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Nouvelle association médicamenteuse à base d'un alcaloide hydrogéné de l'ergot de seigle et d'héparine Invention de : Hans BUEHLMANN et Dieter WELZEL Revendication de la priorité de la demande de brevet déposée en République Fédérale d'Allemagne le 10 décembre 1982 sous le n P 32 45 695.6 au nom de SANDOZ Patent GmbH.
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La présente invention a pour objet une nouvelle association médicamenteuse et des compositions pharmaceutiques utilisables pour la prophylaxie des thromboses, en particulier pour la prévention des thromboses post-opératoires.
L'héparine est un mucopolysaccharide dextrogyre fortement sulfaté, possédant des propriétés anticoagulantes spécifiques et est couramment utilisée entre autres dans la prévention des thromboses post-opératoires. Elle est un constituant naturel de divers tissus, en particulier le foie et les poumons, chez une variété de mammifères et des préparations isolées à partir de différentes sources naturelles sont disponibles sur le marché, sous forme libre et sous forme de sel pharmaceutiquement acceptable, par exemple sous forme de divers sels de métaux alcalins et alcalino-terreux.
L'héparine entière, c'est-à-dire telle qu'obtenue directement a partir de différentes sources naturelles selon les méthodes d'isolement habituelles, comprend des unités polymères de poids moléculaire non-uniforme couramment compris entre 6.000 et 20.000, le poids moléculaire moyen étant de 14.000 à 18.000, dans laquelle la chaîne polymère de base se compose de restes de D-glucosamine et d'acide D-glucuronique. La constitution chimique et physique spécifique, par exemple le degré précis de sulfatation et les caractéristiques du poids moléculaire varient suivant la source, c'est-à-dire la matière animale dont elle provient, ainsi que des moyens précis d'isolement.
Comme indiqué ci-après, diverses techniques sont connues et ont été décrites dans la littérature pour l'obtention de préparations d'héparine d'un poids moléculaire moyen plus faible que les préparations d'héparine entière, par exemple obtenues directement de la source animale par d'autres moyens.
On sait également que l'administration d'héparine en association avec des alcaloïdes hydrogénés de l'ergot de seigle exerçant un effet vaso-constricteur, en particulier la dihydroergotamine, présente un avantage particulier en relation avec la prophylaxie des thromboses, spécialement la prévention des thromboses post-opératoires (voir par exemple la demande de brevet britanique n 1 557 331) et la thérapie à base d'héparine/
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dihydroergotamine est à présent un traitement efficace et couramment suivi par les patients présentant des risques de thrombose, en particulier à la suite d'une opération grave.
L'administration est généralement effectuée par voie parentérale, à savoir par injection intraveineuse, et diverses formulations présentant par exemple des caractéristiques de stabilité améliorées par rapport aux solutions simples destinées à une telle utilisation, sont décrites dans la littérature ou sont disponibles sur le marché (voir par exemple la demande de brevet américain No 4 402 949).
Conformément à la présente invention on a maintenant trouvé de façon surprenante que lorsqu'on applique une thérapie combinée telle que décrite ci-dessus, on obtient des résultats particulièrement avantageux si l'héparine est une héparine à bas poids moléculaire. On a trouvé en particulier qu'en utilisant de l'héparine à bas poids moléculaire en association avec un alcaloïde hydrogéné de l'ergot de seigle exerçant un effet vaso-constricteur,
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en particulier la dihydroergotamine, à la place des préparations d'héparine entière utilisées habituellement, l'efficacité thérapeutique, à savoir la durée de l'effet anti-thrombotique, est fortement augmentée, la dose quotidienne d'héparine et d'alcaloïde hydrogéné de l'ergot seigle nécessaire pour une thérapie prophylactique efficace pouvant être réduite de façon correspondante.
La présente invention présente ainsi le très grand avantage de permettre une réduction significative de la médication quotidienne nécessaire pour le traitement des patients. Tel que précédemment indiqué, étant donné que le traitement se fait généralement par injection intraveineuse, la présente invention présente donc également l'avantage de permettre la réduction du nombre d'injections quotidiennes et par là même réduit sensiblement les désagréments du patient. Ceci est particulièrement important dans le cas de patients devant subir ou ayant subi une opération grave.
Conformément à ce qui précède, la présente invention concerne, à titre de médicament, l'association de :
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i) un alcaloïde hydrogéné de l'ergot de seigle exerçant un effet vaso-constricteur, ou un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable de ce composé, et ii) une héparine à bas poids moléculaire ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce composé.
L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant les composants i) et ii) tels que définis ci-dessus.
Le composant i) du médicament et de la composition de l'invention est avantageusement un alcaloïde hydrogéné de l'ergot de seigle de formule I
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dans laquelle R représente l 1 hydrogène ou un groupe alkyle en Cl-C4, Ri représente un groupe méthyle, éthyle ou isopropyle, R2 représente un groupe isopropyle, sec.-butyle, isobutyle ou benzyle et X représente l'hydrogène ou un groupe méthoxy, ou un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable de ce composé.
Le composant i) est de préférence la dihydroergotamine, la 6-nor-isopropyl-9, 10-dihydro-21 méthyl-5Ia-benzyl-ergopeptine ou la dihydroergovaline, ou un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable de ces composés, la dihydroergotamine et les sels d'addition d'acides de ce composé étant tout particulièrement préférés. Les sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables appropriés sont, par exemple, les méthanesulfonates, maléates et tartrates, et, dans le cas de la dihydroergotamine, spécialement le méthanesulfonate.
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Par l'expression"une héparine à bas poids moléculaire" on entend une héparine préparée par exemple par des procédés d'isolement ou de dépolymérisation tels que décrits ci-après, afin d'arriver à une réduction significative du poids moléculaire moyen comparé aux préparations d'héparine entière.
Les composants ii) tels qu'utilisés dans la présente invention ont de préférence un poids moléculaire moyen d'environ 10.000 ou moins, plus préférablement d'environ 8.000 ou moins.
Cependant, le poids moléculaire moyen n'est de préférence pas inférieur à environ 4.000, plus préférablement pas inférieur à environ 5.000, tout particulièrement pas inférieur à environ 6.000.
Les composants ii) spécialement préférés ont ainsi un poids moléculaire moyen compris entre environ 10.000 et environ 4.000, en
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particulier entre environ 8. 000 et environ 5. 000, par exemple d'environ 7. 000 i 1. 000 ou d'environ 6. 000 i 1. 000. On préfère en outre que les composants ii) aient un poids moléculaire relativement uniforme, par exemple avec au moins 60 %, plus préférablement 80 % d'unités polymères ayant un poids moléculaire compris dans les limites de poids moléculaire moyen défini plus haut, c'est-à-dire un poids moléculaire de 10.000 ou moins.
Les sels pharmaceutiquement acceptables appropriés des héparines à bas poids moléculaire comme composants ii), sont par exemple le sel de calcium et le sel de potassium, en particulier le sel de sodium.
