; AU654583B2; PL299218A1; MX9204917A; HU9301217D0; FI98889C; KR960014791B1; CA2093914C; KR930701968A; RO109816B1; ITRM910637A0; FI98889B; IL102801A

Abstract

Изобретението се отнася до активни компоненти с антитуморна активност, екстрахирани от растения от семейство раlма, подсемейство рноеniсоidеае и видовете рноеniх, и до фармацевтични препарати, съдържащи поне една от субстанциите и съставите, намиращи се в тези екстракти. Активните компоненти показват повишена селективност по отношение на неоплазмените клетки и понижено влияние върху нормалните клетки. Изобретението включва също метод за екстракция и разделяне на компонентите на екстрактите и приложението им за получаване на антинеоплазмени лекарствени средства и лекарства за третиране на други патологии. 38 претенции

Description

Настоящето изобретение се отнася до ношо кимиотарапежтичкс лека.рстаедо ссвдство, притежаващо антинеопластична активност, екстрахирано от плодовете на растенията от семейство Palma, подсемейство FHoenicoideae и видовете Phoenix.

Една от най-представителните насоки на изследване в оОласта на борбата с рака е антитуморната химиотерапия, антибластните химиотерапевтични агенти, изолирани досега имат най-различен произход и химични характеристики. Някои от тези антипролиФеративни агенти са екстрахирани от растения, като например ColcJalclne ©т Colchlcum Autumnale и ·· · ··· ··· ·· · • · · · · · « · « · · • · · · · · ···· · ··· · ······ ··· ······ ·· · ·* ··

Vincaleuccblastin от Vinca Rosea. Тези вещества, обаче, едновремено с известна специфична антит/морна активност, показват ниска, сепективност по отношение на дегенерираните клетки: поради което тяхното влияние върху метаболизма на човешките клетки представлява сериозна спънка за тяхното безразборно приложение.

Заявителят на настоящето изобретение вече е патентовал ,, ζώρχγό антитуморно лекарствено средство от растителен произ'4·» ход (и по-специално субстанцията С1Е>1, екстрахирана от плода на Pittosporum Tobira), притежаващо висока селективна антитуморна активност и силно понижена токсичност в сравнение с другите антибластни лекарства. Следвайки тази насока на изследвания заявителят е изолирал нов антинеопластичен химиотерапевтичен агент също чрез растителна екстракция, който също така показва висока селективна антитуморна активност и изключително ниска токсичност.

Главната цел на настоящето изобретение е да предложи метод за получаване на вещества и/или състави, притежаващи антинеопластична активност, характеризиращ се с Факта, че части и/или продукти на растенията от семейството Palma - на какъвто и да е етап от тяхното развите и зрелост - се подлагат плавно на следните операции:

а) екстракция на компонентите чрез изкисване (мацерация) в органичен разтворител;

<5) възможно разбъркване и разклащане на разтвора, съдържащ екстракта с друг разтворител с поне частична съвместимост с първия разтворител така, че компонентите на екстракта да се разпредялят между Фазите, които разтворителите образуват;

в) възможна обработка на всяка Фаза независимо една от друга при използването на поне една или две органични течности, • · · ··· ·« · ···· · ··· · · · • · · · · · ···· · ··· · ······ ··· ····· ·· · ·· *· представляващи разтворител на поне един от компонентите на екстракта, последвано от Филтруване на утайката, която се образува и изпаряване до сухо състояние на плуващата утайка;

о) възможно разделяне на компонентите, намираща се във всяка течна фаза;

д) отделяне на разделените компоненти, притежаващи антинеопластична активност и на тези непритежаващи такава.

Екстрактите се довеждат до сухо състояние и пречистват преди всеки от последователните етапи на метода.

Растенията от семейство Palma са за предпочитане от подсемейство Flioenicoideae и видовете Fiacerxix. В този смисъл растенията могат да бъдат подбрани например от групата на много видове, включително Phoenix Canadlensis, Fhoenlx Dactylifera, Chamaerops Excelsa, Chamaerops Humilis и много други.

