BG113409A - Метод за получаване на антимикробни култури - Google Patents

Метод за получаване на антимикробни култури Download PDF

Info

Publication number
BG113409A
BG113409A BG113409A BG11340921A BG113409A BG 113409 A BG113409 A BG 113409A BG 113409 A BG113409 A BG 113409A BG 11340921 A BG11340921 A BG 11340921A BG 113409 A BG113409 A BG 113409A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
hours
incubation temperature
culture
antimicrobial
million
Prior art date
Application number
BG113409A
Other languages
English (en)
Inventor
Кирил Петков
Петков Петков Кирил
Росица Тропчева
Василева Тропчева Росица
Петко Петков
Кирилов Петков Петко
Емануела Лукач
Петрова Лукач Емануела
Мартин Драгулев
Петров Драгулев Мартин
Веселина Шишкова
Енчова Шишкова Веселина
Original Assignee
Провиотик Ад
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Провиотик Ад filed Critical Провиотик Ад
Publication of BG113409A publication Critical patent/BG113409A/bg

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/06—Lysis of microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Настоящото изобретение е насочено към метод за размножаване на антимикробна култура. По-специално, настоящото изобретение се отнася до метод за размножаване на антимикробна култура, включващ инкубиране на жизнеспособен микроорганизъм в присъствието на микробен лизат при подходящи условия, позволяващи натрупването на антимикробни метаболити. Настоящото изобретение се отнася също до размножена антимикробна култура и нейното използване като антимикробно средство.