L'héparine à bas poids moléculaire ou le sel pharmaceutiquement acceptable de ce composé utilisé comme composant ii), peuvent être obtenus selon des méthodes connues, par exemple par isolement de fractions à bas poids moléculaire à partir de préparations d'héparine entière, par exemple par précipitation fractionnée et filtration, par exemple tel que décrit dans la demande de brevet allemand DOS 29 45 591, ou par dépolymérisation de fractions à poids moléculaire élevé d'héparine entière, par exemple par scission chimique, comme décrit par exemple dans le brevet belge NO. 888 864 ou dans la demande de brevet européen No. 27 089.
Alternativement, les composants ii) peuvent être obtenus par
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combinaison de telles techniques, par exemple par séparation d'héparine à bas poids moléculaire à partir de préparations d'héparine entière, puis dépolymérisation des fractions restantes d'héparine à poids moléculaire plus élevé pour obtenir de l'héparine supplémentaire à bas poids moléculaire et, éventuellement, le mélange des deux préparations d'héparine à bas poids moléculaire ainsi obtenues.
Lorsque l'héparine à bas poids moléculaire est préparée par scission chimique, les restes des chaînes individuellespeuvent subir certaines modifications chimiques en particulier une dé-sulfatation. Lorsque de telles modifications ont lieu sur le produit destiné à être utilisé selon la présente invention, les composants ii) ainsi produits peuvent, si nécessaire, être ultérieurement reconstitués ou modifiés de façon appropriée selon des techniques connues, par exemple de manière analogue à celle décrite dans le brevet belge NO. 888 864.
Lorsque les préparations d'héparine à bas poids moléculaire obtenues par scission chimique sont utilisées dans les compositions de l'invention, il s'agit de préférence de préparations n'ayant subi aucune ou essentiellement aucune autre modification chimique.
Les composants i) et ii) sont avantageusement présents dans un rapport de 1 mg du composant i) : 300 à 70.000 (par exemple
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500 à 70. 000), de préférence 300 à 35. 000 UI du composant ii). Les composants i) et ii) sont plus préférablement présents dans un rapport de 1 mg du composant i) : 1.000 à 20.000 (par exemple 2.000 à 20.000), tout particulièrement 1.000 à 10.000 UI du composant ii).
Lorsque le composant i) et/ou ii) est présent sous forme de sel pharmaceutiquement acceptable, on utilise la quantité équivalente de sel fournissant les rapports indiqués.
Comme indiqué précédemment, les compositions de l'invention seront généralement administrées par injection. Pour une application directe elles seront donc sous forme liquide. Bien que, par exemple, de simples solutions aqueuses ou hydroalcooliques soient possibles, elles ne sont généralement pas préférées car, en
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l'absence de stabilisants, les composants i) et ii) réagieront pour former des sels difficilement solubles qui précipitent de la solution. De ce fait, de simples solutions ne peuvent pas être conservées au delà de quelques heures et ont donc une valeur pratique limitée.
Les compositions préférées selon la présente invention sont des solutions stabilisées du type de celles décrites dans le brevet américain n 4 402 949 déjà cité, utilisant par exemple un composant supplémentaire iii) qui est un sel de calcium ou de magnésium de l'acide éthylènediamine-tétraacétique (EDTA) pharmaceutiquement acceptable, en tant que stabilisant. Pour de telles solutions, le milieu solvant comprend de préférence iv) de l'eau et v) un mono-ou polyalcool.
Les sels de magnésium ou de calcium de l'EDTA indiqués comme composant iii) sont les sels mono-magnésiens ou mono-calciques, y compris les sels poly-métalliques pharmaceutiquement acceptables comprenant du magnésium ou, de préférence, du calcium avec des ions métalliques monovalents, par exemple les ions sodium ou potassium. Le sel d'EDTA préféré pour une utilisation selon l'invention est le sel mono-calcique disodique (CaNa2 EDTA) aussi connu sous le nom de calciumtitriplex. Le sel mono-magnésien dipotassique (MgK2 EDTA) peut aussi être mentionné.
Le composant iii) est de préférence présent en une quantité comprise entre environ 1 et environ 50 mg, plus préférablement de 1 à 25 mg, tout particulièrement de 1 à 10 mg, basée sur une quantité de 5.000 UI du composant ii).
Lorsque le milieu solvant comprend les composants iv) et v), c'est-à-dire comme diluant ou véhicule, ils représentent de préférence respectivement de 45 à 72% et 28 à 55%, basé sur le volume total de la composition.
Les composants v) préférés sont l'éthanol, le propylèneglycol, le polyéthylèneglycol (avantageusement d'un poids moléculaire moyen d'environ 400), le diéthylèneglycol, le triéthylèneglycol et le glycérol, ainsi que les mélanges de ces composés. Plus préférablement, le composant v) comprend un mélange
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a) d'éthanol et b) de triéthy1èneg1yco1 ou un mélange c) de glycérol et d) de propy1èneg1yco1. Dans de tels mélanges, a) et b) sont de préférence présents dans un rapport pondéral de 1 : 6 à 10, plus préférablement 1 : 8, et c) et d) sont de préférence présents dans un rapport pondéral de 1 : 8 à 12, plus préférablement 1 : 10.
Selon une variante préférée de l'invention, les solutions ci-dessus contiennent également comme autre composant vi), un anesthésique physiologiquement acceptable. Les composants anesthésiques vi) sont de préférence des"anesthésiques acétani1idesll terme sous lequel on entend tout membre de la classe des dérivés de 1'acétamide physiologiquement acceptables exerçant une activité anesthésique, y compris les divers dérivés connus du
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2-amino-N-phény1e-acétani1ide actifs comme anesthésiques, et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
Les anesthésiques acétanilides préférés sont le 2- (aussi connu sous le nom de 1idocaïne), le 2- ch1oro-6-méthy1-phény1) (aussi connu sous le nom de hostacaïne) et l'ester méthylique de l'acide 2- (diéthy1amino)-N- (2, 6-diméthy1phény1)-acétamideacétamido)-m-toluique (aussi connu sous le nom de baycaïne). Les sels pharmaceutiquement acceptables couramment utilisés pour de tels anesthésiques acétanilides comprennent, par exemple, les chlorhydrates. Lorsque le composant vi) est présent, il représente de préférence de 1 à 2% en poids du poids total de la composition.
Les solutions de la présente invention, destinées par exemple aux injections, ont de façon appropriée un pH de 4 à 6.
Il convient de noter que bien que les solutions, par exemple comme décrit plus haut, soient généralement celles convenant le mieux et qui sont préférées, la présente invention comprend aussi d'autres formes appropriées de compositions contenant les composants i) et ii), telles que les préparations lyophylisées, par exemple celles que l'on met en solution ou sous une autre forme liquide appropriée, avant l'administration. Les compositions de l'invention peuvent contenir tout autre additif désiré, par exemple des véhicules, diluants, stabilisants, agents de conservation, colorants et agents tensio-actifs connus.
