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Agent de débridage.
La présente invention concerne un nouvel agent de débridage. Plus particulièrement, elle concerne un nouveau complexe bactérien d'enzymes possédant des propriétés de débri- dage supérieures.
Des agents de débridage sont les agents qui digèrent et liquéfient rapidement les tissus nécrotiques sans endommager les cellules vivantes, en accélérant ainsi les processus de gué- rison. Les recherches relatives à ces agents de débridage ont couvert l'emploi d'une grande variété de substances végétales et animales, telles que vers ou larves de mouche, la papaïne enzyme dérivée de l'arbre papaya, et la trypsine d'enzyme dérivée du
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pancréas. te mécanisme dans presque tous ces cas a été identifié comme étant une action enzymatique.
La guérison des blessures est retardée par la présence de pus de débris de tissu, de bactéries et exsudats. Le but principal de l'enzyme de débridage est de nettoyer la blessure de la totalité des divers éléments de tissus nécrotiques et d'enlever les sécrétions excudatives épaisses.
Lorsqu'elles sont convenablement appliquées à des patients choisis, certaines enzy- mes protéolytiques nettoient les surfaces infectées de leurs exsudats Inflammatoires sans nuire aux tissus vivants, facilitent le drainage de surfaces à accumulations purulentes looulées sanguines et fibrineuses, facilitent la libération de bactéries cachées, en les exposant ainsi aux agents antimicrobiens et aux forces natives d'immunisation, et augmentent le taux de guérison des blessures précédemment infectées,
L'enzyme idéale de débridage de blessures selon " Connell and Associates" (Surgical Gynecology & Obstetrios 108 93-99 1959) doivent répondre aux critères suivants :
1.
L'enzyme doit pouvoir effectuer une lyse rapide de la fibrine, du collagène dénaturé, de l'élastine et de l'exsudat, parce que ceux-ci constituent les constituants principaux de la protéine du tissu dans la blessure, brûlure d'épaisseur entière,- peau nécrotique et lésion ulcérée.
2. Elle doit être complètement inactive lorsqu'elle se trouve en contact avec le tissu normal humain.
3. Elle doit être non-toxique par absorption et non- irritante pour la blessure.
4. Elle doit être préparée facilement:, être stable et facilement applicable sur la plupart des lésions.
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Ces chercheurs insistent sur le fait que le but prin- cipal d'un débridage enzymatique est de donner une blessure propre dans le laps de temps le plus court possible. Quant cela a été fait, le débridage enzymatique doit être arrêté et la méthode chirurgicale appropriée pour fermer la blessure doit être appli- quée. Le débridage enzymatique est un outil ancillaire à la thérapeutique chirurgicale et n'en constitue pa un succédané.
Dans de nombreux cas, où les deux techniques peuvent être réalisées de manière concomitantes, des résultats peu"ent être obtenus plus rapidement.
Jusqu'à ce jour, tous les essais pour développer un agent chirurgical acceptable de débridage ont pratiquement échoue.
L'emploi d'insectes tels que vers et de larves est évidemment accompagné d'inconvénients sérieux et alors que théoriquement l'em- ploi de papaïne et de trypsine parai trait fournir la solution, leur emploi est également accompagné d'inconvénients. La papaïne par exemple tout en possédant une fine action protéolytique manque de sélectivité pour le tissu mort et est par conséquent extrêmement irritante à la blessure. La trypsine d'autre part est relativement non-Irritante, mais malheureusement elle est également relativement inefficace sur les tissus nécrotiques.
Par conséquent, l'un des objets de la présente intention est de prévoir un nouveau produit pharmaceutique d'enzyme de débri- dage,
Un autre objet de l'invention est de prévoir une nouvelle méthode de débridage utilisant le produit enzyme.
Un nouveau complexe enzyme de débridage a été maintenant découvert possédant des propriétés médicinales supérieures. Ce complexe enzyme est une matière protéine hautement purifiée, laquelle
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lorsqu'elle est incorporée sous forme d'applications locales, exerce une action efficace non-irritante, de débridage.
Le nouveau produit enzyme selon la présente invention est obtenu par culture d'une souche choisie de la bactérie
Bacillus subtilis, La désignation Bacillus subtilis couvre une espèce d'organismes très répandus, non pathogènes, formateurs de spores aérobiques, catalase-positifs. Evidemment, les diverses souches sont légèrement différentes quant à certaines propriétés, mais elles suivent toutes les caractérisations de Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 7th Edition, pp. 613-621. Williams and Wilkins C ., Baltimore, Md. 1957.