Description

МЕТОД ЗА ПРОИЗВОДСТВО НА АНТИМИКРОБНИ КУЛТУРИ
[1] Настоящото изобретение е насочено към метод за размножаване на антимикробна култура. По-специално, настоящото изобретение се отнася до метод за размножаване на антимикробна култура, включващ инкубиране на жизнеспособен микроорганизъм, в присъствието на микробен лизат при подходящи условия, позволяващи натрупването на антимикробни метаболити. Настоящото изобретение също се отнася до размножаваща се антимикробна култура и нейното използване като антимикробно средство.
ВЪВЕДЕНИЕ
[2] is I' Инфекциозните заболявания, включително бактериалните инфекции, продължават да бъдат сериозен здравословен проблем в целия свят. Пробиотиците се определят като „живи микроорганизми, които приложени в адекватни количества, оказват благоприятно влияние върху здравето на гостоприемника“. През последните няколко години, употребата на пробиотици набира все по-голяма популярност, поради непрекъснатото натрупване на научни доказателства за свойствата, функционалността и полезните ефекти на пробиотичните бактерии. Наблюдава се тенденциозно нарастващо търсене на пробиотични функционални храни и напитки и хранителни добавки, поради повишените нива на здравно съзнание и нарастващата информираност на потребителите, относно здравето на чревния тракт и концепцията за превантивни здравни грижи. Знаем, че някои от инфекциите и разстройствата, като синдром на раздразнените черва, възпалително заболяване на червата и диария, индуцирана от антибиотици, са свързани с дефицитна или компрометирана чревна микробиота, поради което пробиотиците се считат за основен фактор при контролирането на такива нарушения.
[3] Млечнокиселите бактерии, особено представителите на род Lactobacillus, са най-често използваните микроорганизми, като пробиотици, поради техният GRAS статус (“Generally recognized As Safe”). Киселинността, наличието на жлъчни соли и панкреатични ензими в гастро-интестиналният тракт (ГИТ) са някои от основните стресови фактори, които орално приетият пробиотик среща в ГИТ. Освен че трябва да оцелеява при тези условия, пробиотичният щам също трябва да притежава способността да адхезира и впоследствие да колонизира (поне временно) чревния тракт. Чрез адхезия и колонизация, пробиотичните бактерии успяват да осигурят търсените благоприятни ефекти върху човешкия организъм.
[4] φ Важно е тези пробиотици и продукти, съдържащи пробиотици, да могат да се произвеждат в индустриален мащаб, по възпроизводим начин, който да гарантира проявлението на техните полезните ефекти.
[5] Различни методи за производство на пробиотици са описани и добре документирани. Някои от тези методи описват получаването на смесени микробни култури в течна среда за растеж. Производството на такива смесени култури е силно затруднено от конкуренцията между различните микробни популации в културната среда. Един от начините за получаване на смесени микробни култури е да се култивират отделно различните щамове и след това да се комбинират размножените щамове в желаното съотношение. Това обаче е нежелателно трудоемко и скъпо. Следователно все още има нужда от разработване на ефикасни и рентабилни методи за производство на антимикробни култури като пробиотици.
КРАТКО РЕЗЮМЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
[6] Изобретателите са разработили метод за възпроизводимо производство на антимикробна култура, чрез култивиране на микроорганизъм, в присъствието на микробен лизат.
[7] Съгласно един аспект, методът за изобретението включва стъпките:
а. инокулиране на течна хранителна среда с посевен материал на работния микроорганизъм, за да се получи инокулирана среда, съдържаща около 1О2-5х1О10 CFU/ml; - б. смесване на инокулираната среда с микробен лизат, за получаване на културална течност;
в. инкубиране на така получената културална течност при първа инкубационна температура (1Тс);
г. охлаждане на културалната течност от етап в. до втора инкубационна температура (2Тс), която е най-малко с 0.5°С под първата инкубационна температура (1Тс) и инкубиране на охладената културална течност при 2Тс, за да се получи размножена антимикробна култура; и по желание
д. събиране на размножената антимикробна култура.
[8] Методът, съгласно изобретението, позволява индустриален мащаб или голямо производство на антимикробни култури.
[9] Съгласно един аспект, методът от изобретението, приложен към промишлен мащаб на произвдоство, включва етапите на:
е. посев на антимикробната култура в по-голям обем течна хранитела среда, съгласно претенция 1, като инокулум;
ж. инкубиране на инокулираната среда при първа инкубационна температура (1Тс), за да се получи размножена антимикробна култура; и по желание
з. събиране на размножената антимикробна култура.
[10] Настоящият метод е напълно подходящ за получаване на антимикробни култури, които продуцират голям брой различни антимикробни метаболити.
[11] В допълнение, настоящият метод може да се извърши, като се използват само хранителни субстрати.
[12] Въпреки, че изобретателите не желаят да бъдат обвързани с теория, се смята, че ползите от метода от настоящото изобретение произлизат от сензорните качества на бактериален кворум, и в частност на млечнокисели бактерии.
[13] Настоящите изобретатели изненадващо и неочаквано наблюдават, че когато микробната култура се култивира по метода от настоящото изобретение, размножаващите се микроорганизми, особено бактерии като млечнокиселите, поради метаболитния стрес, който изпитват, увеличават секрецията на различни антимикробни метаболити. По-специално, изобретателите забелязват, че когато микробната култура се размножава, съгласно метода от настоящото изобретение, размножаващите се микроорганизми, по-специално бактерии като млечнокиселите, поради комбинация от метаболитен стрес и сензорните качества на кворума на микроорганизмите, максимизира продукцията на различни антимикробни метаболити.
[14] В някои случаи размножаваната антимикробна култура съдържа лактобацили и микробен лизат. В някои случаи, размножаваната антимикробна лактобацилна култура е
Lactobacillus delbrueckii. В някои случаи, размножаваната антимикробна лактобацилна култура е Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus. В някои случаи, лактобацилната култура е Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus щам GLB44.
[15] Антимикробните метаболити могат да бъдат токсични за патогенни микроорганизми, като бактериални патогени.
[16] В някои случаи, размножаваната антимикробна култура е полезна за лечение на различни заболявания на хора, животни и растения, като микробни заболявания или състояния.
[17] В някои случаи, размножаваната антимикробна култура е полезна за лечение на заболявания или състояния, свързани с бактериални патогени, като например E.coli и Helicobacter pylori.
КРАТКО ОПИСАНИЕ НА ГРАФИКИТЕ
[18] ФИГ. 1 илюстрира антибактериалната активност на L. bulgaricus GLB44 срещу Н. pylori - зони на инхибиране спрямо време на ферментация.
ПОДРОБНО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
[19] Тук е описан метод за размножаване на антимикробна култура, при който инкубирането на микроорганизъм, в присъствието на оптимизирано количество микробен лизат, при подходящи условия, води до повишени нива на антимикробни метаболити в културалната среда.
[20] По време на това разкритие, различни публикации, патенти и публикувани патентни спецификации са посочени чрез идентифициращо цитиране. Разкритията на тези публикации, патенти и публикувани спецификации на патента са включени тук, чрез позоваване в настоящото разкритие, за да се опише подробно състоянието на техниката, до която се отнася това разкритие.
[21] От една страна се осигурява метод за размножаване на антимикробна култура, като методът включва етапите на:
а. инокулиране на течна хранителна среда с посевен материал на работния микроорганизъм, за да се получи инокулирана среда, съдържаща около 1О2-5х1О10 CFU/ml;
б. смесване на инокулираната среда с микробен лизат, за получаване на културална течност;
в. инкубиране на така получената културална течност при първа инкубационна температура (1Тс);
г. охлаждане на културалната течност от етап в. до втора инкубационна температура (2Тс), която е най-малко с 0.5°С под първата инкубационна температура (1Тс) и инкубиране на охладената културална течност при 2Тс, за да се получи размножена антимикробна култура; и по желание
д. събиране на размножената антимикробна култура.
[22] Осигурено е също методът за размножаване на антимикробна култура да се провежда в промишлен мащаб, който включва етапите на:
- г е. посев на антимикробната култура в по-голям обем течна хранитела среда, съгласно претенция 1, като инокулум;
ж. инкубиране на инокулираната среда при първа инкубационна температура (1Тс), за да се получи размножена антимикробна култура; и по желание
з. събиране на размножената антимикробна култура.
[23] Както са използвани тук, някои термини могат да имат следните определени значения.
[24] Както са използвани тук, термините а и the са синоними и могат да се използват взаимозаменяемо с един или повече и поне един, освен ако езикът и/или контекстът ясно посочват друго. Например, терминът клетка включва единична клетка, както и множество клетки, включително клетъчни суспензии.
[25] Както е използван тук, терминът включващ означава, включително, съставен от, обхваща, състои се от, съставя и включва.
[26] Всички цифри или числа, използвани тук, които указват количества, съотношения на материали, физични свойства на материалите и/или употреба, трябва да се разбират като модифицирани или квалифицирани с термина около, освен ако изрично не е посочено друго.
[27] Както се използва тук, терминът около включва посоченото число или число и +/10%отпосоченота цифра или число. Като неограничаващ пример, терминът около десет (10) ще включва девет (9) до единадесет (11) или 9-11.
[28] Както се използва тук, терминът антимикробно се отнася до унищожаване или инхибиране на растежа на микроорганизми и специфично на патогенни микроорганизми, като патогенни бактерии.
[29] Както се използва тук, терминът размножаване на антимикробна култура означава метод за умножаване или увеличаване на броя на микроорганизмите, като бактерии, които се възпроизвеждат, растат или размножават в предварително определена хранителна среда, например течна хранителна среда, при контролирани условия на инкубация . Условията на инкубация варират между различните микроорганизми и те биват разпознати от специалист и ще бъдат адаптирани според изискванията за изпълнение на методите от настоящото изобретение.
[30] В някои случаи, размножената антимикробна култура, получена по метода от настоящото изобретение, се лиофилизира. В някои случаи размножената антимикробна култура, получена по метода от настоящото изобретение, се изсушава чрез замразяване.
[31] В някои случаи инокулумът е лиофилизиран.
[32] В някои случаи инокулумът е изсушен чрез замразяване.
[33] В някои случаи, размножената антимикробна култура, получена по метода от настоящото изобретение, се събира за по-нататъшна обработка. В някои случаи, събраната антимикробна култура се лиофилизира. В някои случаи събраната антимикробна култура се изсушава чрез замразяване.
[34] В някои случаи, инокулумът се събира за по-нататъшна обработка. В някои случаи, събраният инокулум се лиофилизира. В някои случаи, събраният инокулум се изсушава чрез замразяване.
[35] Терминът течна хранителна среда, както се използва тук, се отнася до направена от, със или чрез течна хранителна среда за размножаване, която подпомага растежа на микроорганизмите.
[36] В някои случаи течната среда се инокулира с микроорганизми. Терминът инокулиран, както се използва тук, се отнася до въвеждане или добавяне на микроорганизми, клетки, лизат или техни комбинации във течната среда среда.
[37] В някои случаи, използваната в настоящия метод течна среда обикновено съдържа наймалко 70 wt.% вода. За предпочитане, течната хранителна среда съдържа най-малко 80 wt.%, най-добре 90 wt.% вода. Освен водата, течната хранителна среда съдържа източник на въглерод и азот и по избор всички други компоненти, необходими на организмите да се развиват, като например соли, осигуряващи основни елементи като магнезий, фосфор и сяра.
[38] В някои случаи течната среда е млечна или животинско мляко. В някои случаи животинското мляко може да бъде получено от крава, овца, коза, камила, северни елени, воден бивол, як, кон, магаре и т.н.
[39] В някои случаи течната среда не е млечна или от животинско мляко. В някои случаи тя може да бъде получена от бадеми, соя, ориз, кашу, кокос, овес, лен, коноп и др.