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La nouvelle association, par exemple sous forme d'une composition pharmaceutique telle que décrite précédemment, est indiquée pour l'utilisation dans la prophylaxie des thromboses, en particulier dans la prévention des thromboses post-opératoires.
Les propriétés avantageuses de la nouvelle association par rapport à celles précédemment utilisées peuvent, par exemple, êtremises en évidence par des essais cliniques, par exemple à l'aide de l'essai de fixation du fibrinogène marqué à l'iode 125 décrit par K. H. Frey et coll. CMed. K1in., (1975), pp. 1553-1558) 3, essai dans lequel on effectue chez les patients une mesure externe de la radioactivité du fibrinogène marqué à l'iode 125 qui est concentré sélectivement dans la matière thrombotique des veines de la jambe.
Les patients devant subir une opération grave, par exemple une chirurgie plastique de l'articulation de la hanche, reçoivent par voie parentérale 100 pci de fibrinogène marqué à l'iode 125 la veille de l'opération et on mesure quotidiennement sur les jambes la radioactivité du fibrinogène marqué à l'iode 125 pendant les 2 à 3 semaines qui suivent l'opération. L'injection de fibrinogène est répétée 8 à 10 jours après l'administration initiale si la radioactivité mesurée est faible. On utilise un compteur Logic 121 pour enregistrer la radioactivité, le comptage étant effectué selon la méthode décrite par Kakkar et coll.'Lancet, 1 (1970), p. 540J.
La thrombose veineuse profonde (TVP) est diagnostiquée si le comptage sur n'importe quel site diffère de 20% ou plus de ceux situés en un point adjacent sur la même jambe ou situé à un endroit identique sur l'autre jambe, et si cette différence persiste ou augmente dans les 24 heures qui suivent.
Dans un tel essai clinique, les patients sont répartis en deux groupes. Le Groupe 1 reçoit 0,5 mg de méthanesulfonate de dihydroergotamine et 2.500 UI d'héparinate de sodium à bas poids moléculaire (poids moléculaire moyen d'environ 7.000 t1. 000)
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administrés par voie intraveineuse 1 fois par jour sous forme d'une solution stabilisée. Le Groupe 2 reçoit 0,5 mg de méthanesulfonate de dihydroergotamine et 5.000 UI d'héparinate de sodium entier aussi administrés par voie intraveineuse 2 fois par jour sous forme d'une solution stabilisée. Les résultats du Groupe 1 recevant la composition selon la présente invention sont comparés avec ceux du Groupe 2 recevant la thérapie habituelle. On a trouvé que la réduction de l'incidence de la TVP sur les deux groupes était équivalente.
Des résultats comparables à ceux obtenus dans l'essai clinique ci-dessus avec une injection quotidienne d'une seule dose comprenant 0,5 mg de méthanesulfonate de dihydroergotamine et 2.500 UI d'héparinate de sodium à bas poids moléculaire (7.000 i 1.000), peuvent également être obtenus lorsque la dose d'héparine à bas poids moléculaire est réduite à 1.500 UI.
La dose quotidienne indiquée pour les compositions de l'invention sera en conséquence de l'ordre du 1/3 des doses quotidiennes utilisées avec les compositions connues contenant de l'héparine entière ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce composé, avec en outre une réduction de la dose habituelle d'héparine, par exemple une réduction à 1.500 UI par jour étant possible. Ainsi, la dose quotidienne indiquée pour le composant i) sera de l'ordre d'environ 0,2 à environ 1,5 mg, par exemple environ 0,5 mg, et pour le composant ii) d'environ 1.000 à environ 10.000 UI, par exemple environ 1.500 à environ 5.000 UI. Si nécessaire, la dose quotidienne peut être administrée en doses fractionnées, par exemple 2 à 4 fois par jour. Cependant, elle est administrée de préférence en une seule dose 1 fois par jour, par exemple sous forme d'une dose unitaire.
Si nécessaire, les composants i) et ii) peuvent aussi être administrées séparément.
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Les doses unitaires appropriées pour les compositions de l'invention, par exemple pour les solutions injectables stabilisées telles que décrites plus haut comprenant par exemple les composants iii), iv), v) et, éventuellement, vi), comprennent les ampoules à injection et les seringues à usage unique contenant une quantité prédéterminée de la composition. De telles doses unitaires contiennent de façon appropriée environ 0,2 à environ 1,5 mg, de préférence environ 0,5 mg, du composant i) et d'environ 1.000 (par exemple environ 1.500) à environ 10.000 UI, de préférence environ 1.500 UI (par exemple environ 2.500) à environ 5.000 UI du composant ii). Plus préférablement elles contiennent environ 0,5 mg du composant i) et environ 1.500, environ 2.500 ou environ 5.000 UI du composant ii).
L'invention concerne également un procédé de préparation d'une composition pharmaceutique selon l'invention, procédé selon lequel on mélange intimement le composant i) avec le composant ii), par exemple le composant i) avec le composant ii) en solution dans un milieu solvant pharmaceutiquement acceptable.
Lorsque les solutions sont préparées avec les composants supplémentaires iii), iv) et v) et, éventuellement, vi) tels que décrits plus haut, le procédé est avantageusement effectué par étapes comprenant 1) la préparation d'une solution du composant i) et, éventuellement, du composant vi) dans un milieu solvant contenant le composant v) ; 2) la préparation d'une solution du composant ii) et du composant iii) dans un milieu solvant contenant le composant iv) ; 3) la combinaison des solutions obtenues par l'intermédiaire des étapes 1) et 2), et 4) éventuellement l'addition supplémentaire du composant iv) et/ou
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v).
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Pour la préparation des solutions, le procédé de l'invention est effectué de préférence sous gaz protecteur, par exemple sous atmosphère de C02. Si le pH de la solution obtenue n'est pas de l'ordre de 4 à 6, on l'ajuste de préférence à cet ordre de grandeur, par exemple par addition d'une quantité appropriée d'un acide pharmaceutiquement acceptable, par exemple un acide organique pharmaceutiquement acceptable. Lorsqu'on utilise un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable comme composant i), l'acide ajouté correspondra de préférence au sel employé. Ainsi, lorsque le composant i) est sous forme de méthanesulfonate, tout réglage nécessaire du pH sera effectué de préférence par addition d'acide méthane-sulfonique.
La composition obtenue peut être mise sous forme d'une dose unitaire telle que décrite plus haut, par exemple dans le cas de solutions injectables, par remplissage des ampoules après filtration, de préférence sous gaz protecteur, par exemple sous atmosphère de gaz carbonique.
La présente invention a également pour objet un conditionnement ou système de conditionnement unitaire adapté pour une présentation ou administration simultanée des composants i) et ii) mentionnés plus haut, lesdits composants étant contenus a part dans ledit conditionnement ou système de conditionnement. Les composants i) et ii) sont chacun avantageusement contenus dans le conditionnement ou système de conditionnement sous forme de doses unitaires, les quantités de composants i) et ii) dans chaque
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dose unitaire étant, par exemple, telles que spécifiées plus haut, c'est-à-dire comprenant tout particulièrement environ 0,5 mg du composant i) et 1.500, 2.500 ou 5.000 UI du composant ii).