Cet organisme est également . classifié sous la désignation Bacillus subtilis selon le système de classification décrit dans Aérobie Spore Forming Bacteria,
U.S., Department of Agriculture, Aricultural Monograph N 16.
Une couche particulière de Bacillus subtilis est spécialement préférée pour la production de composants enzymes selon la présente invention. Une culture de cette souche a été déposée dans la collection de Culture de Type Américain ( "American
Type Culture Collection") et a reçu la désignation ATCC 6051 a.
La méthode de production du produit enzyme selon la présente invention comprend en résumé la culture du Bacillus subtilis dans des conditions appropriées de fermentation sur une source nutritive appropriée.. et ensuite le prélèvement et la purification de l'enzyme élaborée par les bactéries,
Selon la pratique préférentielle de préparation de l'enzyme, une souche choisie de Bacillus subtilis est soumise à la culture en milieu nutritif aqueux contenant des sources assi- milables de carbone, azote et ingrédients en traces.
Le mélange de milieu nutritif et d'organisme est maintenu dans des conditions aérobiques à une température d'environ 35 C et à un pH d'environ
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6 jusque oe que la fermentation donne une production appréciable de produits enzymes, et à ce moment le produit enzymes est récupéré par des moyens conventionnels hors du mélange de fermentation.
Le milieu nutritif aqueux préférentiel contient environ 10 à 20 en poid d'une source de carbone telle que l'hydrolysat d'amidon, du sirop de mais, ou analogues. L'azote peut être fourni en quantité, désirée (environ 0,5% en poids) en ajoutant un hydrolysat de protéine tel que de l'hydrolysat de caséine dans les milieux ou en ajoutant des sols ammoniques. Les ingrédients en traces peuvent comprendre des sels, qui à leur tour peuvent comprendre des phospha- tes, sulfates, et des sels de fer, manganèse, magnésium, potassium et sodium.
Des substances nutritives en traces, telles que des vitamines, requises pour la culture du Bacillussubtilis peuvent être fournies en ajoutant à l'amont nutritif des quantités relative- ment faibles de concentrés de levure telle que de la levure de brasserie.
A la fin de la fermentation, le complexe enzyme est contenu en solutions dans la phase aqueuse du mélange de fermentation.
Pour obtenir 'le complexe enzyme sous une forme purifiée, on peut employer diverses méthodes. Une méthode particulièrement appropriée comprend l'addition à la solution contenant le complexe enzyme, des solutions aqueuses de phosphate di-sodique et un sel de calcium soluble dans l'eau avec réglage du pH à une valeur d'environ 6. Un aide-filtrage tel que de la terre à foulons est ajouté et le mélange résultant est filtré pour obtenir un filtrat brillant. Le filtrat contenant l'enzyme est traité dans des conditions contrôlées de pH, température, etc. avec du méthanol froid pour précipiter l'enzyme.
Le précipitât contenant l'enzyme est ensuite redissous dans une solu- tion tampon de phosphate et reprécipité pour obtenir une nouvelle purification.
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Un gramme de la poudre sèche d'enzyme de tannage possède généralement une action protéase d'environ 50.000 à 80.000 unités PP ("Proteolytic Power") toile que déterminée par la méthode d'analyse de la viscosité par la gélatine, qui sera décrite ci-après, et une action protéase d'environ 20,000 à 32.000 unités d'hémoglobine telle que déterminée par la méthode d'analyse à l'hémoglobine, qui sera également décrite ci-après.
Il présente également une activité amylolytique appréciable pouvant atteindre 80 millions d'unités par gramme, quoiqu'en général cette activité ne soit que de 40 à 80 millions d'unités, déterminée par la méthode d'analyse de liquéfaction à l'amidon, qui sera décrite ci-après.
Ainsi que décrit précédemment, l'activité protéolyti- que du produit enzyme peut être déterminé par la méthode d'ana- lyse de la viscosité par la gélatine. En résumé, cette méthode comprend la mise de 10 ml. de la solution d'enzyme en contact avec 250 grs d'une solution de gélatine à 14% à 37,5 C pendant une heure. A la fin de cette période, la viscosité de la solution hydrolysée est mesurée au moyen d'un viscosimètre et est comparée à une viscosité de contrôle. L'action protéolytique de l'enzyme qui doit être soumise aux essais est ensuite comparée avec celle d'une enzyme standard d'activité protéolytique connue et exprimée en tant que valeur protéolytique ou unités PP ("Proteolytio Power").