[40] В някои случаи течната среда не съдържа животински или млечни продукти или странични продукти.
[41] Използваният тук термин животински продукти означава всеки материал, получен от тялото на животно. Животинските продукти включват мляко, яйца, мазнини, месо, кръв, риба, ракообразни и др. Използваният тук термин страничен животински продукт е продукт, добит или произведен от добитък, различен от мускулно месо.
[42] Както е използван тук, терминът „свободно от“ означава, че съдържанието е достатъчно ниско или незначително, така че никаква значителна опасност за хората няма да възникне от контакт с културите, описани тук. В някои случаи течната среда е растителна среда.
[43] В някои случаи растителната среда може да бъде сок или екстракт от асаи, агаве, бадем, алое, ябълка, кайсия, рукола, авокадо, цвекло, звънец, къпина, синьозелено водорасло, боровинка, морков, кайен, целина, чиа, кориандър, карамфил, кокос, краставица, глухарче, фурма, копър, чесън, джинджифил, гинко, грейпфрут, гуаюса, коноп, пипер халапеньо, кейл, киви, лимон, лимонова трева, лайм, мака, мандарина, лук, портокал, магданоз, праскова, круша, ананас, малина, мента, спанак, спирулина, ягода, сладък картоф, домат, корен от куркума, диня или житна трева или растителната среда е соево мляко, оризово мляко, бадемово мляко, кафе , ленено масло, билков чай, или кленов сироп или мед.
[44] В някои случаи растителната среда включва 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14 %, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% от течната растежна среда.
[45] В някои случаи водната среда е зеленчукова среда. В някои случаи зеленчуковата среда може да бъде сок или екстракт от моркови, грах, домати, люспи, артишок, броколи, цвят от броколи, каперси, карфиол, аспержи, цвекло, кана, маниока, джинджифил, пащърнак, ямс или куркума.
[46] В някои случаи растителната среда съдържа 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14 %, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% от течната растежна среда.
[47] В някои случаи растителната среда съдържа 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14 %, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% сок от моркови.
[48] В някои случаи течната растежна среда включва комбинация от една или повече среди на растителна основа и една или повече среди на зеленчукова основа при различни съотношения.
[49] В някои случаи течната растежна среда може да бъде около 50-50 съотношение на сок от моркови и сок от грах. В някои случаи течната растежна среда може да бъде 50-50 съотношение на екстракт от спирулина и сок от моркови. В някои случаи течната растежна среда може да бъде 50-50 съотношение на екстракт от обелки от домати и сок от моркови.
[50] В някои случаи течната среда е веган среда. Както се използва тук, терминът веган означава, че не съдържа компоненти (като месо, яйца или млечни продукти), които идват от животни или са получени от животински продукти.
[51] Както се използва тук, терминът инокулум означава микробен материал или клетъчна култура, който се добавя към някакъв друг материал или вещество, като течна хранителн среда. В някои случаи инокулумът включва живи или жизнеспособни клетки на микроорганизми. В някои случаи, инокулумът, използван в настоящия метод, съдържа поне един микроорганизъм. Микроорганизмът, който може да бъде използван, може да включва прокариот или еукариот. Микроорганизмът може да бъде избран от вируси, бактерии или фунги.
[52] За предпочитане е избраният микроорганизъм да бъде бактериален. Царството на бактериите се състои от над 70 000 вида и всеки носи много различни характеристики. Микроорганизмът, който се размножава, използвайки настоящия метод, може да бъде взет от проби, например, от сложни култури за ферментация на храни или фуражи, смесени култури за биозащита, сложни пробиотици, от микробиота.
[53] В някои случаи инокулумът съдържа между около 1О2-5х1О10 CFU/ml или повече. При някои случаи инокулумът може да бъде произведен с помощта на микрофлуидни системи.
[54] В някои случаи инокулумът, използван в настоящия метод, включва млечнокисели бактерии.
[55] Пробиотиците обикновено включват един от трите вида бактерии: Lactobacillus, Bifidobacteria и Streptococcus. Във всеки от тези три рода бактерии има множество видове.
[56] Родът Lactobacillus съдържа над 180 вида. В някои случаи лактобацилите са от видовете L. acidophilus, L. brevis, L. buchneri, L. casei, L. curvatus, L. delbrueckii, L. fermentum, L. helveticus, L. plantarum, L. reuteri, L. sakei или L. salivarius.
[57] В някои случаи лактобацилите са от вида L. delbrueckii. В някои случаи лактобацилът е Lactobacillus delbrueckii bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii lactis, Lactobacillus delbrueckii delbrueckii или Lactobacillus delbrueckii indicus. В някои случаи, лактобацилът e Lactobacillus delbrueckii bulgaricus.
[58] В някои случаи микроорганизмът е Lactobacillus plantarum GLP3.
[59] В някои случаи микроорганизмът е Lactobacillus delbrueckii bulgaricus щам GLB44.
[60] В някои случаи, лактобацилът е Lactobacillus delbrueckii bulgaricus щам GLB44. Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus GLB44, е депозиран в Националната банка за промишлени микроорганизми и клетъчни култури в София, България на 17 април 2014 г., номер за присъединяване NBIMCC № 8814.
[61] Различни щамове на вида Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus имат различна морфология. Например, някои са прави, други са извити, други единична клетка, други са по двойки или верижки по три. Клетъчната морфология на Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus GLB44 е дълга пръчка, със средна дължина от около 14 pm до около 16 pm. Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus GLB44 също често се среща в къси вериги от две или три прави пръчки, които са свързани заедно.
[62] В някои случаи, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus може да се използва като бактерия в настоящото изобретение. Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus се среща естествено в четири различни растения в България: Camus mas (комелийска череша), Galanthus nivalis (кокиче), Calendula officinalis (обикновен невен) и Prunus spinosa (черен трън).
[63] В някои случаи, инокулираната течна среда съдържа между 1О2-5х1О10 жизнеспособни клетки/ml. В някои случаи, инокулираната течна среда съдържа между 102-5х109 жизнеспособни клетки/ml. В някои случаи, инокулираната течна среда съдържа между 1025х108 жизнеспособни клетки/ml. В някои случаи, инокулираната течна среда съдържа между 102-5х107 жизнеспособни клетки/ml. В някои случаи, инокулираната течна среда съдържа между 102-5х106 жизнеспособни клетки/ml. В някои случаи, инокулираната течна среда съдържа между 102-5хЮ5 жизнеспособни клетки/ml.
[64] В някои случаи инокулираната течна среда съдържа 1010 жизнеспособни клетки/ml. В някои случаи инокулираната течна среда съдържа 109 жизнеспособни клетки/ml. В някои случаи инокулираната течна среда съдържа 108 жизнеспособни клетки/ml. В някои случаи инокулираната течна среда съдържа 107 жизнеспособни клетки/ml. В някои случаи инокулираната течна среда съдържа 10б жизнеспособни клетки/ml. В някои случаи инокулираната течна среда съдържа 105 жизнеспособни клетки/ml.
[65] Специалистът ще знае, че жизнеспособността на микробните клетки може да бъде оценена или изчислена с помощта на колонии образуващи единици на милилитър (CFU/ml) в случай когато пробата е течна или грамове (CFU/g), ако се изследва твърд материал.
[66] Ако размножаваната антибактериална култура е в течна форма, концентрацията на жизнеспособните клетки може да бъде оценена чрез колонии образуващи единици на милилитър (CFU/ml). В някои случаи, концентрацията на жизнеспособните клетки в състава е от 0,5 милиона до 1 милиард CFU/ml, 0,5 милиона до 500 милиона CFU/ml, 0,5 милиона до 400 милиона CFU/ml, 0,5 милиона до 300 милиона CFU/ml, 0,5 милиона до 200 милиона CFU/ml, 0,5 милиона до 150 милиона CFU/ml, 0,5 милиона до 125 милиона CFU/ml, 0,5 милиона до 100 милиона CFU/ml, 0,5 милиона до 75 милиона CFU/ml, 0,5 милиона до 50 милион CFU/ml, 0,5 милиона до 10 милиона CFU/ml, 0,5 милиона до 5 милиона CFU/ml, 0,5 милиона до 1 милион CFU/ml, 1 милион до 1 милиард CFU/ml, 1 милион до 500 милиона CFU/ml, 1 милион до 400 милиона CFU/ml, 1 милион до 300 милиона CFU/ml, 1 милион до 200 милиона CFU/ml, 1 милион до 150 милиона CFU/ml, 1 милион до 125 милиона CFU/ml, 1 милион до 100 милиона
CFU/ml, 1 милион до 75 милиона CFU/ml, 1 милион до 50 милиона CFU/ml, 1 милион до 10 милиона CFU/ml, 1 милион до 5 милиона CFU/ml, 5 милиона до 1 милиард CFU/ml, 5 милиони до 500 милиона CFU/ml, 5 милиона до 40 0 милиона CFU/ml, 5 милиона до 300 милиона CFU/ml, 5 милиона до 200 милиона CFU/ml, 5 милиона до 150 милиона CFU/ml, 5 милиона до 125 милиона CFU/ml, 5 милиона до 100 милиона CFU/ml, 5 милиона до 75 милиона CFU/ml, 5 милиона до 50 милиона CFU/ml, 5 милиона до 10 милиона CFU/ml, 10 милиона до 1 милиард CFU/ml, 10 милиона до 500 милиона CFU/ml, 10 милиона до 400 милион CFU/ml, 10 милиона до 300 милиона CFU/ml, 10 милиона до 200 милиона CFU/ml, 10 милиона до 150 милиона CFU/ml, 10 милиона до 125 милиона CFU/ml, 10 милиона до 100 милиона CFU/ml, 10 милиона до 75 милиона CFU/ml, 10 милиона до 50 милиона CFU/ml, 50 милиона до 1 милиард CFU/ml, 50 милиона до 500 милиона CFU/ml, 50 милиони до 400 милиона CFU/ml, 50 милиона до 300 милиона CFU/ml, 50 милиона до 200 милиона CFU/ml, 50 милиона до 150 милиона CFU/ml, 50 милиона до 125 милиона CFU/ml, 50 милиона до 100 милиона CFU/ml, 50 милиона до 75 милиона CFU/ml, 100 милиона до 1 милиард CFU/ml, 100 милиона до 500 милиона CFU/ml, 100 милиона до 400 милиона CFU/ml, 100 милиона до 300 милиона CFU/ml, 100 милиона до 200 милиона CFU/ml, 100 милиона до 150 милиона CFU/ml, 100 милиона до 125 милиона CFU/ml, 125 милиона до 1 милиард CFU/ml, 125 милиона до 500 милиона CFU/ml, 125 милиона до 400 милиона CFU/ml, 125 милиона до 300 милиона CFU/ml, 125 милиона до 200 милиона CFU/ml, 125 милиона до 150 милиона CFU/ml, 150 милиона до 1 милиард CFU/ml, 150 милиона до 500 милиона CFU/ml, 150 милиона до 400 милиона CFU/ml, 150 милиона до 300 милиона CFU/ml, 150 милиона до 200 милиона CFU/ml, 200 милиона до 1 милиард CFU/ml, 200 милиона до 500 милиона CFU/ml, 200 милиона до 400 милиона CFU/ml, 200 милиона до 300 милиона CFU/ml, 300 милиона до 1 милиард CFU/ml, 300 милиона до 500 милиона CFU/ml, 300 милиона до 400 милиона CFU/ml, 400 милиона до 1 милиард CFU/ml, 400 милиона до 500 милиона CFU/ml или 500 милиона до 1 милиард CFU/ml или повече, като 10 милиарда CFU/ml.
[67] Ако размножаваната антимикробна култура е в твърда форма, концентрацията на жизнеспособните клетки може да бъде оценена чрез колонии образуващи единици на грам (CFU/g). В някои случаи, концентрацията на размножаващата се антимикробна култура, като размножен антимикробен агент е от 0,5 милиона до 1 милиард CFU/g, 0,5 милиона до 500 милиона CFU/g, 0,5 милиона до 400 милиона CFU/g, 0,5 милиона до 300 милион CFU/g, 0,5 милиона до 200 милиона CFU/g, 0,5 милиона до 150 милиона CFU/g, 0,5 милиона до 125 милиона CFU/g, 0,5 милиона до 100 милиона CFU/g, 0,5 милиона до 75 милиона CFU/g, 0,5 милиона до 50 милиона CFU/g, 0,5 милиона до 10 милиона CFU/g, 0,5 милиона до 5 милиона CFU/g, 0,5 милиона до 1 милион CFU/g, 1 милион до 1 милиард CFU/g, 1 милион до 500 милиона CFU/g, 1 милион до 400 милиона CFU/g, 1 милион до 300 милиона CFU/g, 1 милион до 200 милиона CFU/g, 1 милион до 150 милиона CFU/g, 1 милион до 125 милиона CFU/g, 1 милион до 100 милиона CFU/g, 1 милион до 75 милиона CFU/g, 1 милион до 50 милиона CFU/g, 1 милион до 10 милиона CFU/g, 1 милион до 5 милиона CFU/g, 5 милиона до 1 милиард CFU/g, 5 милиона до 500 милиона CFU/g, 5 милиона до 400 милиона CFU/g, 5 милиона до 300 милиона CFU/g, 5 милиона до 200 милиона CFU/g, 5 милиона до 150 милиона CFU/g, 5 милиона до 125 милиона CFU/g, 5 милиона до 100 милиона CFU/g, 5 милиона до 75 милиона CFU/g, 5 милиона до 50 милиона CFU/g, 5 милиона до 10 милиона CFU/g, 10 милиона до 1 милиард CFU/g, 10 милиона до 500 милиона CFU/g, 10 милиона до 400 милиона CFU/g, 10 милиона до 300 милиона CFU/g, 10 милиона до 200 милиона CFU/g, 10 милиона до 150 милиона CFU/g, 10 милиона до 125 милиона CFU/g, 10 милиона до 100 милиона CFU/g, 10 милиона до 75 милиона CFU/g, 10 милиона до 50 милиона CFU/g, 50 милиона до 1 милиард CFU/g, 50 милиона до 500 милиона CFU/g, 50 милиона до 400 милиона CFU/g, 50 милиона до 300 милиона CFU/g, 50 милиона до 200 милиона CFU/g, 50 милиона до 150 милиона CFU/g, 50 милиона до 125 милиона CFU/g, 50 милиона до 100 милиона CFU/g, 50 милиона до 75 милиона CFU/g, 100 милиона до 1 милиард CFU/g, 100 милиона до 500 милиона CFU/g, 100 милиона до 400 милиона CFU/g, 100 милиона до 300 милион CFU/g, 100 милиона до 200 милиона CFU/g,