Le conditionnement ou système de conditionnement contient de préférence les instructions pour l'administration simultanée d'une quantité prédéterminée de chacun des composants i) et ii).
Le système de conditionnement approprié selon la présente invention comprend des seringues multiples, par exemple à deux compartiments, dans lesquelles les composants i) et ii) se trouvent dans des compartiments séparés et adaptés pour une administration par injection simultanée ou immédiatement consécutive des composés contenus. De telles seringues à deux compartiments sont connues.
Les exemples suivants illustrent la présente invention sans aucunement en limiter la portée.
EXEMPLE 1 Procédé pour la préparation d'héparinates de sodium à bas poids moléculaire ayant un poids moléculaire moyen d'environ 6.000 à environ 9.000
On dissout 1.000 g d'héparinate de sodium entier ayant un
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poids moléculaire moyen de 15. 000 dans 6, 66 litres d'eau distillée, on ajuste le pH à 2, 7 par addition d'environ 145 ml d'HCl à 25%, et on fait passer le tout à travers un filtre plié NO b 1/2 ( 320 mm) de la firme Schleicher et Schüll. On pompe le filtrat obtenu
520à travers une membrane de filtration moléculaire ayant une limite d'exclusion d'unités de poids moléculaire de 10.000 (filtre cassette Pelllicon : catalogue nO. PT GC 00001 de la firme Millipore), à la température ambiante et à l'abri de la lumière.
Les conditions suivantes sont réunies :
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<tb>
<tb> Pression <SEP> d'entrée <SEP> : <SEP> 3,2 <SEP> x <SEP> 105 <SEP> Pa.
<tb> Pression <SEP> sur <SEP> le <SEP> résidu <SEP> : <SEP> 1,2 <SEP> x <SEP> 105 <SEP> Pa.
<tb>
Débit <SEP> total <SEP> : <SEP> environ <SEP> 200 <SEP> ml/min.
<tb>
Débit <SEP> du <SEP> résidu <SEP> : <SEP> environ <SEP> 196 <SEP> ml/min.
<tb>
Débit <SEP> du <SEP> filtrat <SEP> : <SEP> environ <SEP> 4 <SEP> ml/min.
<tb>
Après pompage pendant 1 heure, le filtrat est dirigé vers un récipient séparé et est recueilli. On arrête la filtration après environ 24 heures. On réajuste le pH du filtrat (environ 1000-1200 ml) à la valeur du pH de la solution d'héparinate de sodium entier d'origine (environ pH 7) par addition d'environ 3 ml de NaOH aqueux à 30%. Cette solution constitue la FRACTION I.
On ajuste le pH du résidu à 3,5 en ajoutant environ 10 ml de NaOH aqueux à 30% et on refiltre pendant environ 24 heures sous les mêmes conditions qu'indiquées précédemment. On ajuste le pH du filtrat (environ 800 ml) à la valeur du pH de la solution d'héparinate de sodium entier d'origine (environ pH 7) par addition de NaOH aqueux. Cette solution constitue la FRACTION II.
On ajuste le pH du résidu à 4,2 par addition d'environ 60 ml de NaOH aqueux à 30% et on refiltre pendant environ 24 heures, là encore sous les mêmes conditions que celles déjà indiquées plus
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haut. On ajuste le pH du filtrat (environ 500 ml) à la valeur du pH de la solution d'héparinate de sodium entier d'origine (environ pH 7). Cette solution constitue la FRACTION III.
Les 3 fractions sont ensuite traitées chacune séparément de la manière suivante :
On fait précipiter tout d'abord l'héparinate de sodium par addition de 1,1 volume d'acétone, on laisse décanter pendant la nuit le précipité huileux et visqueux et on élimine le solvant. On reprend le résidu avec environ 3 fois son volume de méthanol et on agite le tout à fond à environ 1000 tours par minute. On fait
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précipiter ensuite l'héparinate de sodium sous forme d'un précipité blanchâtre que l'on granule dans un mortier avec du méthanol. On filtre la suspension obtenue et on sèche le résidu à 60 C sous une
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pression d'environ 200 Pa. Dans le cas où la teneur en NaCl est supérieure à 0,5%, on fait reprécipiter la suspension selon le même procédé.
Les 3 fractions ainsi obtenues ont les caractéristiques suivantes :
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<tb>
<tb> FRACTION <SEP> FRACTION <SEP> FRACTION
<tb> ANALYSE <SEP> ELEMENTAIRE <SEP> I <SEP> II <SEP> III
<tb> C <SEP> 23,7 <SEP> % <SEP> 24,9 <SEP> % <SEP> 24,4 <SEP> %
<tb> H <SEP> 3, <SEP> 3 <SEP> 0/, <SEP> 3, <SEP> 1 <SEP> % <SEP> 3, <SEP> 2 <SEP> % <SEP>
<tb> N <SEP> 2,9 <SEP> % <SEP> 2,4 <SEP> % <SEP> 2,7 <SEP> %
<tb> 0 <SEP> 47,1 <SEP> % <SEP> 45,9 <SEP> % <SEP> 46,8 <SEP> %
<tb> 5 <SEP> 11, <SEP> 7 <SEP> % <SEP> 11, <SEP> 9 <SEP> % <SEP> 11,6 <SEP> %
<tb> Na <SEP> 12,3 <SEP> % <SEP> 11,8 <SEP> % <SEP> 11,3 <SEP> %
<tb> Activité <SEP> (essai <SEP> PTT),
<tb> basée <SEP> sur <SEP> la <SEP> norme <SEP> III
<tb> # <SEP> 75+-5 <SEP> UI/mg <SEP> # <SEP> 8+-5UI/mg <SEP> # <SEP> 90+-5UI/mg
<tb> de <SEP> l'OMS
<tb> Activité <SEP> anti <SEP> Xa <SEP> # <SEP> 150¯10 <SEP> U/m9 <SEP> 115¯10 <SEP> U/mg <SEP> 160-10 <SEP> U/mg
<tb> Poids <SEP> moléculaire <SEP> # <SEP> 6.000¯1.000 <SEP> # <SEP> 8.000¯1.000 <SEP> 9.000¯1.000
<tb> moyen
<tb> Teneur <SEP> en <SEP> NaCl
<tb>
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EXEMPLE 2 Préparation d'une solution injectable stable contenant 1.500 UI d'héparine à bas poids moléculaire et 0,5 mg de dihydroergotamine 1) On verse 18,4 kg de propylèneglycol et 1,84 kg de glycérol anhydre dans un agitateur de 50 litres et on agite le mélange pendant 10 minutes sous atmosphère de gaz carbonique.
