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Il est connu que des préparations séchées de tissus animaux et végétaux peuvent être, par un emmagasinage approprié, conservées pratiquement indéfiniment par comparaison avec les tissus frais qui, sans mesures de conservation spéciales, sont rapidement décomposés saus diverses influences.
En plus du procédé de séchage,primitif et le plus simple, l'on a mis au point une série de procédés qui sèchent cette ma- t.ière sensible avec plus de précaution afin de garder autant que possible les caractéristiques et éléments primitivement présentas.
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En dehors des maltiples moyens de conservation et de séchage -chimiques et colloïde-chimiques, parmi lesquels il faut égale- ment compter, dans un sens large abstrait, un séchage avec un gaz inerte, les conditions physiques de séchage ont déjà. été perfectionnées avec succès. Il faut citer à ce point de vue le séchage sous vide, en particulier le séchage par congélation.
En dehors du fait que la viabilité des cellules de tissus séchées par congélation ne répond pas toujours à l'atten- te, l'exécution d'un séchage par congélation exige une période relativement longue jusqu'à plusieurs jours et une dépense énor- me en appareillage, surtout qu'une température de séchage aussi/ que possible est nécessaire d'après toutes les expériences ac- tuelles; plus sensible est la matière, plus basse doit être la température.
Il est d'autant plus surprenant que l'activité biologi- que de préparations séchées de tissus puisse être accrue en les surrefroidissant profondément, suivant la présente invention, pendant une période voulue, puis en élevant très rapidement la température d'au moins 25 C et en commenant immédiatement le séchage avec cette nouvelle température. Il est important dans @ ce cas de soumettre toutes les parties du tissu aussi rapide- ment que possible à cette subite augmentation dE. température..
L'on peut faire appel dans ce but à toutes les mesures connues qui facilitent cette transition de température, tel.. que le travail en couche mince, le chauffage par haute fréquence ou infra-rouge, l'aide d'un courant gazeux tempéré de façon appro- priée et rendu stérile (utilement exempt a'oxygène, par exemple de l'azote, de l'hudrogème de l'acide carbonique, un gaz rare ou des mélanges de divers gaz), l'addition de matières ayant des caractéristiques calorifiques appropriées.
@ L'élévation subite de température ou la température de séchage à choisir dépend énormément de la teneur en eau des
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tissus ou de leur tendance à retenir de l'eau, du vide de tra- vail pouvant être obtenu ou de la période nécessaire pour ces facteurs et de la capacité d'aspiration de la pompe.
Il est évident que les mesures connues d'autres méthodes de conservation peuvent également être utilisées utilement. Ain si, l'on peut ajouter à la préparation, pendant une étape quel- conque du procédé, des agents de conservation et de séchage chimiques ou colloïde-chimiques. On peut découper les prépara- tions avant ou après la conservation, à l'état frais ou congelé.
Le travail dans des conditions stériles n'est pas, pour autant qu'il soit nécessaire, exclu par le présent procédé et peut être envisagé à volonté. On peut ici également exécuter le premier refroidissement aussi rapidement que possible, soit indirecte- ment, soit directement, par exemple par immersion dans un gaz liquéfié, une mesure dont l'importance générale est mise en valeur par les recherches dans le domaine du séchage par réfri- gération. Il est évident que pour le séchage de conservation, on se peut/servir d'un vide ou d'un vide poussé. Afin de diminuer la pression de vapeur sur la surface du tissu, l'on peut éliminer rapidement la vapeur d'eau libérée et la condenser en d'autres points ou la fixer chimiqaement ou physiquement.
On peut égale- ment, après l'élévation brusque de la température suivant le procédé et le séchage en résultant, sécher sous une autre tem- pérature appropriée, dans l'esprit du procédé, mais éventuelle- ment quelconque, inférieure à +5 C, jusqu'à la fin, aussitôt qu'au moins un quart de la teneur primitive en eau ait été éli- miné sous la température suivant le procédé. Il convient éven- tuellement d'abaisser de façon analogue la température de sécha- ge associée à un séchage par congélation.
