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La présente invention a pour objet un -procédé nou- veau pour préparer des corps de la série des tétracyclines, notamment de l'épimère 5a de-la tétracycline, qui est un composé nouveau.
Actuellement, on prépare généralement la tétracycline à l'échelle commerciale par deux méthodes. La méthode la plus répandue aujourd'hui est la déchlruration réductrice de la chlorotétracycline.
Habituellement, on conduit ce procédé en réduisant la chlorotétracycline par l'hydrogène en présence d'un cata- lyseur au palladium ou au platine métallique sur charbon. On conduit habituellement la réduction dans un solvant organique
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de la chlorotétracycline, par exemple un alcool aliphatique inférieur, un éther de glycol, etc. On a employé'des solvants tels que le 2-éthoxyéthanol, le 2-méthoxyéthanol, le butanol-ni le méthanol, l'éthanol et leurs mélanges.
On Deut conduire la réaction à des températures de 0 à 100 C et à des Dressions d'hydrogène absolues de l'ordre de 1,05-4,2 kg/cm2. Habituel- lement, un accepteur d'acide, tel que la triéthylamine ou une autre base organique, est présent dans le milieu réactionnel en quantité suffisante pour se combiner avec tout l'acide chlorhydrique libéré par la réaction d'hydrogénolyse, de sorte que l'on obtient de la tétracycline que l'on récupère sous forme de base libre. Une fois que la réduction de la tétracycline est achevée, on élimine le catalyseur par fil- tration, on acidifie le filtrat qui contient l'activité, on l'ensemence et on le laisse vieillir, et le chlorhydrate de tétracveline se cristallise.
Un procédé d'hydrogénolyse comme celui indiqué ci-dessus est décrit plus en détail dans J.A.C.S. 75 , 4621 (1953).
L'autre méthode générale consiste à faire fermenter directement, à l'aide de microorganismes de l'espèce Streptomyces aureofaciens, un milieu nutritif aqueux à fai- ble teneur en chlorure disponible, de manière à obtenir à la fois de la tétracycline et de la chlorotétracycline, la tétra- eycline étant le produit de fermentation prédominant. Un tel procéda de fermentation est décrit dans le brevet américain n 2 734 018 du 7 février 1956.
La présente invention est basée sur la découverte suivant laquelle il est possible d'obtenir en quantités com- mercialement utiles des corps de la série des tétracyclines par réduction catalytique, soit des 5a(11a)-déhydrotéta- cyclines, répondant à la formule :
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dans laquelle Z est un atome d'hydrogène, de chloreou de brome, soit d'un épimère 4a de ces composés, jus qu'à absorp- tion d'environ 2 moles d'hydrogène par mole de 5a(11a)- déhydrotétracycline.
Ces 5a(11a)-déhydrotétracyclines répondant à la formule I sont elles-mêmes des antibiotiques nouveaux, formés
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par un procédé de fermentation décrit dans la demande de caza rye ttMùRvI1J'f? {)tf1IA brevet -ti 7. déposée par In demanderesse 'ce a '. -
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pour. :
Procédé de préparation des 5a(11a)-déhydrotétracyclinesj Comme on l'indique plus en détail dans ledit brevet, les nouveaux antibiotiques du type tétracycline, par exemple la 7-chloro-5a(11a)-déhydrotétracycline, sont produits par un processus de fermentation à l'aide de nouvelles souches mutantes de S. aureofaciens dont certaines ont été appelées S 1308, S1308-29, S1308-V146, et S1308-V237, et dont des cultures ont été déposées à l'American Type Culture Collec- tion à Washington, où on leur a attribué les numéros d'ins- cription respectifs ATCC 12748,12749, 12750 et 12751.
L'exposé détaillé qui suit concerne principalement la réduction'catalytique de la 7-chloro-5a(11a)-déhydrotétra- cycline en tétracycline, car la première est sans doute l'anti- biotique le plus utile qui soit obtenu par fermentation à l'aide des nouvelles souches mutantes de S, aureofaciens.
Cependant, il est entendu que l'on peut conduire tout aussi
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facilement la réduction catalytique en tétracycline en par- tant d'autres tétracyclines nouvelles de formule I, à savoir, la 5a(11a)-déhydrotétracycline et la 7-bromo-5a(11a)-déhydro- tétracycline,;ainsi que les épimères 4a de chacun de ces nou- veaux antibiotiques.