Tout en continuant d'agiter sous atmosphère de gaz carbonique, on ajoute à ce mélange, en l'espace de 30 minutes, 0,0286 kg de méthanesulfonate de dihydroergotamine et 0,426 kg de chlorhydrate de lidocaïne, ce qui donne une solution.
2) On verse 18,4 kg d'eau (pour injections) dans un agitateur de 30 litres et on agite pendant environ 10 minutes sous atmosphère de gaz carbonique. Tout en continuant d'agiter sous atmosphère de gaz carbonique, on dissout en l'espace de 30 minutes 85,71 millions d'UI (= environ 1,7 à 2,5 kg) d'héparinate de sodium ayant un poids moléculaire moyen de 6. 000 t 1.000 et 0,114 kg de
CaNa2 EDTA hexahydraté (calcium edetate de sodium hexahydraté disponible sur le marché sous le nom de calciumtitriplex).
3) A la solution obtenue à l'étape 1), on ajoute sous agitation et sous atmosphère de gaz carbonique la solution obtenue à l'étape
2) ci-dessus. On lave ensuite le récipient dans lequel la solution 2) est obtenue avec 1 kg d'eau (pour injections) et on ajoute cette eau à la solution de l'étape 1). On agite les solutions réunies pendant encore 10 minutes sous atmosphère de gaz carbonique. Le pH de la solution est d'environ 5,5.
4) On complète la solution avec de l'eau (pour injections) afin d'obtenir un poids de 42,810 kg (ou 40 litres).
5) On préfiltre la solution obtenue en utilisant un filtre à membrane (0,2 pm : Ultipor m Pall) et on la filtre directement sous gaz carbonique dans une machine de remplissage d'ampoules, sur un dispositif de filtration stérile ayant un filtre à membrane (0,2 pm : Ultipor pm Pall) sous une pression de 1,7 bar.
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On remplit sous des conditions stériles des ampoules de 1 ml avec la solution (volume de remplissage 0,8 ml).
EXEMPLE 3 Préparation de solutions injectables contenant 0,5 mg de dihydroergotamine et 2.500 ou 5.000 UI d'héparine a bas poids moléculaire
On répète le procédé de l'exemple 2 en utilisant les mêmes quantités relatives de tous les ingrédients mais en utilisant une proportion relative d'héparinate de sodium (poids moléculaire moyen = 6.000 t 1.000) de 1 et 2/3 pour la première étape et 3 et 1/3 pour la deuxième étape.
EXEMPLE 4 Préparation de solutions injectables contenant de la dihydroergotamine et de l'héparine à bas poids moléculaire (poids moléculaire moyen = 7.000 t 1.000 et 8.000 i 1.000)
On répète les procédés des exemples 2 et 3 mais en remplaçant l'héparinate de sodium de poids moléculaire moyen de 6.000 i 1.000 par 1) de l'héparinate de sodium de poids moléculaire moyen de 7.000 t 1.000 ou 2) de l'héparinate de sodium de poids moléculaire moyen de 8.000 t 1.000. Dans chaque cas, les proportions relatives de tous les ingrédients restent les mêmes que pour l'exemple 2. Les proportions relatives d'héparinate de sodium utilisées sont respectivement environ 3.000, environ 5.000 et environ 10.000 UI/1 mg de méthanesulfonate de dihydroergotamine.
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New medicinal combination based on a hydrogenated alkaloid of ergot of rye and heparin Invention by: Hans BUEHLMANN and Dieter WELZEL Claim for priority of the patent application filed in the Federal Republic of Germany on December 10, 1982 under the n P 32 45 695.6 on behalf of SANDOZ Patent GmbH.
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The subject of the present invention is a new drug combination and pharmaceutical compositions which can be used for the prophylaxis of thromboses, in particular for the prevention of postoperative thromboses.
Heparin is a highly sulfated dextrorotatory mucopolysaccharide with specific anticoagulant properties and is commonly used, among other things, in the prevention of post-operative thrombosis. It is a natural constituent of various tissues, in particular the liver and lungs, in a variety of mammals and preparations isolated from different natural sources are available on the market, in free form and in the form of a pharmaceutically acceptable salt, for example. example in the form of various alkali and alkaline earth metal salts.
Whole heparin, that is to say as obtained directly from different natural sources according to the usual isolation methods, comprises polymer units of non-uniform molecular weight commonly between 6,000 and 20,000, the weight molecular average being 14,000 to 18,000, in which the basic polymer chain consists of residues of D-glucosamine and D-glucuronic acid. The specific chemical and physical constitution, for example the precise degree of sulfation and the characteristics of the molecular weight vary according to the source, that is to say the animal material from which it comes, as well as precise means of isolation.
As indicated below, various techniques are known and have been described in the literature for obtaining heparin preparations of a lower average molecular weight than whole heparin preparations, for example obtained directly from animal sources. by other means.
It is also known that the administration of heparin in combination with hydrogenated alkaloids of ergot of rye exerting a vasoconstrictor effect, in particular dihydroergotamine, has a particular advantage in relation to the prophylaxis of thromboses, especially the prevention of postoperative thrombosis (see for example British patent application No. 1,557,331) and heparin therapy /
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Dihydroergotamine is now an effective and commonly followed treatment for patients at risk of thrombosis, especially after a serious operation.
Administration is generally carried out by parenteral route, namely by intravenous injection, and various formulations having, for example, improved stability characteristics compared to simple solutions intended for such use, are described in the literature or are available on the market ( see for example US patent application No. 4,402,949).
In accordance with the present invention, it has now surprisingly been found that when a combination therapy as described above is applied, particularly advantageous results are obtained if heparin is a low molecular weight heparin. It has been found in particular that by using low molecular weight heparin in combination with a hydrogenated ergot alkaloid having a vasoconstrictive effect,
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in particular dihydroergotamine, in place of the preparations of whole heparin usually used, the therapeutic efficacy, namely the duration of the anti-thrombotic effect, is greatly increased, the daily dose of heparin and of hydrogenated alkaloid ergot needed for effective prophylactic therapy which can be reduced accordingly.
The present invention thus has the very great advantage of allowing a significant reduction in the daily medication necessary for the treatment of patients. As previously indicated, since the treatment is generally done by intravenous injection, the present invention therefore also has the advantage of allowing the reduction in the number of daily injections and thereby significantly reducing the patient's discomfort. This is particularly important in the case of patients undergoing or having undergone a serious operation.
In accordance with the above, the present invention relates, as a medicament, to the combination of:
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i) a hydrogenated ergot alkaloid exerting a vasoconstrictor effect, or a pharmaceutically acceptable acid addition salt of this compound, and ii) a low molecular weight heparin or a pharmaceutically acceptable salt of this compound .
The invention also relates to a pharmaceutical composition comprising components i) and ii) as defined above.
Component i) of the medicament and of the composition of the invention is advantageously a hydrogenated ergot alkaloid of formula R
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wherein R represents l 1 hydrogen or a C1-C4 alkyl group, Ri represents a methyl, ethyl or isopropyl group, R2 represents an isopropyl, sec.-butyl, isobutyl or benzyl group and X represents hydrogen or a methoxy group , or a pharmaceutically acceptable acid addition salt of this compound.