Dans des buts de définition, 1,66 unités de valeur protéolytique représente le degré d'activité enzymatique qui en une heure à 37 C réussit abaisser de 50% la viscosité initiale de 250 grammes d'une solution de gélatine \ 14 ayant un pH égal à 8,0 - 8,4.
L'activité protéolytique de l'enzyme sous la forme de dosage de débridage est le plus avantageusement déterminée par une modification de la méthode Anson à l'hémoglobine (Anson,
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M.L.J. Gen. Physiol. 22:79. 1938). Cette modification comprend la préparation d'un substratum en mettant en suspension*1 2 grammes d'hémoglobine bovine cristalline dans 55 ml. d'eau distillée. On ajoute à cela 7,5 ml. de NaOH 1,0 N et 30 grammes d'urée, et le mélange est aeité pendant 30 minutes. On ajoute ensuite dix ml. de 1,0 M KH2PO4, et le pH est réglé à 6,0 au moyen de HCl 4N et est dilué jusqu'à 100 ml. avec de l'eau.
Une quantité pesée d'enzyme est volumétriquement diluée dans 0,1 M de tempon au phosphate de potassium, pH = 6,0.
Des tubes en double contenant 5,0 ml de substratum pour chaque niveau d'enzyme,et les solutions d'enzyme sont préalablement incubées dans un bain à 35 C pendant 5 minutes. Un ml. de la solution d'enzyme est ensuite ajouté à chaque tube au moment zéro et les tubes sont laissés incuber pendant 10 minutes. Un tube à réactif à blanc est inclus. La réaction est arrêtée par l'addition de 4,0 ml. d'acide trichloroacétique à 12% et on laisse les tubes dans le bain pendant 30 minutes. Les contenus des tubes sont filtrés et les filtrats sont lus à 280 m, par rapport aux tubes de réactif à blanc,
Une relation en ligne droite a été trouvée existant dans ces conditions entre la densité optique et le poids d'enzyme depuis 0 g jusque 30 g.
Des répliques d'échantillons de contrôle varient généralement par moins de / 5%.
Une unité d'hémoglobine d'activité bactérienne de protéase est définie comme étant la quantité d'enzyme qui dans les conditions ci-dessus produira une densité optique de 1,0 à 280 m. dans les filtrats du mélange de réaction.
L'activité amylolytique de l'enzyme est déterminée par la méthode de liquéfaction à l'amidon. Cette méthode comprend l'addition d'une solution d'enzyme à un amidon standardisé de
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maïs, neutralisé, dans un tube de nickel. Un piston en verre de construction spéciale est ensuite placé sur la surface de l'amidon et le degré de liquéfaction est mesuré par la durée requise par le piston pour s'enfoncer à 75 C.
D'une manière plus spécifique, la méthode comprend la pesée de 20 grammes d'amidon de mats standardise dans un tube d'essai en nickel et l'addition de 200 cm3 d'eau distillée au tube, de sorte qu'il n'y a pas d'amidon qui adhère 4 la paroi du tube. Le tube d'essai est placé dans le bain à 30 C et y est maintenu avec mélange intermittent pendant 15 minutes pour assurer l'uniformité de la température. Après 15 minutes, on ajoute 5 ml. d'une concentration appropriée de solution d'enzyme. ' Le contenu du tube est agité mécaniquement pendant 3 minutes et 45 secondes, l'agitateur est déconnecté et le tube d'essai est transféré à un bain à 75 C au s'ornent zéro.
L'agitateur est à nouveau connecté et le contenu du tube est agité pendant deux minutes et 20 secondes*
L'agitateur est à nouveau déconnecté et il est pousse vers le bas pour venir s'appuyer sur le fond du tube. Le piston en verre de construction spéciale est soigneusement placé sur la surface du mélange d'amidon qui maintenant resemble à un gel.
La durée requise pour que le piston s'enfonce dans le mélange d'amidon est soigneusement notée et est comparée Avec celle requise lorsque 5 ml. d'une solution 4 1,0% d'une enzyme standard d'activité amylolytique connue sont employés.