Dans la conduite de la présente invention, on réduit catalytiquement par exemple la 7-chloro-5a(11a)-déhydrotétra- cycline en menant en contact avec de l'hydrogène une solu- tion de l'antibiotique dans un solvant polaire contenant en suspension ' catalyseur finement divisé, tel que le palla- dium métallique ou un autre métal de la'famille du platine, sur support de 'charbon, jusqu'à ce qu'environ 2 moles d'hy- drogènë soient absorbées. On peut conduire la réduction à des températures variant de 0 à 100 C et à des pressions de 1/2 à 100 atmosphères.
Des solvants polaires utiles à la réaction son la diméthylformamide, les alcools aliphatiques inférieurs tels que l'éthanol, le butanol-n, etc, et les alcanols inférieurs à substituant alcoxyle inférieur, tels que le 2-méoxyéthanol, le 2-éthoxyéthanol, etc. et leurs mélanges avec les alcanols inférieurs. La diméthylformamide semble être le solvant de choix, car la réaction est norma- lement achevée en 45 minutes environ. Le système comprenant le butanol et un alcanol inférieur à substituant alcoxyle inférieur est beaucoup plus lent, et nécessite habituellement 18 heures environ à la température ambiante pour achever la réaction.
La réduction de la 7-chloro-5a(11a)-déhydrotétracy- cline donne invariablement deux produits, dont l'un est évi- demment la tétracycline comme on l'a dit, et dont l'autre est un composé nouveau, appelé 5a-épitétracycline. Ce comnosé pouveau présente la formule structurale suivante :
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et suivant la nomenclature internationale, son nom conven- tionnel serait identique à celui de la tétracycline. Un nom courant serait 5a-épitétracycline comme on l'a dit plus haut, et c'est ainsi qu'on l'appellera ici.
L'activité antibactérienne de ce nouvel analogue de tétracycline est très faible. Cependant, par un procédé de 'dégradation en milieu acide, on peut la convertir avec un rendement de 80-90% en un produit utile-connu sous le nom
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d'anhydrotétracycline, qui est un agent an.tibaçtérien effi- cace vis-à-vis de certaines souches de bactéries résistantes
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à.la,tétracycline et à la chlorotétracycline.
Pour récupérer la tétracycline.à partir de la solu- tion réduite de 7-chloro-5a(11a)-déhrdrotétràcycline, on peut,procéder de toute façon appropriée;.*par exemple, on pe'ut filtrer la solution réduite pour éliminer le 'catalyseur et cpncentrer la solution sous vide jusqu'à 'siccité. On dis-
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'sout'"le" résidu dans l'eau ou l'alcool, on l'ensemence et on 'le 'laisse vieillir, et les cristaux de tétracycline neutre précipitent. Il est particulièrement remarquable que la 5a- épitétracycline n'a pas tendance à syncristalliser avec la tétracycline, ni sous forme de chlorhydrate ni'sous forme neutre. Ainsi, rien n'empêche de récupérer des quantités commercialement utiles de tétracycline à partir de la solu- tion-réduite.
Quand on désire isoler la 5a-épitétracycline,
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il faut habituellement une chromatographie sur colonne de terre d'infusoires, avec un système butanol-chloroforme.
Comme indiqué plus haut, on peut réduire la 5a(11a)-
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déhyi3rotétracycline et la 7-bromo-5a(11a)-déhydrotétracycline en tétracycline, essentiellement de la façon que l'on a décrite en detail à propos de la 7-chloro-5a(11a)-déhydrotétracycline.
Quand on réduit en tétracycline les analogues non chlorés et bromés, on obtient aussi de grandes quantités de nouveau
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composé 5-épitétracycline, ainsi qu'on l'a indiqué à propos de la réduction de la 7-chloro-5a(11a)-déhydrotétracycline, et on peut le séparer de la tétracycline de la façon indiquée ci-dessus.
Quand on utilise les épimères 4a des 5a(lla)-déhydro- tétracyclines, le produit de réduction obtenu est la 4-épitétracycline et non la tétracycline.
On décrira l'invention plus en détail à propos des exemples précis qui suivent, dans lesquels les rendements sont exprimés en gammas par milligramme (gamma/mg).