Il va sans dire que suivant le présent procédé, des éléments de tissus animaux et végétaux peuvent être préparés relativement simplement en ce qui concerne l'appareillage et
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avant tout plus rationnellement en travail industriel par rap- port, par exemple, au procédé de séch e par congélation, in- dépendamment de l'activité biologique accrue, entre autres.
EXEi.LES.
Des éléments de -,--issus vivants, obtenus à vif et coupés en morceaux, furent places par 5gr. dans des éprouvettes Jena .
Weitha à paroi mince, Lyant une contenance de 250ml, en mélan- ge à froid approprié, tout en agitant énergiquement, et ils furent amenés à la température de surfusion donnée, la matière étant alors étendue err coucne mince sur la paroi. Ils furent emmagasinés sous cett-; température pendant une période quelcon- que, suivant les pos@ipilités de traitement ultérieur. Pour le séchage suivant le proche, les éprouvettes furent placées, avec les éléments de tissus, dans un appareil dans lequel le vide peut ême fait et dont la tempériautre peut être contrôlée, la température de surfusion étant d'abord maintenue.
L'appareil est alors balayé sans air avec un courant gazeux inerte, par exemple un courant d;'azote, qui était tempéré, séché et stéri- lisé suivant les conditions de travail appropriées. A ce moment, l'appareil, les éprouvettes et le courant gazeux sont amenés simultanément et brusquement à la nouvelle température et mis immédiatement ensuite sous vide. L'on sécha jusqu'au bout sous environ 0,1 - 2 Torr. L'on travailla dans des conditions stéri- les. Toutes les températures sont données en degrés centigrades.
1.Foie foetal (veau).
Température de refroidissement -70 sans l'augmentation subite de température conforme au procédé, l'on comanca, sans cette température, à éliminer l'eau par sublisation sous vide; augmentation de température progressive, tout d'abord lente, jusqu'à finalement 0 (séchage par congélation).
2.Foie foetal (veau).
Température de refroidissement -70 , température de séchage - 15 .
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..).Foie foetal (veau).
Température de refroidissement -35 , température de séchage -5 .
4.Foie foetal (veau).
Température de refroidissement -35 , température de séchage tout d'abord -5 ; après élimination d'environ 1/3 de l'eau, la température de séchage fut abaissée à -35 ; tout à la fin) égalisation progressive de la température suivant l'exemple 2,
5.Testis de jeune animal (veau).
Température de refroidissement -55 , température de séchage -10 .
6. Bacterium Coli 1883 sur Agar-Drigalski.
Température de refroidissement -55 , température de séchage -10 , 7.Feuille de Digitalis Lanata.
Température de refroidissement -55 , température de séchage -10 , 8.Testis de jeune animal (bovidé).
Température de refroidissement -70 , température de séchage +4 .
L'activité biologique des préparations de tissus séchés suivant la présente invention fur déterminée, suivant le procédé Warburg (Biochem.Zsch., 166, 386, 1925),en relevant l'oxygène en cm3, pour 1 gr. de substance séchée, en fonction du temps.
Pour la comparaison avec les exemples 2,3,4 et 8, l'on déterminé simultanément l'activité biologique de: a) une préparation sèche, préparée suivant H.Proom (Freezing and Drying, Report of a Symposium held,
Junf 1951), b) une préparation de cellules sèche obtenue par le séchage par congélation sans accroissement brusque de température suivant l'invention.
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Les résultats ainsi obtenus sont donnés dans le tableau suivant : cm3d'oxygène recueilli, pour 1 gr de substance séchée.
EMI6.1
<tb>
Après(minutes) <SEP> Total <SEP> Accroissement
<tb> Organe: <SEP> 60 <SEP> 120 <SEP> 180 <SEP> d'activité
<tb>
<tb> Foie <SEP> foetal
<tb>
<tb> Essai <SEP> a) <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb>
<tb> " <SEP> b) <SEP> Exemple <SEP> 1 <SEP> 2,5 <SEP> 5,5 <SEP> 8,5 <SEP> 16,5
<tb>
<tb> " <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 14 <SEP> 22 <SEP> 39 <SEP> + <SEP> 136%
<tb>
<tb> " <SEP> 3 <SEP> 6 <SEP> 16 <SEP> 24 <SEP> 46 <SEP> + <SEP> 178%
<tb>
<tb> 4 <SEP> 4 <SEP> 14 <SEP> 19 <SEP> 37 <SEP> + <SEP> 124%
<tb>
<tb> Testis <SEP> de <SEP> jeune <SEP> bovidé
<tb>
<tb> Essai <SEP> b) <SEP> 9,5 <SEP> 17 <SEP> 24 <SEP> 50,5
<tb>
<tb> Exemple <SEP> 8 <SEP> 21 <SEP> 32 <SEP> 53 <SEP> 106 <SEP> 110%
<tb>
Le tableau ci-avant indique que les préparations obte- nues par le procédé suivant l'invention présentent un accrois- sement important de l'intensité de respiration,
qui va de pa- rallèle avec une suractivité biologique.