La valeur de liquéfaction (PL) de la solution d'enzyme Inconnue est alors calculée comme suit
Des comparaisons sont faites entre la valeur de liquéfaction ou vitesse h laquelle l'amidon est digéré, et la viscosité du gel est réduite aussi bien pour l'enzyme de contrôle
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que pour l'enzyme inconnue. Pour la facilité de la détermination des concentrations relatives des enzymes, on emploie l'enzyme standard en diverses portions croissantes, et des durées d'affais- sement du piston de 6 minutes 20 secondes jusque 33 minutes sont obtenues. Ces valeurs sont inscrites par rapport aux augmentations correspondantes de l'enzyme et on obtient ainsi un tableau des valeurs PL du diagramme.
La valeur correspondante dans le diagramme par rapport à la durée requ'se pour l'affaissement du piston lorsqu'on emploie l'enzyme inconnue, est alors divisée par la concentration do la solution d'enzyme pour donner la valeur PL. Des résultats de l'essai sont exprimés en unités PL. Une méthode alternative de détermination de l'activité amylotylique se trouve dans Sanfstedt, Kneen and Bllsh, Cereal Chem; 16 712 (1939). Dans des buts de comparaison, une unité SKB est approximativement égale à mille unités PL.
Une méthode alternative appropriée de détermination de l'activité amylolytique est celle examinée par l'American Associa- tion of Textile Chemists and Colorists. L'unité d'Amylase Bac- térielle (B.A.U.) est définie comme étant la quantité d'enzyme qui dextrinisera un milligramme d'amidon Litner par minute. Les unités B.A.U. peuvent être converties en valeurs de liquéfaction ("PL") en multipliant le chiffre par 190.
Le nouveau produit enzyme selon la présente invention est un mélange protéiné à trois constituants.
Des preuves de sa nature à trois constituants sont trouvées dans les échantillons electrophorétiques suivants obtenus dans le tampon au citrate Véronal au pH égal à 8,6, force ionique 0,1.
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ANALYSB BLECTROPHORETIRUE DU PRODUIT ENZYME Echan- Activités tillon enzymes
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N ¯¯¯¯¯¯ pp PL PH Compo- Mobilités % Total (000) (000 000) sants. de (X 10-5)
EMI10.3
<tb> A <SEP> 0,54 <SEP> 52,2
<tb>
EMI10.4
1 37 54,6 8,6 c 13,17 6" A 1,04 5110 3,87 39#6 II 65 50 8.6 c 1 168 9,4 A o,43 5016 III 70 58o3 816 c 12,*3 16,1l
EMI10.5
<tb> A <SEP> 0,43 <SEP> 52,3
<tb>
<tb> B <SEP> 3,25 <SEP> 33,0
<tb>
EMI10.6
IV 73 62#4 8..6 c il;
?5 14,7
EMI10.7
<tb> A <SEP> 0,72 <SEP> 49,8
<tb>
<tb> B <SEP> 3,50 <SEP> 35,6
<tb>
EMI10.8
v 75 79,4 806 C lad,7 12,6
EMI10.9
<tb> A <SEP> 0,36 <SEP> 54,0
<tb>
EMI10.10
B 3,18 33,S VI 76 66,2 816 C 12,5 12,5
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<tb> A <SEP> 0,22 <SEP> 44,6
<tb>
<tb> B <SEP> 3,26 <SEP> 40,5
<tb>
EMI10.12
VII 56 6918 8.6 c 12,75 14,7
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<tb> A <SEP> 0,19 <SEP> 49,5
<tb>
<tb> B <SEP> 3,03 <SEP> 32,3
<tb>
<tb> VIII <SEP> 62 <SEP> 63,4 <SEP> 8,6 <SEP> C <SEP> 12,35 <SEP> 18,2
<tb>
Ce produit enzyme présente une activité protéolytique par rapport à la caséine 4 des limites de pH comprises entre envi- ron 5 et environ 10,5 (valeur optimum environ 7,0) et une activité ele similaire à l'égard de l'hémoglobine à des limites/pH comprises entre environ 5,5 et environ 7,5 (valeur optimum environ 6).
Elle présente également une activité amylolitique par rapport à l'amidon
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gélatinîsé à des limites de pH comprises entre environ 5,0 et en- viron 9,0 (valeur optimum d'environ 7,1),
Le nouveau produit enzyme selon la présente invention . peut être utilisé en diverses concentrations, généralement de 200
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à 1.000 unités d'hémoglobine par gramme de préparation totale sous une forme d'application pharmaceutique locale. Ces compositions fournissent un agent de débrida ce qui présente une activité de débridage de 90 à. 100 "J en enlevant la forte escarre qui se forme par les brûlures.