100 милиона до 150 милиона CFU/g, 100 милиона до 125 милиона CFU/g, 125 милиона до 1 милиард CFU/g, 125 милиона до 500 милиона CFU/g, 125 милиона до 400 милиона CFU/g, 125 милиона до 300 милиона CFU/g, 125 милиона до 200 милиона CFU/g, 125 милиона до 150 милиона CFU/g, 150 милиона до 1 милиард CFU/g, 150 милиона до 500 милиона CFU/g, 150 милиона до 400 милиона CFU/g, 150 милиона до 300 милиона CFU/g, 150 милиона до 200 милиона CFU/g, 200 милиона до 1 милиард CFU/g, 200 милиона до 500 милиона CFU/g, 200 милион до 400 милиона CFU/g, 200 милиона до 300 милиона CFU/g, 300 милиона до 1 милиард CFU/g, 300 милиона до 500 милиона CFU/g, 300 милиона до 400 милиона CFU/g, 400 милиона до 1 милиард CFU/g, 400 милиона до 500 милиона CFU/g или 500 милиона до 1 милиард CFU/g или повече, като 10 милиарда CFU/ml.
Лизат на микроорганизми
[68] Терминът лизат на микроорганизми или лизат, както се използва тук, означава смес от микробни антигени, пептиди или метаболити, получени от различни инактивирани, разрушени или дезинтегрирани микроби. Антигените, пептидите или метаболитите се получават чрез химичен или механичен лизис на микроорганизми и техния екстракт, събран от култивирани микробни щамове. В някои случаи, лизатът на микроорганизма, използван в настоящия метод, се получава от поне един микроорганизъм. Лизатът на микроорганизмите, който може да се използва, може да включва прокариот или еукариот. Лизатът на микроорганизма може да бъде получен от вируси, бактерии или фунги. В някои случаи лизатът е получен от бактерии. В някои случаи лизатът е получен от млечнокисели бактерии.
[69] В някои случаи лизатът е получен от млечнокисели бактерии, които принадлежат към рода Lactobacillus. В някои случаи, лизатът е получен от L. acidophilus, L. brevis, L. buchneri, L. casei, L. curvatus, L. delbrueckii, L. fermentum, L. helveticus, L. plantarum, L. reuteri, L. sakei или L. salivarius.
[70] В някои случаи, лизатът е получен от L. delbrueckii. В някои случаи, лизатът е получен от Lactobacillus delbrueckii bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii lactis, Lactobacillus delbrueckii delbrueckii или Lactobacillus delbrueckii indicus. В някои случаи, лизатът е получен от Lactobacillus delbrueckii bulgaricus.
[71] В някои случаи, лизатът е получен от Lactobacillus plantarum GLP3.
[72] В някои случаи лизатът е получен от Lactobacillus delbrueckii bulgaricus щам GLB44.
[73] В някои случаи, лизатът на микроорганизмите съдържа 0,1% v/v от растежната среда, за предпочитане 0,2% от растежната среда, за предпочитане 0,4% от растежната среда, за предпочитане 0,8% от растежната среда, за предпочитане 1% от растежната среда, за предпочитане 1,2% от растежната среда, за предпочитане 1,4% от растежната среда, за предпочитане 1,8% от растежната среда, за предпочитане 2% от растежната среда, за предпочитане 3% от растежна среда, за предпочитане 4% от растежната среда, за предпочитане 5% от растежната среда, за предпочитане 7% от растежната среда, за предпочитане 9% от растежната среда, за предпочитане 11% от растежната среда, за предпочитане 13% от растежната среда, за предпочитане 15% от средата за растеж или повече.
предпочитане 6% от растежната среда, за предпочитане 8% от растежната среда, за предпочитане 10% от растежната среда, за предпочитане 12% от растежната среда, за предпочитане 14% от растежната среда, за
[74] В някои случаи, лизатът на микроорганизма представлява 2% от растежната среда.
[75] В някои случаи, лизатът на микроорганизма произлиза от същия микроорганизъм, който се размножава.
[76] В някои случаи, лизатът на микроорганизма е получен от съвсем различен микроорганизъм от размножаващия се микроорганизъм. В някои случаи лизатът на микроорганизма включва група лизати, получени от различни микроорганизми. В някои случаи лизатът на микроорганизма включва група от различни лизати на микроорганизми, където се разпространява поне един от обединените микроорганизми.
[77] Смята се, че добавянето на микробен лизат в течната растежна среда допринася за освобождаването на антимикробни метаболити от размножаващите се микроорганизми. Смята се, че добавянето на микробен лизат в течната растежна среда засилва синтеза на антимикробни метаболити от размножаващите се микроорганизми.
Инкубационни апарати и системи
[78] За да се опитат да се справят с някои от ограниченията на настоящите системи, например скорост на растеж на микроорганизма и кворумен ефект, описаните тук методи могат да използват подходящо адаптиран инкубационен апарат и техники, които използват различни видове и форми на физически сили, като например псевдо сили. Различните видове и форми на физически сили, като псевдо сили могат да се генерират например в резултат на въртяща се платформа, водеща до повишена адвекция и хаотично смесване на микроорганизми, напр. бактерии, съдържащи се в течна среда с или без лизат. В някои случаи, газопропускливи мембрани, покриващи камерите за култивиране на микроорганизми (напр. Микрофлуидни системи), в които са затворени културите, за да се даде възможност за пасивно, но ефективно проветряване на пробата и по този начин оптимално производство на антимикробен метаболит.
[79] Без да желаят да бъдат обвързани с теория, в система с въртяща се инкубационна платформа, псевдо силата на Ойлер (която е перпендикулярна на центробежната псевдо сила), може да се използва за генериране на вихров поток и осигуряване на равномерно смесване, например в микрофлуидна камера на микрофлуидна система. Псевдо силите на Ойлер са инерционни сили, които се създават, когато една микрофлуидна система изпитва цикли на еднопосочно въртене на ускорение и забавяне. По този начин mixmg Is зависи от геометрията на камерата, скоростта на ускорение/забавяне и ъгловото завъртане.
[80] За течни микробни култури, като бактериални култури, бързият и оптимален растеж зависи от фактори, включително (1) аерация, така че аеробните бактерии да имат достъп до свеж кислород за растеж, (2) наличност на хранителни вещества, когато пробите се смесват добре, за да осигурят хранителни вещества хомогенно в цялата култура, (3) минимизиране на образуването на биофилми и натрупването, където разклащането предотвратява утаяването на бактериалната култура на дъното на камерата и образуването на биофилми или бучки, които пречат възпроизводство и (4) оптимално взаимодействие на култивираните бактерии с метаболити или антигени на лизата, което води до засилено производство на антимикробни метаболити от култивираните бактерии.
[81] Микрофлуидните системи с ниско число на Рейнолдс показват режими на ламинарен поток, които са доминирани от вискозни, а не от инерционни сили. По този начин, без турбулентно смесване, микрофлуидните устройства трябва да разчитат или на пасивна молекулярна дифузия, или на външни енергийни източници. В някои случаи, микрофлуидната система ускорява скоростта на растеж или скоростта на пролиферация на култивирания микроорганизъм в сравнение със същия микроорганизъм, инкубиран със стандартно лабораторно оборудване. В някои случаи степента на разпространение на микроорганизма може да бъде около 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13% , 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70 %, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% по-бързо от скоростта на разпространение на същия микроорганизъм, инкубиран със стандартно лабораторно оборудване.
[82] В някои случаи антимикробната култура се размножава с помощта на микрофлуидна система. В някои случаи инокулумът се произвежда с помощта на микрофлуидна система.
[83] В някои случаи методът разчита на размножаване на антимикробни култури в търговски или големи производствени съоръжения. В някои случаи методът може да разчита на ферментационни системи, състоящи се от големи резервоари за ферментация, биореактори и мащабни системи за пречистване.
[84] Както се използва тук, терминът голям мащаб е синоним на търговски мащаб и означава около 5 до 500 L или повече от общата антимикробна култура.
Методи за инкубиране на култура от микроорганизми
[85] В някои случаи, инкубирането на културата на микроорганизмите се провежда при температура като първа инкубационна температура (1Тс) или втора инкубационна температура (2Тс) в диапазона от 20°С до 60°С. В някои случаи, инкубирането на културата на микроорганизми се провежда при температура в интервала от 30°С до 50°С. В някои случаи, инкубирането на културата на микроорганизми се провежда при температура в интервала между 35-39°С. В някои случаи, инкубирането на културата на микроорганизми се провежда при температура в диапазона за предпочитане между 35,5-38,5°С. В някои случаи, инкубирането на културата на микроорганизми се провежда при температура в интервала за предпочитане между 36-38°С. В някои случаи, инкубирането на културата на микроорганизми се провежда при температура в интервала за предпочитане между 36,5-38,25°С. В някои случаи, инкубирането на микроорганизма се провежда при температура в интервала за предпочитане между 37-38°С. В някои случаи, инкубирането на културата на микроорганизми се провежда при температура около 38°С.
[86] В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при първата инкубационна температура (1Тс) за поне 30 минути, за предпочитане поне 45 минути, за предпочитане поне 1 час, за предпочитане поне 1,5 часа, за предпочитане при поне 2 часа, за предпочитане поне 2,5 часа, за предпочитане поне 3 часа, за предпочитане поне 4 часа, за предпочитане поне 5 часа, за предпочитане поне 6 часа, за предпочитане поне 6,5 часа, за предпочитане поне 7 часа, за предпочитане поне 7,5 часа, за предпочитане поне 8 часа, за предпочитане поне 8,5 часа, за предпочитане поне 9 часа, за предпочитане поне 9,5 часа, за предпочитане поне 10 часа, за предпочитане поне 10,5 часа, за предпочитане поне 11 часа, за предпочитане поне 11,5 часа, за предпочитане поне 12 часа, за предпочитане поне 12,5 часа, за предпочитане поне 13 часа, за предпочитане поне 13,5 часа, за предпочитане поне 14 часа или повече.
[87] В един случай културата се инкубира при първата инкубационна температура (1Тс) в продължение на 12 часа.
[88] Един от етапите на метода, описан тук, включва охлаждане на култура от микроорганизми. В някои случаи охлаждането се извършва върху микробна култура, инкубирана при първа инкубационна температура (1Тс). В някои предпочитани случаи охлаждането се извършва върху антимикробна култура, инкубирана при първата инкубационна температура (1 Тс) съгласно стъпка в. на метода.
[89] Съгласно метода, описан тук, се извършва етап на охлаждане на култура на микроорганизми до втора инкубационна температура (2Тс) преди по-нататъшно инкубиране. В някои случаи охлаждането до втора инкубационна температура (2Тс) се извършва върху микробна култура, която преди това е била инкубирана при първа инкубационна температура (1Тс) преди всяко следващо инкубиране при втората инкубационна температура (2Тс). В някои случаи охлаждането се извършва върху антимикробна култура, инкубирана при първа инкубационна температура (1Тс) съгласно стъпка в. от метода до втора инкубационна температура (2Тс) преди по-нататъшна инкубация при втора инкубационна температура (2Тс).
[90] Втората инкубационна температура (2Тс) е с между 3°С-7°С под първата инкубационна температура 1Тс. В някои случаи втората инкубационна температура от 2Тс е между 3°С- 7°С по-ниска от първата инкубационна температура 1Тс.
[91] В някои случаи, втората инкубационна температура (2Тс) е с най-малко 0.6°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 0.75°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 1°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 1,25°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 1,5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 1,75°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 2°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 2,25°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 2,5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 2,75°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 3°С под първата инкубационна температура (1 Тс), за предпочитане поне 3,25°С под първата температура на инкубация (1Тс), за предпочитане поне 3,5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 3,75°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 4°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 4.25°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 4.5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 4.75°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предцочитане поне 5,25°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 5,5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 5,75°С под първата инкубационна температура (1 Тс), за предпочитане поне 6°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 6.25°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 6.5°С по-ниска първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 6.75°С под температурата на първата инкубация (1Тс), за предпочитане поне 7°С под температурата на първата инкубация (1Тс) или повече.