Exemple @
On dissout, dans 6cm3 de diméthylformamide 1 g de
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7-chloro-5a(11a)-déhydrotétracycline neutre, obtenue comme indiqué dans la demande de brevet français déposée par la demanderesse ce même jour pour : Procédé dé préparation des
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5à(lla)-déhydrotétracyciines, et titrant 1000 gàmmas/mg, et on ajoute à la solution 0,56 cm3 de triéthylamine. On ajoute 500 mg de palladium à 5% sur charbon, et on agite le mélange sous atmosphère d'hydrogène à la température ambiante pendant 45 minutes, jusqu'à ce que 2 moles d'hydrogène soient absor- '.ées. On dilue la solution réduite avec 6 cm3 de diméthyl- formamide, on filtre pour éliminer le catalyseur et on con-
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centre sous vide jusqu'à siccité.
On ajoute la quantité mini- mum d'eau pour dissoudre le résidu, et on ensemence la solu- tion résultante avec de la tétracycline neutre pour amorcer la la cristallisation. Après deux heures de-repos à la tempéra.- ture ambiante, on filtre les cristaux, on les lave à l'eau et on les sèche sous vide pour obtenir 0,4 g de tétracycline neutre titrant 900 gammas/mg.
Exemple 2
On dissout 1 g de tétracycline neutre préparé par le procédé de réduction de l'exemple 1 dans un volume minimum de butanol-n préalablement ajusté à pH 1,5 avec de l'acide chlorhydrique concentré. On ensemence la solution avec du chlorhydrate de tétracycline et on laisse vieillir deux heures pour permettre à la cristillisation de se produire. On filtre le produit, on le lave au butanol, puis à l'éther, et on sèche sous vide pour obtenir 0,76 g de chlorhvdrate de tétra- cycline, titrant 994 gammas/mg.
Exemple 3
On prépare un mélange de 50 cm3 de butanol-n, 50 ci,13 de 2-éthoxyéthanol, 0,6 cm3 d'eau et 0,6 cm3 de triéthylamina Dans 12 cm3 de ce mélange, on dissout 188 mg de 7-chloro- 5a(11a)-déhydrotétracycline neutre titrant 1000 gammas/mg, et on ajoute 94 mg de palladium à 5% sur charbon. On conduit la réduction en agitant sous atmosphère d'hydrogène à la température ambiante pendant 18 heures. Après avoir filtré pour éliminer le catalyseur, on concentre sous vide la solu- tion en eau et on sèche la solution aqueuse par congélation.
On dissout le résidu dans un volume minimum de butanol saturé d'eau et acidifié à pH 1,5 à l'aide d'acide chlorhydrique concentré. On ensemence la solution avec du chlorhydrate de, tétracycline pour favoriser la cristallisation, et après
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vieillissement,..on filtre les cristaux, on les lave d'abord au butanol puis à l'éther; et on sèche sous vide. On obtient un rendement de 45 mg de chlorhydrate de tétracycline,titrant 985 gammas/mg.
Exemple 4
On verse la liqueur-mère de l'exemple 3 sur une colonne de terre d'infusoires de 70 g et de 2,5 cm de dia- mètre, tamponnée avec 35 cm3 de HCl 0,01 N. On utilise pour développer la colonne.un mélange à 80% de butanol et 20% de chloroforme, équilibré avec HCl 0, 01 N. On fait des fractions de-10 cm3 chacune. On concentre sous vide les-fractions 4 à 8 en eau, et on sèche la solution aqueuse par congélation.
On réalise la cristallisation du résidu amorphe en le dissol- vant dans une quantité minimum de butanol, en ajustant le pH à 1,5 par de l'acide chlorhydrique concentré, et en ajoutant.
2 volumes d'éther pour former un précipite amorphe qui, après ensemencement, cristallise au bout de 3 heures de repos à la température ambiante. On filtre les cristaux, on les lave avec un mélange de butanol/éther à 2:1, à pH 1,5, puis à l'éther, et on sèche sous vide pour obtenir 25 mg de chlor- hydrate de-5a-épitétracycline.
Analyse : calculée pour C22H25N2C108.H20 : C 52,9 ; H 5,42 ; N 5,61 ; Cl 7,1-1 ; 0 28,8.