Le pourcentage de produit enzyme qui doit être incorporé dépendra évidemment de la concentration de l'enzyme, de la forme du dosage pharmaceutique, du taux et de la quantité d'enzymes libérées du produit pharmaceutique de base, et de l'emploi qu'on désire faire de la préparation. En général, il est préférable qu'un onguent ou celée de débridage contienne depuis environ 200 jusque environ 700 unités d'hémoglobine du nouveau produit enzyme par gramme, Spécialement préférable est la concentration d'enzyme de 500 unités d'hémoglobine par gramme, cette concentration fournissant environ 2,5 % de l'enzyme par poids total de la préparation.
Des onguents et des gelées contenant de$ concentrations moindres du produit enzymé sont également efficaces et peuvent être requises dans certains cas où un effet plus lent, moins drastique analocue au débridage, est envisagé, par exemple le traitement d'escarres légères, ou enlèvement de dép8ts scléro- protéinés tels que des bouchons de kératine.
Un onguent particulièrement désirable peut être obtenu en incorporant le nouveau produit enzyme bactérien dans la base d'onguent de type "eau dans l'huile" contenant 95% de pétrolatum liquide U.S.P. et 5% de polyéthylène. L'onguent résultant se laisse de facilement étendre, et possède une consistance uniforme entre/grande limites de température. De plus, la base d'onguent est non-irritan- te et non-sensibilisante.
Le type d'onguent de base utilisé dépendra évidemment jusqu'à un certain point de la nature de la surface qui doit être
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traitée. En générale on pourra, employer presque tout onguent .ou pâte de base qui ne se désactive pas, et ne gêne pas l'action enzymatique.
D'autres formes de dosages pharmaceutiques tels que des paquets du produit enzyme, pourront être préparées permettant la préparation improvisée de lotions, etc... si pour certaines raisons l'onguent ou la gel le sont inacceptables.
La réalisation pratique de la présente invention sera de plus illustrée en se reportant aux exemples qui suivent et aux historiques de divers cas cliniques. Tous les pourcentages mentionnés sont pondéraux, à moins qu'il ne soit indiqué autrement.
EXEMPLE I.
Un milieu contenant 280 parties de sirop de maïs, 12 parties d'acide phosphorique, 5 parties de matières solubles pro- venant de la distillation d'alcool, 4 parties d'hydroxyde de potassium, 1,6 parties de levure séchée de brasserie, 1,3 d'hydro- xyde de sodium, 0,6 partie de chlorure manganeux, 0,5 partie de sulfate de magnésium, dilué avec de l'eau Jusque 1200 parties- a été stérilisé à 140 C pendant 20 minutes et refroidi., L'agent stérile a été inocculé avec une culture de 24 heures de Baciljus subtilis et soumis à la fermentation pendant 50 heures. Pendant la fermentation, le mélange a été soumis mécaniquement à l'agita- tion et alimenté avec de l'air sténile. La température fut maintenue à 34-38 C et le pH fut maintenu à 6,0 - 6,5 par addi- tion de NH4OH, comme requis.
A 130 parties du mélange fermenté pendant 50 heures, on ajouté une solution comprenant 0,78 parties de phosphate bisodique et 7,8 parties d'eau. Cela fut suivi d'addition d'acé- tate de calcium et de 18 parties d' eau. Le pH fut réglé à une valeur de 6 et on a ajouté 19,5 parties de terre à diatomées.
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Le mélange fut filtré, on a recueilli le filtrat lorsqu'il fut
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dt'vcnu brillant et le yfitenu auperrè d'une quantité d'eau telle '1'."1 ;'It'nqu t on a combiné le filtrat et la masse acpertséoj on A tin de 150 parties. Cette masse fut alors oon- 1,; vnb'Ú Jumu' 80 partius et filtrée de 1!Iu.n1re h obtenir un clair.