Разтворителят може да бъде алкохол. Добри резултати се получават при използване на етилов алкохол,

Обемното съотношение между органичния разтворител и частите на растението, които ще се обработват е за предпочитане между 1:10 и 10:1.

Времето на обработка е за предпочитане между 5 мин. и месеца. Температурата на обработката може да варира и е за предпочитане между и 1О0®С.

Общият алкохолен екстракт на лекарството при разреждане 1 мг/мл може да бъде анализиран чрез HPLC (високоефективна течна хроматогра Фия) (Течен хроматогра Ф PerKin Elmer 250) при използването на колона 125 мм - 41 мм RF1S с метанол-вода (90:20) течна Фаза и дължина ма вълната равна на 210 нм. Въпросният общ алкохолен екстракт показва приблизително 14· пика с RT (време на задържане) от 1.123 (първи пик) до 33.461 • · · • · · · ·

• · (четиринадесети пик): най-представителните пикове са с ЕТ

1.123 (3.36'Z ПЛОЩ); RT 1,301 (3.01 X ПЛОЩ); RT 1.583 (63.341Х

ПЛОЩ); RT 2,133 (141.88Х площ) и RT 2.636 (З.ЗЗХ ПЛОЩ).

Разделянето на компонентите на екстракта се провежда за предпочитане чрез хроматогра Фия. До5ри резултати се получават при използването на хроматогра Фия върху колона със силикагел или HPLC препаративна колона.

Екстракцията може да се осъществи при използването на метанол и събиране на компонентите, които при HPLC имат времена на задържане около 1,123, 1.301, 1.583, 2.133 и 2.636.

след екстракция с етанол, полученият разтвор може да бъде разклатен с хлороформ, при което се образуват две Фази, алкохол-хлороФормна Фаза стьс зелен цвят и водна Фаза оцветена в <5ордо. В този случай компонентите, притежаващи антинеопластична активност се намират във водната фаза.

Водният разтвор може да бъде концентриран чрез изпарение в ротационен вакуум изпарител и в този момент:

1. в колбата може да се добави етилов алкохол, при което се образува суспензия; след това може да бъде добавен петролеев етер, който след разбъркване води до ускоряване на образуването на голямо количество утайка, която след като отново се разтвори в етанол-вода и се концентрира до около 30 мл се суспендира в изопропилов алкохол и след това се изсушава. Плуващата част на свой ред се изпарява и изсушава, което води до нарастване на образуването на червено аморфно вещество; накрая това вещество може да кристализира, ако след разтваряне в малко метанол се изсуши след добавянето на изопропилов алкохол, което води до получаването на изключително Фина суспензия;

г, или за предпочитане след концентрирането на водния разтвор може да се добави метилов алкохол в колбата, при което се получава суспензия; след това може да се добави етилов етер, който след разбъркване предизвиква образуването на голямо количество люспеста утайка; след отделянето на плуващата чааст утайката се суспендира в изопропилов алкохол и се изсушава в ротационен вакуум изпарител, при което се получава светлорозово-пембян прах.

Изобретението се отнася също така до вещества и състави, характеризиращи се с това, че могат да бъдат получени съгласно описания по-горе метод.

Настоящето изобретение има също така като предмет веществата и съставите, притежаващи антинеопластична активност, характеризиращи се с това, че могат да бъдат получени при използването на метода, описан по-горе,

Веществата и съставите, притежаващи антинеопластична активност могат да бъдат обработени така, че да бъдат получени под формата на соли, съединения или комплекси с оглед да бъдат превърнати във водоразтворими,

Дручга цел на настоящето изобретение е Фармацевтичен състав, характеризиращ се с това, че съдържа поне един активен компонент, който е вещество или състав подбран от групата на веществата или съставите, притежаващи антинеопластична активност, които могат да бъдат получени съгласно метода описан по-горе или техни смеси.