REVENDICATIONS.
1. Procédé de préparation de tissus animaux ou végétaux par séchage, caractérisé en ce qu'ils sont amenés tout d'abord à une température de profonde congélation, par exemple jusqu'à -80 C puis ramenés rapidement à une température supérieure d'au moins 25 C, avantageusement supérieure à -15 , par exemple de -5 à -30 C, utilement cependant inférieure à 5 C l'élimina- tion de l'humidité étant commencée simultanément.
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It is known that dried preparations of animal and plant tissues can be, by proper storage, preserved almost indefinitely as compared to fresh tissues which, without special preservation measures, are rapidly decomposed under various influences.
In addition to the primitive and simplest drying process, a series of processes have been developed which dry this sensitive material with more care in order to retain as much as possible the characteristics and elements originally present.
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Apart from the multiple means of preservation and drying -chemical and colloid-chemical, among which must also be counted, in a broad abstract sense, drying with an inert gas, the physical conditions of drying already exist. been successfully perfected. Vacuum drying, in particular freezing drying, should be mentioned in this respect.
Apart from the fact that the viability of freeze-dried tissue cells does not always meet the expectation, performing freeze-drying requires a relatively long period up to several days and an enormous expense. in apparatus, especially that a drying temperature as / as possible is necessary according to all current experiments; the more sensitive the material, the lower the temperature.
It is all the more surprising that the biological activity of dried tissue preparations can be increased by supercooling them deeply, according to the present invention, for a desired period, and then very rapidly raising the temperature to at least 25 ° C. and immediately starting drying with this new temperature. It is important in this case to subject all parts of the tissue as quickly as possible to this sudden increase in dE. temperature..
All known measures which facilitate this temperature transition can be used for this purpose, such as working in a thin layer, heating by high frequency or infrared, using a tempered gas current. appropriately and made sterile (usefully free of oxygen, for example nitrogen, the hudrogem, carbonic acid, a rare gas or mixtures of various gases), the addition of materials having appropriate calorific characteristics.
@ The sudden rise in temperature or the drying temperature to be chosen depends greatly on the water content of the
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tissues or their tendency to retain water, the working vacuum that can be achieved or the time required for these factors and the suction capacity of the pump.
Obviously, measures known from other conservation methods can also be useful. Thus, chemical or colloid-chemical preservatives and drying agents can be added to the preparation at any stage of the process. Preparations can be cut before or after storage, fresh or frozen.
Work under sterile conditions is not, as far as necessary, excluded by the present method and can be envisaged at will. The first cooling can also be carried out here as quickly as possible, either indirectly or directly, for example by immersion in a liquefied gas, a measure the general importance of which is highlighted by research in the field of drying by refrigeration. Obviously, for conservation drying, a vacuum or a high vacuum can be used. In order to decrease the vapor pressure on the surface of the fabric, the released water vapor can be rapidly removed and condensed at other points or chemically or physically fixed.
It is also possible, after the abrupt rise in temperature depending on the process and the resulting drying, to dry at another suitable temperature, in the spirit of the process, but possibly any, below + 5 ° C. until the end, as soon as at least a quarter of the original water content has been removed below the temperature according to the process. The drying temperature associated with freeze drying may need to be similarly lowered.
It goes without saying that according to the present process, elements of animal and plant tissues can be prepared relatively simply as regards the apparatus and
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above all more rationally in industrial work compared to, for example, the freeze-drying process, irrespective of the increased biological activity, among others.
EXEi.LES.