Analyse effective : C 53,12 ; H 5,33: N 5,36 ; Cl 7,41 C 28, 75;
Exemple 5 'On chauffe à 60 C pendant 5 minutes une solution de 200 mg d 5a-épitétracycline préparée comme à l'exemple 4 dans 0,6 cm3 d'acide ohlorhydrique concentré. A la solution, on ajoute 1,5 cm3'de butanol-n, 0,4 cm3 d'eau et 2,5 cm3
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d'acétone. On ensemence la solution avec du chlorhydrate d'anhydrotétracycline et on laisse reposer 16 heures à la température ambiante; puis, on filtre le produit cristallin, on le lave à l'acétone et on le sèche sous vide pour obtenir 145 mg de chlorhydrate d'anhydrotétracycline.
On vérifie l'identité du produit en comparant son spectre infra-rouge, ses spectres ultra-violets acides et alcalins, avec les courbes normales de l'anhydrotétracycline.
Exemple 6
On suit la méthode de l'exemple- 1, sauf que l'on utilise comme matière première la 5a(lla)-déhydrotétracycline.
On obtient de la tétracycline.
Exemple 7
On suit la méthode de l'exemple 1, sauf que l'on utilise comme matière première la 7-bromo-5a(11a)-déhydro- tétracycline. On obtient de la tétracycline.
Exemples 8-10
On suit la méthode de l'exemple 1 , sauf que l'on utilise respectivement, dans une série de réductions sépa- rées, la 7-chloro-5a(lla)-déhydro-4-épitétracycline, la
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5a(11a)-déhydro--q.-épitétra.cyeline et la 7-bromo-5a(11a)- déhydro-4-épitétracycline. On obtient dans tous les cas la 4-épitétra.cycline.
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The present invention relates to a new process for preparing bodies of the tetracycline series, in particular of the 5a epimer of tetracycline, which is a new compound.
Currently, tetracycline is generally prepared on a commercial scale by two methods. The most widely used method today is the reductive dechlorination of chlorotetracycline.
Usually, this process is carried out by reducing the chlorotetracycline with hydrogen in the presence of a palladium or platinum metal-on-carbon catalyst. The reduction is usually carried out in an organic solvent.
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chlorotetracycline, for example lower aliphatic alcohol, glycol ether, etc. Solvents such as 2-ethoxyethanol, 2-methoxyethanol, butanol-ni methanol, ethanol and mixtures thereof have been employed.
The reaction can be carried out at temperatures from 0 to 100 C and absolute hydrogen ratios of the order of 1.05-4.2 kg / cm2. Usually, an acid acceptor, such as triethylamine or another organic base, is present in the reaction medium in an amount sufficient to combine with all the hydrochloric acid liberated by the hydrogenolysis reaction, so that the 'tetracycline is obtained which is recovered in the form of the free base. After the reduction of the tetracycline is complete, the catalyst is removed by filtration, the filtrate which contains the activity is acidified, seeded and allowed to age, and the tetracvelin hydrochloride crystallizes.
A hydrogenolysis process such as that indicated above is described in more detail in J.A.C.S. 75, 4621 (1953).
The other general method consists in directly fermenting, using microorganisms of the species Streptomyces aureofaciens, an aqueous nutrient medium with a low content of available chloride, so as to obtain both tetracycline and chlorotetracycline with tetraeycline being the predominant fermentation product. Such a fermentation process is described in U.S. Patent No. 2,734,018 of February 7, 1956.
The present invention is based on the discovery that it is possible to obtain in commercially useful amounts bodies of the tetracycline series by catalytic reduction, namely 5a (11a) -dehydroetetacyclines, corresponding to the formula:
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wherein Z is a hydrogen, chlorine or bromine atom, or a 4a epimer of these compounds, until about 2 moles of hydrogen are absorbed per mole of 5a (11a) - dehydrotetracycline.
These 5a (11a) -dehydrotetracyclines corresponding to formula I are themselves new antibiotics, formed
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by a fermentation process described in the application of caza rye ttMùRvI1J'f? {) tf1IA patent -ti 7. filed by the applicant 'ce a'. -
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for. :
Process for the preparation of 5a (11a) -dehydro-tetracyclinesj As discussed in more detail in said patent, new antibiotics of the tetracycline type, for example 7-chloro-5a (11a) -dehydro-tetracycline, are produced by a fermentation process. using new mutant strains of S. aureofaciens some of which have been named S 1308, S1308-29, S1308-V146, and S1308-V237, and whose cultures have been deposited in the American Type Culture Collec- tion at Washington, where they were assigned the respective ATCC registration numbers 12748,12749, 12750 and 12751.