[92] В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при 2Тс, преди да се инкубира при 1Тс.
[93] В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при втора инкубационна температура (2Тс) в продължение на поне 30 минути. В някои случаи суспензията от микроорганизмите е инкубира се при втора инкубационна температура (2Тс) за поне 45 минути. В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при втора инкубационна температура (2Тс) в продължение на поне 1 час. В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при втора инкубационна температура (2Тс) в продължение на поне 1,5 часа. В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при втора инкубационна температура (2Тс) за поне 2 часа, за предпочитане 2,5 часа. В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при втора инкубационна температура (2Тс) за поне 3 часа. В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при втора инкубационна температура (2Тс) за поне 3,5 часа. В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при втора инкубационна температура (2Тс) за поне 4 часа. В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при втора инкубационна температура (2Тс) за поне 4,5 часа. В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при втора инкубационна температура (2Тс) за поне 5 часа. В някои случаи, суспензията от микроорганизми се инкубира при втора инкубационна температура (2Тс) за поне 5,5 часа или повече.
[94] В един предпочитан случай, суспензията от микроорганизми се инкубира при втората инкубационна температура (2Тс) в продължение на 2 часа.
[95] Съгласно едно предпочитано изпълнение суспензията от щам GLB44 на Lactobacillus delbrueckii bulgaricus се инкубира при първата инкубационна температура (1Тс) при около 38°С за около 12 часа и охладената суспензия се инкубира при втората инкубационна температура (2Тс) около 33°С за около 2 часа.
Определяне на кворум
[96] Определянето на кворум обикновено се счита за отговор на флуктоациите в плътността на клетъчната популация. Определящите кворум микроорганизми, например бактерии, продуцират и отделят молекули на химически сигнали, наречени автоиндуктори, които увеличават концентрацията, в зависимост от плътността на клетките. Откриването на минимална прагова стимулираща концентрация на автоиндуктора води до промяна в генната експресия. Микроорганизми като Грам-положителни и Грам-отрицателни бактерии използват комуникационни вериги, за да регулират разнообразен набор от физиологични дейности. Тези процеси включват симбиоза, вирулентност, компетентност, конюгация, производство на антибиотици, подвижност, спорообразуване и формиране на биофилми. Попринцип Грамотрицателните бактерии използват ацилирани хомосеринови лактони като автоиндуктори, а Грам-положителните бактерии използват преработени олиго-пептиди за комуникация. Последните постижения в областта показват, че комуникацията между две клетки чрез автоиндуктори се осъществява, както в рамките на бактериалните видове, така и между тях.
[97] Смята се, че когато микробната култура се размножава съгласно метода от настоящото изобретение, размножаващите се микроорганизми, особено бактерии като млечнокиселите, поради метаболитния стрес, който изпитват по време на размножаването, отделят повишени нива на различни антимикробни метаболити. По-специално, когато микробната култура се размножава съгласно метода от настоящото изобретение, размножаващите се микроорганизми, бактерии като млечнокиселите, поради комбинацията от метаболитния стрес и способностите за определяне на кворум на размножените микроорганизми, микроорганизмите освобождават високи нива на различни антимикробни метаболити.
[98] Чрез подлагане на микробните културите, като например бактериални или млечнокисели бактериални култури, на комбинация от условия за разпространение на стрес, като неоптимална температура на инкубация (2Тс) след инкубация при оптимална температура (1Тс) и в присъствието на микробен лизат, може да доведат до максимизиране на антимикробния метаболит на размножаващата се антимикробна култура.
[99] В някои случаи, подлагането на култури на микроорганизми, като бактериални или млечнокисели бактериални култури, на комбинация от условия за разпространение на стрес като субоптимална температура на инкубация (2Тс) и в присъствието на микробен лизат, може да доведе до максимизиране на антимикробния метаболит на размножена антимикробна култура. В някои случаи размножената антимикробна култура може да се използва като антимикробен инокулум за посев на по-голям обем течна хранителна растежна среда.
[100] В някои случаи, подлагането на микробни култури, като например бактериални или млечнокисели бактериални култури, култивирани в по-голям обем течна хранителна среда, с добавен антимикробен инокулум, на комбинация от условия за разпространение на стрес като неоптимална температура на инкубация (2Тс) след инкубация при оптимална температура (1Тс), може да доведе до максимизиране на антимикробния метаболит на размножаващата се антимикробна култура.
[101] Експертизата в областта показва, че когато нивата на антимикробните метаболити, синтезирани от антимикробните култури, достигнат определена желана концентрация или количество, както е показано на фиг. 1, растежът или разпространението на микробната култура трябва да бъде значително намален или напълно спрян. Различни методи за значително намаляване или спиране на растежа на микробни култури са добре проучени. Неограничаващи примери за методи за значително намаляване или спиране на растежа на микробни култури включват бързо охлаждане на размножаващата се антимикробна култура, сушене чрез замразяване на размножената антимикробна култура и други.
[102] В някои случаи скоростта на растеж или скоростта на разпространение на микробната култура се намаляват значително или спират, когато се достигне желаното ниво на антимикробни метаболити.
[103] Желаното ниво на антимикробни метаболити може да зависи от предпочитаните последващи употреби на антимикробната култура.
[104] В някои случаи желаното ниво на антимикробни метаболити е в пика на log-фазата.
[105] В някои случаи растежът или размножаването на антимикробната култура значително намалява или спира след достигане на пика на log-фазата, както е показано на фиг. 1.
[106] В някои случаи антимикробните метаболити могат да бъдат токсични за патогенни микроорганизми като бактериални патогени. Както се използва тук, терминът токсичен се отнася до токсин или друго микробно вещество или метаболит, който индуцира имунен отговор, в частност производството на антитела.
[107] В различни случаи, размножаващата се антимикробна култура може да бъде полезна за лечението на бозайници, по-специално на човешки заболявания, причинени от микроорганизми като бактерии, чрез инхибиране на каскадата на образуване на бактериален кворум, което прави патогена авирулентен. Такива заболявания включват ендокардит, респираторни и белодробни инфекции (предимно при имунокомпрометирани пациенти), бактериемия, кожни заболявания, вагиноза, инфекции на дебелото черво, инфекции на централната нервна система, ушни инфекции, включително външен отит, очни инфекции, костни и ставни инфекции, инфекции на пикочните пътища, стомашно-чревни инфекции и инфекции на кожата и меките тъкани, включително инфектирани рани, пиодермия и атопичен дерматит, които всички могат да бъдат предизвикани от Helicobacter pylori или Е. coli.
Антимикробни култури и тяхното използване
[108] Най-общо, настоящото изобретение осигурява метод за получаване на размножени антимикробни култури, който може да се използва за намаляване на вирулентността на бактериалните патогени. За специалистите в областта е ясно, че размножаваната антимикробна култура, получена от настоящите методи, може да се прилага в голямо разнообразие от различни области, като например екологични, промишлени и медицински приложения, за да се предотвратят и/или лекуват нарушения или заболявания, причинени от бактерии. В някои случаи размножаващата се антимикробна култура, получена съгласно настоящите методи, може да се използва за консервиране на месо, консервиране на храни, производство на фуражи, козметика, като антимикробни средства за кожата, хранителни добавки, и фармацевтични продукти.
[109] В някои случаи размножаващата се антимикробна култура може да се използва като антимикробно средство.
[110] В някои случаи размножаващата се антимикробна култура може да се използва като антибактериално средство.
[111] В някои случаи антимикробният агент може да се използва за локални разтвори за почистване и третиране като дезинфектанти, детергенти, домакински почистващи препарати и прах за пране под формата на спрей или течност, която може да се използва. В определена форма тези смеси могат да се прилагат за почистване на прозорци, контейнери, подове, дрехи, повърхности на кухнята и банята и други повърхности в областта на приготвянето на храна и личната хигиена. В допълнение, размножаваната антимикробна култура може да се използва като антибактериални съставки в артикули за лична хигиена, тоалетни принадлежности и козметика като средства за почистване на зъби, води за уста, сапуни, шампоани, душ телове, мехлеми, кремове, лосиони, пулверизатори, дезодоранти и дезинфектанти и разтвори за съхранение за контакт лещи, вода за уста, напитки и храна за животни.
[112] В някои случаи размножаващата се антимикробна култура се лиофилизира. Както се използва тук, терминът лиофилизиран означава запазване на размножаващата се антимикробна култура, като се замразява много бързо и след това се подлага на вакуум или сублимация за отстраняване на водата. В някои случаи лиофилизираната антимикробна култура се запазва дългосрочно. В някои случаи лиофилизираната антимикробна култура включва жизнеспособни микробни клетки. В някои случаи, лиофилизацията може да се използва за приготвяне на дозата, която трябва да се разтвори за инжектиране.
[113] В някои случаи лиофилизираната антимикробна култура е лиофилизиран антимикробен агент.
[114] В някои случаи лиофилизираната антимикробна култура е лиофилизиран антибактериален агент.
[115] В някои случаи се осигурява размножена антимикробна култура, комбинирана с една или повече фармацевтично одобрени съставки. В някои случаи се осигурява размножена антимикробна култура, комбинирана с един или повече фармацевтично приемливи ексципиенти или добавки.
[116] В настоящия контекст, фармацевтично приемлив ексципиент се отнася до инертно вещество, добавено към фармацевтичен състав, за допълнително улесняване на прилагането на размножаващата се антимикробна култура, например лиофилизирана култура. Примери, без ограничение, на помощни вещества включват калциев карбонат, калциев фосфат, различни захари и видове нишесте, целулозни производни, желатин, растителни масла и полиетилен гликоли.
[117] В някои случаи фармацевтичните състави съдържат антимикробния агент. В някои случаи фармацевтичните състави съдържат антибактериалното средство.
[118] По този начин, настоящото изобретение също се отнася до състави, включващи фармацевтични състави, съдържащи терапевтично ефективно количество от размножена антимикробна култура, например лиофилизирана култура, както е споменато. Както се използва тук, размножаваща се антимикробна култура, например лиофилизирана култура, ще бъде терапевтично ефективна, ако е в състояние да повлияе на целевата концентрация на микроорганизма.
[119] За предпочитане, размножаващата се антимикробна култура, например лиофилизирана култура или агент, ще бъде терапевтично ефективна, ако е в състояние да повлияе на целевата концентрация на микроорганизми, като може да лекува или предотвратява заболяване, свързано с микроорганизми, като бактериално заболяване или нарушение в субект след размножаване на антимикробна култура, например лиофилизирана култура, е приложена на субект. В някои случаи заболяването или нарушението е свързано с патоген. В някои случаи патогенът е серотип на Salmonella enterica. В някои варианти на изпълнение патогенът е Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis, Salmonella newport, Salmonella hadar, Salmonella Oranienburg, Salmonella javiana, Salmonella saintpaul, Salmonella muenchen, Salmonella agona, Salmonella I monophashi, Salmonella panafana, Salmonella palamonahi. В някои случаи, патогенът e Salmonella typhimurium. В някои случаи, патогенът е Salmonella enteritidis.