Elements of -, - from alive, obtained alive and cut into pieces, were placed by 5gr. in Jena test tubes.
Thin-walled Weitha, Holding a capacity of 250ml, in a suitable cold mix, while stirring vigorously, and they were brought to the given supercooling temperature, the material then being spread thinly on the wall. They were stored under this; temperature for any period, depending on the possibilities of further processing. For the next drying, the test pieces were placed, with the tissue elements, in an apparatus in which a vacuum can be created and the temperature of which can be controlled, the supercooling temperature being first maintained.
The apparatus is then swept airless with an inert gas stream, eg, nitrogen stream, which has been tempered, dried and sterilized under appropriate working conditions. At this point, the apparatus, the test pieces and the gas stream are brought simultaneously and suddenly to the new temperature and immediately thereafter placed under vacuum. It was dried to the end under about 0.1 - 2 Torr. We worked under sterile conditions. All temperatures are given in degrees centigrade.
1. Fetal liver (calf).
Cooling temperature -70 without the sudden increase in temperature in accordance with the process, we comanca, without this temperature, to remove the water by vacuum sublization; gradual increase in temperature, initially slow, until finally 0 (freezing drying).
2. Fetal liver (calf).
Cooling temperature -70, drying temperature - 15.
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..) Fetal liver (calf).
Cooling temperature -35, drying temperature -5.
4. Fetal liver (calf).
Cooling temperature -35, drying temperature first -5; after removing about 1/3 of the water, the drying temperature was lowered to -35; at the very end) progressive equalization of the temperature according to example 2,
5. Young animal test (calf).
Cooling temperature -55, drying temperature -10.
6. Bacterium Coli 1883 on Agar-Drigalski.
Cooling temperature -55, drying temperature -10, 7.Lanata Digitalis sheet.
Cooling temperature -55, drying temperature -10.8 Young animal test (bovid).
Cooling temperature -70, drying temperature +4.
The biological activity of the preparations of dried tissues according to the present invention were determined, according to the Warburg method (Biochem.Zsch., 166, 386, 1925), by recording the oxygen in cm3, for 1 gr. of dried substance, as a function of time.
For the comparison with Examples 2, 3, 4 and 8, the biological activity of: a) a dry preparation, prepared according to H. Proom (Freezing and Drying, Report of a Symposium held,
Junf 1951), b) a preparation of dry cells obtained by freezing drying without sudden increase in temperature according to the invention.
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The results thus obtained are given in the following table: cm3 of oxygen collected, for 1 g of dried substance.
EMI6.1
<tb>
After (minutes) <SEP> Total <SEP> Increase
<tb> Organ: <SEP> 60 <SEP> 120 <SEP> 180 <SEP> of activity
<tb>
<tb> Liver <SEP> fetal
<tb>
<tb> Test <SEP> a) <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb>
<tb> "<SEP> b) <SEP> Example <SEP> 1 <SEP> 2.5 <SEP> 5.5 <SEP> 8.5 <SEP> 16.5
<tb>
<tb> "<SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 14 <SEP> 22 <SEP> 39 <SEP> + <SEP> 136%
<tb>
<tb> "<SEP> 3 <SEP> 6 <SEP> 16 <SEP> 24 <SEP> 46 <SEP> + <SEP> 178%
<tb>
<tb> 4 <SEP> 4 <SEP> 14 <SEP> 19 <SEP> 37 <SEP> + <SEP> 124%
<tb>
<tb> Testis <SEP> of young bovid <SEP> <SEP>
<tb>
<tb> Test <SEP> b) <SEP> 9.5 <SEP> 17 <SEP> 24 <SEP> 50.5
<tb>
<tb> Example <SEP> 8 <SEP> 21 <SEP> 32 <SEP> 53 <SEP> 106 <SEP> 110%
<tb>
The table above indicates that the preparations obtained by the process according to the invention exhibit a significant increase in the intensity of respiration,
which goes hand in hand with biological overactivity.
CLAIMS.
1. Process for preparing animal or plant tissues by drying, characterized in that they are first brought to a deep freezing temperature, for example down to -80 C and then quickly brought back to a temperature greater than minus 25 C, preferably greater than -15, for example -5 to -30 C, usefully however less than 5 C, the removal of moisture being started simultaneously.