фармацевтичният състав може да бъде подбран от групата, включваща водните разтвори за парентерално приложение, капсулите за орално приложение, свещичките за ректално приложение, овулите за вагинално приложение, унгвентите, мехлемите, кремовете и геловете.

• · · ·· · · • · ·· · · ···· · · * · • · · · · ·.·· • · · · « ·· · · ¢5

Водният разтвор може да <5ъ>де опакован в ампули. Всяка ампула съдържа от 0.5 до 2.5 г· активен компонент, за предпочитане между 1.2 и 1.7г·.

В случая на Фармацевтичен състав под Формата на капсули всяка капсула съдържа о.1-2.0 г¹ активен принцип, за предпочитане O.S - 1.2 г> активен компонент.

В случая на Фармацевтичен състав под Формата на свещич г··

Ч. ки за ректално приложение всяка свещичка съдържа от 0.5 до

2.5 г активен компонент, за предпочитане между 1.2 и 1.7 г· активен компонент.

В случая на фармацевтичен състав под Формата на глобули за вагинално приложение всяка глобула съдържа от 0.5 до 2.5 п активен компонент, за предпочитане от 1.2 до 1.7 г¹ активен компонент.

В случая на Фармацевтичен състав под Формата на мехлем, мазило, крем или г>ел носителя за повърхностно приложение съдържа между 0.5 и 12/. активен компонент, за предпочита не между 3 и 7/. активен компонент.

г Изобретението се отнася съшс така до приложение на ком понентите, получени чрез горната екстракция разделяне и съби ране, самостоятелно или в комбинация за получаването на лекарства за лечение на патологии различни от неопластичните.

До тук бе представено общо описание на настоящето изобретение. С помоща ма следващите по-долу примери се предлага по-детайлно описание така, че да се постигне яснота на обектите, характеристиките, предимствата и методите за работа съ гласно изобретението.

Пример 1

Метод за екстракция и пречистване на активните компоненти.

• · · • · • · • ·

Определено количество плодове на CTxamaerops excelsa се пропиват при стайна температура с определено количество

Етилов алкохол, достатъчно да покрие плодовете (приблизително 1:1 обемно отношение, приблизително 7:1 тегловно отношение). Оставят се да се накиснат в продължение на поне 30 дни и след това, се филтруват. 500 мл от алкохолния екстракт, получен както е описано по-горе, се наливат в целителна Фуния заедно със същото количество хлороформ. След разбъркване в продължение на определен период от време започва сепарация, която завършва след 24 часа: в долната част на Фунията остава алкохолнохлоро Формен разтвор със зелен цвят; в горната част остава воден разтвор оцветен в бордо (червена разтворима Фракция = ЧРф), образувана от водоразтворими вещества екстрахирани от водата., съдържаща се първоначално в плода. ЧРФ е приблизително 20/ от обема и е образувана почти изцяло от компоненти, които при HPLC имат време на задържане RT 1.175 <га.О4Х ПЛОЩ), 1.575 (67.47Z ПЛОЩ) и 2284 (10.4-9/ площ). ЧРФ след изсушаване представлява аморфно вещество с червен цвят. Алкохолно-хлороФормният разтвор със зеленцвят (неразтворима зелена Фракция=нзф), която остава в долната частна разделителната фуния, след изсушаване е неразтворима във вода и когато се разтвори в метанол показва при HPLC четири пика с RT: 1.089 (14.17Z площ); 1.299 (8.29Z площ);

1.600 (68.1OZ площ); 2.268 (9.43Z площ).

Пример 2

Методи за пречистване на активния компонент

1) Първи метод

Водният разтвор (ЧРф), оставащ след провеждане на операциите от пример 1 (съставен от целия алкохолен екстракт без НЗФ) се концентрира силно чрез изпарение в ротационен ва-

β куум изпарител при С като се довежда до обем приблизително 30 мл. В този момент в колбата се добавят 300 мл етилов алкохол. Образува се суспензия. Добавя се еквивалентен обем (300 мл) петролеев етер. Сместа се разбърква. Образува се голямо количество утайка. Прозрачната плуваща част се отделя, Фиптрува и изсушава в ротационен вакуум изпаарител. По-

лучава се аморфно вещество червено на цвят, което е разтворимо във вода.