[120] В някои случаи патогенът е Bacillus cereus, Campylobacter jejuni, Clostridium botulinum, Clostridium peifringens, Cryptosporidium parvum, Escherichia coli, Giardia lamblia, Hepatitis A, Listeria monocytogenes, Norwalk virus, Staphylococcus, Shingella, Toxoplasma gondii, Vibrio, или Yersiniosis.
[121] В някои случаи патогенът e Helicobacter pylori.
[122] В някои случаи патогенът е Escherichia coli.
[123] В по-нататъчни слуачи, размножаващата се антимикробна култура, например лиофилизирана култура от настоящото изобретение, може да се прилага директно на животни, за предпочитане на бозайници, и на хора като заместител на антибиотици, като смеси един с друг или под формата на фармацевтични препарати, които позволяват ентерално или парентерално приложение и които като активна съставка съдържат ефективна доза от размножаващата се антимикробна култура, например лиофилизирана култура, в допълнение към обичайните фармацевтични ексципиенти и добавки.
[124] Както бе споменато по-горе, в допълнение към размножаваната антимикробна култура, тя може да съдържа и други обичайни, обикновено инертни носители, добавки или помощни вещества. По този начин културата може също да съдържа добавки или адюванти, често използвани например в галенови формулировки, като например пълнители, разширители, дезинтегранти, свързващи вещества, плъзгачи, омокрящи агенти, стабилизатори, емулгатори, консерванти, подсладители, оцветители, ароматизанти или ароматизатори , буферни вещества и освен това разтворители или агенти за постигане на депо ефект, както и соли за изменение на осмотичното налягане, покриващи агенти или антиоксиданти. Те също могат да съдържат две или повече култури, както и други терапевтично активни вещества като антивирусни, противогъбни или антибиотици.
[125] По този начин, културите от настоящото изобретение могат да се използват самостоятелно, в комбинация с други компоненти от това изобретение или в комбинация с други активни съединения, например с активни съставки, вече известни за лечението на гореспоменатите заболявания, като в последния случай се забелязва благоприятен адитивен ефект.
[126] В друг аспект, настоящото изобретение осигурява процес на приготвяне на хранителни продукти, напитки, хранителни вещества и фуражи за животни, като процесът включва комбиниране на една или повече съставки с размножена антимикробна култура.
[127] В някои случаи продуктите на антимикробни културни могат да включват инертни, неорганични или органични ексципиенти.
[128] В някои случаи за приготвяне на хапчета, таблетки, филмирани таблетки и твърди желатинови капсули, могат да бъдат използвани например лактоза, нишесте или техни производни, талк, стеаринова киселина или нейните соли и др. Помощни вещества за меки желатинови капсули и супозитории са напр. мазнини, восъци, полутвърди и течни полиоли, естествени или втвърдени масла и др. Подходящи помощни вещества за производството на разтвори и сиропи са например вода, алкохол, захароза, инвертна захар, глюкоза, полиоли и др.
[129] Дозата може да варира в големи граници и трябва да се преценява за индивидуалните условия във всеки отделен случай. За горните употреби подходящата доза ще варира в зависимост от начина на приложение, конкретното състояние, което се лекува, и желания ефект. Като цяло обаче се постигат задоволителни резултати при дневни дозировки от около 0,1 до 100 mg/kg телесно тегло на животните, за предпочитане 1 до 50 mg/kg. Подходящите нива на дозиране за по-големи бозайници, например хора, са от порядъка на около 10 mg до 3 g/ден, удобно се прилагат веднъж, в разделени дози 2 до 4 пъти на ден, или под формата на удължено освобождаване.
[130] Като цяло, дневната доза от приблизително 0,1 mg до 5000 mg, за предпочитане 10 до 500 mg, на бозайник, по-специално човешки индивид, е подходяща в случай на орално приложение, което е предпочитаната форма на приложение съгласно изобретението. В случай на други форми на приложение, дневната доза е в сходни граници. Съединенията с формула I или формула II могат също да се използват под формата на прекурсор (пролекарство) или подходящо модифицирана форма, която освобождава активното съединение при естествени условия.
[131] В по-нататъшно изпълнение съединенията от настоящото изобретение могат да се използват като фармакологично активни компоненти или съставки на медицински изделия, инструменти и изделия с ефективна доза размножена антимикробна култура, например лиофилизирана култура от настоящото изобретение. Количеството култури, използвани за покриване, например на повърхности на медицински изделия, варира до известна степен в зависимост от метода на нанасяне на покритие и областта на приложение. Най-общо обаче концентрацията варира от около 0,01 mg на cm2 до около 100 mg на cm. По подобен начин количеството култури трябва да се коригира, спрямо режима на приложение, ако културите от изобретението се използват като компоненти или съставки в почистващи, обработващи разтвори или мехлеми. По принцип ефективните дози варират от около 0.1 μΜ до около 1000 mM.
Доклади и предаване на данни
[132] В някои случаи, методите и системите, разкрити тук, допълнително включват генериране на един или повече отчети. В някои случаи, методите разкрити тук по-нататък включва съхраняване на един или повече отчети. В някои случаи, методите, разкрити тук, допълнително включват предаване на един или повече отчети. В някои случаи докладът включва информация за способността на микроорганизма да се размножава и генерира размножена антимикробна култура. В някои случаи докладът предоставя препоръки за терапевтичен режим на размножаваната антимикробна култура като антимикробно средство. В някои случаи, докладът предоставя препоръки за дозирането на размножаваща се антимикробна култура като антимикробно средство.
[133] За да може лесно да се разбере изобретението и да се осъществи практически ефект, сега ще бъдат описани конкретни случаи чрез следните неограничаващи примери.
ЕКСПЕРИМЕНТАЛЕН ПРИМЕР
Тест за антимикробна активност ин витро- ФИГ. 1
[134] Веган хранителни среда: -100% сок от моркови.
[135] Използвани в експериментите щамове от род Lactobacillus·. 1. Lactobacillus bulgaricus GLB44; 2. Lactobacillus bulgaricus GLB3; 3. Lactobacillus bulgaricus GLB27
[136] Култивиране на L. bulgaricus GLB44 - Без максимизиране на антимикробен метаболит
[137] Подготовка на инокулума: Едноетапен процес
[138] Култивиране на L. bulgaricus GLB44 във веганска хранителна среда при 38°С в продължение на 22 часа, за да достигне експоненциална фаза. След това, използване само на тази жива култура, за инокулиране на ферментационната веган среда - 10% (v/v) от крайния обем на ферментационната среда.
Ферментация и лиофилизация:
[139] Култивиране на L. bulgaricus GLB44 във веганска хранителна среда при постоянна температура от 38°С в продължение на 24 часа в биореактор, без аерация.
[140] Вземане на проби след 4-ия час на ферментацията, на всеки 2 часа. Неутрализация до pH = 5.90 и лиофилизация на взетите културални проби.
[141] Култивиране на L. bulgaricus GLB44, L. bulgaricus GLB3 и L. bulgaricus GLB27 - с максимизиране на антимикробния метаболит.
Приготвяне на размножен инокулум на антимикробната култура: Двуетапен процес
[142] Първият етап от култивирането на инокулума продължава 12 часа при 38 градуса по Целзий.
[143] Втората стъпка започва на 12-ия час, когато е пикът на експоненциалната фаза, температурата се понижава от 38 на 33 градуса Целзий за 2 часа, за да се създаде допълнителен стрес за бактериалната култура. Ултразвукова дезинтеграция на част от тази проба.
[144] След това приготвяне на инокулационна суспензия (10% (v/v) от крайния обем на ферментационна среда) - 8% GLB44 култура в експоненциална фаза и 2% дезинтегриран GLB44 клетки - лизат.
Ферментация и лиофилизация:
[145] Култивиране на щамовете L. bulgaricus в биореактор, без аерация, във веганската хранителна среда, в продължение на 12 часа при 38 градуса по Целзий, след което температурата се понижава до 33°С за още 12 часа. Вземане на проби след 4-ия час на ферментацията, на всеки 2 часа. Неутрализация до pH = 5.90 и лиофилизация на взетите културални проби.
[146] Сравнително проучване на антимикробната активност на проби от L. bulgaricus срещу клиничен изолат на Н. pylori.
Проби от L. bulgaricus от всяка точка на изпитване от процеса на ферментация
[147] 1. L. bulgaricus GLB44 Без антимикробно максимизиране: течна проба - реконституиран лиофилизиран продукт (1:10, продукт:стерилен физиологичен разтвор)
[148] 2. L. bulgaricus GLB44 Антимикробно максимизиране: течна проба- реконституиран лиофилизиран продукт (1:10, продукт:стерилен физиологичен разтвор)
[149] 3. L. bulgaricus GLB3 Антимикробно максимизиране: течна проба- реконституиран лиофилизиран продукт (1:10, продукт:стерилен физиологичен разтвор)
[150] 4. L. bulgaricus GLB18 Антимикробно максимизиране: течна проба- реконстиуиран лиофилизиран продукт (1:10, продукт: стерилен физиологичен разтвор)
[151] Helicobacter pylori - клиничен изолат, култура в експоненциална фаза на растеж.
Тестваният щам се култивира при анаеробни условия в Brucella бульон с 5% фетален говежди серум (B-FBS).
Ин витро антибактериален тест:
[152] Тестът е осъществен по метода на дифузия в агарови ямки [Референции 1,2]. Крайната концентрация на Helicobacter pylori в ямките на агара Brucella с хемин, витамин Kand 5% овча кръв (ВМВ) е ЗхЮ5 CFU/ml.
[153] Пробите от L. bulgaricus се приготвят, както е описано по-горе, и се прилагат в обем от 100 микролитра (μΐ) във всяка ямка в петриева паничка в 3 повторения (Зх).
[154] Петритата се поставят в буркани Gas-Pak, съдържащи микроаерофилни сашета, генериращи газ, и се инкубират при 37°С.
[155] Зоните на инхибиране се измерват след 120 часа инкубация.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
[156] От нашите експерименти забелязахме, че когато инокулумът се максимизира с използването на микробен лизат, като деактивирани бактерии и температурния шок, ние наблюдаваме продукцията на неочаквано високи нива на различни антимикробни метаболити. В допълнение, ние забелязахме, че когато използваме максимизиран инокулум за посев в етапа на същинската ферментация, втори температурен шок по време на същинската ферментация води до неочаквано високи нива на различни антимикробни метаболити. Съответно, ефектите, които наблюдавахме, са както температурните шокове, така и натрупването на пептиди от инокулата до основната ферментация, поради получаване на кворум. Заедно те формират кумулативния ефект в същинската ферментация. На практика ние вярваме, че създаваме бактериоцин в инокулума, който след това осигурява по-високи нива на същия бактериоцин в промишлен мащаб, от активността на създадения кворум.
[157] Микробният растеж или размножаването в същинската ферментация трябва да бъде спрян в пика, в противен случай нивата на антимикробните метаболити, като бактериоцин, спадат значително, тъй като размножаващите се микроорганизми реабсорбират метаболитите и продължават да ги метаболизират като храна. От фиг. 1 става ясно, че антимикробните нива започват да спадат след пика на log-фазата. Чрез драстично охлаждане или лиофилно изсушаване на размножаващата се антимикробна култура, когато антимикробните метаболити са в пик, е възможно да се увеличат антимикробните нива в крайния разтвор/продукт.
[158] Илюстративно описаното тук разкритие може подходящо да се практикува при липса на какъвто и да е елемент или елементи, ограничение или ограничения, които не са специално разкрити тук. По този начин, например, термините включващ, включително, съдържащ и т. н. трябва да се четат разширително и без ограничение. Освен това, използваните тук термини и изрази са използвани като термини за описание, а не за ограничение и нямат за цел изключване на всякакви еквиваленти на показаните и описани характеристики или части от тях, но се признава, че са възможни различни модификации в рамките на претендираното разкритие.
Източници:
[1 ] S. Magaldi, S. Mata-Essayag, С. Hartung de Capriles, et al., Well diffusion for antifungal susceptibility testing, Int. J Infect. Dis. 8 (2004) 39-45.
2] C. Valgas, S.M. De Souza, E.F.A. Smania, et al., Screening methods to determine antibacterial activity of natural products, Braz. J Microbial. 38 (2007) 369-380.