Component i) is preferably dihydroergotamine, 6-nor-isopropyl-9, 10-dihydro-21 methyl-5Ia-benzyl-ergopeptine or dihydroergovaline, or a pharmaceutically acceptable acid addition salt of these compounds, dihydroergotamine and the acid addition salts of this compound being very particularly preferred. Suitable pharmaceutically acceptable acid addition salts are, for example, methanesulfonates, maleates and tartrates, and, in the case of dihydroergotamine, especially methanesulfonate.
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By the expression "a low molecular weight heparin" is meant a heparin prepared for example by isolation or depolymerization methods as described below, in order to achieve a significant reduction in the average molecular weight compared to the preparations whole heparin.
Components ii) as used in the present invention preferably have an average molecular weight of about 10,000 or less, more preferably about 8,000 or less.
However, the average molecular weight is preferably not less than about 4,000, more preferably not less than about 5,000, most preferably not less than about 6,000.
The specially preferred components ii) thus have an average molecular weight of between approximately 10,000 and approximately 4,000, in particular
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especially between about 8,000 and about 5,000, for example about 7,000 to 1,000 or about 6,000 to 1,000. It is further preferred that components ii) have a relatively molecular weight uniform, for example with at least 60%, more preferably 80% of polymer units having a molecular weight within the limits of average molecular weight defined above, i.e. a molecular weight of 10,000 or less.
Suitable pharmaceutically acceptable salts of low molecular weight heparins as components ii) are for example the calcium salt and the potassium salt, in particular the sodium salt.
The low molecular weight heparin or the pharmaceutically acceptable salt of this compound used as component ii), can be obtained according to known methods, for example by isolation of low molecular weight fractions from preparations of whole heparin, for example by fractional precipitation and filtration, for example as described in German patent application DOS 29 45 591, or by depolymerization of high molecular weight fractions of whole heparin, for example by chemical scission, as described for example in the Belgian patent NO. 888 864 or in European patent application No. 27 089.
Alternatively, components ii) can be obtained by
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combination of such techniques, for example by separation of low molecular weight heparin from whole heparin preparations, then depolymerization of the remaining higher molecular weight heparin fractions to obtain additional low molecular weight heparin and , optionally, the mixture of the two low molecular weight heparin preparations thus obtained.
When low molecular weight heparin is prepared by chemical cleavage, the residues of the individual chains can undergo certain chemical modifications, in particular de-sulfation. When such modifications take place on the product intended to be used according to the present invention, the components ii) thus produced can, if necessary, be subsequently reconstituted or modified in an appropriate manner according to known techniques, for example in a manner analogous to that described. in Belgian patent NO. 888 864.
When the low molecular weight heparin preparations obtained by chemical scission are used in the compositions of the invention, they are preferably preparations which have undergone no or essentially no other chemical modification.
Components i) and ii) are advantageously present in a ratio of 1 mg of component i): 300 to 70,000 (for example
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500 to 70,000), preferably 300 to 35,000 IU of component ii). Components i) and ii) are more preferably present in a ratio of 1 mg of component i): 1,000 to 20,000 (for example 2,000 to 20,000), especially 1,000 to 10,000 IU of component ii).
When component i) and / or ii) is present in the form of a pharmaceutically acceptable salt, the equivalent quantity of salt providing the indicated ratios is used.
As indicated above, the compositions of the invention will generally be administered by injection. For direct application, they will therefore be in liquid form. Although, for example, simple aqueous or hydroalcoholic solutions are possible, they are generally not preferred because, in
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the absence of stabilizers, components i) and ii) will react to form sparingly soluble salts which precipitate from the solution. Therefore, simple solutions cannot be kept for more than a few hours and therefore have limited practical value.
The preferred compositions according to the present invention are stabilized solutions of the type described in US Pat. No. 4,402,949 already cited, using for example an additional component iii) which is a calcium or magnesium salt of ethylenediamine acid. Pharmaceutically acceptable tetraacetic (EDTA) as a stabilizer. For such solutions, the solvent medium preferably comprises iv) water and v) a mono or polyalcohol.
The magnesium or calcium salts of EDTA indicated as component iii) are the mono-magnesium or mono-calcium salts, including the pharmaceutically acceptable poly-metallic salts comprising magnesium or, preferably, calcium with metal ions monovalent, for example sodium or potassium ions. The preferred EDTA salt for use according to the invention is the disodium mono-calcium salt (CaNa2 EDTA) also known as calciumtitriplex. The dipotassium mono-magnesium salt (MgK2 EDTA) can also be mentioned.
Component iii) is preferably present in an amount between about 1 and about 50 mg, more preferably 1 to 25 mg, most preferably 1 to 10 mg, based on an amount of 5,000 IU of component ii).
When the solvent medium comprises components iv) and v), that is to say as diluent or vehicle, they preferably represent respectively from 45 to 72% and 28 to 55%, based on the total volume of the composition.
The preferred components v) are ethanol, propylene glycol, polyethylene glycol (advantageously with an average molecular weight of approximately 400), diethylene glycol, triethylene glycol and glycerol, as well as mixtures of these compounds. More preferably, component v) comprises a mixture
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a) ethanol and b) triethylene glycol or a mixture of glycerol and d) propylene glycol. In such mixtures, a) and b) are preferably present in a weight ratio of 1: 6 to 10, more preferably 1: 8, and c) and d) are preferably present in a weight ratio of 1: 8 to 12, more preferably 1:10.
According to a preferred variant of the invention, the above solutions also contain, as another component vi), a physiologically acceptable anesthetic. The anesthetic components vi) are preferably "acetanides anesthetics" term by which is meant any member of the class of physiologically acceptable acetamide derivatives exerting anesthetic activity, including the various known derivatives of
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2-amino-N-phenyl-acetaniide active as anesthetics, and their pharmaceutically acceptable salts.
The preferred acetanilide anesthetics are 2- (also known as 1idocaine), 2-ch1oro-6-methy1-pheny1) (also known as hostacaine) and the acid methyl ester 2- ( diethy1amino) -N- (2,6-dimethy1pheny1) -acetamideacetamido) -m-toluic (also known as baycaine). The pharmaceutically acceptable salts commonly used for such acetanilide anesthetics include, for example, hydrochlorides. When component vi) is present, it preferably represents from 1 to 2% by weight of the total weight of the composition.
The solutions of the present invention, intended for example for injections, suitably have a pH of 4 to 6.
It should be noted that although the solutions, for example as described above, are generally those most suitable and which are preferred, the present invention also includes other suitable forms of compositions containing components i) and ii), such as than lyophilized preparations, for example those which are put in solution or in another suitable liquid form, before administration. The compositions of the invention may contain any other desired additive, for example known vehicles, diluents, stabilizers, preservatives, dyes and surfactants.