Червеното аморфно вещество се разтваря в метанол и се концентрира определено време в ротационен вакуум изпарител до получаване на висока концентрация и напълно метанолен разтвор, В този момент в колбата се добавя изопропилов алкохол (приблизително 200 мл), който предизвиква образуването на изключително Фина суспензия. Същата се изсушава. По този начин се получава изключително Фин прах с розово-пембян цвят, който всъщност представлява пречистена и кристализирала ЧРф.

ЧРф прахът е разтворим във вода, метанол и етанол и неразтворим в изопропилов алкохол. Неговите разтвори имат брилянтно червен цвят.

ЧРф прахът разтворен в метилов алкохол и изследван с HFLC, прилагайки обичайния метод показва единичен пик с RT 1.591.

ЧРф прахът е изключително хигроскопичен и след престояване във вакуум сушилня трябва да бъде консервиран в запечатани бутилки под вакуум.

Отделно от това утайката, която се образува в колбата също се разтваря в етилов алкохол-вода (3:1) и се концентрира чрез изпарение във вакуум изпарител по познатия метод до достигане на обем приблизително 30 мл. В този момент в колбата се добавя изопропилов алкохол, което води до Фина суспен• · · · •9 9

9 99

9* ······ · · « ···· ·· 99 9 9999 зия, която се изсушава. Получава се блед розово-пембян прах, показващ същото време на задържане (RT) при HPLC както в точка а) на втория метод.

Втори метод

Водният разтвор СЧРф), оставащ след операциите осъществени в пример 1 (съставен от целия алкохолен екстракт без НЗФ) се изпарява в ротационен вакуум изпарител при ч?б°с до обем 30 м л.

В този момент в колбата се добавят 300 мл метилов алкохол. Получава се Фина суспензия. Сместа се разбърква. Добавя се еквивалентен обем етилов етер. Сместа се разбърква, Образува се голямо количество люспеста утайка. Плуващата част се отделя. Всички утаителни операции, описани в т.2 досега могат да бъдат повторени определен брой пъти с цел да се получи все по—чист на всеки следващ етап продукт. След отделянето на плаващата част утайката се суспендира в приблизително 1ОО мл изопропилов алкохол и след това се изсушава в ротационен вакуум изпарител. По този начин се получава Фин розовопембян прах, който по-нататък ще бъде наричан DEGU,

DEGU прахът е неразтворим в ацетон, бензол, хлороформ, етилов етер, петролеев етер, етилов алкохол, метилов алкохол, изопропилов алкохол и е разтворим във вода.

Химични и физико-химични характеристики

PEGU прах от единичното утаяване:

a) HFLC

Колона RP 16 125 мм . -Ч мм, подвижна Фаза метанол-вода (60:20), дължина на вълната 210 нм, концентрация 1 мг/мл: RT 0.7 26 (2.16Z площ); RT 0.994 (·4·Ο.69Ζ площ); RT 1.А152 (56.93Ζ площ).

Същият метод при концентрация 2 мг/мл; RT 1.031 .··. ·«!

• · · · · ··· · · · • · · · · · ···· · ··· · (40.75% площ); RT 1.457 ( 59.2^ГЦЛЬщ) .*·*’ * ··”··’

Сферична колона Supelcosil LC-NH2 5 и, подвижна фаза

CH3CN-H2O (3:), поток 1.5 мл/мин., UV детектор 217 нм :

RT 1.702 (конц.15.823); RT 1.958 (конц.75.7988 ); RT 5.039 (конц. 9.1218).

Неправилни Chrompack Lichrosorb RP 18-10 и колона, подвижна фаза CH3CN-H2O (3:1), поток 1.5 мл/мин, UV детектор 217 нм: RT 1.503 (конц. 15.3867); RT 1=826 (конц.