Claims (25)

1. Метод за култивиране на антимикробна култура, методът включва етапите на:
'Лг а. инокулиране на течна хрантелна среда с инокулум, съдържащ микроорганизъм, за да се получи инокулирана среда, съдържаща между 1О2-5х1О10 CFU/ml;
б. Смесване на инокулираната среда с лизат на микроорганизми за получаване на културална течност;
в. инкубиране на културална течността при първа инкубационна температура (1Тс);
г. охлаждане на суспензията от етап в) до втора инкубационна температура (2Тс), която е най-малко 0.5°С под първата инкубационна температура и инкубиране на охладената културална течност при 2Тс, за да се получи размножена антимикробна култура.
д. събиране на антимикробната култура.
2. Метод за култивиране на антимикробна култура в промишлен мащаб, като методът допълнително включва стъпките на:
е. добавяне към по-голям обем течна хранителна среда за растеж на антимикробната култура съгласно претенция 1, като антимикробен инокулум;
ж. инкубиране на инокулираната среда при първа инкубационна температура (1Тс), за да се получи размножена антимикробна култура.
з. събиране на антимикробна култура.
3. Метод за култивиране на антимикробна култура, съгласно която и да е от претенциите 1 или 2, при който инокулумът се получава от микробиота.
4. Метод за култивиране на антимикробна култура съгласно претенция 3, при който микроорганизмът е бактерия.
5. Метод за култивиране на антимикробна култура съгласно претенция 4, при който бактерията е избрана от млечнокисели бактерии, Bifidobacteria или техни комбинации.
6. Метод за култивиране на антимикробна култура съгласно претенция 5, при който млечнокиселата бактерия е Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus.
7. Метод за култивиране на антимикробна култура, съгласно претенция 6, където Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus e Lactobacillus bulgaricus GLB44.
8. Метод за култивиране на антимикробна култура, съгласно която и да е от предходните претенции, където лизатът е получен от микроорганизъм, съгласно която и да е от претенциите от 3 до 7.
9. Метод за култивиране на антимикробна култура съгласно претенция 8, характеризиращ се с това, че лизатът на микроорганизма съдържа 0,1% v/v от растежната среда, за предпочитане 0,2% от растежната среда, за предпочитане 0,4% от растежната среда, за предпочитане 0,8% от растежната среда, за предпочитане 1% от растежната среда, за предпочитане 1,2% от растежната среда, за предпочитане 1,4% от растежна среда, за предпочитане 1,8% от растежната среда, за предпочитане 2% от растежната среда, за предпочитане 3% от растежната среда, за предпочитане 4% от растежната среда, за предпочитане 5% от растежната среда, за предпочитане 6% от растежната среда, за предпочитане 7% от растежната среда, за предпочитане 8% от растежната среда, за предпочитане 9% от растежната среда, за предпочитане 10% от растежната среда, за предпочитане 1% от растежната среда, за предпочитане 12% от растежната среда, за предпочитане 13% от растежната среда, за предпочитане 14% от растежната среда, за предпочитане 15% от растежната среда или повече.
10. Метод за култивиране на антимикробна култура, съгласно която и да е от претенциите 8 или 9, където лизатът на микроорганизма съдържа около 2% v/v от хранителната среда.
11. Метод за култивиране на антимикробна култура съгласно, която и да е от предходните претенции, при който температурата на първата инкубация (1Тс) е в диапазона между 20°С и 60°С, за предпочитане между 30 °C и 50 °C, за предпочитане между 35-39°С, за предпочитане между 35,5-38,5°С, за предпочитане между 36-38°С, за предпочитане между 36,5-38,25°С, за предпочитане между 37-38°С, за предпочитане 38°С.
12. Метод за култивиране на антимикробна култура, съгласно която и да е от предходните претенции, при който първата инкубационна температура (1Тс) е около 38°С.
13. Метод за култивиране на антимикробна култура, съгласно която и да е от предходните претенции, при който културална течността се инкубира при първата инкубационна температура (1Тс) в продължение на поне 30 минути, за предпочитане поне 45 минути, за предпочитане поне 1 час, за предпочитане поне 1,5 часа, за предпочитане поне 2 часа, за предпочитане поне 2,5 часа, за предпочитане поне 3 часа, за предпочитане поне 4 часа, за предпочитане поне 5 часа, за предпочитане поне 6 часа, за предпочитане поне 6,5 часа, за предпочитане поне 7 часа, за предпочитане поне 7,5 часа, за предпочитане поне 8 часа, за предпочитане поне 8,5 часа, за предпочитане поне 9 часа, за предпочитане поне 9,5 часа, за предпочитане поне 10 часа, за предпочитане поне 10,5 часа, за предпочитане поне 11 часа, за предпочитане поне 11,5 часа, за предпочитане поне 12 часа, за предпочитане поне 12,5 часа, за предпочитане поне13 часа, за предпочитане поне 13,5 часа, за предпочитане поне 14 часа или повече.
14. Метод за култивиране на антимикробна култура, съгласно която и да е от предходните претенции, при който културална течността се инкубира при първата инкубационна температура (1Тс) за около 2 часа.
15. Метод за култивиране на антимикробна култура, съгласно която и да е от предходните претенции, при който инкубираната културална течност от етап в) се охлажда до втора инкубационна температура (2Тс), която е най-малко 0.6°С под първата инкубационна температура (1 Тс), за предпочитане поне 0.75°С под първата инкубационна температура (1 Тс), за предпочитане поне 1°С под първата инкубационна температура (1 Тс), за предпочитане поне 1.25°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 1.5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 1.75°С под първата инкубационна температура (1 Тс), за предпочитане поне 2°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 2,25°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 2,5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 2,75°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 3°С бел благодарение на първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 3,25°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 3,5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 3,75°С под първа инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 4°С под първата инкубационна температура (1 Тс), за предпочитане поне 4.25°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 4.5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 4.75°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 5.25°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 5.5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 5.75°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 6°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 6.25°С под първата инкубационна температура (1 Тс), за предпочитане поне 6.5°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 6.75°С под първата инкубационна температура (1Тс), за предпочитане поне 7 °C под температурата на първата инкубация (1Тс) или повече.
16. Метод за култивиране на антимикробна култура, съгласно която и да е от предходните претенции, при който охладената културална течност се инкубира при втора инкубационна температура (2Тс) за поне 30 минути, за предпочитане поне 45 минути, за предпочитане поне 1 час , за предпочитане поне 1,5 часа, за предпочитане поне 2 часа, за предпочитане 2,5 часа, за предпочитане 3 часа, за предпочитане 3,5 часа, за предпочитане 4 часа, за предпочитане 4,5 часа, за предпочитане 5 часа, за предпочитане 5,5 часа или повече
17. Метод съгласно която и да е от предходните претенции, при който инокулираната среда, съдържаща около 109 CFU/ml, за предпочитане 108 CFU/ml, за предпочитане 107 CFU/ml, за предпочитане 106 CFU/ml.
18. Метод за култивиране на антимикробна култура, съгласно която и да е от предходните претенции, при който охладената културална течност се инкубира при втората инкубационна температура (2Тс) за около 2 часа.
19. Метод за култивиране на антимикробна култура, съгласно претенция 7, при който културална течността се инкубира при първата инкубационна температура (1Тс) при около 3 8°С за около 12 часа и охладената културална течност се инкубира при втората инкубационна температура (2Тс) при около 33 °C за около 2 часа.
20. Култивирана антимикробна култура, получена съгласно метода от която и да е от предходните претенции.
21. Култивирана антимикробна култура, съгласно претенция 20, където културата е лиофилизирана.
22. Култивирана антимикробна култура съгласно, която и да е от претенциите 20 или 21 за използване, като антимикробно средство.
23. Култивирана антимикробна култура, съгласно претенция 22 за използване при лечение Helicobacter pylori.
24. Култивирана се антимикробна култура, съгласно претенция 22 за използване при лечение наК coli.
25. Процес на приготвяне на продукт, избран от хранителни продукти, напитки, хранителни вещества и фуражи за животни, като процесът включва комбиниране на една или повече съставки с размножена антимикробна култура, получена по метода, съгласно която и да е от претенциите от 1 до 19.
BG113409A 2019-03-05 2019-03-05 Метод за получаване на антимикробни култури BG113409A (bg)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/EP2019/055420 WO2020177858A1 (en) 2019-03-05 2019-03-05 Propagating antimicrobial cultures