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The new combination, for example in the form of a pharmaceutical composition as described above, is indicated for use in the prophylaxis of thromboses, in particular in the prevention of post-operative thromboses.
The advantageous properties of the new combination compared to those previously used can, for example, be demonstrated by clinical trials, for example using the fixation test for fibrinogen labeled with iodine 125 described by KH Frey et al. CMed. K1in., (1975), pp. 1553-1558) 3, trial in which an external measurement of the radioactivity of fibrinogen labeled with iodine 125 is carried out in patients, which is selectively concentrated in the thrombotic material of the veins of the leg.
Patients having to undergo a serious operation, for example a plastic surgery of the hip joint, receive by the parenteral route 100 pci of fibrinogen marked with iodine 125 the day before the operation and the radioactivity is measured daily on the legs fibrinogen labeled with iodine 125 for 2 to 3 weeks after the operation. The fibrinogen injection is repeated 8 to 10 days after the initial administration if the radioactivity measured is low. A Logic 121 counter is used to record the radioactivity, the counting being carried out according to the method described by Kakkar et al. Lancet, 1 (1970), p. 540J.
Deep vein thrombosis (DVT) is diagnosed if the count at any site differs by 20% or more from those located at an adjacent point on the same leg or at an identical location on the other leg, and if this difference persists or increases within 24 hours.
In such a clinical trial, the patients are divided into two groups. Group 1 receives 0.5 mg of dihydroergotamine methanesulfonate and 2,500 IU of low molecular weight sodium heparinate (average molecular weight of approximately 7,000 t1,000)
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administered intravenously once a day as a stabilized solution. Group 2 receives 0.5 mg of dihydroergotamine methanesulfonate and 5,000 IU of whole sodium heparinate also administered intravenously twice a day as a stabilized solution. The results of Group 1 receiving the composition according to the present invention are compared with those of Group 2 receiving the usual therapy. The reduction in the incidence of PST on the two groups was found to be equivalent.
Results comparable to those obtained in the above clinical trial with a daily injection of a single dose comprising 0.5 mg of dihydroergotamine methanesulfonate and 2,500 IU of low molecular weight sodium heparinate (7,000 to 1,000), can also be obtained when the dose of low molecular weight heparin is reduced to 1,500 IU.
The daily dose indicated for the compositions of the invention will therefore be of the order of 1/3 of the daily doses used with known compositions containing whole heparin or a pharmaceutically acceptable salt of this compound, with in addition a reduction of the usual dose of heparin, for example a reduction to 1,500 IU per day is possible. Thus, the daily dose indicated for component i) will be of the order of approximately 0.2 to approximately 1.5 mg, for example approximately 0.5 mg, and for component ii) from approximately 1,000 to approximately 10,000 IU, for example around 1,500 to around 5,000 IU. If necessary, the daily dose can be administered in divided doses, for example 2 to 4 times a day. However, it is preferably administered in a single dose once a day, for example in the form of a unit dose.
If necessary, components i) and ii) can also be administered separately.
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The appropriate unit doses for the compositions of the invention, for example for the stabilized injectable solutions as described above comprising for example the components iii), iv), v) and, optionally, vi), include injection ampoules and disposable syringes containing a predetermined amount of the composition. Such unit doses suitably contain from about 0.2 to about 1.5 mg, preferably about 0.5 mg, of component i) and from about 1,000 (e.g. about 1,500) to about 10,000 IU, preferably about 1,500 IU (for example approximately 2,500) to approximately 5,000 IU of component ii). More preferably they contain about 0.5 mg of component i) and about 1,500, about 2,500 or about 5,000 IU of component ii).
The invention also relates to a process for the preparation of a pharmaceutical composition according to the invention, process according to which component i) is intimately mixed with component ii), for example component i) with component ii) in solution in a pharmaceutically acceptable solvent medium.
When the solutions are prepared with the additional components iii), iv) and v) and, optionally, vi) as described above, the process is advantageously carried out in stages comprising 1) the preparation of a solution of component i) and , optionally, of component vi) in a solvent medium containing component v); 2) preparing a solution of component ii) and component iii) in a solvent medium containing component iv); 3) the combination of the solutions obtained via steps 1) and 2), and 4) optionally the additional addition of component iv) and / or
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v).
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For the preparation of the solutions, the process of the invention is preferably carried out under a protective gas, for example under a CO 2 atmosphere. If the pH of the solution obtained is not of the order of 4 to 6, it is preferably adjusted to this order of magnitude, for example by adding an appropriate amount of a pharmaceutically acceptable acid, for example a pharmaceutically acceptable organic acid. When a pharmaceutically acceptable acid addition salt is used as component i), the added acid will preferably correspond to the salt used. Thus, when component i) is in the form of methanesulfonate, any necessary adjustment of the pH will preferably be carried out by adding methane sulfonic acid.
The composition obtained can be in the form of a unit dose as described above, for example in the case of injectable solutions, by filling the ampoules after filtration, preferably under protective gas, for example under carbon dioxide atmosphere.
The present invention also relates to a unit packaging or packaging system suitable for the simultaneous presentation or administration of the components i) and ii) mentioned above, said components being contained separately in said packaging or packaging system. The components i) and ii) are each advantageously contained in the packaging or packaging system in the form of unit doses, the quantities of components i) and ii) in each
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unit dose being, for example, as specified above, that is to say very particularly comprising about 0.5 mg of component i) and 1,500, 2,500 or 5,000 IU of component ii).
The packaging or packaging system preferably contains the instructions for the simultaneous administration of a predetermined quantity of each of the components i) and ii).
The suitable packaging system according to the present invention comprises multiple syringes, for example with two compartments, in which the components i) and ii) are in separate compartments and suitable for administration by simultaneous or immediately consecutive injection of the compounds contained. Such syringes with two compartments are known.
The following examples illustrate the present invention without in any way limiting its scope.
EXAMPLE 1 Process for the preparation of low molecular weight sodium heparinates having an average molecular weight of about 6,000 to about 9,000
1,000 g of whole sodium heparinate having a
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average molecular weight of 15,000 in 6.66 liters of distilled water, the pH is adjusted to 2.7 by adding approximately 145 ml of 25% HCl, and the whole is passed through a folded filter NO b 1/2 (320 mm) from the firm Schleicher and Schüll. The filtrate obtained is pumped
520 through a molecular filtration membrane having an exclusion limit of molecular weight units of 10,000 (Pelllicon cassette filter: catalog no. PT GC 00001 from the firm Millipore), at room temperature and protected from light .
The following conditions are met:
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<tb>
<tb> Input <SEP> pressure <SEP>: <SEP> 3,2 <SEP> x <SEP> 105 <SEP> Pa.
<tb> Press <SEP> on <SEP> the <SEP> residue <SEP>: <SEP> 1,2 <SEP> x <SEP> 105 <SEP> Pa.
<tb>
Total <SEP> flow <SEP>: <SEP> about <SEP> 200 <SEP> ml / min.
<tb>
<SEP> flow of <SEP> residue <SEP>: <SEP> about <SEP> 196 <SEP> ml / min.