42.5747); RT 2.019 (конц. 38.1984); RT 4.132 (конц. 3.8399).

б) Инфрачервен спектър

ИЧ спектрофотометър Perkin Elmer 683 в среда на калиев бромид, концентрация 1 мг/100 мг.

Регистрирани ивици:

3350	см^-!	валентни асоциирани ОН
2900	см-1	валентни СН3 и СН2-
1600	см-1	валентни С=С
1510	см-1	ножични асоциирани ОН
1400	СМ“1	ножични СН
1380	см~1	ножични СНз
1250	СМ“!	ножични свободни ОН
1050	см-1	валентни С-0

в) Ултравиолетов спектър

UV-vis спектрофотометър Perkin Elmer lambda 5

Разтвор в CH3CN-H2O (4:1), концентрация 5 х10^-2мг/мл:

Максимална обсорбция: първичен продукт при 204 нм

Вторичен продукт при 279 нм

Разтвор в СН3ОН-Н2О (3:1), концентрация 5 х 10^-2мг/мл:

Максимална абсорбция: първичен продукт при 202 нм • · • · • · · · • · · ··· ··· • · · · * · » · · ·· • · · · · · ···· · ···· ······· « · ······ ·· · ·· ·· вторичен продукт при 279.5 нм г¹) ЯМР спектри

ЯМР спектрите са получени при използването на апарат

Bruker А.С при 200 МХц (протонен) и 50 МХц (въглероден). Пробите се приготвят чрез разтваряне на 55 мг от субстанцията в 0.5 мл в DMSO—dgc прибавяне на 15 мг натриева сол на

3—(триметилсилил)пропансулФонова киселина (DSS) като вътрешен стандарт.

За спектъра се акумулират 3568 скена при използване на импулс с ширина 30°. Обмена на подвижни протони се провежда с помота на добавянето към пробата на 5 капки Рго и относителния^ спектър се постига чрез акумулиране на 212 скена.

¹³ С спектърът се регистрира чрез акумулиране на

11,555 скена при използване на 9Обимпулс, последван от изнакване 1.41 сек.

От протонните спектри могат да бъдат отбелязани определен брой сигнали в сбласта между 2.5 и ppm (дължащи се вероятно на С-Н от алкохолен или етерен тип); съществуват също така и подвижни протони, вероятно от хидроксилен тип в областа между 41 и 5 ppm. В спектърът се наблюдават също така и

Чг слаби сигнали в областа на виниловите протони.

С спектърът дава подобна ин формация, показвайки няколко пика в областа на виниловите въглеродни атоми и няколко сигнала в областа на алкохолните и етерни въглеродни атоми.

д) Процентен анализ: сх 38.48

HZ 5.72

NZ ОХ 55.80 • · • · • · ··· ··· ·· • · · · · ··· · · • · · · · ······ ··· · ······ ···

Минималната емпирична формула най-близка*до‘горния анализ е: С9Н16ОЮ·

е) Точка на топене: 95 - 130°С (децимална).

ж) pH на водния разтвор: 6.05

Описаните по-горе химични и физико-химични характеристики на субстанцията DEGU могат да се различават в зависимост от степента на пречистване (брой на утаяванията и промиванията), което е представено в следващата по-долу таблица:

Метод	RSF	Прах от	Прах от	Прах от
		първо	второ	трето
	(прим.1)	промиване	промиване	промиване
Тегло на сухата
субстанция в
г/л	~26	12	~8	~5
Т.т (десетична)	70-75 С	95-130 С	130-150 С	170-200 С
HPLC (RT)	175	0.728	0.088	0.777
(колона RP 18,	(22.4%)	(2.18%)	(0.36%)	(0.99%)
подвижна фаза
метанол-вода	1.575	0.994	1.085	1.044
80:20	(67.47%)	(40.89%)	(77.78%)	(41.41%)
lambda 210 nm,	2.284	1.452	1.579	1.571
концентр. 1мг/мл	(10.49%)	(56.93%)	(21.86%)	(11.51%)
	____	____	_____	2.438

(46.09%) • · · · · · • · · · · · · • · · · · · ··· ···· · ··· · ·· • · ··· ······ ···· ······ · ·· ······ ·· · ·· · · pH воден разтвор <5.2 6.05 6.556.4-1

L.D5O за швейцарска мишка.