On a réglé le pH du concentrât a une valeur de 6# et on a ajouté 2,4 parties de matière facilitant la filtration, et on a refroidi le mélange à environ 3 C. On a jouté du méthanol refroidi
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par de la glace au mjlanee à 9 C dans un rapport de 185 parties p0Ur 100 parties. On a séparé par filtration le prdeipitd formé et on l'a dizvous dans une substance au phosphate ayant un pH ûé&ï h 65. La solution résultante Pat filtrée et le filtrat clair fut traité une fois encore avec du méthanol refoidi par de la glace pour précipiter le complexe enzyme. Le précipité fut dissous dans do 2'eau refroidie par de la glace et filtré. Lo
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filtrat fut alor" ::.1<îch avec congélation. Le mélange ainsi sdohé fut broyé à l'état de poudre.
Le produit enzyme à l'état de poudre lécèrement tanné ainsi obtenu présentait une teneur en humidité de 4%, une teneur en cendres de 6%, une activité protéase de 61.000 unités PP, et 22. 000 unités d'hémoglobine par gramme et une activité amylase de 58 millions d'unités PL. Une solution à 1% du nouveau produit enzyme était claire et d'un aspect présen- tant une couleur ambre léger.
EXEMPLE. II
Un oncuent. de consistance ettexture lisses a été préparé en mélangeant 3% en poids du complexe enzyme selon l'exemple 1 avec 97% en poids d'un mélange de pétrolatum liquide
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U.S.P. à 95± et avec 5 de poly6thylbne. L'onguent a été divisé en quantités d'une demi-once et placé dans des tubes Individuels
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en aluminium cune revdtement.
Chaque gramme d%l ' onguent contenait aprbe etdrilioutïon par rayonnement 500 unit', d'aotivit' protdolytïquo telle que 44tuln1n6è par la mdthode d'osinui t l'h6l11og1obint, Un entent ayant une consistance l:1./;II"e et un caractère hydrophyle a été préparé en mélangeant 3% en poids du complexe enzyme bactérien de l'exemple I avec 97% en poids
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d'un onguent de base contenant 88,16% de p4tro1atum liquide U.S.P., 5,64,' de polyithylène 6e d'ugent d'emuloifioation, 0#1% d'agent antioxydant et 091% de stérilisant. L'onguent fut alors placé dune deu tubes en aluminium de une demi-once sans revêtement. Après la fJtériJ.iaation par rayonnement clique gramme de l'onguent contenait environ 500 unités d'activité protéolytique telle que déterminée par la méthode d'essai à l'hémoglobine.
Exerple IV.
,our déterminer l'activité de l'enzyme et la libération de l'onguent de base, on a udopté la méthode suivante :
On a recueilli de l'escarre de brûlure de divers patients soumis à des opérations chirurgicales et on l'a lavée trois fois par de l'e...u distillée et deux fois dans de l'alcool à 95% avant de la sécher à l'air. Cela a été fait pour
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enlever le plua de débris pénibles avM)t la digestion enzymatique en sorte que la lorte de poids observée puisse constituer une mesure de l'activité de l'enzyme.
L'escarre rincée et séchée a été découpée au moyen d'une matrice sous forme de disques circulaires, en formant ainsi
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dea pièces de surface ut de diamètre unifomes, L'échantillon
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d'onguent fut placé au fond d'un tube d'essai de 10 x 100% mm. une profondeur de 2 cm. Sur la surface de l'onguent on a placé un disque d'escarre pressé par un poids et légèrement pressé dans l'onguent pour assurer un contact parfait. L'échantillon fut humidifié avec quelques goutted d'eau ; on a mis le bouchon et on a soumis à l'incubation à 37 C.
A la fin de l'expérience, le disque d'escarre fut enlevé de l'onguent et lavé trois fois, chaque fois avec 5 ml. de H2O et deux fois avec 5 ml. d'alcool à 95%. Le disque fut séché dansie four à moins de 85 C, conditionné à l'atmosphère du laboratoire, et pesé. La différence de poids a été prise comme constituant la mesure de la libération d'enzyme et de l'action exercée sur l'escarre.
Le tableau 1 qui suit donne les chiffres moyens pour la perte de poids en pour cents de l'escarre dans les conditions expérimentales.
TABLEAU 1.
Onguent Perte de poids de l'escarre
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<tb> Onguent <SEP> contenant <SEP> 1% <SEP> de <SEP> produit <SEP> 43%
<tb> enzyme
<tb>
<tb> Onguent <SEP> contenant <SEP> 2% <SEP> de <SEP> 54%
<tb> produit <SEP> enzyme
<tb>
<tb> Onguent <SEP> contenant <SEP> 2 <SEP> 1/2% <SEP> 57%
<tb> (500 <SEP> unités <SEP> d'hémoglobine
<tb> d'activité <SEP> protéase)
<tb>
<tb> Onguent <SEP> contenant <SEP> 3% <SEP> de <SEP> 50%
<tb> produit <SEP> enzyme
<tb>
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Historique du Cas clinique I.