<tb>
<SEP> flow rate of the <SEP> filtrate <SEP>: <SEP> about <SEP> 4 <SEP> ml / min.
<tb>
After pumping for 1 hour, the filtrate is directed to a separate container and is collected. The filtration is stopped after approximately 24 hours. The pH of the filtrate (approximately 1000-1200 ml) is readjusted to the pH value of the original whole sodium heparinate solution (approximately pH 7) by addition of approximately 3 ml of 30% aqueous NaOH. This solution constitutes FRACTION I.
The pH of the residue is adjusted to 3.5 by adding approximately 10 ml of 30% aqueous NaOH and is filtered for approximately 24 hours under the same conditions as indicated above. The pH of the filtrate (approximately 800 ml) is adjusted to the pH value of the original whole sodium heparinate solution (approximately pH 7) by addition of aqueous NaOH. This solution constitutes FRACTION II.
The pH of the residue is adjusted to 4.2 by the addition of approximately 60 ml of 30% aqueous NaOH and is filtered for approximately 24 hours, again under the same conditions as those already indicated more
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high. The pH of the filtrate (approximately 500 ml) is adjusted to the pH value of the original whole sodium heparinate solution (approximately pH 7). This solution constitutes FRACTION III.
The 3 fractions are then each treated separately as follows:
First of all, the sodium heparinate is precipitated by adding 1.1 volumes of acetone, the oily and viscous precipitate is left to settle overnight and the solvent is removed. The residue is taken up with approximately 3 times its volume of methanol and the whole is stirred thoroughly at approximately 1000 revolutions per minute. We do
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then precipitate the sodium heparinate in the form of a whitish precipitate which is granulated in a mortar with methanol. The suspension obtained is filtered and the residue is dried at 60 ° C. under a
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pressure of approximately 200 Pa. In the case where the NaCl content is greater than 0.5%, the suspension is reprecipitated according to the same process.
The 3 fractions thus obtained have the following characteristics:
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<tb>
<tb> FRACTION <SEP> FRACTION <SEP> FRACTION
<tb> BASIC <SEP> ANALYSIS <SEP> I <SEP> II <SEP> III
<tb> C <SEP> 23.7 <SEP>% <SEP> 24.9 <SEP>% <SEP> 24.4 <SEP>%
<tb> H <SEP> 3, <SEP> 3 <SEP> 0 /, <SEP> 3, <SEP> 1 <SEP>% <SEP> 3, <SEP> 2 <SEP>% <SEP>
<tb> N <SEP> 2.9 <SEP>% <SEP> 2.4 <SEP>% <SEP> 2.7 <SEP>%
<tb> 0 <SEP> 47.1 <SEP>% <SEP> 45.9 <SEP>% <SEP> 46.8 <SEP>%
<tb> 5 <SEP> 11, <SEP> 7 <SEP>% <SEP> 11, <SEP> 9 <SEP>% <SEP> 11.6 <SEP>%
<tb> Na <SEP> 12.3 <SEP>% <SEP> 11.8 <SEP>% <SEP> 11.3 <SEP>%
<tb> Activity <SEP> (test <SEP> PTT),
<tb> based <SEP> on <SEP> the <SEP> standard <SEP> III
<tb> # <SEP> 75 + -5 <SEP> IU / mg <SEP> # <SEP> 8 + -5UI / mg <SEP> # <SEP> 90 + -5UI / mg
<tb> from <SEP> WHO
<tb> Activity <SEP> anti <SEP> Xa <SEP> # <SEP> 150¯10 <SEP> U / m9 <SEP> 115¯10 <SEP> U / mg <SEP> 160-10 <SEP> U / mg
<tb> Molecular weight <SEP> <SEP> # <SEP> 6,000¯1,000 <SEP> # <SEP> 8,000¯1,000 <SEP> 9,000¯1,000
<tb> medium
<tb> <SEP> <SEP> NaCl content
<tb>
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EXAMPLE 2 Preparation of a stable injectable solution containing 1,500 IU of low molecular weight heparin and 0.5 mg of dihydroergotamine 1) 18.4 kg of propylene glycol and 1.84 kg of anhydrous glycerol are poured into a 50 liter stirrer and the mixture is stirred for 10 minutes under an atmosphere of carbon dioxide.
While continuing to stir under a carbon dioxide atmosphere, 0.0286 kg of dihydroergotamine methanesulfonate and 0.426 kg of lidocaine hydrochloride are added to this mixture over 30 minutes, giving a solution.
2) 18.4 kg of water (for injections) are poured into a 30 liter agitator and the mixture is stirred for approximately 10 minutes under an atmosphere of carbon dioxide. While continuing to stir under a carbon dioxide atmosphere, 85.71 million IU (= approximately 1.7 to 2.5 kg) of sodium heparinate having an average molecular weight is dissolved over 30 minutes 6,000 t 1,000 and 0.114 kg of
CaNa2 EDTA hexahydrate (calcium sodium edetate hexahydrate available commercially as calciumtitriplex).
3) To the solution obtained in step 1), the solution obtained in step is added with stirring and under a carbon dioxide atmosphere
2) above. The container in which solution 2) is obtained is then washed with 1 kg of water (for injections) and this water is added to the solution of step 1). The combined solutions are stirred for a further 10 minutes under an atmosphere of carbon dioxide. The pH of the solution is approximately 5.5.
4) The solution is completed with water (for injections) in order to obtain a weight of 42.810 kg (or 40 liters).
5) The solution obtained is prefiltered using a membrane filter (0.2 μm: Ultipor m Pall) and it is filtered directly under carbon dioxide in an ampoule filling machine, on a sterile filtration device having a filter membrane (0.2 pm: Ultipor pm Pall) under a pressure of 1.7 bar.
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1 ml ampoules are filled under sterile conditions with the solution (filling volume 0.8 ml).
EXAMPLE 3 Preparation of injectable solutions containing 0.5 mg of dihydroergotamine and 2,500 or 5,000 IU of low molecular weight heparin
The process of Example 2 is repeated using the same relative amounts of all the ingredients but using a relative proportion of sodium heparinate (average molecular weight = 6,000 t 1,000) of 1 and 2/3 for the first step and 3 and 1/3 for the second stage.
EXAMPLE 4 Preparation of injectable solutions containing low molecular weight dihydroergotamine and heparin (average molecular weight = 7,000 t 1,000 and 8,000 i 1,000)
The procedures of Examples 2 and 3 are repeated, but replacing the sodium heparinate with an average molecular weight of 6,000 to 1,000 by 1) of the sodium heparinate with an average molecular weight of 7,000 and 1,000 or 2) of the heparin of sodium with an average molecular weight of 8,000 t 1,000. In each case, the relative proportions of all the ingredients remain the same as for Example 2. The relative proportions of sodium heparinate used are respectively approximately 3,000, approximately 5,000 and approximately 10,000 IU / 1 mg of dihydroergotamine methanesulfonate.