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BG113409A true BG113409A (bg) 2021-10-15

Family

ID=65991752

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG113409A BG113409A (bg) 2019-03-05 2019-03-05 Метод за получаване на антимикробни култури

Country Status (3)

Country Link
EP (1) EP4084813A1 (bg)
BG (1) BG113409A (bg)
WO (1) WO2020177858A1 (bg)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB202204335D0 (en) 2022-03-28 2022-05-11 Hel1X Ltd Non-antibiotic antimicrobial compositions

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018231992A2 (en) * 2017-06-14 2018-12-20 Nutraferma, Inc. Methods of using lactobacillus plantarum strains for protecting animals from pathogenic bacterial infection

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020177858A1 (en) 2020-09-10
EP4084813A1 (en) 2022-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110964655B (zh) 一种乳双歧杆菌bl-99及其应用
JP2023017845A (ja) Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症の処置
Zhang et al. Adhesive ability means inhibition activities for lactobacillus against pathogens and S-layer protein plays an important role in adhesion
KR101757504B1 (ko) 경구용 피부 성상 개선제
Darsanaki et al. Antimicrobial activities of Lactobacillus strains isolated from fresh vegetables
Li et al. Novel vitamin B 12-producing Enterococcus spp. and preliminary in vitro evaluation of probiotic potentials
RU2439145C2 (ru) Штамм микроорганизма bacillus smithii tbmi12 mscl p737 и применение его в качестве пищевой или кормовой добавки, или компонента пробиотической композиции и пробиотическая композиция
US11376289B2 (en) Composition and uses thereof
Kazemipoor et al. Screening of antibacterial activity of lactic acid bacteria isolated from fermented vegetables against food borne pathogens
EA037388B1 (ru) Штамм lactobacillus paracasei для продуцирования линолевой кислоты с сопряженными связями, питательные и фармацевтические препараты, содержащие этот штамм, и их применение
Romyasamit et al. Optimization of cryoprotectants for freeze-dried potential probiotic Enterococcus faecalis and evaluation of its storage stability
Farinha et al. Influence of prebiotic ingredients on the growth kinetics and bacteriocin production of Lactococcus lactis
Husmaini et al. Growth and survival of lactic acid bacteria isolated from by-product of virgin coconut oil as probiotic candidate for poultry
CN113637603B (zh) 一种肠道乳杆菌及其应用
BG113409A (bg) Метод за получаване на антимикробни култури
CN101432006B (zh) 具有增强耐酸性的乳酸菌的方法和应用
Erginkaya et al. Antibacterial effects of microencapsulated probiotic and synbiotics
BG112923A (bg) Метод за получаване на антимикробни култури
Gupta et al. Synbiotics: promoting gastrointestinal health
CN117660219B (zh) 一种高效抑制肠道致腹泻菌的益生菌益生元组合物及其制备方法
Karaca Exopolysaccharides of lactic acid bacteria isolated from honeybee gut and effects of their antibiofilm activity against Streptococcus mutans
Najarian Impact of bioactive molecules secreted by Lactobacillus acidophilus La-5 on Clostridium difficile virulence factors
Kumar et al. In–Vitro Assessment of Probiotic Attributes of Propionibacterium freudenreichii Isolated from Dairy Cheese
Muhammad Shireen. Antibacterial Approach of Lactobacillus Species Isolated From Exterior of Fruits
Rosenberg et al. Microbiomes in Medicine and Agriculture