Une temps de race blanche de 82 ans ayant un décubitus sacral qui avait été auparavant découvert et traité par des imprégnations salines mais qui avait développé une aponéphrose carsrale nécrotique à la base de la blessure, fut traitée deux fois par jour avec l'onguent de l'exemple II. Après quatre jours, la blessure fut complètement claire avec une base granuleuse, Les résultats généraux furent excellents.
Historique du Cas clinique II.
Un patient masculin de race blanche présentait un grand abcès ischioreotal avec une escarre nécrotique. La blessure fut incisée et drainée. Après quatre jours, l'onguent de l'exemple II fut appliqué deux fois par jour. Endéana 72 lieures, la blessure fut complètement débarrassée de tissus nécrotiques. Après 96 heures, on a constaté une base granuleuse propre dans la blessure, se remplissant rapidement.
Les résultats ont été jugés excellents.
Historique du Cas clinique III.
La malade, une femme de race blanche de 71 ans, présentait une surface nécrotique sur le moignon d'une amputation faite deux semaines auparavant, à mi-cuisse. Deux fois par jour on a appliqué sur le moignon, l'onguent contenant l'enzyme selon l'exemple II. Endéans 96 heures, l'escarre épaisse s'est complètement dissoute, en laissant une base semi-ischémique.
Après quatre jours encore de traitement, la blessure présentait une base propre granuleuse qui a été laissée se guérir par une méthode accessoire. Les résultats ont été jugés excellents et aucune irritation locale mesurable n'en a résulté.
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Historique du Cas clinique IV.
Un malade de 8 ans a été admis avec des brulûres profondes, de deuxième et troisième degrés, du torse, y compris la poitrine, les côtés et le bras droit supérieur. L'onguent de l'exemple II a été appliqua deux fois par jour sur toute la surface des brûlures, Endéans 48 heures, il *'*et produit une lyse de 50 à 60%. A la fin du quatrième jour, la blessure était propre et prête pour la greffe. On n'a noté aucune irritation et les résultats ont été jugés excellents Historique au Cas clinique V.
Le patient a été admis à la clinique avec des brûlures étendues des deuxième et troisième, degré, de la jambe. droite* Les blessures ont été traitées par la thérapeutique ouverte pendant 7 jours. On a commencé l'application de l'onguent de l'exemple II, deux fois par jour. Endéans 48 heures il y avait dea signes évidents de liquéfaction avec de 1'exsudât lourd sur toute la surface de la jambe. Après 96 heures, la plupart des surfaces, excepté uns escarre sèche sur le tiers inférieur de la jambe, étaient nettoyées, en présentant une couche de tissu d e granulation. Le sixième jour la jambe était complètement débridée.
La nouvelenzyme, produit de la présente invention, satisfait aux critères imposés par "Connell and Associates" (IBID) comme agent idéal de débridage. Elle est capable de donner une lyse rapide de la fibrine, du collagène dénaturé, de l'élastine et un exsudat qui sont les constituante principaux de la protéine du tissu dans la blessure. Elle possède un haut degré de sélectivité pour le tissu nécrotique.
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Elle est non-toxique dans les quantités généralement employées et n'est pas irritante pour la blessure. Ainsi qu'il a été indiqué dans les exemples, le produit enzyme peut être facilement préparé sous forme d'onguent qui est stable pendant les périodes de temps prolongées et est facilement applicable aux lésions.
De plue, la nouvelle enzyme sous forme de préparation dosée, exerce d'une manière surprenante une action anti-inflammatoire et muoolytique qui augmente davantage son utilité comme produit pharmaceutique.
Il est clair qu'une grande variété de changements et de modifications pourront être apportée sans sortir des principes et de la portée de la présente invention.
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1. Produits pharmaceutiques pour le débridage de tissus nécrotiques, comprenant un produit enzyme élaboré par la culture de Bacillus subtilus sur un milieu nutritif aqueux contenant du carbone assimilable et de l'azote dans des conditions aérobiques à un pH d'environ 6 et 4 une température d'environ 35 C, le dit produit étant utilisé en combinaison avec un diluant pharmaceutique approprié pour préparation sous une forme permettant son application locale.
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