The detailed discussion which follows is mainly concerned with the catalytic reduction of 7-chloro-5a (11a) -dehydrotetra-cyclin to tetracycline, since the former is arguably the most useful antibiotic which is obtained by fermentation in l. using new mutant strains of S, aureofaciens.
However, it is understood that one can drive just as
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easily catalytically reduced to tetracycline starting from other novel tetracyclines of formula I, namely 5a (11a) -dehydro-tetracycline and 7-bromo-5a (11a) -dehydro-tetracycline, as well as 4a epimers of each of these new antibiotics.
In carrying out the present invention, for example 7-chloro-5a (11a) -dehydrotetra-cyclin is catalytically reduced by contacting with hydrogen a solution of the antibiotic in a polar solvent containing in suspension. A finely divided catalyst, such as metallic palladium or another metal of the platinum family, on a charcoal carrier until about 2 moles of hydrogen are absorbed. The reduction can be carried out at temperatures varying from 0 to 100 ° C. and at pressures from 1/2 to 100 atmospheres.
Polar solvents useful for the reaction are dimethylformamide, lower aliphatic alcohols such as ethanol, n-butanol, etc., and lower alkanols having a lower alkoxyl substituent, such as 2-meoxyethanol, 2-ethoxyethanol, etc. . and their mixtures with lower alkanols. Dimethylformamide appears to be the solvent of choice as the reaction is normally completed in about 45 minutes. The system comprising butanol and a lower alkoxyl substituted lower alkanol is much slower, and usually requires about 18 hours at room temperature to complete the reaction.
The reduction of 7-chloro-5a (11a) -dehydrotetracy- cline invariably gives two products, one of which is obviously tetracycline as has been said, and the other of which is a new compound, called 5a -epitetracycline. This compound can have the following structural formula:
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and according to international nomenclature, its conventional name would be identical to that of tetracycline. A common name would be 5a-epitetracycline as mentioned above, and that is what it will be called here.
The antibacterial activity of this new tetracycline analogue is very low. However, by an acidic degradation process, it can be converted in 80-90% yield into a useful product known as
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of anhydrotetracycline, which is an effective antibacteric agent against certain strains of resistant bacteria
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à.la, tetracycline and chlorotetracycline.
To recover the tetracycline from the reduced solution of 7-chloro-5a (11a) -dehdrotetracycline, one can proceed in any suitable manner;. * For example, the reduced solution can be filtered to remove the catalyst and center the solution in vacuo to dryness. We say-
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"Sust" the "" residue in water or alcohol, seed it and allow it to age, and the neutral tetracycline crystals precipitate. It is particularly noteworthy that 5α-epitetracycline does not tend to syncrystallize with tetracycline, neither as hydrochloride nor in neutral form. Thus, there is nothing to prevent commercially useful amounts of tetracycline from being recovered from the reduced solution.
When it is desired to isolate 5a-epitetracycline,
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usually a diatomaceous earth column chromatography with a butanol-chloroform system is required.
As indicated above, we can reduce the 5a (11a) -
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dehyi3rotetracycline and 7-bromo-5a (11a) -dehydrotetracycline to tetracycline, essentially as described in detail in connection with 7-chloro-5a (11a) -dehydrotetracycline.
When unchlorinated and brominated analogues are reduced to tetracycline, large amounts of new are also obtained.
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compound 5-epitetracycline, as indicated in connection with the reduction of 7-chloro-5a (11a) -dehydro-tetracycline, and can be separated from tetracycline as indicated above.
When using epimers 4a of 5a (11a) -dehydro-tetracyclines, the reduction product obtained is 4-epitetracycline and not tetracycline.
The invention will be described in more detail with respect to the specific examples which follow, in which the yields are expressed in gammas per milligram (gamma / mg).
Example @
Is dissolved in 6cm3 of dimethylformamide 1 g of
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Neutral 7-chloro-5a (11a) -dehydro-tetracycline, obtained as indicated in the French patent application filed by the applicant on the same day for: Process for the preparation of
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5à (11a) -dehydrotetracyciines, and assaying 1000 gàmmas / mg, and 0.56 cm3 of triethylamine is added to the solution. 500 mg of 5% palladium on charcoal are added, and the mixture is stirred under a hydrogen atmosphere at room temperature for 45 minutes, until 2 moles of hydrogen are absorbed. The reduced solution is diluted with 6 cm3 of dimethylformamide, filtered to remove the catalyst and con- solidated.