МГ/КГ >2000 >2000 >2000>2000

Пример 3

Метод за хроматографично разделяне на активните компоненти.

Целият алкохолен екстракт на лекарственото средство се изсушава в ротационен вакуум изпарител и отново се разтваря в малко количество метанол и вода. С този разтвор се провежда хроматограФско разделяне, както върху колена със силикагел <50, така и с висока прецизност върху HPLC препаративна колона. По този начин се получават чисти Фракции, които както 5еше споменато по-горе отговарят на пикове с времена на задържане: 1.123; 1.301; 1.5 S3; 2.133 и 2.6 36.

Пример -4·

Тестове подчертаващи антинеопластичната активност както ДЛ v Jtr о така и лл vivo

Субстанциите и/или съставите, получени съгласно горните примери, разтворени или разтворими при използване на етилов алкохол във вода показват значителна антинеопластична активност едновременно с приемлива токсичност и отсъствие на имуносупресивна активност. Тези специфични характеристики са вече наблюдавани от заявителя на настоящето изобретение при активните компоненти изолирани от друго растение, което както бе споменато пс-горе бяха предмет на предишен патент: това вероятно се дължи на Факта, че тази група субстанции притежават освен това литична активност върху всички мембрани на неопластичната клетка от париеталната мембрана до тези на • · • · · · · ·

различните цитоплазмени органели на клетъчната мембрана.

Значителната селективна антинеопластична активност върху тумсрните клетки се проявява на хистологично ниво както in vitro така и in vivo в очевидно изменение на ту — морните клетки, които изглежда нарастват обемно, срастват, разпукват се и показват утъняване на клетъчната мембрана, вакуопизиране и грапава цитоппазма с хипохромия на клетъчния хроматин и избледняване на ядрата. Доказателство за високата селективност на тези субстанции е Фактът, че всички изброени по-горе поражения отсъстват напълно при нормалните клетки претърпели подобно третиране.

Антинеопластичната активност на изброените по-горе субстанции се изпитва ш гцио върху Sa ISO на швейцарска мишка, като обикновено се използват дози между го и ЮОО mg/kg/dle в зависимост от използваната субстанция, приложена интраперитониално в продължение на & последователни дни като се започва от деня следващ трансплантирането. В сравнение с един среден период на надживяваме от 23 дни при контролните животни, при βΟΖ от третираните животни се наблюдава отхвърляне на тумора, поради което те могат да бъдат смитани за оцелели.

Единично подкожно инжектиране, приложено 24 часа след трансплантирането на тумора при доза осем пъти единичната интраперитонеална доза е способно да предизвика отхвърляне на тумора в 1ΟΟΖ от слумайте.

За терапевтимно приложение субстанциите съгласно настоящето изобретение и техните соли, съединения или комплекси се прилагат за предпочитане под Формата на воден разтвор за мускулно, интравенозно или интракавитарно инжектираме.

Claims

ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ

1. Метод за получаване на вещества и/или състави, притежаващи антинеоппастична активност, характеризиращ се с факта, че части и/или продукти на растенията от семейството Palma - на какъвто и да е етап от тяхното развите и зрелост

- се подлагат главно на следните операции:

а) екстракция на компонентите чрез изкисване (мацерация) в органичен разтворител;

б) възможно разбъркване и разклащане на разтвора, съдържащ екстракта с друг разтворител с поне частична съвместимост с първия разтворител така, че компонентите на екстракта да се разпредялят между Фазите, които разтворителите образуват;

в) възможна обработка на всяка фаза независимо една от друга при използването на поне една или две органични течности, представляващи разтворител на поне един от компонентите на екстракта, последвано от Филтруване на утайката, която се образува и изпаряване до сухо състояние на утайката и/или плуващата утайка ;

го възможно разделяне на компонентите, намираща се във всяка течна Фаза;

д) отделяне на разделените компоненти, притежаващи антинеопластична активност и на тези непритежаващи такава, като въпросните екстракти е възможно да бъдат изсушени до сухо и пречистени преди всяка следваща обработка.
2. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че растенията са от подсемейство Phoenlcoldeae и видовете Phoenix.
3. Метод съгласно претенция г, характеризиращ се с то- • · · • · · • · · · · · • · · · ·· · ···

1<5 ва, че растенията са подбрани от? групата, включваща Pboenix Canadiemis, Phoenix Dactylifera, Chamaerops Excelsa, Chamaerops HumiUs и техни смеси.

At. Метод съгласно коя да е от? предишните претенции, характеризиращ се с това, ч:е разтворите ля е подбран от γ·ε>μпата на алкохолите,
5. Метод съгласно претенция AL, характеризиращ се с това, че алкохолът е етамол.

в. Метод съгласно коя да е от предишните претенции,

Чйй*' характеризиращ се с това, че обемното отношение между ор>зга.ничния разтворител м частите от растенията за обработка е между 1:10 и 10:1.

Т. Метод съгласно коя да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, м:е времето на обработка е между 3 мин. и 3 месеца.

3. Метод съгласно коя да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че температурата на обработка е между ‘о и ю<^ с.
9. Метод съгласно коя да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че разделянето на компонентите на ’W- екстракта е от хроматограФски тип.

Ю. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че разделянето на компонентите на екстракта се извършва върху колона със силикагел.
11. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с то- ва, че разделянето на компонентите на екстракта се провежда с HPLC пгзегтахза.а.тивма. колона.
12. Метод съгласно претенция 11, характеризиращ се с това, м:е разделянето се осъществява пр>рг използването на HPLC техника и компонентите имащи време на задържане около стой• · • · • · · е • ·

17 костите 1.123; 1.301; 1.563; 2.133 и 2.636 се събират.
13. Метод съгласно коя да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, ме екстракцията се провежда с етанол, полученият разтвор се разклаща с хлороформ, при което се образуват две фази - алкохолно-хлоро Формена Фаза със зелен цвят и водна фаза с цвят бордо, като съединенията, притежаващи антинеоппастична активност се намират в бордо оцветената Фаза.

1Д·. Метод съгласно претенция 13, характеризиращ се с това, че разделянето на компонентите, притежаващи антинеопластична активност се осъществява при използването на хроматография след изсушаване на водната Фаза и след разтваряне на сухото в метанол-вода.
15. Метод съгласно претенция 1·4·, характеризиращ се с това, не разделянето на компонентите, притежаващи антинеопластична активност се провежда с използването на HPLC техника икомпонентите с времена на задържане около 0.777;

1.0-444: 1.174; 1.575 и 2.264 се събират.

15. Метод съгласно претенция 13, характеризиращ се с това, ме водният разтвор се концентрира чрез изпаряване във вакуум изпарител и след това се въвеждат етилов алкохол и петролеев етер, при което се образува утайка, която се изпарява до сухо и се получава бледо пембян прах, които след изпитания с HPLC показва времена на заадържане 0.726; 0.99^4: 1.4452, докато плуващата нает на свой ред се изпарява, при което се получава червена аморфна субстанция, която с HPLC показва единимен пик с време на задържане 1.591.
17. Метод съгласно претенция 15, характеризиращ се с това, ме както утайката така и аморфната субстанция, получени от плуващата утайка се рекристализират под Формата на чер·« ·· ··· *····« • · · ··· ··· • · · · · · * · · ·· • · · · · · ···· · ··»· ······ ··· «·«··· ·· · · ···

IS вен прах след суспендиране в метилов алкохол и изопропилов алкохол.