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center under vacuum to dryness.
The minimum amount of water is added to dissolve the residue, and the resulting solution is seeded with neutral tetracycline to initiate crystallization. After standing for two hours at room temperature, the crystals are filtered, washed with water and dried in vacuo to give 0.4 g of neutral tetracycline assaying 900 gammas / mg.
Example 2
1 g of neutral tetracycline prepared by the reduction method of Example 1 is dissolved in a minimum volume of butanol-n previously adjusted to pH 1.5 with concentrated hydrochloric acid. The solution is seeded with tetracycline hydrochloride and allowed to age for two hours to allow crystallization to occur. The product is filtered, washed with butanol, then with ether, and dried in vacuo to obtain 0.76 g of tetracyclin hydrochloride, assaying 994 gammas / mg.
Example 3
Preparing a mixture of 50 cm3 of butanol-n, 50 ci, 13 of 2-ethoxyethanol, 0.6 cm3 of water and 0.6 cm3 of triethylamina In 12 cm3 of this mixture, 188 mg of 7-chloro are dissolved - 5a (11a) -dehydro-tetracycline neutral assaying 1000 gammas / mg, and 94 mg of 5% palladium on charcoal are added. The reduction is carried out with stirring under a hydrogen atmosphere at room temperature for 18 hours. After filtering to remove the catalyst, the water solution is concentrated in vacuo and the aqueous solution dried by freezing.
The residue is dissolved in a minimum volume of butanol saturated with water and acidified to pH 1.5 with concentrated hydrochloric acid. The solution is inoculated with tetracycline hydrochloride to promote crystallization, and after
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aging, .. the crystals are filtered, washed first with butanol and then with ether; and dried under vacuum. A yield of 45 mg of tetracycline hydrochloride is obtained, assaying 985 gammas / mg.
Example 4
The mother liquor of Example 3 was poured onto a 70 g, 2.5 cm diameter diatomaceous earth column, buffered with 35 cc of 0.01 N HCl. Used to develop the column. .a mixture of 80% butanol and 20% chloroform, equilibrated with HCl 0, 01 N. Fractions of −10 cm3 each are made. Fractions 4 to 8 were concentrated in vacuo to water, and the aqueous solution was dried by freezing.
Crystallization of the amorphous residue is accomplished by dissolving it in a minimum amount of butanol, adjusting the pH to 1.5 with concentrated hydrochloric acid, and adding.
2 volumes of ether to form an amorphous precipitate which, after sowing, crystallizes after standing for 3 hours at room temperature. The crystals were filtered, washed with a 2: 1 butanol / ether mixture, pH 1.5, then with ether, and dried in vacuo to obtain 25 mg of 5α-epitetracycline hydrochloride. .
Analysis: calculated for C22H25N2C108.H2O: C 52.9; H 5.42; N 5.61; Cl 7.1-1; 0 28.8.
Actual analysis: C 53.12; H 5.33: N 5.36; Cl 7.41 C 28.75;
Example 5 A solution of 200 mg of 5α-epitetracycline prepared as in Example 4 in 0.6 cm3 of concentrated hydrochloric acid is heated at 60 ° C. for 5 minutes. To the solution are added 1.5 cm3 of n-butanol, 0.4 cm3 of water and 2.5 cm3.
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acetone. The solution is seeded with anhydrotetracycline hydrochloride and left to stand for 16 hours at room temperature; then, the crystalline product is filtered, washed with acetone and dried in vacuo to obtain 145 mg of anhydrotetracycline hydrochloride.
The identity of the product is verified by comparing its infra-red spectrum, its acidic and alkaline ultra-violet spectra, with the normal curves of anhydrotetracycline.
Example 6
The method of Example-1 is followed, except that 5a (11a) -dehydrotetracycline is used as starting material.
Tetracycline is obtained.
Example 7
The method of Example 1 is followed, except that 7-bromo-5a (11a) -dehydro-tetracycline is used as starting material. Tetracycline is obtained.
Examples 8-10
The method of Example 1 was followed, except that, respectively, in a series of separate reductions, 7-chloro-5a (11a) -dehydro-4-epitetracycline, la
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5a (11a) -dehydro - q.-épitétra.cyeline and 7-bromo-5a (11a) - dehydro-4-epitetracycline. In all cases, 4-epitetra.cycline is obtained.