1Θ. Метод съгласно претенция 13, характеризиращ се с това, че водният разтвор се концентрира в изпарителна колба, след което в нея се добавят метилов алкохол и етилов етер, водещи до образуване на утайка; утайката, след като от? нея е отделена плуващата част се суспендира в изопропилов алкохол и се суши, при което се получава блед розово-пембян прах, който при HFLC показва следните времена на заадържане: O.72S (2.
18Z площ); 0.9 94 (4O.89Z площ); 1.4152 (56.93Z площ).
19. Субстанции и състави, характеризиращи се с това, че се получават при използването на метода съгласно претенции ОТ 1 ДО 1S.
20. Субстанции и състави, притежаващи антинеопластична активност, характеризиращи се с това, че се получават при използването на метода съгласно претенции от 1 до 1в.
21. Субстанции и състави, притежаващи антинеопластична активност съгласно претенция 20, характеризиращи се с това, че са под формата на соли, съединения, комплекси или техни комбинации с оглед на това да станат водоразтворими.
22. фармацевтичен препарат, характеризиращ се с това, че съдържа като един от своите активни компоненти субстанциите и съставите подбрани от групата на продуктите, притежаващи антинеопластична активност, които са получени при използване на метода съгласно претенции от 1 до 1е.
23. фармацевтичен препарат съгласно претенция 22, характеризираш се с това, че е под Формата на воден разтвор за парентерално приложение.
24. фармацевтичен препарат съгласно претенция 22, характеризиращ се с това, че е под Формата на капсули за орално приложение.
25. фармацевтичен препарат съгласно претенция 22, характеризираш се с това, че е под Формата на свещички за ректално приложение.

25. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 22, характеризиращ се с това, че е под Формата на овули за вагинално приложение.

27. фармацевтичен препарат съгласно претенция 22, характеризиращ се с това, че е под Формата на мехлем, мазило, крем или гел.
26. фармацевтичен препарат съгласно претенция 23, характеризиращ се с това, че е под формата на ампули, като всяка ампула съдържа между 0.5 и 2.5 г активен компонент.
29- фармацевтичен препарат съгласно претенция 26, характеризиращ се с това, че всяка ампула съдържа между 1.2 и 1.7 г активен компонент.
30. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 2-4-, характеризиращ се с това, ме е под Формата на капсула, като всяка капсула съдържа 0.1-2.0 η активен компонент.
31. фармацевтичен препарат съгласно претенция 30, характеризиращ се с това, ме всяка капсула съдържа от 0.8 до 1.2 г активен компонент.
32. фармацевтичен препарат съгласно претенция 25, характеризиращ се с това, че е под Формата на свещички за ректално приложение, като всяка свещимка съдържа от 0.5 до 2.5 г активен компонент.
33. фармацевтичен препарат съгласно претенция 32, характеризиращ се с това, че всяка свещичка съдържа от 1.2 до 1.7 г активен компонент.
34. фармацевтичен препарат съгласно претенция 26, ха• · · · · · • · • · · · • · · • · • · · · · · r

ί·

20 р>а_г<те:р1тзртр>а_11х се стова.» е под Формата на овули за вагинално приложение, като всяка овула съдържа от 0.5 до 2.5 гактизен компонент.
35. фармацевтичен гтр»еггарзат съгласно претенция 3-4г, характеризиращ се с това, че всяка овула съдържа от 1.2 до 1.Т ]т активен компонент.

35. фармацевтичен препарат съгласно претенция 2Т, характеризиращ се с това, че е под Формата на мехлем, мазило, крем или гел с носител за повърхностно приложение, съдържащ между 0.5 и 12Z активен компонент.

ЗТ. фармацевтичен препарат съгласно претенция 36, характеризиращ се с това, ч:е носителят за повърхностно приложение съдържа между 3 к т тегл.х активен компонент.

35. Приложение на компонентите, получени съгласно мето да от претенции от 1 до 15 - самостоятелно или в комбинация - за получаване на лекарства за третиране мес патологии различни от неопластичните.